專利名稱：一種生產(chǎn)番茄紅素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種分離和純化番茄紅素的新方法，該番茄紅素原則上是從生物合成的任何天然原料，更具體的說(shuō)是從毛霉目的真菌，如Blaleslea，Choanephora或Phycomyces的深層培養(yǎng)物開(kāi)始，以一種結(jié)晶形式供人體使用。本發(fā)明描述了一種提取方法，該方法可能簡(jiǎn)化回收過(guò)程并使前述方法所涉及的產(chǎn)物的純度得到提高。
所有這些化合物在人類飲食方面均有重要作用，對(duì)它們可作為預(yù)防癌癥和其他人類疾病的抗氧化劑以及可作為維生素A前體的性質(zhì)，已進(jìn)行了廣泛研究。而且由于類胡蘿卜素有由黃到紅的不同著色，它們可用來(lái)作為食品添加劑及人造黃油、黃油、油料、湯、調(diào)料等的著色劑。(Ninet etal.Microbial Technology 2ndEdn.Vol 1 529-544(1979)Academic Press NYEds Peppler HJ and Perlman D.)。
番茄紅素是一種類胡蘿卜素，它作為中間產(chǎn)物在β-胡蘿卜素和胡蘿卜醇的生物合成途徑中產(chǎn)生，屬于碳水化合物組的類胡蘿卜素。其化學(xué)式是C40H56，分子量為536.85，分子式如下 該化合物的性質(zhì)已被廣泛研究。它的抗氧化特性可描述為捕獲人體中持續(xù)產(chǎn)生的自由基，因此它可應(yīng)用于預(yù)防心血管疾病和某些類型的癌癥如前列腺癌(Giovannucci等，J Nat.Cancer Inst.871767-1776(1995)；Stahl等，Arch Biochem.Biophys 3361-9(1996)；Clinton等，Nutr.Rev.5635-51(1998)，這在部分病人中產(chǎn)生需求的增加，因此廠家已開(kāi)始嘗試通過(guò)化學(xué)合成來(lái)制造番茄紅素以滿足這種需求。
番茄紅素作為一種高純度化合物，其生產(chǎn)在過(guò)去是與化學(xué)合成相連系的(US 5208381；US 5166445；US 4105855；US 2842599)，現(xiàn)在由于改進(jìn)的途徑是從天然原料開(kāi)始并與特定萃取過(guò)程相結(jié)合，這種作為爭(zhēng)論主題的生產(chǎn)過(guò)程證明是更有利的，并組成所謂的“天然途徑”來(lái)獲得這些產(chǎn)物。
通過(guò)所謂的“天然途徑”，番茄紅素可從植物產(chǎn)品，如番茄、胡蘿卜、胡椒、植物油等開(kāi)始來(lái)獲得。因此，專利WO97/48287描述了一種制備富含番茄紅素的油性樹(shù)脂的方法，通過(guò)壓榨使番茄成漿，用有機(jī)溶劑從漿中萃取番茄紅素，隨后通過(guò)蒸發(fā)除去溶劑，使得油性樹(shù)脂中番茄紅素的含量在2-10％。
通過(guò)相似的方法從植物和油中來(lái)獲得富含一般意義上的類胡蘿卜素和特定意義上的番茄紅素的油性樹(shù)脂在各種專利中都有描述，US 5245095和EP 580745用鈣鹽進(jìn)行沉淀，US 5019668使用油的轉(zhuǎn)酯作用和隨后的蒸餾過(guò)程，WO 98/16363描述了番茄分餾的各種餾分，其中包括一種富含類胡蘿卜素的油性樹(shù)脂，PCT WO 90/08584描述了在超臨界態(tài)用流動(dòng)相萃取番茄紅素的方法，盡管獲得的提取物是各種類胡蘿卜素的混合物，而且由于其低溶解性，萃取的產(chǎn)量也是很低的。
在所有這些例子中，由于番茄紅素在這些天然產(chǎn)物中的低含量和該化合物在一定器官如葉綠體或成色素細(xì)胞中的胞內(nèi)分布，萃取的產(chǎn)量和獲得的產(chǎn)物純度是低的，因?yàn)楦缓鸭t素的油性樹(shù)脂或脫水的未加工材料的生產(chǎn)伴隨著不同含量的其它類胡蘿卜素或非胡蘿卜素化合物。在大多數(shù)情況下，所描述的萃取方法均需要壓擠水果作為預(yù)處理，以利于溶劑萃取和釋放富含番茄紅素的細(xì)胞內(nèi)容物。最后一點(diǎn)，在這些專利所描述的大多數(shù)過(guò)程中都需要使用有機(jī)溶劑，并有痕量殘存在獲得的油性樹(shù)脂中。
同樣，專利IL 107999描述了從番茄漿開(kāi)始生產(chǎn)特別富含番茄紅素的油性樹(shù)脂的方法，雖然如前述例子一樣，沒(méi)有獲得高純度的番茄紅素晶體，但濃縮了富含番茄紅素的脂類。
另一方面，專利WO 97/15554描述了從胡蘿卜和番茄中提取植物來(lái)源的類胡蘿卜素包括番茄紅素的方法，通過(guò)分離葉綠體和成色素細(xì)胞，利用蛋白水解酶如果膠和/或蛋白酶消化上述器官，釋放與各種結(jié)構(gòu)蛋白相連的番茄紅素。通過(guò)隨后的堿處理和低分子量的醇混合物萃取，可能獲得產(chǎn)量和純度大于油性樹(shù)脂的番茄紅素提取物，盡管沒(méi)有獲得純的番茄紅素晶體，但得到了富含番茄紅素的粗提取物。
另外，在專利EP 608027 A2中，通過(guò)分離番茄紅素以結(jié)晶形式存在的番茄成色素細(xì)胞，獲得濃縮的番茄紅素提取物。這些從番茄成色素細(xì)胞中得到的富含番茄紅素的提取物可不經(jīng)隨后的番茄紅素晶體的提取直接用作著色劑，這避免了提取過(guò)程中番茄紅素顏色的改變，而且不需要使用有機(jī)溶劑。根據(jù)該專利描述的方法，不可能獲得適于食品或藥劑成分的以結(jié)晶形式存在的純的番茄紅素，而僅可以以脫水、凍干或冷凍的形式用作食物著色劑。
番茄紅素的另一個(gè)重要來(lái)源是富含類胡蘿卜素的Dulaniella型的某些微藻。已描述了從這些生物中提取類胡蘿卜素特別是番茄紅素的多種不同方法，例如在US 5378369，US 4713398和US 4680314中，通過(guò)有機(jī)溶劑(氯甲酸，碳水化合物等)或食用油DE4342798進(jìn)行萃取。在PCT WO98/08584中描述了一種不同的過(guò)程，番茄紅素提取物是用CO2在超臨界態(tài)獲得，但這樣得到的提取物中番茄紅素的純度很低。
番茄紅素可通過(guò)在液體培養(yǎng)基中發(fā)酵Mucorales真菌如Phycomyces，Blaleslea或Choanephora而獲得，與從植物產(chǎn)物或藻類生產(chǎn)番茄紅素的方法相比，這種方法的有利之處在于該化合物具有高的濃度，在一些情況下相對(duì)干生物質(zhì)而言可達(dá)到5％(重量)以上(高于從最好的植物中獲得的濃度)，而且利用傳統(tǒng)的突變技術(shù)或應(yīng)用分子生物學(xué)的新技術(shù)得到這些微生物的高產(chǎn)菌株，通過(guò)生物技術(shù)的發(fā)展，對(duì)這些微生物進(jìn)行遺傳操作，有可能提高番茄紅素的含量和產(chǎn)量及刪除其它結(jié)構(gòu)相關(guān)的類胡蘿卜素產(chǎn)物。
如上所述，從天然原料中制備高純度結(jié)晶番茄紅素一般需要一個(gè)用有機(jī)溶劑或流動(dòng)相在超臨界態(tài)進(jìn)行萃取的過(guò)程，然后進(jìn)行各種附加的純化階段如層析、吸附和洗脫過(guò)程以及沉淀或結(jié)晶階段，如專利US 3369974，EP818255和EP242148所述。在大多數(shù)情況下，當(dāng)不進(jìn)行隨后的純化階段時(shí)，可通過(guò)蒸發(fā)溶劑直接從提取物進(jìn)行結(jié)晶，直到超過(guò)溶解度為止，這樣得到的產(chǎn)物純度很低，需對(duì)獲得的低溶解度的番茄紅素進(jìn)行隨后的重結(jié)晶過(guò)程，因此在重結(jié)晶階段需要大量的溶劑，并伴有相當(dāng)大的產(chǎn)量損失(NL 6411184，US 4439629)。
專利申請(qǐng)WO 96/13178描述了制備穩(wěn)定于可食用的液體培養(yǎng)基中的結(jié)晶番茄紅素濃縮物的方法，在該液體中番茄紅素是不溶的，例如乙二醇，乙醇或甘油，通過(guò)研磨得到大小在1-3微米懸浮在液體培養(yǎng)基中的番茄紅素晶體。
此外，專利申請(qǐng)WO 98/43620描述了從一種油性樹(shù)脂中分離番茄紅素晶體的方法，通過(guò)一個(gè)在高溫下對(duì)各種甘油三酯和磷酸鹽進(jìn)行皂化的過(guò)程，隨后用水進(jìn)行洗脫，獲得純度在75-95％的番茄紅素晶體。最近在國(guó)際申請(qǐng)WO 98/03480中描述了制備高純度的β-胡蘿卜素晶體的相似方法，通過(guò)用水、低分子量的醇或丙酮進(jìn)行洗脫，但沒(méi)有描述通過(guò)相似的方法來(lái)生產(chǎn)高純度番茄紅素晶體的應(yīng)用。
一般來(lái)說(shuō)，該過(guò)程由以下階段組成1)從天然生物合成的原料(例如發(fā)酵培養(yǎng)基)中進(jìn)行濕生物質(zhì)(wetbiomass)的分離。
2)通過(guò)用乙醇處理對(duì)濕生物質(zhì)進(jìn)行純化。
3)從乙醇中分離純化的生物質(zhì)。
4)通過(guò)干燥加上其裂解或降解對(duì)純化的生物質(zhì)進(jìn)行調(diào)理(conditioning)。
5)使用有機(jī)溶劑進(jìn)行番茄紅素的固相-液相萃取。
6)對(duì)富集的提取物進(jìn)行濃縮。
7)加入醇類進(jìn)行沉淀/結(jié)晶。
8)過(guò)濾。
9)干燥。
此處所描述的方法可使我們回收到純度為90％以上的結(jié)晶番茄紅素，優(yōu)選可達(dá)到95％以上，更優(yōu)選可達(dá)到98％以上。發(fā)明的詳細(xì)描述由于在發(fā)酵過(guò)程中生物合成的類胡蘿卜素組分的胞內(nèi)特性，從通用方法所制備的培養(yǎng)基中進(jìn)行的回收過(guò)程包括從培養(yǎng)基中分離生物質(zhì)的過(guò)程，其目的是消除或降低在無(wú)生物質(zhì)培養(yǎng)基中的損失。
該分離方法通過(guò)以下所建立的方法進(jìn)行A)過(guò)濾，使用過(guò)濾器通過(guò)常規(guī)技術(shù)進(jìn)行過(guò)濾，過(guò)濾器可以是帶狀過(guò)濾器，旋轉(zhuǎn)過(guò)濾器，壓濾等，在其中由過(guò)濾棉構(gòu)成一個(gè)屏障，可對(duì)生物質(zhì)進(jìn)行分離，只允許無(wú)生物質(zhì)的液體通過(guò)?；駼)離心，利用培養(yǎng)基和生物質(zhì)(通常密度更大)的密度不同，使用機(jī)器如離心機(jī)，玻璃瓶或其他同樣的機(jī)器進(jìn)行離心，其中重相被濃縮，并與含有盡可能少生物質(zhì)的液相分離。本發(fā)明的其中一個(gè)目的是降低損失，優(yōu)化各個(gè)階段的特征以獲得最大量的具最高含量干殘余物的生物質(zhì)，并除去大部分含有最少活性物質(zhì)的發(fā)酵培養(yǎng)基。
由于濕菌絲含有發(fā)酵所產(chǎn)生的95％以上的類胡蘿卜素，更好時(shí)達(dá)到97％，最好可達(dá)到99％以上。從而水相中類胡蘿卜素的含量低于5％，更好時(shí)低于3％，最好時(shí)低于1％。
該菌絲的濕固體可通過(guò)隨后的階段進(jìn)行番茄紅素的分離，但發(fā)現(xiàn)由于發(fā)酵的緣故，它仍然含有相當(dāng)高百分比的親脂成分，在15-20％之間(脂肪酸和油)，這會(huì)在隨后的純化階段中產(chǎn)生問(wèn)題，因此我們?cè)诖颂幗榻B生物質(zhì)的純化過(guò)程。
該純化過(guò)程包括用大量的醇重懸生物質(zhì)該醇可以是甲醇，乙醇，丙醇，異丙醇或其它番茄紅素在其中的溶解度很低的醇類，以合適的比例使液體組分達(dá)到最大純化。也就是說(shuō)，重懸濕菌絲所用的醇量可在1ml/g與10ml/g濕菌絲之間變動(dòng)。重懸溫度可在室溫與醇的沸點(diǎn)之間變動(dòng)，接觸時(shí)間可在5分鐘到24小時(shí)之間變動(dòng)。這樣制備的醇重懸液通過(guò)過(guò)濾或離心，可使濾液或澄清液中的固體含量實(shí)際為零。這樣得到的包含各種比例醇和水的濕菌絲中含有93％以上的發(fā)酵產(chǎn)生的類胡蘿卜素，更好時(shí)可達(dá)95％以上，最好時(shí)可達(dá)97％以上。
這樣產(chǎn)生的培養(yǎng)基殘存物和醇的混合物中，類胡蘿卜素的含量低于2％，更好時(shí)可低于1％。根據(jù)所用培養(yǎng)基的特性使用不同量的醇，通過(guò)這種醇處理，可能除去大量醇溶的親脂性物質(zhì)。進(jìn)行這種預(yù)處理是非常重要的，可使我們獲得高純度的結(jié)晶終產(chǎn)物。另外，從最初的濕菌絲中除去不同比例的水可使干燥過(guò)程大為便利。
作為將生物質(zhì)的分離與隨后利用重懸進(jìn)行純化這兩個(gè)階段組合的可選擇的方案，可以考慮使培養(yǎng)基與醇的直接混合物中測(cè)定的體積比接近1∶1，并維持最小接觸時(shí)間，使得到的純化效果與描述的兩階段方法相當(dāng)，從而使該過(guò)程通過(guò)刪除固相-液相分離操作而得到簡(jiǎn)化。
事實(shí)上，類胡蘿卜素產(chǎn)物是胞內(nèi)產(chǎn)物，這意味著純化的生物質(zhì)需通過(guò)干燥與研磨，干燥與裂解，或者生物質(zhì)的直接裂解進(jìn)行調(diào)理，從而提高與溶劑的混合及利于溶劑的萃取。
將脫水的/純化的菌絲進(jìn)行干燥?？赏ㄟ^(guò)一般的烤爐或連續(xù)過(guò)程進(jìn)行干燥。干燥溫度可在室溫和150℃之間變動(dòng)，最好不要超過(guò)60℃，更不要低于50℃。干燥時(shí)間根據(jù)所用的溫度可在1小時(shí)到72小時(shí)之間變動(dòng)。由于大氣氧的氧化，這些類胡蘿卜素可能發(fā)生分解，因此建議干燥操作在氮?dú)饣蛘咧辽僭谡婵罩羞@樣的無(wú)氧環(huán)境中進(jìn)行。
為了使溶劑更好的接觸所要萃取的類胡蘿卜素，首先需要進(jìn)行菌絲裂解，以使接觸面積達(dá)到最大。干燥破碎菌絲的最適顆粒大小必須小于3毫米，小于1毫米更好，最好小于0.5毫米。
可通過(guò)具旋轉(zhuǎn)或固定零件的機(jī)械系統(tǒng)，如錘，篩等對(duì)干物質(zhì)進(jìn)行有效研磨，通過(guò)旋轉(zhuǎn)柱的互相擠壓或在噴射磨粉機(jī)的快速(瞬時(shí)的)干燥系統(tǒng)中進(jìn)行，在那里濕產(chǎn)物在高溫下被加入到氣體回流中，通過(guò)滯留時(shí)間達(dá)到最小的方式使液體組分中的內(nèi)容物達(dá)到氣化，并根據(jù)密度的不同，將產(chǎn)物運(yùn)輸?shù)綒庑羞M(jìn)行回收。
在干燥和運(yùn)送過(guò)程中，由于顆粒對(duì)壁的撞擊，也有一個(gè)勻化效應(yīng)。
可以用各種有機(jī)溶劑從上述調(diào)理的菌絲中提取番茄紅素。本發(fā)明涉及所謂天然的食品級(jí)溶劑，如酰基酯，最好使用乙酸乙酯、乙酸丙酯，乙酸異丙酯，乙酸丁酯和乙酸異丁酯，它們既對(duì)類胡蘿卜素組分有高溶解度，同時(shí)與屬于ICH的3類溶劑相容。這些溶劑在國(guó)家和商業(yè)水平上，在制藥和食品部門(RDL12/04/90和RDL16/10/96)都是允許的。
萃取溫度在室溫和溶劑的沸點(diǎn)之間變動(dòng)，最好在50℃和80℃之間。萃取時(shí)間對(duì)溶解并不重要，可在1秒到1小時(shí)之間，優(yōu)選在1分鐘到15分鐘之間。所用溶劑的量根據(jù)溫度和菌絲中類胡蘿卜素的豐度在5ml/g和20ml/g之間變動(dòng)。萃取次數(shù)在1到3之間變動(dòng)。萃取的類胡蘿卜素的量大于85％，更好時(shí)大于90％，最好時(shí)大于95％。
一旦獲得富含類胡蘿卜素的提取物后，必須將它濃縮到一定體積。濃縮后類胡蘿卜素在溶劑中的終濃度在10和40g/l之間變動(dòng)。濃縮溫度必須低于80℃，低于70℃更好，最好低于50℃。濃縮時(shí)間必須少于1小時(shí)，少于30分鐘更好，最好是少于15分鐘。
一旦提取物濃縮到所需體積，需要加入使類胡蘿卜素不溶的試劑，具體是指醇類，更具體是指甲醇、乙醇、異丙醇等或其它番茄紅素的溶解度在其中很低的醇類，從而使結(jié)晶番茄紅素的產(chǎn)量得到較大提高。加入的醇類也有一個(gè)純化效應(yīng)，使產(chǎn)物比未加醇類時(shí)更純。結(jié)晶時(shí)間在15分鐘到24小時(shí)之間變動(dòng)，在1小時(shí)到12小時(shí)之間更好，最好在3小時(shí)到8小時(shí)之間。結(jié)晶溫度必須低于25℃，最好低于5℃。
可通過(guò)過(guò)濾或離心從母液中分離晶體，除去浸泡晶體的母液，并用同樣的使晶體不溶的醇類進(jìn)行洗滌。
獲得的晶體在真空中室溫下至少干燥1小時(shí)，直到殘余溶劑的含量符合前面提到的通過(guò)立法規(guī)定的說(shuō)明書中的最大含量。對(duì)番茄紅素而言，規(guī)定其在干燥中的損失小于0.5％。
通過(guò)上述方法得到的晶體純度大于95％，β-胡蘿卜素含量低于3％，其它類胡蘿卜素的含量低于2％。含量的測(cè)定是將晶體溶在正己烷(E1％1cm＝3450)中，利用分光光度法，在472nm處測(cè)定其吸收值。
獲得的結(jié)晶產(chǎn)物可進(jìn)行加工和銷售，或以配方制劑組分的形式進(jìn)行加工和銷售，其中在該制劑中番茄紅素的重量比在1至85％之間，其任選與各種不同酸度的賦形劑或化合物混合，如豆油、玉米油、橄欖油等，優(yōu)選新鮮的或非常新鮮的橄欖油，并且任選加入維生素E型的抗氧化劑。
本發(fā)明中的方法特別適合于從微生物來(lái)源中回收結(jié)晶番茄紅素，藻類、真菌或酵母更好，最好是毛霉目的真菌，特別是B.trispora。
通過(guò)本發(fā)明中的方法獲得的晶體所達(dá)到的高純度以及對(duì)所謂的天然溶劑的使用，使這些晶體可用于食品、制藥或化妝品工業(yè)。
實(shí)施例1收獲3升培養(yǎng)基，其生物合成途徑在番茄紅素水平被中斷。培養(yǎng)基的濃度是每升中含1.4g番茄紅素。在布氏漏斗(用磁漏斗支撐一圓形濾紙或用紙板作為濾膜)中通過(guò)過(guò)濾回收培養(yǎng)基中的生物質(zhì)，得到880克濕生物質(zhì)。該濕生物質(zhì)重懸在5.2升的恒沸異丙醇85/15中，攪拌30分鐘。純化的生物質(zhì)再用布氏漏斗進(jìn)行回收。
該生物質(zhì)于低于45℃真空干燥18小時(shí)，直到殘余溶劑的含量為1-2％。從而獲得150克干燥的純生物質(zhì)，其番茄紅素含量相當(dāng)于2.75％的濃度。
干燥的生物質(zhì)用具1毫米狹縫的錘式研磨機(jī)進(jìn)行研磨，并進(jìn)行調(diào)理，這樣得到的固體具有同樣的特定強(qiáng)度，可用溶劑進(jìn)行萃取。
在70℃將150克磨碎的生物質(zhì)與1500毫升乙酸異丁酯混合，攪拌5分鐘。用濾盤通過(guò)過(guò)濾從富集溶劑中分離處理過(guò)的生物質(zhì)。然后用300毫升熱的乙酸異丁酯在同一個(gè)濾盤中洗滌處理過(guò)的生物質(zhì)，并合并這兩個(gè)溶劑。所有這些富含乙酸異丁酯的溶劑在真空中濃縮，保持溫度低于45℃，直到體積減少至200毫升，以使番茄紅素部分結(jié)晶。為了完成結(jié)晶并獲得更純的番茄紅素，需加入600毫升異丙醇。該混合物在氮?dú)庀掠?-5℃的范圍內(nèi)攪拌3小時(shí)。用布氏漏斗進(jìn)行過(guò)濾，并在布氏漏斗中用25毫升異丙醇洗滌晶體。收集晶體并進(jìn)行干燥，得到3.3克純度為94％的番茄紅素晶體。
實(shí)施例2培養(yǎng)500升發(fā)酵培養(yǎng)基，直接與500升含水共沸異丙醇(異丙醇/水為85/15)混合。攪拌30分鐘后，在濾壓下通過(guò)過(guò)濾從液體中分離生物質(zhì)。大約可收集到130千克濕的純化的生物質(zhì)。
該生物質(zhì)在烤爐中真空干燥18小時(shí)，直到殘余溶劑的含量為1-2％。干燥溫度低于45℃，時(shí)間為12-24小時(shí)。從而獲得30千克生物質(zhì)，其番茄紅素含量相當(dāng)于3％的特定濃度，盡管其純度稍低，但實(shí)際上與實(shí)施例1相同。
干燥的生物質(zhì)用具1毫米狹縫的錘式研磨機(jī)進(jìn)行研磨，并進(jìn)行調(diào)理，這樣得到的固體具有同樣的特定濃度，可用溶劑進(jìn)行萃取。
在70℃將30千克磨碎的固體與350升乙酸異丁酯混合，攪拌15分鐘。用濾盤通過(guò)過(guò)濾從富集溶劑中分離處理過(guò)的生物質(zhì)。然后用100升熱的乙酸異丁酯在同一個(gè)濾盤中洗滌處理過(guò)的生物質(zhì)，濾液與前面的溶劑混合。所有這些富含乙酸異丁酯的溶劑在真空中濃縮，保持溫度低于45℃，直到體積減少至65升，以使番茄紅素部分結(jié)晶。為了完成番茄紅素的結(jié)晶，需加入180升異丙醇。該混合物冷至0-5℃時(shí)攪拌3小時(shí)。用布氏漏斗進(jìn)行過(guò)濾，收集番茄紅素晶體并進(jìn)行干燥，根據(jù)分光光度的測(cè)定，得到500克純度為94％的產(chǎn)物。
權(quán)利要求
1.一種從任何生物合成的天然原料中獲得番茄紅素的方法，其特征在于包含如下步驟●直接用醇類處理生物合成的天然原料，并分離濕的純化的生物質(zhì)；●通過(guò)干燥與裂解或降解，對(duì)濕的純化的生物質(zhì)進(jìn)行調(diào)理；●用有機(jī)溶劑對(duì)純化的生物質(zhì)中含有的番茄紅素進(jìn)行固相-液相萃??；●濃縮富含番茄紅素的提取物；●加入醇，從濃縮的提取物中沉淀/結(jié)晶番茄紅素；●過(guò)濾；●干燥。
2.按照權(quán)利要求1的方法，其特征在于生物合成的天然原料是微生物的發(fā)酵培養(yǎng)基。
3.按照權(quán)利要求1和2中任何一個(gè)的方法，其特征在于獲得的結(jié)晶番茄紅素產(chǎn)物的含量大于95％，β-胡蘿卜素的含量低于3％，其它類胡蘿卜素的含量低于2％，其中含量的測(cè)定是在472nm(E1％1cm丙酮中3450)通過(guò)分光光度法測(cè)定其吸收值進(jìn)行的。
4.按照權(quán)利要求1-3中任何一個(gè)的方法，其特征在于生物質(zhì)的純化是在醇∶生物質(zhì)的比例為1∶1到10∶1之間進(jìn)行的。
5.按照權(quán)利要求1-4中任何一個(gè)的方法，其特征在于醇可在0℃與該醇的沸點(diǎn)之間的溫度范圍內(nèi)使用，優(yōu)選在10℃-50℃之間，更優(yōu)選在室溫與40℃之間。
6.按照權(quán)利要求1中的方法，其特征在于固相-液相萃取階段所用的溶劑為酯類溶劑，最好是乙酸乙酯、乙酸丙酯，乙酸異丙酯，乙酸丁酯或乙酸異丁酯。
7.按照權(quán)利要求6中的方法，其特征在于根據(jù)生物質(zhì)的重量，使用了10至20倍體積的溶劑，優(yōu)選10至15倍體積的溶劑。
8.按照權(quán)利要求6和7中任何一個(gè)的方法，其特征在于溶劑在接近其沸點(diǎn)的溫度使用，優(yōu)選在40℃和80℃之間，更優(yōu)選在60℃至70℃之間。
9.按照權(quán)利要求6至8中任何一個(gè)的方法，其特征在于溶劑使用的方式是其與番茄紅素的接觸時(shí)間少于10分鐘。
10.按照權(quán)利要求1中的方法，其特征在于萃取后濃縮產(chǎn)物的沉淀是通過(guò)加入對(duì)番茄紅素溶解度低的化合物如甲醇、乙醇或異丙醇而進(jìn)行，并且在該化合物中與番茄紅素伴生的親脂性物質(zhì)是可溶的。
11.按照權(quán)利要求1中的方法，根據(jù)該方法獲得的產(chǎn)物可以以結(jié)晶形式進(jìn)行加工和銷售，或以配方制劑組分的形式進(jìn)行加工和銷售，其中在該制劑中番茄紅素的重量比在1至85％之間，優(yōu)選在15至50％之間，其任選與各種不同酸度的賦形劑或化合物混合，如豆油、玉米油、橄欖油等，優(yōu)選新鮮的或非常新鮮的橄欖油，并且任選加入維生素E型的抗氧化劑。
全文摘要
一種獲得番茄紅素的方法。本發(fā)明涉及一種獲得類胡蘿卜素,特別是番茄紅素的新過(guò)程,一般來(lái)說(shuō),從天然生物合成的原料,特別是指從毛霉目的真菌,例如Blakeslea,Choanephora或Phycomyces的深層培養(yǎng)基中進(jìn)行提取。所描述的過(guò)程可能簡(jiǎn)化回收過(guò)程,并提高產(chǎn)物的純度。它包含如下步驟:1)用醇對(duì)生物合成的天然原料(如發(fā)酵培養(yǎng)基)直接進(jìn)行處理,并分離濕的純化的生物質(zhì)。2)通過(guò)干燥與裂解或降解,對(duì)純化的生物質(zhì)進(jìn)行調(diào)理。3)用一種有機(jī)溶劑對(duì)番茄紅素進(jìn)行固相－液相萃取。4)濃縮富集提取液。5)加入醇進(jìn)行沉淀/結(jié)晶。6)過(guò)濾。7)干燥。
文檔編號(hào)A61K47/44GK1370241SQ00811634
公開(kāi)日2002年9月18日 申請(qǐng)日期2000年7月21日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月12日
發(fā)明者安東尼奧·埃斯特雷利亞·德卡斯特羅, 阿爾方薩·J·科拉多斯·德拉·別哈, 埃爾曼諾·貝爾納斯科尼, 曼努埃爾·埃斯特萬(wàn)·莫拉萊斯, 埃米利亞諾·岡薩雷斯·德普拉多 申請(qǐng)人:維塔特內(nèi)有限公司