專利名稱：一種含有3'疊氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制備方法，尤其涉及含有3’疊氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制備方法，該類化合物具有良好的生物活性和抗病毒、抗腫瘤、抗愛(ài)茲病毒等藥物活性，可在臨床應(yīng)用中發(fā)展成為一種核苷類抗病毒、抗腫瘤、抗愛(ài)茲病毒前藥(prodrugs)。
硫代磷酸在磷原子上含有一個(gè)硫取代氧的結(jié)構(gòu)，雖然這個(gè)結(jié)構(gòu)仍然保留著原來(lái)的電荷，保留著高水溶性的性質(zhì)，但硫代磷酸的寡聚脫氧核糖核酸(S-oligos)的其他理化特性和生物學(xué)屬性均與天然的磷酸二酯原型有很大的差別。最顯著的差別之一是硫代磷酸對(duì)核酸酶具有抵抗性。由于細(xì)胞內(nèi)外核酸酶的存在，很快消化掉了加入的磷酸二酯類反義寡聚核苷酸，使其喪失作用功能。通過(guò)合成具有抵抗核酸酶的硫代磷酸類化合物，對(duì)于今后應(yīng)用合成的寡聚脫氧核糖核酸用于治療目的，無(wú)疑是開(kāi)辟了一條希望之路。
本發(fā)明的目的是提出一種含有3’疊氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制備方法，用于開(kāi)發(fā)抗病毒、抗腫瘤、抗愛(ài)茲病毒活性藥物。
本發(fā)明制備的含有3’疊氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物，化合物的結(jié)構(gòu)式為 上述結(jié)構(gòu)式中R＝H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2；X＝H，Cl，NO2。
上述化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃的條件下，將原料(芳香基取代) 二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成濃度為0.8～1.0mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入與原料相同物質(zhì)的量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑，縛酸劑的加入量是原料物質(zhì)的量的2倍。
3)跟蹤上述反應(yīng)進(jìn)程，待原料全部反應(yīng)完畢以后，將與原料相同物質(zhì)的量的已溶于四氫呋喃中的3’疊氮胸苷溶液慢慢滴入第二步的溶液中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加與原料相同物質(zhì)的量的縛酸劑。
4)監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，即得到含有3’疊氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物。
用本發(fā)明的方法制備的含有3’疊氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物，是一類全新的具有抗愛(ài)茲病毒藥物活性的化合物，通過(guò)合成不同種類的核苷-氨基酸綴合物，并進(jìn)行活性實(shí)驗(yàn)，初步得到了滿意的結(jié)果，為進(jìn)一步研制和開(kāi)發(fā)新型抗愛(ài)茲病毒藥物提供了基礎(chǔ)研究成果。經(jīng)CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)均有不同程度的活性。
以下介紹
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1制備3’疊氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物，其中R＝H，X＝H。
化合物的結(jié)構(gòu)式為 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8C，將1mmol(0.227g)的(苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.125g)的甘氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(苯基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)率為77.1％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ71.70，72.10；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.80(1H，sb，NH，7.22-7.41(6H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，2，50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 173.24(COOMe)，163.70(C-2)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，129.91(m，Ph-para)，125.52(m，Ph-ortho)，120.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z 511(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 509(M-H)-。該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-9×10-6μM (CD50206μM)CEM-SS 4×10-5μM (CD50118μM)MT4 5×10-5μM (CD5070μM)實(shí)施例2制備3’疊氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物，其中R為CH3，X為H。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.227g)的(苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.14g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(苯基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為67.3％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ70.20，71.70；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.81(1H，sb，NH)，7.22-7.41(6H，m，Ph，H-6)，6.34(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.56(2H，m，H-α)，2，50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.40(3H，d，Ala-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 178.24(COOMe)，163.70(C-2)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，129.91(m，Ph-para)，125.52(m，Ph-ortho)，120.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，37.46(C-2′)，20.86(d，Ala-Me，J＝5Hz)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z525(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z523(M-H)-該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoidT cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-6××10-3μM (CD50188μM)CEM-SS 6××10-2μM (CD5049μM)MT44××10-2μM (CD5069μM)實(shí)施例3制備3’疊氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物，其中R為C6H5CH2，X為H。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8C，將1mmol(0.227g)的(苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.215g)的苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(苯基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.266g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為69.6％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ70.70，71.30；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.88(1H，sb，NH)，7.22-7.41(6H，m，Ph，H-6)，7.15-7.35(5H，m，Ph)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.44(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，2,50(1H，m，H-2′)，2.32(2H，m，H-β)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 174.39(COOMe)，163.66(C-2)，151.24(C-4)，148.36(Ph-pso)，140.76(C-6)，120.08(m，Ph-meta)，135.12(Ph-para)，130.42(Ph-ortho)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，56.82(C-β)，54.78(OCH3)，
50.41(C-α)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z601(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 599(M-H)-該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-8×10-3μM(CD50112μM)CEM-SS3×10-2μM(CD5029μM)MT4 6×10-2μM(CD5044μM)實(shí)施例4制備3’疊氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CH2，X為H。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.227g)的(苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.17g)的纈氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(苯基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯，產(chǎn)率為87.3％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ71.70，72.40；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.80(1H，sb，NH)，7.22-7.41(6H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.67(1H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，2，50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.61(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ174.24(COOMe)，165.70(C-2)，150.63(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，129.91(m，Ph-para)，125.52(m，Ph-ortho)，120.08(m，Ph-meta，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，26.86(CH3)，26.40(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z 553(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 551(M-H)-該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-6×10-3μM(CD5077μM)CEM-SS 1×10-2μM(CD5048μM)MT42×10-2μM(CD5062μM)實(shí)施例5制備3’疊氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CHCH2，X為H。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.227g)的(苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.184g)的亮氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(苯基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(苯基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯，產(chǎn)率為68.3％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ70.6，71.8；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.80(1H，sb，NH)，7.22-7.41(6H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，3.21(1H，m，H-γ)，2，50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.61(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ173.24(COOMe)，163.70(C-2)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，129.91(m，Ph-para)，125.52(m，Ph-ortho)，120.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，46.35(C-γ)，23.40(CH3)，22.86(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z 567(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 565(M-H)-.
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-8×10-3μM (CD5079μM)CEM-SS9×10-2μM (CD5078μMMT4 5×10-2μM (CD5023μM)實(shí)施例6制備3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)氯苯基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物，其中R為H，X為CI。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8C，將1mmol(0.262g)的(對(duì)氯苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.125g)的甘氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(對(duì)氯苯基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)氯苯基取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)率為77.1％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ71.32，72.11；1H NMR(500MHz，DMSO-d6δ9.80(1H，sb，NH)，6.82-7.25(5H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，2，50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 173.24(COOMe)，163.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z547(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z545(M-H)-.該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-8×10-3μM(CD50186μM)CEM-SS 5×10-2μM(CD50218μM)MT45×10-2μM(CD5060μM)實(shí)施例7制備3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)氯苯基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物，其中R為CH3，X為CI。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmo1(0.262g)的(對(duì)氯苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.14g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(對(duì)氯苯基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)氯苯基取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為71.3％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ70.20，71.70；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.81(1H，sb，NH)，6.82-7.28(5H，m，Ph，H-6)，6.36(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.11(1H，m，Ala-NH)，3.86(3H，s，OCH3)，3.66(2H，m，H-α)，2,50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.40(3H，d，Ala-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6δ 177.24(COOMe)，161.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，116.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，35.46(C-2′)，19.86(d，Ala-Me，J＝5Hz)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z 560(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 558 M-H)-.
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-9×10-3μM(CD50188μM))CEM-SS5×10-2μM(CD50123μM)MT4 6×10-2μM(CD5098μM)實(shí)施例8制備3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)氯苯基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物，其中R為C6H5CH2，X為CI。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.262g)的(對(duì)氯苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.215g)的苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(對(duì)氯苯基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.266g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)氯苯基取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為70.8％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ71.70，72.30；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.81(1H，sb，NH)，6.82-7.25(5H，m，Ph，H-6)，7.15-7.35(5H，m，Ph)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.44(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，2，50(1H，m，H-2′)，2.32(2H，m，H-β)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6δ174.39(COOMe)，163.66(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，56.82(C-β)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z 636(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 634(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-8×10-3μM(CD50185μM)CEM-SS5×10-2μM(CD5065μM)MT4 6×10-2μM(CD50122μM)實(shí)施例9制備3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)氯苯基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CH2，X為CI。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.262g)的(對(duì)氯苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.17g)的纈氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(對(duì)氯苯基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)氯苯基取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯，產(chǎn)率為67.3％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ71.60，72.50；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.56(1H，sb，NH)，6.82-7.35(5H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.69(1H，m，H-α)，3.55(1H，m，H-β)，2，56(1H，m，H-2′)，2.12(3H，s，5-Me)，1.51(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ175.24(COOMe)，165.70(C-2)，161.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，26.86(CH3)，26.40(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z 587(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 585 M-H)-。該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-6×10-3μM(CD5077μM)CEM-SS1×10-2μM(CD5048μM)MT4 2×10-2μM(CD5062μM)實(shí)施例10制備3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)氯苯基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CHCH2，X為CI。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8C，將1mmol(0.262g)的(對(duì)氯苯基取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.184g)的亮氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(對(duì)氯苯基取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)氯苯基取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯，產(chǎn)率為66.3％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ71.8，72.3；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.85(1H，sb，NH)，6.82-7.21(5H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.44(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，3.21(1H，m，H-γ)，2，50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.61(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6δ173.24(COOMe)，163.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，46.35(C-γ)，23.40(CH3)，22.86(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z 602(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 600(M-H)-。該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-7×10-3μM(CD50159μM)CEM-SS 9×10-2μM(CD5068μM)MT46×10-2μM(CD5021μM)實(shí)施例11制備3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)硝基苯取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物，其中R為H，X為NO2。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmol(0.273g)的(對(duì)硝基苯取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.125g)的甘氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(對(duì)硝基苯取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)硝基苯取代)硫代磷酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)率為66.1％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ71.32，72.11；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.80(1H，sb，NH)，6.82-7.21(5H，m，Ph，H-6)，6.41(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.85(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，2，50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6δ173.24(COOMe)，163.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，118.08(m，Ph-meta)，113.52(C-5)，84.64(C-1′)，82.40(C-4′)’65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，38.46(C-2′)，12.55(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z 558(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 556(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-9×10-3μM(CD50286μM)CEM-SS 7×10-2μM(CD50118μM)MT45×10-2μM(CD5060μM)實(shí)施例123’疊氮胸苷-5′-(對(duì)硝基苯取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制備，其中R為CH3，X為NO2。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃，將1mmo1(0.273g)的(對(duì)硝基苯取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.14g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(對(duì)硝基苯取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.267g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)硝基苯取代)硫代磷酰丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為71.3％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ70.60，71.30；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 9.82(1H，sb，NH)，6.82-7.28(5H，m，Ph，H-6)，6.36(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.11(1H，m，Ala-NH)，3.86(3H，s，OCH3)，3.66(2H，m，H-α)，2，50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.40(3H，d，Ala-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ177.24(COOMe)，161.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，116.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，35.46(C-2′)，19.86(d，Ala-Me，J＝5Hz)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z572(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z570 M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-9×10-3μM(CD50168μM)CEM-SS6×10-2μM(CD50183μM)MT4 7×10-2μM(CD5098μM)實(shí)施例13制備3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)硝基苯取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物，其中R為C6H5CH2，X為NO2。化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8C，將1mmol(0.273g)的(對(duì)硝基苯取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.215g)的苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(對(duì)硝基苯取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.266g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)硝基苯取代)硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為61.8％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ71.70，72.30；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.81(1H，sb，NH)，6.82-7.25(5H，m，Ph，H-6)，7.15-7.35(5H，m，Ph)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.44(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α，2，50(1H，m，H-2′)，2.32(2H，m，H-β)，2.02(3H，s，5-Me)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ174.39(COOMe)，163.66(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，56.82(C-β)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z 636(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z 634(M-H)-該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-8×10-3μM (CD50185μM)CEM-SS 6×10-2μM (CD50157μM)MT46×10-2μM (CD50122μM)實(shí)施例14制備3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)硝基苯取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CH2，X為NO2。
化合物的結(jié)構(gòu)式
化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8C，將1mmol(0.273g)的(對(duì)硝基苯取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.17g)的纈氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(對(duì)硝基苯取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)硝基苯取代)硫代磷酰纈氨酸甲酯，產(chǎn)率為62.3％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ71.60，72.50；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.56(1H，sb，NH)，6.82-7.35(5H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.41(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.69(1H，m，H-α)，3.55(1H，m，H-β)，2，56(1H，m，H-2′)，2.12(3H，s，5-Me)，1.51(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ176.24(COOMe)，165.70(C-2)，161.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，26.86(CH3)，26.40(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z 598(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z596 M-H)-。該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-9×10-3μM(CD50178μM)CEM-SS 5×10-2μM(CD5048μM)MT48×10-2μM(CD50162μM)實(shí)施例15制備3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)硝基苯取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物，其中R為(CH3)2CHCH2，X為NO2。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟如下1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8C，將1mmol(0.273g)的(對(duì)硝基苯取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol/L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0.184g)的亮氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0.2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待(對(duì)硝基苯取代)二氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0.31g)已溶于THF中的3’疊氮胸苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0.1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝50∶1即可得到產(chǎn)物3’疊氮胸苷-5′-(對(duì)硝基苯取代)硫代磷酰亮氨酸甲酯，產(chǎn)率為65.3％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ71.8，72.3；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.85(1H，sb，NH)，6.82-7.21(5H，m，Ph，H-6)，6.32(1H，m，H-1′)，4.20-4.44(4H，H-3′，H-4′，H-5′)，4.01(1H，m，Ala-NH)，3.88(3H，s，OCH3)，3.57(2H，m，H-α)，3.45(1H，m，H-β)，3.21(1H，m，H-γ)，2，50(1H，m，H-2′)，2.02(3H，s，5-Me)，1.61(3H，s，CH3)，1.42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ173.24(COOMe)，163.70(C-2)，159.91(m，Ph-para)，150.43(C-4)，149.33(d，Ph-ipso，J＝4Hz)，140.76(C-6)，125.52(m，Ph-ortho)，117.08(m，Ph-meta)，111.52(C-5)，84.94(C-1′)，82.40(C-4′)，65.87(C-5′)，60.54(C-3′)，54.78(OCH3)，50.41(C-α)，48.66(C-β)，46.35(C-γ)，23.40(CH3)，22.86(CH3)，37.46(C-2′)，12.60(5-Me)；ESI-MS(pos.)m/z612(M+H)+；ESI-MS(neg.)m/z610(M-H)-.該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗愛(ài)茲病毒-1活性實(shí)驗(yàn)愛(ài)茲病毒＝Human immunodeficiency virusMT-4＝Human leukenia T cellCEM＝Human lymphoblastoid T cellED50＝抗病毒活性指標(biāo)CD50＝細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK-8×10-3μM(CD50159μM)CEM-SS6×10-2μM(CD5088μM)MT4 4×10-2μM(CD50121μM)
權(quán)利要求
1.一種3’疊氮胸苷-5′-(芳香基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于，該化合物的結(jié)構(gòu)式為 上述結(jié)構(gòu)式中R為H、CH3、C6H5CH2、(CH3)2CH2或(CH3)2CHCH2中的任何一種，X為H、Cl或NO2中的任何一種。
2.一種如權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰鹽浴冷卻至-4～-8℃的條件下，將原料(芳香基取代)二氯硫磷溶于已干燥過(guò)的四氫呋喃中，配制成濃度為0.8～1.0mol/L的溶液；2)向上述溶液中加入與原料相同物質(zhì)的量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑，縛酸劑為三乙胺，縛酸劑的加入量是原料物質(zhì)的量的2倍；3)跟蹤上述反應(yīng)進(jìn)程，待原料全部反應(yīng)完畢以后，將與原料相同物質(zhì)的量的已溶于四氫呋喃中的3’疊氮胸苷溶液慢慢滴入第二步的溶液中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加與原料相同物質(zhì)的量的縛酸劑，4)監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，即得到3’疊氮胸苷-5′-(芳香基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有3’疊氮胸苷的硫代磷酰氨基酸酯化合物及其制備方法,其化合物的結(jié)構(gòu)為右式。其制備方法為將原料(芳香基取代)二氯硫磷溶于四氫呋喃(THF)中,加入氨基酸甲酯鹽酸鹽,再滴加縛酸劑,再將3’疊氮胸苷溶液加入上述溶液中,再加入縛酸劑,過(guò)濾,旋轉(zhuǎn)蒸餾,用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離,即得到3’疊氮胸苷－5’－(芳香基取代)硫代磷酰氨基酸酯化合物。用本發(fā)明的方法制備的化合物,具有抗愛(ài)茲病毒藥物活性。
文檔編號(hào)A61P31/12GK1343673SQ0113078
公開(kāi)日2002年4月10日 申請(qǐng)日期2001年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月24日
發(fā)明者趙玉芬, 苗志偉, 付華, 成昌梅, 韓波 申請(qǐng)人:清華大學(xué)