專利名稱：C－吡唑a的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明背景發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明包括可用作A2A受體激動(dòng)劑的C-吡唑化合物。本發(fā)明化合物是可在心臟顯像中使用的血管擴(kuò)張劑，有助于識(shí)別動(dòng)物特別是人患有疾病如提示患有冠狀動(dòng)脈疾病(CAD)的冠脈灌注不足。本發(fā)明化合物可用作冠狀動(dòng)脈疾病治療劑。
技術(shù)描述在用T1閃爍法或超聲波心動(dòng)描記術(shù)顯像之前，懷疑患有CAD的病人常常用腺苷或二雙嘧達(dá)莫誘導(dǎo)產(chǎn)生藥理性緊張。兩種藥物都通過激活細(xì)胞表面A2受體而影響冠狀阻力血管的擴(kuò)張。盡管最初誘導(dǎo)藥理性緊張是作為一種刺激不能運(yùn)動(dòng)的病人冠脈血管擴(kuò)張的方法，但某些研究顯示，對(duì)于由腺苷或二雙嘧達(dá)莫誘導(dǎo)產(chǎn)生藥理性緊張的病人和進(jìn)行傳統(tǒng)的運(yùn)動(dòng)緊張?jiān)囼?yàn)的病人來說，201T1或超聲波心動(dòng)描記術(shù)顯像的預(yù)測(cè)值是相等的。然而，在這些藥物誘導(dǎo)的藥理性緊張顯像期間，與藥物相關(guān)的副作用如頭痛和惡心的發(fā)生率高，這可用新的治療劑來改善。
肥大細(xì)胞在脫粒過程中涉及腺苷A2B和A3受體，因此哮喘者不適宜用非特異性腺苷激動(dòng)劑誘導(dǎo)藥理性緊張的試驗(yàn)。因此，用腺苷刺激心房和A-V結(jié)A1受體將使S-H間期減少，這可誘導(dǎo)AV阻滯(N.C.Gupto等人；J.Am.Coll.Cardiol；(1992)19248-257)。用腺苷刺激A1受體也可能引起惡心，因?yàn)樵谀c道中發(fā)現(xiàn)有A1受體(J.Nicholls等人；Eur.J.Pham.(1997)338(2)143-150)。
動(dòng)物數(shù)據(jù)提示，在冠狀阻力血管上的特異性腺苷A2A受體亞型介導(dǎo)腺苷引起的冠脈血管擴(kuò)張反應(yīng)，而刺激A2B受體亞型使外周血管舒張(注意后者降低系統(tǒng)血壓)。因此，需要在體內(nèi)刺激A1受體時(shí)無藥理作用的作為A2A受體激動(dòng)劑的藥物組合物。此外需要半衰期短并且可被進(jìn)行藥理性冠脈緊張?jiān)u估病人很好地耐受的A2A受體激動(dòng)劑。
本發(fā)明概述一方面，本發(fā)明包括可用作A2A受體激動(dòng)劑的2-腺苷C-吡唑化合物。
另一方面，本發(fā)明包括包含耐受性好、副作用少的2-腺苷C-吡唑化合物的藥物組合物。
另一方面，本發(fā)明包括可以很容易地與放射性顯像劑聯(lián)合使用以便促進(jìn)冠脈顯像的C-吡唑化合物。
在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包括下式C-吡唑化合物 在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包括利用本發(fā)明化合物刺激哺乳動(dòng)物并且特別是人冠脈血管擴(kuò)張，使心臟緊張引起“竊血”現(xiàn)象以便于心臟顯像的方法。
在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包括包含一種或多種本發(fā)明化合物和一種或多種藥物賦形劑的藥物組合物。
附圖描述

圖1為本發(fā)明化合物18在離體大鼠灌注心臟中產(chǎn)生的A1腺苷受體(AdoR)-介導(dǎo)的負(fù)性變傳導(dǎo)(AV傳導(dǎo)時(shí)間)作用和A2AAdoR-介導(dǎo)的血管擴(kuò)張(增加冠脈傳導(dǎo))作用的濃度反應(yīng)曲線。符號(hào)和誤差線代表分別由四個(gè)心臟測(cè)定得到結(jié)果的平均值±SEM。EC50(效力)為化合物18引起50％最大反應(yīng)的濃度；圖2為本發(fā)明化合物18在離體豬灌注心臟中產(chǎn)生的A1腺苷受體(AdoR)-介導(dǎo)的負(fù)性變傳導(dǎo)(AV傳導(dǎo)時(shí)間)作用和A2AAdoR-介導(dǎo)的血管擴(kuò)張(增加冠脈傳導(dǎo))作用的濃度反應(yīng)曲線。符號(hào)和誤差線代表分別由四個(gè)心臟測(cè)定得到結(jié)果的平均值±SEM。EC50(效力)為化合物18引起50％最大反應(yīng)的濃度；并且圖3為CVT510(A1腺苷受體激動(dòng)劑)和本發(fā)明化合物18(A2A腺苷受體激動(dòng)劑)在離體大鼠灌注心臟中產(chǎn)生的對(duì)房室(AV)傳導(dǎo)時(shí)間的效應(yīng)圖。
現(xiàn)有實(shí)施方案的描述本發(fā)明化合物包括下式2-腺苷C-吡唑化合物 其中R1為-CH2OH，和-C(＝O)NR5R6；R2選自氫、C1-15烷基、C2-15鏈烯基、C2-15鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基，其中烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、NO2、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、SR20、N(R20)2、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、SO2NR20COR22、SO2NR20CO2R22、SO2NR20CON(R20)2、N(R20)2NR20COR22、NR20CO2R22、NR20CON(R20)2、NR20C(NR20)NHR23、COR20、CO2R20、CON(R20)2、CONR20SO2R22、NR20SO2R22、SO2NR20CO2R22、OCONR20SO2R22、OC(O)R20、C(O)OCH2OC(O)R20和OCON(R20)2并且其中各可任選的雜芳基、芳基和雜環(huán)基取代基是由取代基可任選地取代，所述取代基選自鹵素、NO2、烷基、CF3、氨基、一或二烷基氨基、烷基或芳基或雜芳基酰胺、NCOR22、NR20SO2R22、COR20、CO2R20、CON(R20)2、NR20CON(R20)2、OC(O)R20、OC(O)N(R20)2、SR20、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、CN或OR20；R3和R4獨(dú)立地選自氫、C1-15烷基、C2-15鏈烯基、C2-15鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基、鹵素、NO2、CF3、CN、OR20、SR20、N(R20)2、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、SO2NR20COR22、SO2NR20CO2R22、SO2NR20CON(R20)2、N(R20)2NR20COR22、NR20CO2R22、NR20CON(R20)2、NR20C(NR20)NHR22、COR20、CO2R20、CON(R20)2、CONR20SO2R22、NR20SO2R22、SO2NR20CO2R22、OCONR20SO2R22、OC(O)R20、C(O)OCH2OC(O)R20和OCON(R20)2，其中烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基取代基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、NO2、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、SR20、N(R20)2、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、SO2NR20COR22、SO2NR20CO2R22、SO2NR20CON(R20)2、N(R20)2NR20COR22、NR20CO2R22、NR20CON(R20)2、NR20C(NR20)NHR22、COR20、CO2R20、CON(R20)2、CONR20SO2R22、NR20SO2R22、SO2NR20CO2R22、OCONR20SO2R22、OC(O)R20、C(O)OCH2OC(O)R20和OCON(R20)2，并且其中各可任選的雜芳基、芳基和雜環(huán)基取代基是由取代基可任選地取代，所述取代基選自鹵素、NO2、烷基、CF3、氨基、一或二烷基氨基、烷基或芳基或雜芳基酰胺、NCOR22、NR20SO2R22、COR20、CO2R20、CON(R20)2、NR20CON(R20)2、OC(O)R20、OC(O)N(R20)2、SR20、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、CN或OR20；
R5和R6各獨(dú)立地為氫、由1-2個(gè)取代基取代的C1-15烷基，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、NO2、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、SR20、N(R20)2、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、SO2NR20COR22、SO2NR20CO2R22、SO2NR20CON(R20)2、N(R20)2NR20COR22、NR20CO2R22、NR20CON(R20)2、NR20C(NR20)NHR23、COR20、CO2R20、CON(R20)2、CONR20SO2R22、NR20SO2R22、SO2NR20CO2R22、OCONR20SO2R22、OC(O)R20、C(O)OCH2OC(O)R20和OCON(R20)2，并且其中各可任選的雜芳基、芳基和雜環(huán)基取代基是由取代基可任選地取代，所述取代基選自鹵素、NO2、烷基、CF3、氨基、一或二烷基氨基、烷基或芳基或雜芳基酰胺、NCOR22、NR20SO2R22、COR20、CO2R20、CON(R20)2、NR20CON(R20)2、OC(O)R20、OC(O)N(R20)2、SR20、S(O)22、SO2R22、SO2N(R20)2、CN或OR20；R20選自H、C1-15烷基、C2-15鏈烯基、C2-15鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基，其中烷基、鏈烯基、鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基取代基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、烷基、一或二烷基氨基、烷基或芳基或雜芳基酰胺、CN、O-C1-6烷基、CF3、芳基和雜芳基；并且R22選自C1-15烷基、C2-15鏈烯基、C2-15鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基，其中烷基、鏈烯基、鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基取代基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、烷基、一或二烷基氨基、烷基或芳基或雜芳基酰胺、CN、O-C1-6烷基、CF3和雜芳基；并且，其中R1＝CH2OH，R3為H，R4為H，吡唑環(huán)通過C4連接，并且R2不為H。
當(dāng)所述化合物選自下式化合物時(shí) 優(yōu)選地R1為-CH2OH；R2選自氫、C1-8烷基，其中烷基為由一個(gè)獨(dú)立地選自芳基、CF3、CN的取代基可任選地取代的，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3或CN可任選地取代的；R3和R4各獨(dú)立地選自氫、甲基并且更優(yōu)選地R3和R4各為氫。
當(dāng)所述化合物選自下式化合物時(shí) 優(yōu)選地R1為-CH2OH；R2選自氫和由苯基可任選地取代的C1-8烷基。更優(yōu)選地，R2選自芐基和戊烷基；R3選自氫、C1-6烷基、芳基，其中烷基和芳基取代基是由1-2獨(dú)立地選自鹵素、芳基、CF3、CN的取代基可任選地取代的，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3或CN可任選地取代的；R4選自氫和C1-6烷基，并且更優(yōu)選地，R4選自氫和甲基。
最優(yōu)選地，本發(fā)明化合物選自(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-芐基吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-[6-氨基-2-(1-戊基吡唑-4-基]嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-[6-氨基-2-[1-甲基吡唑-4-基]嘌呤-9-基]-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(甲基乙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(3-苯基丙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(4-叔丁基芐基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-(6-氨基-2-吡唑-4-基嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-戊-4-烯基吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-癸基吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(環(huán)己基甲基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(2-苯基乙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(3-環(huán)己基丙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(2-環(huán)己基乙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇及其混合物。
下列定義適用于本文所使用的術(shù)語。
獨(dú)立的或組合的“鹵”或“鹵素”是指鹵素，即氯(Cl)、氟(F)、溴(Br)、碘(I)。
“羥基”是指基團(tuán)-OH。
“巰基”是指基團(tuán)-SH。
獨(dú)立的或組合的“烷基”是指鏈烷烴衍生的含1-20，優(yōu)選1-15個(gè)碳原子(除非特別定義)的基團(tuán)。所述烷基是直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)烷基。優(yōu)選包含1-15，更優(yōu)選1-8，甚至更優(yōu)選1-6，還更優(yōu)選1-4并且最優(yōu)選1-2個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基等。本文使用術(shù)語“低級(jí)烷基”來描述上述直鏈烷基。優(yōu)選地，環(huán)烷基為每個(gè)環(huán)上含有3-8，更優(yōu)選3-6個(gè)環(huán)成員的單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)系統(tǒng)，如環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、金剛烷基等。烷基也包括含有環(huán)烷基或由環(huán)烷基部分間斷的直鏈或支鏈烷基。直鏈或支鏈烷基可在任何有效點(diǎn)連接以便產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物。其實(shí)例包括但不限制于4-(異丙基)-環(huán)己基乙基或2-甲基-環(huán)丙基戊基。取代的烷基為先前定義的、獨(dú)立地由1-3個(gè)取代基取代的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)烷基，其中所述取代基選自鹵素、羥基、烷氧基、烷硫基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；ⅤＱ趸?、芳氧基、雜芳氧基、由烷基、芳基或雜芳基可任選地一取代或二取代的氨基、脒基、由烷基、芳基、雜芳基或制劑可任選地取代的脲、由烷基、芳基或雜芳基N-一取代或N，N-二取代的氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、芳基磺?；被?、雜芳基磺酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基等。
單獨(dú)或組合的“鏈烯基”是指含有2-20，優(yōu)選2-17，更優(yōu)選2-10，甚至更優(yōu)選2-8，最優(yōu)選2-4個(gè)碳原子并且至少含有一個(gè)，優(yōu)選1-3，更優(yōu)選1-2，最優(yōu)選一個(gè)碳碳雙鍵的直鏈、支鏈或環(huán)狀烴。在環(huán)烷基情況下，一個(gè)以上碳碳雙鍵共軛不能為該環(huán)提供芳香性。碳碳雙鍵也可以包含在環(huán)烷基部分中，環(huán)丙基除外，或包含在直鏈或支鏈部分中。鏈烯基的實(shí)例包括乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、環(huán)己烯基、環(huán)己烯基烷基等。取代的鏈烯基為先前定義的、獨(dú)立地由1-3個(gè)取代基取代的直鏈鏈烯基、支鏈鏈烯基或環(huán)烯基，其中所述取代基選自鹵素、羥基、烷氧基、烷硫基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；?、酰氧基、芳氧基、雜芳氧基、由烷基、芳基或雜芳基可任選地一取代或二取代的氨基、脒基、由烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基可任選地取代的脲、可任選地由烷基、芳基或雜芳基N-一取代或N，N-二取代的氨基磺?；?、烷基磺酰基氨基、芳基磺?；被?、雜芳基磺酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、雜芳氧基羰基等，這些取代基可在任何有效點(diǎn)連接以便產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物。
單獨(dú)的或組合的“鏈炔基”是指含有2-20，優(yōu)選2-17，更優(yōu)選2-10，甚至更優(yōu)選2-8，最優(yōu)選2-4個(gè)碳原子并且至少含有一個(gè)，優(yōu)選1一個(gè)碳碳三鍵的直鏈或支鏈烴。鏈炔基的實(shí)例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基等。取代的鏈炔基是指先前定義的、獨(dú)立地由1-3個(gè)取代基取代的直鏈鏈炔基或支鏈鏈炔基，其中所述取代基選自鹵素、羥基、烷氧基、烷硫基、烷基亞磺?；?、烷基磺酰基、酰氧基、芳氧基、雜芳氧基、可任選地由烷基、芳基或雜芳基一取代或二取代的氨基、脒基、可任選地由烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基取代的脲、可任選地由烷基、芳基或雜芳基N-一取代或N，N-二取代的氨基磺?；⑼榛酋；被?、芳基磺酰基氨基、雜芳基磺酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基等，這些取代基可在任何有效點(diǎn)連接以便產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物。
“烷基鏈烯基”是指基團(tuán)-R-CR’＝CR’’’R’’’’，其中R為低級(jí)烷基或取代的低級(jí)烷基，R’、 R’’’、R’’’’可以獨(dú)立地為氫、鹵素、低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、下文所定義的?；⒎蓟?、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基。
“烷基鏈炔基”是指基團(tuán)-RC≡CR’，其中R為低級(jí)烷基或取代的低級(jí)烷基，R’為氫、低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、下文所定義的酰基、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基。
“烷氧基”是指基團(tuán)OR，其中R為低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、下文所定義的?；?、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳烷基、雜烷基、雜芳烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)雜烷基或取代的環(huán)雜烷基。
“烷硫基”是指基團(tuán)-S(O)n＝1-2-R，其中R為低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、本文所定義的芳基、取代的芳基、芳烷基、或取代的芳烷基。
“?；笔侵富鶊F(tuán)-C(O)R，其中R為氫、低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、本文所定義的芳基、取代的芳基等。
“芳氧基”是指基團(tuán)-OAr，其中Ar為本文所定義的芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基。
“氨基”是指基團(tuán)NRR’，其中R和R’可以獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、本文所定義的芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基或?；?。
“酰氨基”是指-C(O)NRR’，其中R和R’可以獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、本文所定義的芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基。
“羧基”是指基團(tuán)-C(O)OR，其中R為氫、低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、本文所定義的單一的芳基、雜芳基和取代的雜芳基。
單獨(dú)的或組合的“芳基”是指未稠合的或由優(yōu)選含有5-7，更優(yōu)選5-6個(gè)環(huán)成員的環(huán)烷基稠合的和/或由1-3個(gè)取代基可任選地取代苯基或萘基，其中所述取代基選自鹵素、羥基、烷氧基、烷硫基、烷基亞磺?；⑼榛酋；ⅤＱ趸?、芳氧基、雜芳氧基、可任選地由烷基、芳基或雜芳基一取代或二取代的氨基、脒基、可任選地由烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基取代的脲、可任選地由烷基、芳基或雜芳基N-一取代或N，N-二取代的氨基磺?；?、烷基磺?；被?、芳基磺?；被?、雜芳基磺酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基等。
“取代的芳基”是指可任選地由一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)取代的芳基，其中所述官能團(tuán)選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷硫基、雙亞乙基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、巰基、磺酰胺基等。
“雜環(huán)基”是指具有單環(huán)(例如嗎啉基、吡啶基或呋喃基)或多個(gè)稠合環(huán)(例如萘基吡啶基、喹喔啉基、喹啉基、吲嗪基或苯并[b]噻吩基)并且環(huán)內(nèi)至少具有一個(gè)雜原子如N、O或S的飽和的、不飽和的或芳族碳環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)可以是由取代基可任選地取代，所述取代基選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷硫基、雙亞乙基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、巰基、磺酰胺基等。
單獨(dú)的或組合的“雜芳基”是指含有一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選1-3，甚至更優(yōu)選1-2個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、S和N雜原子并且是由1-3個(gè)取代基可任選地取代具有5或6個(gè)環(huán)原子的單環(huán)芳族環(huán)結(jié)構(gòu)，或具有8-10個(gè)環(huán)原子的二環(huán)芳族基團(tuán)，所述取代基選自鹵素、羥基、烷氧基、烷硫基、烷基亞磺?；?、烷基磺酰基、酰氧基、芳氧基、雜芳氧基、可任選地由烷基、芳基或雜芳基一取代或二取代的氨基、脒基、可任選地由烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基取代的脲、可任選地由烷基、芳基或雜芳基N-一取代或N，N-二取代的氨基磺?；?、烷基磺酰基氨基、芳基磺?；被?、雜芳基磺酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基等。雜芳基也包含氧化的S或N，如亞磺?；?、磺酰基和環(huán)上叔氮的N-氧化物。碳或氮原子是雜芳環(huán)結(jié)構(gòu)的連接點(diǎn)，這樣可以保留穩(wěn)定的芳環(huán)。雜芳基的實(shí)例為吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、喹唑啉基、嘌呤基、吲哚基、喹啉基、嘧啶基、吡咯基、惡唑基、噻唑基、噻吩基、異惡唑基、氧雜噻二唑基、異噻唑基、四唑基、咪唑基、三嗪基、呋喃基、苯并呋喃基、吲哚基等。取代的雜芳基包含在有效的碳或氮上連接以便產(chǎn)生穩(wěn)定化合物的取代基。
單獨(dú)的或組合的“雜環(huán)基”是指具有5-10個(gè)原子的，環(huán)上的1-3個(gè)碳原子被O、S或N取代的，并且是未稠合或與苯稠合的或者與具有5-6個(gè)環(huán)成員的雜芳基稠合的和/或如環(huán)烷基中所述是未取代或取代的非芳族環(huán)烷基。雜芳基也包含氧化的S或N，如亞磺?；?、磺?；铜h(huán)上叔氮的N-氧化物。連接點(diǎn)在碳或氮原子上。雜環(huán)基的實(shí)例為四氫呋喃基、二氫吡啶基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、二氫苯并呋喃基、二氫吲哚基等。取代的雜環(huán)基包含在有效的碳或氮上連接以便產(chǎn)生穩(wěn)定化合物的取代基。
“取代的雜芳基”是指可任選地由一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)一取代或多取代的雜環(huán)，所述官能團(tuán)選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷硫基、雙亞乙基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、巰基、磺酰胺基等。
“芳烷基”是指基團(tuán)-R-Ar，其中Ar為芳基并且R為低級(jí)烷基或取代的低級(jí)烷基。芳基可以是由取代基可任選地取代所述取代基的鹵素、低級(jí)烷基、烷氧基、烷硫基、雙亞乙基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、巰基、磺酰胺基等。
“雜烷基”是指基團(tuán)-R-Het，其中Het為雜環(huán)基并且R為低級(jí)烷基。雜烷基可以是由取代基可任選地取代，所述取代基選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷硫基、雙亞乙基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、巰基、磺酰胺基等。
“雜芳基烷基”是指基團(tuán)-R-HetAr，其中Ar為雜芳基并且R為低級(jí)烷基或取代的低級(jí)烷基。雜芳基烷基可以是由取代基可任選地取代，所述取代基選自鹵素、低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、烷氧基、烷硫基、雙亞乙基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、巰基、磺酰胺基等。
“環(huán)烷基”是指含有3-15個(gè)碳原子的二價(jià)環(huán)或多環(huán)烷基。
“取代的環(huán)烷基”是指包含一個(gè)或多個(gè)取代基的環(huán)烷基，所述取代基選自鹵素、低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、烷氧基、烷硫基、雙亞乙基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、巰基、磺酰胺基等。
“環(huán)雜烷基”是指其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)上碳原子被雜原子(例如N、O或S)取代的環(huán)烷基。
“取代的環(huán)雜烷基”是指本文所定義的包含一個(gè)或多個(gè)取代基的環(huán)雜烷基，所述取代基選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷硫基、雙亞乙基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、巰基、磺酰胺基等。
“烷基環(huán)烷基”是指基團(tuán)-R-環(huán)烷基，其中環(huán)烷基為為環(huán)烷基并且R為低級(jí)烷基或取代的低級(jí)烷基。環(huán)烷基可以是由取代基可任選地取代，所述取代基選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷硫基、雙亞乙基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、巰基、磺酰胺基等。
“烷基環(huán)雜烷基”是指基團(tuán)-R-環(huán)雜烷基，其中R為低級(jí)烷基或取代的低級(jí)烷基。環(huán)雜烷基可以是由取代基可任選地取代，所述取代基選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷硫基、氨基、酰氨基、羧基、雙亞乙基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、巰基、磺酰胺基等。
本發(fā)明化合物可如合成方案1-5所述制備。通式II化合物
可通過鈀介導(dǎo)的化合物1與式VIII表示的鹵代-吡唑在銅鹽存在或不存在下偶聯(lián)(合成方案4)(K.Kato等人，J.Org.Chem.1997，62，6833-6841；Palladium Reagents and Catalysts-Innovations in Organic Synthesis，Tsuji，John Wiley and Sons，1995)，然后用TBAF或NH4F脫保護(hù)(Markiewica等人，Tetrahedron Lett.(1988)，29，1561)制備。化合物1的制備先前已經(jīng)描述過(K.Kato等人，J.Org.Chem.1997，62，6833-6841)并且在合成方案5中描述。
通式VI化合物可如合成方案2所述制備。II與2，2-二甲氧基丙烷在酸存在下反應(yīng)得到的化合物III合成方案2
可用高錳酸鉀或氯鉻酸吡啶翁等氧化為羧酸IV(以結(jié)構(gòu)上類似的化合物為基礎(chǔ))(Jones等人，J.Am.Chem.Soc.(1949)，71，3994；Hudlicky，Oxidations in organic chemistry，American Chemical Society，Washington D.C.，1990)，得到化合物IV。式NHR5R6伯胺或仲胺和化合物IV可通過使用DCC(Fujino等人，Chem.Pharm.Bull.(1974)，22，1857)，PyBOP(J.Martinez等人，J.Med.Chem.(1988)，28，1967或PyBrop(J.Caste等人，Tetrahedron，(1991)，32，1967)偶聯(lián)條件反應(yīng)，得到化合物V。化合物V的脫保護(hù)可通過與80％乙酸水溶液(T.W.Green and P.G.M.Wuts，(1991)，Protective Group in Organic Synthesis，A，Wiley-Interscience publication)或與無水HCl(4N)一起加熱進(jìn)行，得到通式VI化合物。
合成方案3
或者，通式II化合物也可以通過合成方案3所示的Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)制備。2-碘腺苷6可按照文獻(xiàn)方法，從鳥苷開始經(jīng)過4步反應(yīng)制備(M.J.Robins等人，Can.J.Chem.(1981)，59，2601-2607；J.F.Cerster等人，Org.Synthesisi，---242-243；V.Nair等人，J.Org.Chem.，(1988)，53，3051-3057)。鈀介導(dǎo)的6與適宜取代的吡唑-硼酸XVII在堿存在下進(jìn)行Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)可提供通式II最終化合物(A.Suzuki，Acc.Chem.Res(1982)，15，178)。如果需要，在6上的2’，3’，5’羥基可在Suzuki偶聯(lián)前保護(hù)為TBDMS醚。
通式VIII化合物可通過商業(yè)渠道獲得或按照合成方案4所示的步驟制備。式IX 1，3-二酮化合物與肼在適宜的溶劑中縮合可提供通式X吡唑(R.H.Wiley等人，Org.Synthesis，Coll.Vol IV(1963)，351)。這些吡唑可用各種烷基鹵進(jìn)行N-烷基化，得到式XI化合物，該化合物碘化后得到通式VIII 4-碘衍生物(R.Huttel等人，Justus Liebigs Ann.Chem.(1955)，593，200)。
合成方案4 通式XV 5-碘吡唑可按照合成方案5所述的步驟制備。
合成方案5 式XII 1，3-二酮化合物與肼在適宜的溶劑中縮合可提供通式XIII吡唑。這些吡唑可用各種烷基鹵進(jìn)行N-烷基化，得到式XIV化合物。用強(qiáng)堿奪取5-H，然后用碘中止反應(yīng)，得到通式XV 5-碘衍生物(F.Effenberger等人，J.Org.Chem.(1984)，49，4687)。
4-或5-碘吡唑可如合成方案6所示轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的硼酸。用n-buLi進(jìn)行金屬轉(zhuǎn)移，然后用硼酸三甲酯處理可得到通式XVI化合物，該化合物水合成方案6 解可提供通式XVII硼酸(F.C.Fischer等人，RECUEIL(1965)，84，439)。
2-甲錫烷基腺苷1可按照文獻(xiàn)方法，從通過商業(yè)渠道獲得的6-氯嘌呤核苷開始，經(jīng)過3步反應(yīng)制備(K.Kato等人，J.Org.Chem.(1997)，62，6833-6841)。Tri TBDMS衍生物可通過在DMF中用TBDMSCl和咪唑處理8得到。用LTMP鋰化，然后用氯化正丁基錫中止反應(yīng)，得到單一的2-甲錫烷基衍生物10。在2-丙醇中氨解得到2-甲錫烷基腺苷1。1與1-芐基-4-碘吡唑在Pd(PPh3)4和CuI存在下進(jìn)行Stille偶聯(lián)得到11(K.Kato等人，J.Org.Chem.(1997)，62，6833-6841)。將2′，3′和5′羥基上的甲硅烷基在甲醇中用0.5M氟化銨脫保護(hù)，得到較高收率的12(合成方案7)?；衔?8-23用類似的方法制備。用于制備本發(fā)明化合物的方法不受上述方法限制。其他方法可在下列原始資料中發(fā)現(xiàn)并且引入本供參考(J.March，AdvancedOrganic Chemistry；Reaction Mechanisms and Studies(1992)，A WileyInterscience Publications；and J.Tsuji，Palladium reagents andcatalysts-Innovations in organic synthesis，John Wiley and Sons，1995)。
合成分案7
本發(fā)明化合物與放射性顯像劑聯(lián)合使用使冠脈活動(dòng)顯像。與心房和AV結(jié)中的腺苷A1受體和/或外周血管中的A2B受體截然不同，本發(fā)明化合物是確信在冠脈血管中特異性激活血管A2A受體的A2A激動(dòng)劑，因此避免了不需要的副作用。當(dāng)給予治療量時(shí)，本發(fā)明化合物引起冠脈血管擴(kuò)張，誘導(dǎo)冠脈竊血，其中健康的冠脈血管從非健康的血管竊血，導(dǎo)致心臟組織血流不足。通過冠脈顯像來確定具有健康和不健康血流的冠脈區(qū)域。較低劑量的A2A激動(dòng)劑可以在慢性CAD治療中提供有益的冠脈血管擴(kuò)張(不太嚴(yán)重)。
與A2A激動(dòng)劑一樣，本發(fā)明化合物也用于血管成形術(shù)的輔助治療以便引起擴(kuò)張，抑制血小板聚集和作為一般的抗炎劑。A2A激動(dòng)劑如本發(fā)明化合物可通過阻止中性白細(xì)胞激活提供上述治療效益(Purinergic Approachesin Experimental Therapeutics K.A. Jacobson and M.F. Jarvis 1997 Wiley，New York)。本發(fā)明化合物對(duì)血小板和中性白細(xì)胞聚集并阻斷血管的不再流狀況也是有效的。與A2A激動(dòng)劑一樣，本發(fā)明化合物通過阻止中性白細(xì)胞和血小板激活有效地治療不再流狀況(例如，確信所述化合物可阻止中性白細(xì)胞釋放過氧化物)。與A2A激動(dòng)劑一樣，本發(fā)明化合物通過它們對(duì)中性白細(xì)胞的抗炎作用也可以用作心臟保護(hù)劑。因此，當(dāng)心臟將經(jīng)歷局部缺血狀態(tài)如移植時(shí)，它們是有用的。
本發(fā)明也包括上述A2A激動(dòng)劑的前藥。前藥是一種經(jīng)過化學(xué)修飾并且在其作用部位可能是無生物活性的，但可通過一種或多種酶過程或體內(nèi)過程降解或修飾成生物活性形式的藥物。本發(fā)明前藥應(yīng)該具有與母化合物不同的藥動(dòng)學(xué)特征，因?yàn)樗軌蚋纳瓶缯衬ど掀さ奈?、是更好的鹽制劑和/具有更好的溶解性并且能夠改善系統(tǒng)的穩(wěn)定性。優(yōu)選地，上述化合物可在一個(gè)或多個(gè)羥基上進(jìn)行修飾。所述修飾可以是(1)例如，可以由酯酶或脂肪酶裂開的酯或氨基甲酸酯衍生物；(2)可由特異性或非特異性蛋白酶識(shí)別的肽；或(3)通過膜選擇作用在作用部位蓄積的衍生物或前藥形式或修飾的前藥形式，或者上述(1)-(3)的任一組合。
所述組合物可通過口服、靜脈內(nèi)、表皮或本領(lǐng)域已知的給予治療劑的任何其他方法給予。治療方法包括給予優(yōu)選分散在藥用載體中的有效量所選擇化合物?；钚越M分的劑量單位通常為0.01-100mg/kg，而且本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易根據(jù)給藥途徑、病人的年齡和疾病狀況確定。典型地，在冠脈顯像前大約5分鐘至大約1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，給予該劑量的化合物溶液。當(dāng)給予治療量本發(fā)明化合物時(shí)，預(yù)期沒有任何無法接受的毒理學(xué)作用。
如果本發(fā)明最終化合物包含堿性基團(tuán)，可制備酸加成鹽?；衔锏乃峒映甥}可按照標(biāo)準(zhǔn)方法，在適宜的溶劑中，由母化合物和過量的酸如鹽酸、氫溴酸、流速、磷酸、乙酸、馬來酸、琥珀酸或甲磺酸制備。鹽酸是特別有用的。如果最終化合物包含酸性基團(tuán)，可制備陽離子鹽。典型地，將母化合物用過量的堿性試劑如包含適宜陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或醇化物處理。陽離子如Na+、K+、Ca+2和NH4+是可藥用鹽中存在的陽離子的實(shí)例。某些化合物形成內(nèi)鹽或兩性離子，它們也可能是適宜的。
包含本發(fā)明化合物的藥物組合物，和/或其衍生物可以配制成用于非腸道給藥的溶液劑或凍干粉劑。粉劑可以在使用前通過加入適宜的稀釋劑或其它可藥用載體重新配制。如果以液體形式使用，本發(fā)明組合物優(yōu)選地配制成緩沖、等滲的水溶液。適宜的稀釋劑的實(shí)例為標(biāo)準(zhǔn)的等滲鹽溶液、標(biāo)準(zhǔn)的5％葡萄糖水溶液和緩沖的醋酸鈉或醋酸銨溶液。所述液體制劑適用于非腸道給藥，但也可以用于口服給藥。包含本發(fā)明化合物的藥物組合物中可能需要加入賦形劑如聚乙烯吡咯烷酮、明膠、羥基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、甘露糖醇、氯化鈉、枸櫞酸鈉或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何其他賦形劑。或者，所述藥物組合物可以制備成用于口服給藥的膠囊劑、片劑或乳劑或糖漿劑?？梢约尤肟伤幱霉腆w或液體載體來增強(qiáng)或穩(wěn)定所述組合物，或促進(jìn)所述組合物的制備。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、甘油、鹽水、醇或水。固體載體包括淀粉、乳糖、硫酸鈣、二水合物、teffaalba、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石粉、果膠、阿拉伯膠、瓊脂或明膠。所述載體也可以包括持續(xù)釋放材料如單一的或與蠟混合的單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。固體載體的量可以改變，但優(yōu)選地，每劑量單位含大約20mg至大約1g。藥用配料可使用常規(guī)技術(shù)配制，如通過碾磨、混合、制粒和壓片(如果需要)來制備片劑，；或者通過碾磨、混合和填充制備來硬明膠膠囊。當(dāng)使用液體載體時(shí)，所述制劑可以是糖漿劑、酏劑、乳劑或含水或不含水的懸浮液形式。所述液體制劑可以直接給予或填充到軟明膠膠囊中。優(yōu)選地，本發(fā)明組合物以溶液劑形式通過口服給予或者通過連續(xù)輸注或以濃縮藥團(tuán)形式靜脈內(nèi)給予。
下列實(shí)施例用于說明本發(fā)明。所述實(shí)施例并不以任何方式限制本發(fā)明范圍，而是為了顯示如何制備和使用本發(fā)明化合物。在實(shí)施例中，所有溫度為攝氏度。
實(shí)施例1 4-碘-1-芐基吡唑(13)在0℃下，向4-碘吡唑(400mg，2mmol)的DMF(4ml)溶液中加入氫化鈉(80mg，60％的礦物油分散體，2mmol)，然后加入芐基溴(342mg，2mmol)并將該反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物真空濃縮，殘?jiān)ㄟ^柱色譜層析純化，得到幾乎定量收率的N-芐基吡唑。1H NMR 5.29(s，2H)，7.18-7.28(m，2H)，7.28-7.40(m，4H)，7.53(s，1H)。
實(shí)施例2 9-{(2R，3R，4R，5R)-3，4-雙(1，1，2，2，-四甲基-lsilapropoxy)-5-[(1，1，2，2，-四甲基-1-silapropoxy)甲基]oxolan-2-基}-2-[1-芐基吡唑-4-基]嘌呤-6-基胺(11)將化合物1(50mg，0.056mmol)、N-芐基-4-碘吡唑13(50mg，0.183mmol)、Pd(PPh3)4(20mg(15mol％)和CuI(40mg，0.2mmol)的DMF(1ml)混合物在90℃下攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物真空濃縮，殘?jiān)ㄟ^制備薄層色譜層析(二氯甲烷∶甲醇10∶1)純化，得到化合物111H NMR(CDCl3)δ0.00(s，3H，CH3)，0.01(s，3H，CH3)，0.04(s，3H，CH3)，0.07(s，3H，CH3)，0.11(s，3H，CH3)，，0.14(s，3H，CH3)，0.78(s，9H，t-bu)，0.83(s，9H，t-bu)，0.91(s，9H，t-bu)，3.80(d，1H)，4.05(d，1H)，4.11-4.12(m，1H)，4.33(d，1H)，4.50-4.52(m，1H)，5.35(m，2H)，5.65(bs，2H，D2O exchangeable)，6.05(d，1H)，7.28-7.40(m，5H)，7.98(s，1H)，8.18(s，1H)，8.22(s，1H)。 9-{(2R，3R，4R，5R)-3，4-雙(1，1，2，2，-四甲基-lsilapropoxy)-5-[(1，1，2，2，-四甲基-1-silapropoxy)甲基]oxolan-2-基}-2-[1-戊基吡唑-4-基]嘌呤-6-基胺(14)以制備化合物11的方式制備化合物14，但用4-碘戊基吡唑代替4-碘芐基吡唑，得到化合物141H NMR(CDCl3)0.00(s，3H，CH3)，0.01(s，3H，CH3)，0.04(s，3H，CH3)，0.07(s，3H，CH3)，0.11(s，3H，CH3)，，0.14(s，3H，CH3)，0.78(s，9H，t-bu)，0.80(t，3H)，0.83(s，9H，t-bu)，0.91(s，9H，t-bu)，1.25-1.40(m，4H)，1.85-1.95(m，2H)，3.82(d，1H)，4.08(d，1H)，4.20-4.28(m，3H)，4.32-4.34(m，1H)，4.55-4.57(m，1H)，5.35(m，2H)，5.70(bs，2H，D2O exchangeable)，6.08(d，1H)，7.28-7.40(m，5H)，8.05(s，1H)，8.15(s，1H)，8.20(s，1H)。 9-{(2R，3R，4R，5R)-3，4-雙(1，1，2，2，-四甲基-1silapropoxy)-5-[(1，1，2，2，-四甲基-1-silapropoxy)甲基]oxolan-2-基}-2-[1-甲基吡唑-4-基]嘌呤-6-基胺(15)以制備化合物11的方式制備化合物15，但用4-碘甲基吡唑代替4-碘芐基吡唑，得到化合物151H NMR(CDCl3)0.00(s，3H，CH3)，0.01(s，3H，CH3)，0.04(s，3H，CH3)，0.07(s，3H，CH3)，0.11(s，3H，CH3)，0.14(s，3H，CH3)，0.78(s，9H，t-bu)，0.83(s，9H，t-bu)，0.91(s，9H，t-bu)，3.8(d，1H)，3.90(s，3H，N-CH3)4.05(d，1H)，4.08-4.12(m，1H)，4.30-4.32(m，1H)，4.55-4.60(m，1H)，5.60(bs，1H，D2O exchangeable)，6.00-6.05(m，1H)，7.99(s，1H)，8.05(s，1H)，8.15(s，1H) 9-{(2R，3R，4R，5R)-3，4-雙(1，1，2，2，-四甲基-lsilapropoxy)-5-[(1，1，2，2，-四甲基-1-silapropoxy)甲基]oxolan-2-基}-2-[1-(1-甲基乙基)吡唑-4-基]嘌呤-6-基胺(16)以制備化合物11的方式制備化合物16，但用4-碘-(1-甲基乙基)吡唑代替4-碘芐基吡唑，得到化合物161H NMR(CDCl3)0.00(s，3H，CH3)，0.01(s，3H，CH3)，0.04(s，3H，CH3)，0.07(s，3H，CH3)，0.11(s，3H，CH3)，，0.14(s，3H，CH3)，0.78(s，9H，t-bu)，0.83(s，9H，t-bu)，0.91(s，9H，t-bu)，1.55(d，6H，C(CH3)2)，3.8(d，1H)，4.05(d，1H)，4.08-4.15(m，1H)，4.30-4.32(m，1H)，4.44-4.56(m，2H)，5.55(bs，1H，D2O exchangeable)，6.05(s，1H)，8.05(s，1H)，8.10(s，1H)，8.2(s，1H) 9-{(2R，3R，4R，5R)-3，4-雙(1，1，2，2，-四甲基-1silapropoxy)-5-[(1，1，2，2，-四甲基-1-silapropoxy)甲基]oxolan-2-基}-2-[1-(4-叔丁基芐基)吡唑-4-基]嘌呤-6-基胺(17)以制備化合物11的方式制備化合物17，但用4-碘-(4-叔丁基芐基)吡唑代替4-碘芐基吡唑，得到化合物171H NMR(CDCl3)0.00(s，3H，CH3)，0.01(s，3H，CH3)，0.04(s，3H，CH3)，0.07(s，3H，CH3)，0.11(s，3H，CH3)，，0.14(s，3H，CH3)，0.78(s，9H，t-bu)，0.83(s，9H，t-bu)，0.91(s，9H，t-bu)，1.30(s，9H，t-bu)，3.8(d，1H)，4.05(d，1H)，4.08-4.15(m，1H)，4.30-4.32(d，1H)，4.47-4.49(dd，1H)，5.44(bs，1H，D2O exchangeable)，6.01(d，J＝3.6Hz，1H)，7.2(d，J＝2.0Hz，2H)，7.35(d，J＝2.0Hz，2H)，7.99(s，1H)，8.14(s，1H)，8.20(s，1H)實(shí)施例3 (4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-芐基吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(12)將在0.5M NH4F甲醇(5ml)溶液中的triTBDMS衍生物溶液(25mg，0.035mmol)回流16小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮，殘?jiān)ㄟ^制備TLC(甲醇-二氯甲烷9∶1)純化得到12；1H NMR(CD3OD)3.65(d，J＝11.2Hz，1H)，3.81(d，J＝11.2Hz，1H)，4.18-4.19(m，1H)，4.26(d，J＝5.2Hz，1H)，4.78(dd，1H)，5.23(s，2H)，5.72(d，J＝7.2 Hz，1H)，7.15-7.17(m，2H)，7.17-7.27(m，3H)，7.80(s，1H)，8.10(s，2H). (4S，2R，3R，5R)-2-[6-氨基-2-(1-戊基吡唑-4-基)嘌呤-9-基]-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(18)以制備化合物12的方式制備化合物18；1H NMR(CD3OD)4 0.8(t，J＝3.6Hz，3H)，1.20-1.26(m，4H)，1.76-1.80(m，2H)，3.67(d，J＝12.0Hz，1H)，3.85(d，J＝12.0Hz，1H)，4.03(t，J＝7.2Hz，2H)，4.19-4.20(m，1H)，4.28(d，J＝1.2Hz，1H)，4.78(dd，1H)，5.73(d，J＝7.2Hz，1H)，7.80(s，1H)，8.05(s，1H)，8.07(s，1H). (4S，2R，3R，5R)-2-[6-氨基-2-(1-甲基吡唑-4-基)嘌呤-9-基]-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(19)以制備化合物12的方式制備化合物19；1H NMR(CD3OD)3.60(d，J＝9.2Hz，1H)，3.78(s，3H，N-CH3)，3.80(d，J＝9.2Hz，1H)，4.10-4.12(m，1H)，4.24(d，J＝1.4Hz，1H)，4.78(dd，1H)，5.69(d，J＝7.0Hz，1H)，7.80(s，1H)，7.98(s，1H)，8.01(s，1H). (4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(甲基乙基)吡唑-4-基)嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(20)以制備化合物12的方式制備化合物20；1H NMR(CD3OD)1.41(d，J＝6.8Hz，6H)，3.66(d，J＝9.0Hz，1H)，3.80(d，J＝9.0Hz，1H)，4.16-4.18(m，1H)，4.25(d，J＝4.8Hz，1H)，4.40(septet，1H)，4.77(dd，1H)，5.71(d，J＝7.2Hz，1H)，7.80(s，1H)，8.03(s，1H)，8.13(s，1H)。 (4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(3-苯基丙基)吡唑-4-基)嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(21)以制備化合物12的方式制備化合物21；1H NMR(CD3OD)2.10(t，J＝6.7Hz，2H，CH2)，2.51(t，J＝6.7Hz，2H，CH2)，3.65(d，J＝9.2Hz，1H)，3.80(d，J＝9.2Hz，1H)，4.04(t，J＝6.7Hz，1H)，4.16-4.17(m，1H)，4.25(d，J＝1.2Hz，1H)，4.79(dd，1H)，5.71(d，J＝7.2Hz，1H)，7.05-7.07(m，2H)，7.16-7.24(m，3H)，7.80(s，1H)，8.06(s，1H)，8.08(s，1H)。 (4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(4-叔丁基苯基)吡唑-4-基)嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(22)以制備化合物12的方式制備化合物22；1H NMR(CD3OD)1.15(s，9h，t-bu)3.55(d，J＝11.2Hz，1H)，3.75(d，J＝11.2Hz，1H)，4.18-4.19(m，1H)，4.26(d，J＝5.2Hz，1H)，4.65(dd，1H)，5.12(s，2H)，5.65(d，J＝7.2Hz，1H)，7.05(d，2H)，7.17(d，3H)，7.75(s，1H)，8.05(s，2H)。 (4S，2R，3R，5R)-2-(6-氨基-2-吡唑-4-基嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(23)以制備化合物12的方式制備化合物23；1H NMR(CD3OD)3.75(d，1H，5`-CH)，3.90(d，1H，，5`-CH)，4.15(d，2H，4`-CH)4.35(m，1H，3`-CH)，4.85(m，1H，2`-CH)，5.95(d，1H，1`-CH)，8.20(s，1H，8-H)，8.25(s，2H，Ar). (4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-戊-4-烯基吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(24)以制備化合物12的方式制備化合物24；[MS 402(M+1)] (4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-癸基吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(25)以制備化合物12的方式制備化合物25；[MS 430(M+1)] (4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(環(huán)己基甲基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(26)以制備化合物12的方式制備化合物26；[MS 474(M+1)] (4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(2-苯基乙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(27)以制備化合物12的方式制備化合物27；[MS 438(M+1)] (4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(3-環(huán)己基丙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇以制備化合物12的方式制備化合物28；[MS 458(M+1)] (4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(2-環(huán)己基乙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇(29)以制備化合物12的方式制備化合物29；[MS 444(M+1)]實(shí)施例4測(cè)定本發(fā)明化合物以確定其與豬紋狀體膜制劑中A2A受體的親和性。簡(jiǎn)而言之，0.2mg的豬紋狀體膜用腺苷脫氨基酶和50mMTris緩沖液(pH＝7.4)處理然后混合。在豬紋狀體膜中加入2μL濃度范圍在100μM到10nM濃度的本發(fā)明化合物系列稀釋的DMSO儲(chǔ)備溶液或加入2μL只含有DMSO的對(duì)照，然后加入氚拮抗劑ZM241385的Tris緩沖液(50mM，pH7.4)，得到2nM的最終濃度。在23℃溫度下保溫2小時(shí)后，用膜收獲劑和多次洗滌的膜(3×)過濾溶液。在閃爍液中記錄濾板以獲得由本發(fā)明化合物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合置換的氚代ZM的量。使用超過5點(diǎn)的曲線產(chǎn)生IC50并在下表所表示的欄中顯示實(shí)驗(yàn)序號(hào)。
表1
實(shí)施例5本實(shí)驗(yàn)的目的是確定本發(fā)明化合物與A1、A2A、A2B和A3腺苷受體的親和性和受體結(jié)合的選擇性。分子克隆法已經(jīng)確定并證實(shí)存在4個(gè)亞型的腺苷受體(AdoRs)，指定為A1、A2A、A2B和A3AdoRs(Linden，1994)。這些AdoRs亞型具有不同的解剖學(xué)分布、藥理特性和生理功能(Shryock和Belardinelli，1997)。A1和A3AdoRs偶合來抑制G蛋白(Gi/o)并且減少腺苷酰環(huán)化酶的活性，而A2A和A2BadoRs通過偶合來刺激G蛋白質(zhì)(Gs)而增加細(xì)胞內(nèi)cAMP含量。
對(duì)不同的腺苷受體亞型具有高效力和組織/器官選擇性的配體具有治療和診斷各種疾病(如心律不齊、局部缺血心臟病、哮喘和帕金森氏病)的能力并且是學(xué)術(shù)界和工業(yè)上努力進(jìn)行研究的焦點(diǎn)。這里我們報(bào)告使用表達(dá)內(nèi)皮AdoRs或重組人AdoRs的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系確定的本發(fā)明一系列新的腺苷類似物的藥理和功能特性。
材料腺苷脫氨酶購(gòu)自Boehringer Manheim Biochemicals Indianapolis，IN，U.S.A)。[3H]ZM241385(LotNo.1)購(gòu)自Tocris Cookson Ltd(Langford，Bristol，UK)。[3H]CPX(Lot No.3329207)購(gòu)自New England Nuclear(Boston，MA，USA)。CGS21680(Lot No.SW-3R-84和89H4607)、NECA(LotNo.OXV-295E)、R-PIA(Lot No.WY-V-23)、Rolipram和HEK-hA2AAR膜從Sigma-RBI(Natick，MA)處獲得。WRC-0470按文獻(xiàn)(K.Niiya等人，J.Med.Chem.354557-4561(1992))中所述方法來制備。合成本發(fā)明化合物18和化合物12并制備成DMSO的儲(chǔ)備溶液(10mmol/L)。
細(xì)胞培養(yǎng)和膜制備PC12細(xì)胞從美國(guó)典型物培養(yǎng)中心獲得并在具有5％胎牛血清、10％馬血清、0.5mmol/L L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素、0.1mg/mL鏈霉素和2.5μg/mL兩性霉素的DMEM中生長(zhǎng)。穩(wěn)定表達(dá)重組人A2BadoRs(HEK-hA2BAdoR)的HEK-293細(xì)胞在補(bǔ)充有10％胎牛血清和0.5mg/mL G-418的DMEM中生長(zhǎng)。穩(wěn)定表達(dá)重組人A1adoRs(CHO-hA1AdoR)和A3adoRs(CHO-hA3AdoR)的CHOK1細(xì)胞以單層于150-mm塑料培養(yǎng)板上在補(bǔ)充有10％胎牛血清并存在0.5mg/mLG-418的Ham’s F-12介質(zhì)中生長(zhǎng)。細(xì)胞在保持37℃下的5％CO2/95％空氣的環(huán)境下培養(yǎng)。
為了制備膜，將細(xì)胞從培養(yǎng)板中分離到冰冷的50mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH7.4)中。細(xì)胞懸浮液用設(shè)定在4的Polytron勻化30秒并以48000g的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)15分鐘。所得團(tuán)狀物通過重新懸浮在冰冷的Tris-HCl緩沖液中并離心來洗滌3次。最終團(tuán)狀物重新懸浮在小體積的Tris-HCl中、等量分裝并在-80℃冷凍以備受體結(jié)合測(cè)定使用。以牛血清作為標(biāo)準(zhǔn)來用Bradford方法(Bio-Rad)確定膜懸浮液的蛋白質(zhì)濃度。
競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定來確定下列未標(biāo)記化合物(競(jìng)爭(zhēng)劑)的親和力(Ki)化合物WRC-0470、化合物18、化合物12、NECA、CGS21680和R-PIA對(duì)A1AdoRs(CHO-hA1AdoR細(xì)胞膜上的[3H]DPCPX結(jié)合部位)、A2AAdoRs(PC12和HEK-hA2AAR細(xì)胞膜上的[3H]ZM241385結(jié)合部位)、A2BAdoRs(HEK-hA2BAdoR細(xì)胞膜上的[3H]DPCPX結(jié)合部位)和A3AdoR(CHO-hA3AdoR細(xì)胞膜上的[125I]ABMECA結(jié)合部位)。膜懸浮液在含有ADA(1U/mL)、Gpp(NH)p(100μM)、放射配體{或者[3H]ZM241385(-1.5-5nmol/L)、[3H]DPCPX(對(duì)A1為～2.5-3.0nmol/L并且對(duì)A23為30nM)或[125I]ABMECA(1nM)}和濃度逐漸增高競(jìng)爭(zhēng)劑的50mmol/LTris-HCl緩沖液(pH7.4)中于室溫下培養(yǎng)2小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，使用Brandel組織收獲器(Gaithersburg，MD)經(jīng)Whatman GF/C玻璃纖維濾器過濾來分離結(jié)合和游離的放射配體。對(duì)每個(gè)濃度的競(jìng)爭(zhēng)劑重復(fù)測(cè)定3次。
研究設(shè)計(jì)(實(shí)驗(yàn)方法)各種CVT化合物對(duì)A1和A2A腺苷受體的親和力(Ki)通過其競(jìng)爭(zhēng)由CHO-hA1AdoR、PC12或HEK-HA2AAdoR細(xì)胞衍生的膜上的[3H]CPX(A1)或[3H]ZM241385(A2A)結(jié)合部位的能力來測(cè)定。R-PIA和CGS21680(分別是A1和A2A的選擇性激動(dòng)劑)和NECA(非選擇性AdoR激動(dòng)劑)用作對(duì)照。為了便于比較和避免因受體與G-蛋白質(zhì)偶合而并發(fā)多個(gè)親和狀態(tài)，在選化合物對(duì)A2B和A3受體的親和性通過其分別競(jìng)爭(zhēng)由HEK-HA2BAdoR和CHO-hA3AdoR細(xì)胞衍生的膜上的[3H]CPX(A2B)或[125I]ABMECA(A3)結(jié)合部位的能力來評(píng)價(jià)。
這些藥物對(duì)A2A和A2BAdoRs的功能強(qiáng)弱和選擇性通過測(cè)定其分別對(duì)PC12和HEK-293細(xì)胞中A2A或A2B介導(dǎo)的cAMP積累的影響來評(píng)價(jià)。在這些實(shí)驗(yàn)中，CGS21680和NECA用作陽性對(duì)照。
結(jié)果通過競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合研究測(cè)定的WRC-0470、化合物18和化合物12對(duì)人A1、鼠和人A2AAdoRs的親和力(Ki)概括在下表2中。除化合物12外，所有化合物都對(duì)人A2A與A1受體顯示中度的選擇性。
表2腺苷受體激動(dòng)劑對(duì)A2AAdoRs和A1AdoRs的結(jié)合親和力Ki/nmol/L(pKi±SEM)
該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示化合物16是低親和力的A2A激動(dòng)劑。
實(shí)施例6本實(shí)施例的目的是確定本發(fā)明化合物12和18對(duì)冠狀動(dòng)脈傳導(dǎo)作用的藥理性特性。具體來說，設(shè)計(jì)該實(shí)驗(yàn)來確定化合物12和18的能力并將其能力與腺苷和其它選擇的A2AAdoR激動(dòng)劑進(jìn)行比較。
在心臟中，A2A腺苷受體介導(dǎo)由腺苷引起的冠脈血管擴(kuò)張，而A1受體介導(dǎo)腺苷的心抑制作用，如負(fù)性變時(shí)性作用和變傳導(dǎo)(AV阻滯)作用。
已經(jīng)合成了A1和A2AAdoRs的一些強(qiáng)效的和選擇性配體(包括激動(dòng)劑和拮抗劑)。已經(jīng)提出，A1AdoRs激動(dòng)劑可在心臟中用作抗心律失常藥物，而A2AAdoRs激動(dòng)劑正被開發(fā)為選擇性冠脈血管擴(kuò)張劑。
為了開發(fā)冠脈血管擴(kuò)張劑而合成了一系列以選擇性激活A(yù)2A腺苷受體(A2AAdoR)為靶向的腺苷衍生物。更具體來說，在該研究中我們報(bào)告了一系列新的A2AAdoRs激動(dòng)劑在大鼠和豚鼠離體灌注心臟中對(duì)冠狀動(dòng)脈傳導(dǎo)力的影響(血管擴(kuò)張作用)。
材料大鼠(Sprague Dawley)和豚鼠(Hartley)分別購(gòu)自simonsen和CharlesRivers。WRC-0470按文獻(xiàn)(K.Niiya等人，J.Med.Chem.354557-4561(1992))中所述方法來制備。本發(fā)明的化合物12和化合物18按上文所述方法來制備。CGS21680(Lot No.89H4607)和腺苷(Lot No.123HO94)購(gòu)自Sigma。按Standard Methods制備Krebs-Henseleit溶液，并且0.9％鹽水購(gòu)自McGraw，Inc(Lot No.J8B246)。
方法在本研究中使用體重分別為230到260克和300到350克的任性別的成年Sprague Dawley大鼠和Hartley豚鼠。通過腹膜注射含有氯胺酮和甲苯噻嗪(氯胺酮100mg，甲苯噻嗪20mg/ml)的混合液來麻醉動(dòng)物。打開胸腔并快速取出心臟。在冰冷卻的Krebs-Henseleit溶液中簡(jiǎn)單地漂洗心臟(參見下文)，并在主動(dòng)脈中插入套管。然后以10ml/分鐘的流速用含有NaCl117.9、KCl 4.5、CaCl22.5、MgSO41.18、KH2PO41-18、丙酮酸鹽2.0mmol/L的改良的Krebs-Henseleit(K-H)溶液灌注心臟。K-H溶液(pH7.4)連續(xù)用95％O2和5％CO2通氣并且溫?zé)岬?5±0.50℃。使用放置在左心房上的雙極電極使心臟以340ms(250次/分鐘)d固定周期作電搏動(dòng)。電刺激是由Grass刺激器(Model S48，W.Warwick，RI)產(chǎn)生的并且通過Stimuli IsolationUnit(Model SIU5，Astro-Med，Inc.，NY)以3毫秒周期的方形波脈沖和擴(kuò)大至少兩倍閾值強(qiáng)度來傳遞。
壓力轉(zhuǎn)換器通過位于心臟上約3em的T-連接器與主動(dòng)脈插管連接，用來測(cè)量冠脈灌注壓(CPP)。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中監(jiān)測(cè)冠脈灌注壓并在圖表記錄器(Gould Recorder 2200S)或計(jì)算機(jī)記錄系統(tǒng)(PowerLab/4S，AdinstrumentsPty Ltd，澳大利亞)上記錄。在研究中僅僅使用CPP在60-85mmHg范圍(不存在藥物)的心臟。以冠脈灌注速度(10ml/分鐘)和冠脈灌注壓之比來計(jì)算冠脈傳導(dǎo)性(ml/分鐘/mmHg)。
在實(shí)驗(yàn)中，測(cè)量了A1腺苷受體介導(dǎo)的負(fù)性變傳導(dǎo)作用，記錄了動(dòng)脈恒定搏動(dòng)期間心房和心室表面的電描記圖。按以前Jenkins和BelardinelliCirc.Res.6397-116(1988)所描述的方法測(cè)定灌注腺苷受體激動(dòng)劑對(duì)房室傳導(dǎo)時(shí)間的影響。
在購(gòu)自Aldrich，PS04253MS的二甲基亞砜(DMSO)中制備本發(fā)明化合物(5mM)和CGS 21680(5mM)的儲(chǔ)備液。在鹽水中制備腺苷的儲(chǔ)備溶液(1mg/ml)。通過鹽水稀釋儲(chǔ)備溶液產(chǎn)生2×10-4或2×10-5M溶液來產(chǎn)生各個(gè)濃度。這些溶液以20μl濃縮藥團(tuán)形式注射到裝置的灌注管線中。在某些實(shí)驗(yàn)中，將溶液放置在30ml玻璃注射器中并將藥物以獲得所需灌注液濃度(如，10/100nM等)。需要的速度輸入。
A2A腺苷受體激動(dòng)劑的冠脈血管擴(kuò)張作用獲得本發(fā)明化合物(0.1-400nM)和CGS21680(0.1-10nM)增加冠脈傳導(dǎo)性作用的量效關(guān)系。記錄對(duì)照的冠脈灌注壓后，給予濃度逐漸增加的腺苷受體激動(dòng)劑直到觀察到最大的冠脈血管擴(kuò)張作用。記錄腺苷受體激動(dòng)劑各個(gè)濃度的穩(wěn)態(tài)反應(yīng)。在該組(每個(gè)激動(dòng)劑需要4-6個(gè)心臟)的各個(gè)心臟中，僅獲得一個(gè)激動(dòng)劑和一個(gè)量效關(guān)系。
結(jié)果在動(dòng)脈恒定搏動(dòng)期為340毫秒的離體灌注心臟(n＝36只大鼠和18只豚鼠)中，腺苷、CGS21680、WRC0470和本發(fā)明化合物12和18產(chǎn)生濃度依賴性的冠脈傳導(dǎo)增加。CGS21680和WRC是該系列中最強(qiáng)的激動(dòng)劑?；衔?2和18在增加冠脈傳導(dǎo)方面與腺苷幾乎一樣強(qiáng)。值得注意的是所有激動(dòng)劑在大鼠中的冠脈血管擴(kuò)張作用比在豚鼠心臟中強(qiáng)數(shù)倍。
表3腺苷和A2A腺苷受體激動(dòng)劑在大鼠和豚鼠離體灌注心臟中增加冠脈傳導(dǎo)的能力
實(shí)施例7本實(shí)施例的目的是確定化合物18引起冠脈血管擴(kuò)張的功能選擇性。具體來說，在大鼠和豚鼠心臟中確定了化合物18引起冠脈血管擴(kuò)張(A2AAdoR反應(yīng))的能力和A-V結(jié)傳導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)作用(A1AdoR反應(yīng))。
材料Sprague Dawley大鼠購(gòu)自simonsen。Hartley豚鼠購(gòu)自Charles Rivers。化合物18按上文所述方法來制備。按美國(guó)專利579416(該文獻(xiàn)引入本文供參考)所公開的合成方法來制備CVT-510(2-{6-[((3R)oxolan-3-基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，3R，5R)-5-(羥基甲基)oxolane-3，4-二醇)。氯胺酮購(gòu)自FortDodge Animal Health(Lot No.440444)并且甲苯噻嗪購(gòu)自Bayer(Lot No.26051A)。按Standard Methods制備Krebs-Henseleit溶液，并且0.9％氯化鈉購(gòu)自McGraw，Inc(Lot No.J8B246)。
離體灌注心臟在本研究中使用體重分別為230到260克和300到350克的任一性別的成年Sprague Dawley大鼠和Hartley豚鼠。通過腹膜注射含有氯胺酮和甲苯噻嗪(氯胺酮100mg，甲苯噻嗪20mg/ml)的混合液來麻醉動(dòng)物。打開胸腔并快速取出心臟。在冰冷卻的Krebs-Henseleit溶液中簡(jiǎn)單地漂洗心臟(參見下文)，并在主動(dòng)脈中插入套管。然后以10ml/分鐘的流速用含有NaCl117.9、KCl 4.5、CaCl22.5、MgSO41.18、KH2PO41.18、丙酮酸鹽2.0mmol/L的改良的Krebs-Henseleit(K-H)溶液灌注心臟。K-H溶液(pH7.4)連續(xù)用95％O2和5％CO2通氣并且溫?zé)岬?5±0.50℃。使用放置在左心房上的雙極電極使心臟以340毫秒(250次/分鐘)的固定周期作電搏動(dòng)。電刺激是由Grass刺激器(Model S48，W.Warwick，RI)產(chǎn)生的并且通過Stimuli IsolationUnit(Model SIU5，Astro-Med，Inc.，NY)以3毫秒周期的方形波脈沖和擴(kuò)大至少兩倍閾值強(qiáng)度來傳遞。
壓力轉(zhuǎn)換器通過位于心臟上約3cm的T-連接器與主動(dòng)脈插管連接，用來測(cè)量冠脈灌注壓(CPP)。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中監(jiān)測(cè)冠脈灌注壓并在圖表記錄器(Gould Recorder 2200S)或計(jì)算機(jī)記錄系統(tǒng)(PowerLab/4S，ADInstrumentsPty Ltd，澳大利亞)上記錄。在研究中僅僅使用60-85mmHg(不存在藥物)CPP范圍的心臟。以冠脈灌注速度(10ml/分鐘)和冠脈灌注壓之比來計(jì)算冠脈傳導(dǎo)性(ml/分鐘/mmHg)。
測(cè)量A1腺苷受體介導(dǎo)的對(duì)A-V結(jié)傳導(dǎo)時(shí)間的抑制作用(負(fù)性變傳導(dǎo)作用)。記錄了動(dòng)脈恒定搏動(dòng)期間心房和心室表面的電描記圖。按以前Jenkins和Belardinelli(1988)所描述的方法測(cè)定化合物18對(duì)房室傳導(dǎo)時(shí)間和對(duì)His-束的刺激(S-H間隔)的影響。
然后確定化合物18對(duì)冠脈傳導(dǎo)性(A2A作用)和房室傳導(dǎo)時(shí)間或?qū)is-束間隔刺激(A1作用)的作用。心臟用儀器連續(xù)記錄冠脈灌注壓(A2A反應(yīng))和房室(A-V)傳導(dǎo)時(shí)間或S-H間隔(A1反應(yīng))。在各實(shí)驗(yàn)中，確定化合物18對(duì)增加冠脈傳導(dǎo)性和延長(zhǎng)A-V傳導(dǎo)時(shí)間或S-H間隔的量效關(guān)系(n＝5只大鼠，5只豚鼠)。測(cè)量對(duì)照CPP和A-V傳導(dǎo)時(shí)間或S-H間隔后，給予濃度逐漸增加的化合物18直到產(chǎn)生最大的冠脈血管擴(kuò)張作用和A-V結(jié)傳導(dǎo)時(shí)間或S-H間隔延長(zhǎng)作用。在離體大鼠心臟(n＝4)中，確定各種濃度(100-400nM)的CVT510(插入化學(xué)名稱)、A1腺苷激動(dòng)劑(Snowdy等人1999)對(duì)A-V結(jié)傳導(dǎo)時(shí)間的作用并與化合物18(0.1-30μM)進(jìn)行比較。
化合物18增加冠狀動(dòng)脈傳導(dǎo)和延長(zhǎng)A-V結(jié)傳導(dǎo)時(shí)間或S-H間隔的量效曲線顯示在附圖1和2中。在大鼠和豚鼠中，化合物18以濃度依賴性方式增加冠脈傳導(dǎo)性?；衔?8增加大鼠心臟冠脈傳導(dǎo)性的能力(EC50值)是68.9±9.6nM，在豚鼠心臟中是203±22nM。相反地，該激動(dòng)劑對(duì)S-H間隔的作用在大鼠和豚鼠心臟之間有某些改變。在大鼠心臟中，化合物18不延長(zhǎng)A-V結(jié)傳導(dǎo)時(shí)間(附圖1)，而A1AdoR激動(dòng)劑CVT510明顯延長(zhǎng)A-V結(jié)傳導(dǎo)時(shí)間(附圖3)。50μM濃度的化合物18不延長(zhǎng)豚鼠心臟的S-H間隔(附圖2)。
結(jié)果表明化合物18在大鼠心臟中是一種無負(fù)性變傳導(dǎo)作用(A1AdoR介導(dǎo)的作用)的冠脈血管擴(kuò)張劑(A2AAdoR介導(dǎo)的作用)。在豚鼠心臟中，化合物18不產(chǎn)生負(fù)性變傳導(dǎo)作用。在兩種動(dòng)物(大鼠和豚鼠)中，化合物在不引起A-V結(jié)傳導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)，即沒有負(fù)性變傳導(dǎo)作用的濃度下產(chǎn)生最大的冠脈血管擴(kuò)張作用。也觀察到化合物18對(duì)A2A的親和力大于A1AdoR(即，＞2-/＞-13-倍)并且對(duì)A2AAdoR介導(dǎo)的冠脈血管擴(kuò)張作用的受體保留明顯大于對(duì)A1AdoR介導(dǎo)的神經(jīng)傳導(dǎo)阻滯作用的受體保留。
實(shí)施例8設(shè)計(jì)本研究來試驗(yàn)A2A腺苷受體(AdoR)的親和力(Ki或pKi)和作用持續(xù)時(shí)間之間有相反關(guān)系的假設(shè)。具體來說，研究的目的是確定大鼠離體心臟和麻醉豬中由所選擇的一系列高和低親和力的A2AAdoR激動(dòng)劑引起的冠脈血管擴(kuò)張作用持續(xù)時(shí)間和這些激動(dòng)劑在豬紋狀體中與A2AAdoR的親和力之間的關(guān)系。
材料大鼠(Sprague Dawley)購(gòu)自simonsen。農(nóng)場(chǎng)豬從Division ofLaboratory Animal Resources，University of Kentucky處獲得。本發(fā)明化合物12、化合物18、化合物21和化合物13按上文所述方法來制備。按美國(guó)專利4956345(該文獻(xiàn)引入本文供參考)所述方法來制備YT-0146。WRC-0470按文獻(xiàn)(K.Niiya等人，J.Med.Chem.354557-4561(1992))中所述方法來制備。CGS21680購(gòu)自Research Biochemicals，Inc.和Sigma并且R-PLA(Lot No.WY-V-23)購(gòu)自Research Biochemicals，Inc.。HENECA由Camerino(Italy)大學(xué)的Gloria Cristalli教授饋贈(zèng)。
麻醉劑氯胺酮購(gòu)自Fort Dodge Animal Health。甲苯噻嗪購(gòu)自Bayer。戊巴比妥鈉購(gòu)自Butler Co.處。苯福林購(gòu)自Sigma。DMSO購(gòu)自Sigma和美國(guó)典型物保藏中心。按常規(guī)方法制備Krebs-Henseleit溶液，并且0.9％鹽水購(gòu)自McGraw，Inc。
大鼠離體灌注心臟樣本在本研究中使用體重分別為230到260克的任一性別的成年SpragueDawley大鼠。通過腹膜注射含有氯胺酮和甲苯噻嗪(氯胺酮100mg，甲苯噻嗪20mg/ml)的混合液來麻醉動(dòng)物。打開胸腔并快速取出心臟。在冰冷卻的Krebs-Henseleit溶液中簡(jiǎn)單地漂洗心臟(參見下文)，并在主動(dòng)脈中插入套管。然后以10ml/分鐘的流速用含有NaCl 117.9、KCl 4.5、CaCl22.5、MgSO41.18、KH2PO41.18、丙酮酸鹽2.0mmol/L的改良的Krebs-Henseleit(K-H)溶液灌注心臟。K-H溶液(pH7.4)連續(xù)用95％O2和5％CO2通氣并且溫?zé)岬?5±0.50℃。使用放置在左心房上的雙極電極使心臟以340毫秒(250次/分鐘)的固定周期作電搏動(dòng)。電刺激是由Grass刺激器(Model S48，W.Warwick，RI)產(chǎn)生的并且通過Stimuli IsolationUnit(Model SIU5，Astro-Med，Inc.，NY)以3毫秒周期的方形波脈沖和擴(kuò)大至少兩倍閾值強(qiáng)度來傳遞。
壓力轉(zhuǎn)換器通過位于心臟上約3cm的T-連接器與主動(dòng)脈插管連接，用來測(cè)量冠脈灌注壓(CPP)。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中監(jiān)測(cè)冠脈灌注壓并在圖表記錄器(Gould Recorder 2200S)或計(jì)算機(jī)記錄系統(tǒng)(PowerLab/4S，ADInstrumentsPty Ltd，澳大利亞)上記錄。在研究中僅僅使用CPP在60-85mmHg范圍(不存在藥物)的心臟。以冠脈灌注速度(10ml/分鐘)和冠脈灌注壓之比來計(jì)算冠脈傳導(dǎo)性(ml/分鐘/mmHg)。
麻醉下開胸的豬標(biāo)本在本研究中使用體重為22-27kg的農(nóng)場(chǎng)豬。所有動(dòng)物都按“ThePrinciples of Laboratory Animal Care”(由National Society for Medicalresearch制定)和“guide for the Care and Use of Laboratory Anomals”(由Institute of Laboratory Animal Resources編著并由National Institutes ofHealth(NIH公開號(hào)為86-23，1996年修訂))所述的方法接受人道的飼養(yǎng)。另外，按University of Kentucky Institutional Animal Car and Use Protocol的指導(dǎo)原則使用動(dòng)物。
用氯胺酮(20mg/kg，肌注)和戊巴比妥鈉(15-18mg/kg，靜注)來進(jìn)行麻醉。另外每15-20分鐘用戊巴比妥鈉(1.5-2mg/kg，靜注)保持麻醉。使用室內(nèi)空氣和100％O2的混合物并通過氣管切開術(shù)來保持氣流通暢。調(diào)節(jié)潮流氣量、呼吸速率和吸入空氣的O2分?jǐn)?shù)來保持正常的動(dòng)脈血?dú)?ABG)和pH值。用食管溫度探針檢測(cè)體內(nèi)溫度并通過在37.0-37.5℃下加熱襯墊來保持。在開始給予300-400ml后，通過耳或股靜脈以5-7ml/kg/分鐘的量給予乳酸鹽林格溶液。將插管插入股動(dòng)脈以檢測(cè)動(dòng)脈血壓并獲得ABG樣。
通過正中胸骨切開術(shù)暴露心臟并懸浮在心包支架中。用尖端放置在左心房腔中并用金線(purse string)縫合固定的5F高保真度壓力敏感的末端傳感器(Millar Instruments，Houston，TX)測(cè)量左心房壓力(LVP)。從周圍組織中剝離一段左前下行冠狀動(dòng)脈(LAD)(鄰近最早斜線分支的起端)。將轉(zhuǎn)變時(shí)間的血管周流動(dòng)探針(Transonic Systems Inc.，Ithaca，NY)放置在該段血管周圍來測(cè)量冠脈血流(CBD)。在鄰近流動(dòng)探針處，插入24g改性的血管插管用于冠脈內(nèi)輸注。所有血液動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)被連續(xù)顯示在計(jì)算機(jī)檢測(cè)器中并通過32位模擬數(shù)字轉(zhuǎn)化器輸入具有定制軟件的在線數(shù)據(jù)獲得計(jì)算機(jī)(Augury，Coyote Bay Instruments，Manchester，NH)中。將A2AAdoR激動(dòng)劑溶解在DMSO中以產(chǎn)生1-5mM的儲(chǔ)備濃度，在0.9％鹽水中稀釋并以1-1.5ml/分鐘的速度輸入。冠脈內(nèi)給予A2AAdoR激動(dòng)劑。為了保持血壓的恒定，靜脈內(nèi)給予苯福林。在蒸餾水中制備苯福林儲(chǔ)備溶液(30mM)。
離體灌注心臟為了測(cè)定由腺苷和腺苷受體激動(dòng)劑引起的A2A腺苷受體介導(dǎo)的冠脈血管擴(kuò)張的持續(xù)時(shí)間，通過濃縮藥團(tuán)注射液靜脈內(nèi)給予所述激動(dòng)劑。試驗(yàn)方案濃縮藥團(tuán)注射液。將腺苷(20μl，2×10-4M)、本發(fā)明化合物(20-40μl，2×10-5M)和其他腺苷受體激動(dòng)劑的濃縮藥團(tuán)注射到該組(每個(gè)激動(dòng)劑需要3-11個(gè)心臟)每個(gè)心臟的灌注管線中。測(cè)定CPP降低逆轉(zhuǎn)50％(t0.5)和90％(t0.9)的時(shí)間。給予每個(gè)心臟最大量的三個(gè)血管擴(kuò)張劑。
各種A2A腺苷受體激動(dòng)劑的親和力與其增加冠脈傳導(dǎo)作用逆轉(zhuǎn)時(shí)間的關(guān)系進(jìn)行這些實(shí)驗(yàn)以便研究各種A2A腺苷受體激動(dòng)劑的親和力與其對(duì)冠脈傳導(dǎo)作用持續(xù)時(shí)間的關(guān)系。將各種激動(dòng)劑的濃縮藥團(tuán)注射到大鼠離體灌注心臟(對(duì)于各激動(dòng)劑來說，n＝4-6)的灌注管線中并測(cè)定CPP降低逆轉(zhuǎn)90％(t0.9)的時(shí)間。如上所述，在豬紋狀體膜中測(cè)定各種A2A腺苷受體激動(dòng)劑的親和力。將CPP降低逆轉(zhuǎn)時(shí)間(t0.9)與其A2A腺苷受體親和力(pKi)繪圖。
開胸的豬在實(shí)驗(yàn)開始前，當(dāng)所有的設(shè)備測(cè)試完成后穩(wěn)定30分鐘。獲得基線血液動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)后，開始第一次冠脈內(nèi)輸注A2AADOR激動(dòng)劑。輸注持續(xù)4-5分鐘以便使LAD CBF達(dá)到穩(wěn)態(tài)，然后結(jié)束輸注。記錄基線CBF逆轉(zhuǎn)50％(t0.5)和90％(t0.9)的時(shí)間。CBF恢復(fù)到給藥前數(shù)值后10-15分鐘，開始第二次輸注不同的激動(dòng)劑。在預(yù)試研究中發(fā)現(xiàn)，冠脈內(nèi)輸注腺苷激動(dòng)劑引起不同程度的系統(tǒng)性低血壓，因此在后來的所有實(shí)驗(yàn)中，靜脈內(nèi)給予苯福林。在開始以1μg/kg/min的劑量輸注苯福林之前和輸注后進(jìn)行血液動(dòng)力學(xué)測(cè)定。在輸注腺苷激動(dòng)劑期間和輸注后調(diào)節(jié)苯福林的輸注速度以保持動(dòng)脈壓在輸注前的5mmHg內(nèi)。在各實(shí)驗(yàn)中測(cè)定三種不同激動(dòng)劑作用的最大值。
結(jié)果將腺苷、本發(fā)明化合物和其他腺苷衍生物的濃縮藥團(tuán)以引起冠脈傳導(dǎo)增加相同或接近相同的濃度注入灌注管線中。盡管腺苷和所述激動(dòng)劑引起最大的冠脈傳導(dǎo)增加相同，但其作用時(shí)間是明顯不同的。腺苷作用的持續(xù)時(shí)間是最短的，接下來是化合物18、化合物12和化合物21，而CGS21680、YH-146、HENECA和WRC0470是最長(zhǎng)的。以冠脈傳導(dǎo)增加逆轉(zhuǎn)50％和90％(分別為t0.5和t0.9)的時(shí)間表示的由腺苷、本發(fā)明化合物和其他激動(dòng)劑引起的冠脈血管擴(kuò)張的持續(xù)時(shí)間概括于表4中。
表4腺苷和腺苷受體激動(dòng)劑在大鼠離體灌注心臟中冠脈血管擴(kuò)張作用的逆轉(zhuǎn)時(shí)間
由腺苷和腺苷受體激動(dòng)劑引起的冠脈傳導(dǎo)增加逆轉(zhuǎn)50％和90％(分別為t0.5和t0.9)的時(shí)間(分鐘)。該值是各標(biāo)本(n)單獨(dú)測(cè)定的平均值±SEM。
冠脈血管擴(kuò)張作用的逆轉(zhuǎn)時(shí)間依賴于腺苷衍生物與腦紋狀體A2A受體的親和力。激動(dòng)劑與A2AAdoR的親和力(PKi)和由該激動(dòng)劑引起的冠脈血管擴(kuò)張作用的逆轉(zhuǎn)時(shí)間(t0.9)之間具有明顯(P＜0.05)的反比關(guān)系。
開胸豬樣本中的冠脈血管擴(kuò)張作用在開胸并麻醉的豬樣本原位心臟中，本發(fā)明的化合物12和18以及CGS21680和其他A2AAdoR激動(dòng)劑(即，WRC-0470和YT-146)使冠脈血流(CBF)明顯增加。如下表4所述，連續(xù)(4-5分鐘)冠脈內(nèi)輸注所選劑量的這些化合物使CBF增加3.1-3.8倍。一旦所有激動(dòng)劑使CBF產(chǎn)生幾乎相同的增大(即，“成倍增加”)并使心率和平均動(dòng)脈血壓產(chǎn)生類似的改變被建立，就測(cè)定其各自冠脈血管擴(kuò)張作用的逆轉(zhuǎn)時(shí)間。
表4各種腺苷受體激動(dòng)劑在開胸并麻醉的豬中使冠脈血流增加的大小
各種腺苷受體激動(dòng)劑引起的基線上冠脈血流(CBF)的最大“成倍增加”。數(shù)據(jù)表示各個(gè)豬(n)一次或兩次測(cè)量的平均值±SEM。
如表5所述，由各種A2AAdoR激動(dòng)劑和“CVT-化合物”產(chǎn)生的冠脈血管擴(kuò)張作用的t0.5和t0.9是可變的。本發(fā)明化合物12和18產(chǎn)生的CBF增加的逆轉(zhuǎn)時(shí)間比CGS21680、WRC-0470或YT-146短。更重要的是，在大鼠離體灌注心臟中，A2AAdoR激動(dòng)劑與豬腦紋狀體A2A受體的親和力(PKi)和冠脈血管擴(kuò)張作用的逆轉(zhuǎn)時(shí)間(t0.9)之間成明顯(P＜0.05)的反比關(guān)系(r＝0.93)。所選的激動(dòng)劑在大鼠離體灌注心臟和麻醉并開胸的豬樣本中產(chǎn)生的冠脈血管擴(kuò)張作用的逆轉(zhuǎn)時(shí)間之間有極好的一致性。
表5各種腺苷受體激動(dòng)劑在開胸并麻醉的豬中產(chǎn)生的冠脈血管擴(kuò)張作用的逆轉(zhuǎn)時(shí)間
由腺苷受體激動(dòng)劑引起的冠脈血流增加逆轉(zhuǎn)50％和90％(分別為t0.5和t0.9)的時(shí)間(分鐘)。該值是各動(dòng)物(n)一次或兩次測(cè)定的平均值±SEM。
化合物18是低親和力的A2AAdoR激動(dòng)劑并且強(qiáng)度(-10倍)低于原型激動(dòng)劑CGS21680。然而，化合物18對(duì)冠脈血管擴(kuò)張作用來說是一種完全的激動(dòng)劑。但是，如本研究所示，其作用時(shí)間比高親和力的激動(dòng)劑CGS21680和WRC-0470短數(shù)倍。因此，化合物18是一種作用時(shí)間短的A2AAdoR激動(dòng)劑冠脈血管擴(kuò)張劑。由于其具有比高親和力A2AAdoR激動(dòng)劑(如，CGS21680和WRC-0470)短的作用時(shí)間，可證明這種低親和力但仍是完全的激動(dòng)劑冠脈血管擴(kuò)張劑是心肌放射性核素顯像中理想的藥理學(xué)“緊張性刺激劑”。
權(quán)利要求
1.一種具有下列通式的化合物 其中R1為-CH2OH，和-C(＝O)NR5R6；R2選自氫、C1-15烷基、C2-15鏈烯基、C2-15鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基，其中烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、NO2、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、SR20、N(R20)2、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、SO2NR20COR22、SO2NR20CO2R22、SO2NR20CON(R20)2、N(R20)2NR20COR22、NR20CO2R22、NR20CON(R20)2、NR20C(NR20)NHR23、COR20、CO2R20、CON(R20)2、CONR20SO2R22、NR20SO2R22、SO2NR20CO2R22、OCONR20SO2R22、OC(O)R20、C(O)OCH2OC(O)R20和OCON(R20)2并且其中各可任選的雜芳基、芳基和雜環(huán)基取代基是由取代基可任選地取代，所述取代基選自鹵素、NO2、烷基、CF3、氨基、一或二烷基氨基、烷基或芳基或雜芳基酰胺、NCOR22、NR20SO2R22、COR20、CO2R20、CON(R20)2、NR20CON(R20)2、OC(O)R20、OC(O)N(R20)2、SR20、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、CN和OR20；R3和R4獨(dú)立地選自氫、C1-15烷基、C2-15鏈烯基、C2-15鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基、鹵素、NO2、CF3、CN、OR20、SR20、N(R20)2、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、SO2NR20COR22、SO2NR20CO2R22、SO2NR20CON(R20)2、N(R20)2NR20COR22、NR20CO2R22、NR20CON(R20)2、NR20C(NR20)NHR22、COR20、CO2R20、CON(R20)2、CONR20SO2R22、NR20SO2R22、SO2NR20CO2R22、OCONR20SO2R22、OC(O)R20、C(O)OCH2OC(O)R20和OCON(R20)2，其中烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基取代基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、NO2、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、SR20、N(R20)2、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、SO2NR20COR22、SO2NR20CO2R22、SO2NR20CON(R20)2、N(R20)2NR20COR22、NR20CO2R22、NR20CON(R20)2、NR20C(NR20)NHR22、COR20、CO2R20、CON(R20)2、CONR20SO2R22、NR20SO2R22、SO2NR20CO2R22、OCONR20SO2R22、OC(O)R20、C(O)OCH2OC(O)R20和OCON(R20)2，并且其中各可任選的雜芳基、芳基和雜環(huán)基取代基是由取代基可任選地取代，所述取代基選自鹵素、NO2、烷基、CF3、氨基、一或二烷基氨基、烷基或芳基或雜芳基酰胺、NCOR22、NR20SO2R22、COR20、CO2R20、CON(R20)2、NR20CON(R20)2、OC(O)R20、OC(O)N(R20)2、SR20、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、CN和OR20；R5和R6各獨(dú)立地為H、由1-2個(gè)取代基取代的C1-15烷基，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、NO2、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、SR20、N(R20)2、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、SO2NR20COR22、SO2NR20CO2R22、SO2NR20CON(R20)2、N(R20)2NR20COR22、NR20CO2R22、NR20CON(R20)2、NR20C(NR20)NHR22、COR20、CO2R20、CON(R20)2、CONR20SO2R22、NR20SO2R22、SO2NR20CO2R22、OCONR20SO2R22、OC(O)R20、C(O)OCH2OC(O)R20和OCON(R20)2，并且其中各可任選的雜芳基、芳基和雜環(huán)基取代基是由取代基任選地取代的，所述取代基選自鹵素、NO2、烷基、CF3、氨基、一或二烷基氨基、烷基或芳基或雜芳基酰胺、NCOR22、NR20SO2R22、COR20、CO2R20、CON(R20)2、NR20CON(R20)2、OC(O)R20、OC(O)N(R20)2、SR20、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、CN和OR20；R20選自H、C1-15烷基、C2-15鏈烯基、C2-15鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基，其中烷基、鏈烯基、鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代的，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、烷基、一或二烷基氨基、烷基或芳基或雜芳基酰胺、CN、O-C1-6烷基、CF3、芳基和雜芳基；并且R22選自C1-15烷基、C2-15鏈烯基、C2-15鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基，其中烷基、鏈烯基、鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代的，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、烷基、一或二烷基氨基、烷基或芳基或雜芳基酰胺、CN、O-C1-6烷基、CF3和雜芳基；并且，其中R1為CH2OH，R3為H，R4為H，吡唑環(huán)通過C4連接，并且R2不為H。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R2選自氫、C1-15烷基、C2-15鏈炔基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基，其中烷基、鏈炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基取代基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代的，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、NO2、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、SR20、N(R20)2、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、COR20、CO2R20、CON(R20)2，并且其中各可任選的雜芳基、芳基和雜環(huán)基取代基是由取代基可任選地取代，所述取代基選自鹵素、烷基、CF3、CN和OR20；R3和R4獨(dú)立地選自氫、C1-15烷基、C2-15鏈炔基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、鹵素、NO2、CF3、CN、OR20、SR20、N(R20)2、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、COR20、CO2R20、CON(R20)2，其中烷基、鏈炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基取代基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、NO2、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、SR20、N(R20)2、S(O)R22、SO2R22、SO2N(R20)2、COR20、CO2R20、CON(R20)2，并且其中各可任選的雜芳基、芳基和雜環(huán)基取代基是由選自鹵素、烷基、CF3、CN或OR20的取代基可任選地取代的；R5和R6各獨(dú)立地選自H和由1-2個(gè)取代基取代的C1-15烷基，所述取代基獨(dú)立地選自芳基、雜芳基、CF3、OR20，并且其中各可任選的雜芳基和芳基取代基是進(jìn)一步由選自鹵素、烷基和CF3的取代基可任選地取代的；R20選自H、C1-6烷基、芳基和雜芳基；并且R22選自C1-6烷基、芳基和雜芳基，其中烷基、芳基和雜芳基取代基是由1-3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、烷基、CN、O-C1-6烷基和CF3的取代基可任選地取代。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R2選自氫、C1-15烷基、C2-15芳基和雜芳基，其中烷基、芳基和雜芳基取代基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、SR20、S(O)R22、CO2R20、CON(R20)2，并且其中各可任選的雜芳基和芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3、CN和OR20可任選地取代；R3和R4獨(dú)立地選自氫、C1-15烷基、C2-15芳基、雜芳基、鹵素、CF3、CN、OR20、SR20、S(O)R22、CO2R20和CON(R20)2，其中烷基、芳基和雜芳基取代基是由1-3個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、SR20、S(O)R22、CO2R20和CON(R20)2，并且其中各可任選的雜芳基和芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3、CN或OR20可任選地取代；R5和R6各獨(dú)立地選自H和由1-2個(gè)選自CF3的取代基取代的C1-15烷基；R20選自H和C1-6；并且R22為C1-6烷基。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R2獨(dú)立地選自氫、C1-15烷基、C2-15芳基和雜芳基，其中烷基、芳基和雜芳基取代基是由1-2個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、CO2R20和CON(R20)2，并且其中各可任選的雜芳基和芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3和CN可任選地取代；R3和R4獨(dú)立地選自氫、C1-15烷基、C2-15芳基、雜芳基、鹵素、CF3、CN、OR20、CO2R20和CON(R20)2，其中烷基、芳基和雜芳基取代基是由1-2個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、芳基、雜芳基、CF3、CN、OR20、CO2R20和CON(R20)2，并且其中各可任選的雜芳基和芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3或CN可任選地取代；R5和R6各獨(dú)立地選自H和C1-15烷基；R20選自H和C1-6；并且R22為C1-6烷基。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R2獨(dú)立地選自氫、C1-15烷基和芳基，其中烷基和芳基取代基是由1-2個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、OR20、芳基、CF3、CN，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3或CN可任選地取代；R3和R4獨(dú)立地選自氫、C1-15烷基、芳基、鹵素、CF3和CN，其中烷基和芳基取代基是由1-2個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、芳基、CF3、CN，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3或CN可任選地取代；R5和R6各獨(dú)立地選自H和C1-15烷基；并且R20選自H和C1-6。
6.權(quán)利要求1或2或3或4或5中具有下列通式的化合物，其中吡唑環(huán)的連接點(diǎn)為C-4。
7.權(quán)利要求1或2或3或4或5中具有下列通式的化合物，其中吡唑環(huán)的連接點(diǎn)為C-3。
8.權(quán)利要求1或2或3或4或5中具有下列通式的化合物，其中吡唑環(huán)的連接點(diǎn)為C-5。
9.權(quán)利要求6或7或8的化合物，其中R1＝CH2OH；
10.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為-CH2OH；R2獨(dú)立地選自氫、C1-10烷基和芳基，其中烷基和芳基取代基是由1-2個(gè)取代基可任選地取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、OR20、芳基、CF3和CN，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3或CN可任選地取代；R3和R4獨(dú)立地選自氫、C1-15烷基、芳基、鹵素、CF3和CN，其中烷基和芳基取代基是由獨(dú)立地選自鹵素、CF3和CN的取代基可任選地取代；并且R20選自H和C1-6烷基。
11.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為-CH2OH；R2獨(dú)立地選自氫、C1-8烷基和芳基，其中烷基和芳基取代基是由1-2個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、OR20、芳基、CF3和CN的取代基可任選地取代，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3或CN可任選地取代；R3和R4獨(dú)立地選自氫、C1-3烷基、芳基、鹵素、CF3、CN；并且R20選自H和C1-6烷基。
12.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為-CH2OH；R2獨(dú)立地選自氫、C1-8烷基和芳基，其中烷基和芳基取代基是由1-2個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、OR20、芳基、CF3和CN的取代基可任選地取代，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3和CN可任選地取代的；R3和R4獨(dú)立地選自氫、甲基和鹵素；并且R20選自H和C1-6。
13.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為-CH2OH；R2獨(dú)立地選自氫、C1-8烷基和芳基，其中烷基和芳基取代基是由1個(gè)選自鹵素、芳基、CF3和CN的取代基可任選地取代，并且其中各可任選的芳基取代基是可任選地由鹵素、烷基、CF3和CN取代的；并且R3和R4獨(dú)立地選自氫和甲基。
14.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為-CH2OH；R2選自氫和由1個(gè)選自芳基、CF3和CN的取代基可任選地取代的C1-8烷基，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3和CN可任選地取代；并且R3和R4獨(dú)立地選自氫和甲基。
15.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為-CH2OH；R2選自氫和由1個(gè)芳基取代基可任選地取代的C1-8烷基，其中所述芳基是由鹵素、烷基、CF3和CN可任選地取代；并且R3和R4各為氫。
16.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為-CH2OH；R2選自氫和由芳基可任選地取代的C1-6烷基，其中所述芳基是由烷基可任選地取代；并且R3和R4各為氫。
17.權(quán)利要求7的化合物，其中R1為-CH2OH；R2選自氫和由1個(gè)選自芳基、CF3和CN的取代基可任選地取代的C1-8烷基，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3和CN可任選地取代；并且R3和R4各獨(dú)立地選自氫和甲基。
18.權(quán)利要求7的化合物，其中R1為-CH2OH；R2選自氫和由1個(gè)選自芳基的取代基可任選地取代的C1-8烷基，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3和CN可任選地取代；并且R3和R4各為氫。
19.權(quán)利要求7的化合物，其中R1為-CH2OH；R2選自氫和由芳基可任選地取代的C1-6烷基，其中所述芳基是由烷基可韌選地取代；并且R3和R4各為氫。
20.權(quán)利要求8的化合物，其中R1為-CH2OH；R2選自氫和C1-6烷基；R3選自氫、C1-6烷基和芳基，其中烷基和芳基取代基是由1-2個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、芳基、CF3和CN的取代基可任選地取代，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3和CN可任選地取代；并且R4選自氫和C1-6烷基。
21.權(quán)利要求8的化合物，其中R1為-CH2OH；R2選自氫和甲基；R3和R4各獨(dú)立地選自氫和由芳基可任選地取代的C1-6烷基，其中所述芳基是由烷基可任選地取代；并且R4選自氫和甲基。
22.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為-CONHEt；R2選自氫和由1個(gè)選自芳基、CF3和CN的取代基可任選地取代的C1-8烷基，并且其中各可任選的芳基取代基是由鹵素、烷基、CF3和CN可任選地取代的；并且R3和R4各獨(dú)立地選自氫和甲基。
23.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為-CONHEt；R2選自氫和可任選地由1個(gè)芳基取代基取代的C1-8烷基，其中所述芳基是可任選地或由鹵素、烷基、CF3和CN取代的；并且R3和R4各為氫。
24.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為-CONHEt；R2選自氫和由芳基可任選地取代的C1-6烷基，其中所述芳基是由烷基可任選地取代的；并且R3和R4各為氫。
25.權(quán)利要求7的化合物，其中R1為-CONHEt；R2選自氫和由1個(gè)芳基取代基可任選地取代的C1-8烷基，其中所述芳基是由鹵素、烷基、CF3和CN可任選地取代；并且R3和R4各為氫。
26.權(quán)利要求7的化合物，其中R1為-CONHEt；R2獨(dú)立地選自氫和由芳基可任選地取代的C1-6烷基，其中所述芳基是由烷基可任選地取代的；并且R3和R4各為氫。
27.權(quán)利要求8的化合物，其中R1為-CONHEt；并且R2選自氫和甲基；R3和R4各獨(dú)立地選自氫和由芳基可任選地取代的C1-6烷基，其中所述芳基是由烷基可任選地取代的；并且R4選自氫和甲基。
28.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物選自(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-芐基吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-[6-氨基-2-(1-戊基吡唑-4-基]嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-[6-氨基-2-[1-甲基吡唑-4-基]嘌呤-9-基]-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(甲基乙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(3-苯基丙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(4-叔丁基芐基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-(6-氨基-2-吡唑-4-基嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-戊-4-烯基吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-癸基吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(環(huán)己基甲基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(2-苯基乙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(3-環(huán)己基丙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇，(4S，2R，3R，5R)-2-{6-氨基-2-[1-(2-環(huán)己基乙基)吡唑-4-基]嘌呤-9-基}-5-(羥甲基)oxolane-3，4-二醇及其混合物。
29.一種通過給予哺乳動(dòng)物治療有效量權(quán)利要求1化合物來刺激哺乳動(dòng)物冠脈血管擴(kuò)張以便于心臟顯像的方法，其中所述劑量足以使心臟處于緊張狀態(tài)并引起冠脈“竊血”現(xiàn)象。
30.權(quán)利要求25的方法，其中所述治療有效量的大約為0.01-100mg/kg哺乳動(dòng)物體重。
31.權(quán)利要求29的方法，其中所述哺乳動(dòng)物為人。
32.一種包含權(quán)利要求1化合物和一種或多種藥用賦形劑的藥物組合物。
33.權(quán)利要求32的藥物組合物，其中所述藥物組合物是以溶液劑形式存在的。
34.權(quán)利要求32的藥物組合物，其中所述組合物在血管成形術(shù)輔助治療中用作抗炎劑、血小板聚集抑制劑以及血小板和中性白細(xì)胞激活抑制劑。
全文摘要
具有式(a)結(jié)構(gòu)的2－腺苷C－吡唑化合物及其以治療和心臟顯像為目的,利用本發(fā)明化合物作為A
文檔編號(hào)A61P9/00GK1358189SQ00809443
公開日2002年7月10日 申請(qǐng)日期2000年6月21日 優(yōu)先權(quán)日1999年6月22日
發(fā)明者杰夫·A·扎布沃茨基, 埃費(fèi)提·O·埃爾策英, 文卡塔·P·帕列 申請(qǐng)人:Cv治療公司