專利名稱：炔基磺酰胺硫醇tace抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及炔芳基磺酰胺硫醇作為TNF-α轉(zhuǎn)化酶(TACE)的抑制劑。本發(fā)明中的化合物在由TNF-α介導(dǎo)的疾病中十分有用，這些疾病如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒癥、艾滋病、潰瘍性結(jié)腸炎、多發(fā)性硬化、克羅恩氏病和退化軟骨喪失癥。
(2)背景技術(shù)TNF-α轉(zhuǎn)化酶(TACE)會催化膜結(jié)合的TNF-α前體蛋白形成TNF-α。TNF-α是一種促炎性細胞因子，它被認為在下列病癥中起主要作用類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[Shire，M.G.；Muller，G.W.Exp.Opin.Ther.Patents 1998，8(5)，531；Grossman，J.M.Branhn，E.J.Woman’s Healthl997，6(6)，627；Isomaki，P.；Punnonen，J.Ann.Med.1997，29，499；Camussi，G.；Lupia，E.Drugs，1998，55(5)，613.]，膿毒性休克[Mathison等.J.Clin.Invest.1988，81，1925；Miethke等.J.Exp.Med.1992，175，91.]、移植排斥[Piguet，P.F.；Grau等.J.Exp.Med.1987，166，1280.]、惡病質(zhì)[Beutler，B.；Cerami，A.Ann.Rev.Biochem.1988，57，505.]、厭食癥、發(fā)炎[Ksontini，R.；Mackay，S.L.D.；Moldawer，L.L.Arch.Surg.1998，133，558.]、充血性心力衰竭[Packer，M.Circulation，1995，92(6)，1379；Ferrari，R.；Bachetti，T.；等.Circulation，1995，92(6)，1479.]、后局部貧血重灌注傷害、中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥、腸炎、抗胰島素[Hotamisligil，G.S.；Shargill，N.S.；Spiegelman，B.M.；等.Science，1993，259，87.]和HIV感染[Peterson，P.K.；Gekker，G.；等.J.Clin.Invest.1992，89，574；Pallares-Trujillo，J.；Lopez-Soriano，F(xiàn).J.Argiles，J.M.Med.Res.Reviews，1995，15(6)，533]，另外，它被證明有良好的抗腫瘤特性[Old，L.Science，1985，230，630.]。例如，對抗TNF-α抗體和轉(zhuǎn)基因動物的研究表明，阻止TNF-α的形成能夠抑制關(guān)節(jié)炎惡化[Rankin，E.C.；Choy，E.H.；Kassimos，D.；Kingsley，G.H.；Sopwith，A.M.；Isenberg，D.A.；Panayi，G.S.Br.J.Rheumatol. 1995，34，334；Pharmaprojects，1996，Therapeutic Updates17(8月)，au197-M2Z.]。近來，這項發(fā)現(xiàn)已被延用到人類身上，并被記載在“TNF-αin Human Diseases(人類疾病中的TNF-α)”，Current Pharmaceutical Design(現(xiàn)代醫(yī)藥設(shè)計)，1992，2，662。
預(yù)期TACE的小分子抑制劑對多種病癥的治療會有潛在的應(yīng)用。雖然多種TACE抑制劑已公知，但許多這些分子是肽或者類肽化合物，這使得它在運用時會在生物利用率和藥物動力學(xué)方面遇到難題。另外，許多這些分子作為基質(zhì)金屬蛋白酶特別是MMP-1的強力抑制劑是無選擇性的。在MMP抑制劑的臨床試驗中，人們認為抑制MMP-1(膠原酶1)會造成關(guān)節(jié)疼痛[Scrip，1998，2349，20]。所以用能長期發(fā)揮作用的、選擇性的、可口服生物利用的非肽TACE抑制劑治療上述疾病是極為需要的。
美國專利5,455,258；5,506,242；5,552,419；5,770,624，和5,817,822以及歐洲專利申請書EP606,046A1和WIPO(世界知識產(chǎn)權(quán)組織)的國際發(fā)行刊物WO9600214和WO9722587中揭示了非肽的基質(zhì)金屬蛋白酶和/或TACE抑制劑，下面顯示的芳基磺酰胺異羥肟酸是具有代表性的。還有些刊物揭示了以磺酰胺為基礎(chǔ)的MMP抑制劑，是如下所示的磺酰胺異羥肟酸的變體，或磺酰胺羧酸鹽的類似物，這些刊物有歐洲專利申請書EP-757037-AL和EP-757984-A1以及WIPO(世界知識產(chǎn)權(quán)組織)的國際刊物WO9535275，WO9535276，WO9627583，WO9719068，WO9727174，WO9745402，WO9807697，WO9831664，WO9833768，WO9839313，WO9839329，WO9842659和WO9843963。對于這種類型的MMP抑制劑的發(fā)現(xiàn)，詳細記載于MacPherson，等在J.Med.Chem.，(1997)，40，2525和Tamura，等在J.Med.Chem.(1998)，41，640。 包括美國專利5,753,653，WIPO國際刊物WO9633172，WO9720824，WO9827069，WO9808815，WO9808822，WO9808823，WO9808825，WO9834918，W09808827，Levin等，Biroorg.&Med.Chem.Letters1998，8，2657和Pikul等，J.Med.Chem.1998，41，3568在內(nèi)的刊物，揭示了MMP和/或TACE的β-磺酰胺-異羥肟酸鹽抑制劑，此抑制劑的結(jié)構(gòu)如下顯示，其中異羥肟酸的α碳與環(huán)中的磺酰胺的氮原子相連。 專利申請書DE19,542,189-A1，WO9718194，和EP803505揭示了另一些用作MMP和TACE抑制劑的，環(huán)狀磺酰胺的實例。在此，含磺酰胺的環(huán)與芳環(huán)或雜芳環(huán)稠合。 WIPO國際刊物WO9816503，WO9816506，WO9816514和WO9816520以及美國專利5,776,961揭示了磺酰胺異羥肟酸MMP/TACE抑制劑的例子，其中含2碳的碳鏈把異羥肟酸和磺酰胺的氮原子分開，如下所示。 WIPO國際刊物WO9808853揭示了與磺酰胺相類似的次膦酸酰胺異羥肟酸MMP/TACE抑制劑，結(jié)構(gòu)示例圖如下。 WIPO國際申請書9803166揭示的磺酰胺MMP/TACE抑制劑，其中硫醇是鋅螯合基團，如下所示。 本發(fā)明的意圖之一，是揭示芳基磺酰胺異羥肟酸MMP/TACE抑制劑，它的磺酰芳基被取代的丁炔基，炔丙基醚，炔丙基胺或炔丙基硫?qū)ξ蝗〈?br> (3)發(fā)明內(nèi)容發(fā)明概述本發(fā)明給出了具有結(jié)構(gòu)式B的TACE和MMP抑制劑 其中n’＝1或2當n’＝2時，A不存在(即為二硫化物)當n’＝1時，A為H或R14C(＝W)-；(即，其中B為下列結(jié)構(gòu)式中的一個 在這些結(jié)構(gòu)式中W為氧或硫；X為SO2或-P(O)-R10；Y是如下定義的芳基或雜芳基，條件是X和Z不與Y的相鄰的原子連接；Z是O、NH、CH2或S；R1是氫、芳基、含1-6個碳原子的烷基、含2-6個碳原子的鏈烯基、含2-6個碳原子的鏈炔基；R2是氫、如下定義的芳基或雜芳基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、-C5-C8-雜環(huán)烷基、含1-6個碳原子的烷基、含2-6個碳原子的鏈烯基、含2-6個碳原子的鏈炔基或CONR8R7；或R1和R2與和它們相連的原子一起形成環(huán)，其中R1和R2代表為下結(jié)構(gòu)式中的二價基團 其中Q＝碳-碳單鍵或雙鍵、O、S、SO、-N-R11、或-CONR15；m＝1-3r＝1或2，其條件是當Q是一個鍵時，r就等于2；芳基是被選自R7的一到二個取代基任選取代的苯基或萘基，其中R7如下所述；雜芳基的如下所述 或 雜芳基任選地被R7單取代或雙取代，其中K為O、S或-NR15；R3是氫或含1-6個碳原子的烷基；或R1和R3和與它們所連的原子一起形成5-8元環(huán)，其中R1和R3代表以下結(jié)構(gòu)式中的二價基團 ；和 其中Q和m如上所述；A是芳基或雜芳基；s為O-3；u為1-4；R4和R5各自獨立為氫、含1-6個碳原子的烷基、-CN、-CCH；R6是氫、芳基、雜芳基、含1-6個碳原子的烷基、含2-6個碳原子的鏈烯基、含2-6個碳原子的鏈炔基、含3-6個碳原子環(huán)烷基或如下定義的-C5-C8-雜環(huán)烷基；R7是氫、鹵素、含1-6個碳原子的烷基、含2-6個碳原子的鏈烯基、含2-6個碳原子的鏈炔基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、-OR8、-CN、-COR8、含1-4個碳原子的全氟烷基、含1-4個碳原子的-O-全氟烷基、-CONR8R9、-S(O)nR8、-OPO(OR8)OR9、-PO(OR8)R9、-OC(O)NR8R9、-C(O)NR8OR9、-COOR8、-SO3H、-NR8R9，-N[(CH2)2]2NR8、-NR8COR9、-NR8COOR9、-SO2NR8R9、-NO2、-N(R8)SO2R9、-NR8CONR8R9、-NR8C(＝NR9)NR8R9，-NR8C(＝NR9)N(C＝OR8)R9、-NR8C(＝NR9)N(SO2R8)R9、5-四唑基，-SO2NHCN、-SO2NHCONR8R9、苯基、如上所述的雜芳基；或者是如下所述的-C5-C8-雜環(huán)烷基；其中-NR8R9可形成吡咯烷、哌啶、嗎啉、硫代嗎啉、噁唑烷、噻唑烷、吡唑烷、哌嗪、或吖丁啶環(huán)；其中-C5-C8-雜環(huán)烷基如下所述 其中K如上所述；R8和R9各自獨立為氫、含1-6個碳原子的烷基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、芳基、雜芳基或-C5-C8雜環(huán)烷基；R10是含1-6個碳原子的烷基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、如上所述的芳基或雜芳基；R11是氫、含1-6個碳原子的烷基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-S(O)nR8、-COOR8、-CONR8R9、-SO2NR8R9或-COR8；R12和R13獨立地選自H、-OR8、-NR8R9、含1-6個碳原子的烷基、含2-6個碳原子的鏈烯基、含2-6個碳原子的鏈炔基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-COOR8；-CONR8R9；或R12和R13一起形成含3-6個碳原子的-C3-C6-環(huán)烷基或-C5-C8-雜環(huán)烷基的環(huán)；或R12和R13與它們所連的碳原子形成羰基；其條件是，R10和R12或R11和R12可形成雜環(huán)烷基的環(huán)，其中如果它們連在相鄰的原子上，就形成如上所述的環(huán)雜烷基；R14是-OR8、-NR8R9、含1-6個碳原子的烷基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、芳基或雜芳基；R15是氫、芳基、雜芳基、含1-6個碳原子的烷基或含3-6個碳原子的環(huán)烷基；
且n為O-2；或者其是醫(yī)藥上可用的鹽。
本發(fā)明提供了如上所述的結(jié)構(gòu)式B化合物的制備方法，包括下列方法中的一種a)使結(jié)構(gòu)式V的化合物 其中R1-R6，X，Y和Z如上所述，在適合發(fā)生Mitsunobu反應(yīng)的條件下，與結(jié)構(gòu)式為R14C(W)SH的化合物起反應(yīng)，生成相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式1b的化合物(即，結(jié)構(gòu)式B中的n’＝1并且A為R14C(＝W)-)；或者b)使結(jié)構(gòu)式VI的化合物 其中R1-R6、X、Y和Z如上所述，并且J是一個離去基團如鹵素(如氯)，有機磺酰氧基基團(如甲磺酸酯，甲苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯)，與結(jié)構(gòu)式為A’SH的化合物或其鹽反應(yīng)，(其中A’為堿金屬或R14C(W)-基團)，生成相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式為1a或1b的化合物(即，結(jié)構(gòu)式B中的n’＝1并且A是H或R14C(W)-)；或者c)使結(jié)構(gòu)式為VII的化合物 其中R1、R2、R3、X、Y、Z和n’如上所述，當n’＝1R40為H或R14C(＝W)-，并當n’＝2，R40不存在(即為二硫化物)時，與結(jié)構(gòu)式VIII的化合物會反應(yīng) 其中R4、R5和R6如上所述，并且J是一個離去基團(如上所述)，得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式為B的化合物或者d)水解結(jié)構(gòu)式B的化合物，其中R1-R6、X、Y和Z如上所述，n’＝1并且A為R14C(＝W)-(即為結(jié)構(gòu)式1b)，得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式1a的化合物(即，結(jié)構(gòu)式B中的A為H)；或者e)還原結(jié)構(gòu)式B的化合物，其中R1-R6、X、Y和Z如上所述，n’＝1并且A是RC14(＝W)-(即結(jié)構(gòu)式1b)或n’為2(即結(jié)構(gòu)式1c)，得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式1a的化合物(即，結(jié)構(gòu)式B中的A是H)；或者f)氧化結(jié)構(gòu)式B的化合物，其中R1-R6、X、Y和Z如上所述，n’＝1并且A為H(即，結(jié)構(gòu)式1a)，得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式1c的化合物(即，結(jié)構(gòu)式B中的n’＝2)；或者g)拆分結(jié)構(gòu)式B化合物的光學(xué)活性異構(gòu)體混合物(如外消旋體)，來將一個對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體同另一個對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體基本上分離；
或者h)用醫(yī)藥上可用的酸來酸化結(jié)構(gòu)式B的堿性化合物，從而得到醫(yī)藥上可用的鹽。
方法a)在進行Mitsunobu反應(yīng)的已知標準條件下(見MerckIndex12thEdition(Merck索引第12版)ONR-61和有關(guān)參考)，使用合適的反應(yīng)試劑進行，如偶氮二羧酸二烷酯，三烷基-或三芳基-膦，以及例如硫代乙酸。
方法b)可通過本領(lǐng)域已知適用的硫羥基化或硫代酸酯化法實現(xiàn)。
方法c)可通過本領(lǐng)域已知適用的烷基化法實現(xiàn)，其中J是合適的離去基團，如鹵化物，或有機磺酰氧基，如甲磺氧基、甲苯磺酰氧基或三氟甲磺酰氧基。
方法d)可通過本領(lǐng)域已知適用的方法實現(xiàn)，例如使用甲醇鈉水解。
方法e)可通過使用適宜的還原劑，如硼氫化鈉來實現(xiàn)。
方法f)可通過本領(lǐng)域已知適用的手段，如使用空氣或氧氣來進行氧化，從而形成的相應(yīng)的二硫化物。
關(guān)于方法g)的標準分離技術(shù)可用于分離特定的對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體。例如一個外消旋混合物通過與單一對映異構(gòu)體的“拆分試劑”(例如通過非對映異構(gòu)體的鹽的形成或共價鍵的形成)進行反應(yīng)，就能轉(zhuǎn)化為光學(xué)活性的非對映異構(gòu)體混合物。所得到的光學(xué)活性非對映異構(gòu)體混合物可用標準技術(shù)(如結(jié)晶法或色譜法)來分離，單一光學(xué)活性非對映異構(gòu)體經(jīng)處理脫去“拆分試劑”，從而釋放出本發(fā)明化合物的單一對映異構(gòu)體。手性色譜法(使用一個手性載體，洗脫劑或離子配對試劑)同樣可直接用來分離對映異構(gòu)體混合物。
結(jié)構(gòu)式B的化合物通過用酸處理，能以醫(yī)藥上可用的酸(如上述的有機酸或無機酸)的鹽的形式分離出來。
本發(fā)明進一步涉及結(jié)構(gòu)式B化合物的制備方法，它涉及制備中間產(chǎn)物的一個或多個反應(yīng)，如下所述1)使結(jié)構(gòu)式I的化合物或它的鹽或溶劑化物轉(zhuǎn)化， 形成結(jié)構(gòu)式II的化合物 2)使上述結(jié)構(gòu)式II的化合物或它的鹽或溶劑化物轉(zhuǎn)化成結(jié)構(gòu)式III的化合物 其中J是氟、溴、氯、1，2，4-三唑基、苯并三唑基或咪唑基，并且R4、R5和R6如上所述。
本發(fā)明還進一步涉及結(jié)構(gòu)式B的化合物一個制備方法，它涉及制備中間物的一個或多個反應(yīng)，如下所述1)使苯酚，或它的鹽或溶劑化物轉(zhuǎn)化成結(jié)構(gòu)式IV的化合物 2)使上述的結(jié)構(gòu)式IV的化合物或它的鹽或溶劑化物轉(zhuǎn)化成上述結(jié)構(gòu)式II的化合物。
烷基、烯基、炔基和全氟烷基既包括直鏈部分，也包括支鏈部分。烷基，烯基、炔基、環(huán)烷基和苯基的定義包括未取代的(碳連到氫，或鏈或環(huán)上的其它碳上)烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基和苯基部分或可被R7單取代或多取代。如果某一部分含有多于一個的符號相同的取代基(即，被R7三取代的烷基)，則這些取代基(此例中的R7)各可能是相同的也可能是不同的。鹵素意味著溴、氯、氟和碘。
本發(fā)明的化合物可能含有不對稱的碳原子，并且本發(fā)明的一些化合物可能含有一個或多個不對稱中心，因此可能產(chǎn)生光學(xué)異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體。如果沒有特別表示立體化學(xué)，本發(fā)明包括這些光學(xué)活性異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體；以及外消旋的和拆分的、對映異構(gòu)純的R和S立體異構(gòu)體；以及其它R和S立體異構(gòu)體的混合物以及它們所形成的在醫(yī)藥上可用的鹽。人們已認識到，一種光學(xué)活性異構(gòu)體，包括非對映異構(gòu)體和對映異構(gòu)體，或立體異構(gòu)體，可能有超過其它異構(gòu)體的有利性能。所以在公開，并對本發(fā)明的權(quán)利提出要求的時候，如果揭示了一種外消旋混合物，很顯然還要考慮它的兩種光學(xué)異構(gòu)體，包括基本上不含其它異構(gòu)體的對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體，或者立體異構(gòu)體也同時公開和要求保護。
在本發(fā)明化合物含有堿性部分的情況下，可由有機酸或無機酸制得醫(yī)藥上可用的鹽，這些酸如，乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、丙二酸、扁桃酸、蘋果酸、鄰苯二甲酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸，和類似的已知可用的酸。在本發(fā)明化合物含有酸性部分的情況下，也可由有機堿或無機堿制得鹽，最好是堿金屬鹽，例如，鈉、鋰或鉀。
本發(fā)明較理想的化合物具有這樣的結(jié)構(gòu)式其中B為 或者是它所形成的醫(yī)藥上可用的鹽。
本發(fā)明更為理想的化合物中的B為 并且X為SO2；或它所形成的醫(yī)藥上可用的鹽。
本發(fā)明更為理想的化合物中的B為 并且X為SO2，Z為氧；或它所形成的醫(yī)藥上可用的鹽。
本發(fā)明更為理想的化合物中的B為 并且X為SO2，Z為氧，R4和R5是氫；或者是它所形成的醫(yī)藥上可用的鹽。
本發(fā)明更為理想的化合物中的B為 并且X為SO2，Z為氧，R4和R5是氫，R6是-CH2OH或甲基；或者是它所形成的醫(yī)藥上可用的鹽。
本發(fā)明更為理想的化合物中的B為 其中R1是氫，這樣此化合物就具有和上反應(yīng)流程

圖1a相同的絕對立體化學(xué)。
發(fā)明詳述本發(fā)明化合物可通過有機合成領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的常規(guī)技術(shù)制備。制備在本發(fā)明化合物所使用的原材料是公知的，可用公知的方法制得，或購得的。
本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，如果分子的其它能發(fā)生潛在反應(yīng)的官能度被掩蔽或被保護，某些反應(yīng)就能更好的進行，因而避免了不希望出現(xiàn)的副反應(yīng)和/或增加反應(yīng)的產(chǎn)率。為此，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用保護基。這些保護基的示例見T.W.Greene，P.G.M.Wuts“Protective Groupin Organic Synthesis(有機合成中的保護基)”，2ndEdition(第二版)，1991，Wildy & Sons，New York(紐約)。在原材料氨基酸中，活性側(cè)鏈官能度最好被保護起來。對特定反應(yīng)的保護基的需求和選擇在這些現(xiàn)行技術(shù)中為已知，取決于要被保護的官能團(羥基，氨基，羧基等)的性質(zhì)、結(jié)構(gòu)，以及取代基為其一部分的分子穩(wěn)定性和反應(yīng)條件。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，上述所介紹的合成步驟的性質(zhì)和次序，出于要優(yōu)化本發(fā)明化合物形成的需要可以有所變化。
如果要制備或精制的本發(fā)明化合物中含有芳環(huán)，雜芳環(huán)或雜環(huán)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可知，這些環(huán)上取代基的制備可以在環(huán)的生成前，或環(huán)的生成后，也可與環(huán)的生成一同進行。為了描述清楚，本文自下圖開始忽略這些環(huán)上的取代基。
本發(fā)明的硫醇化合物，1a-1c，根據(jù)反應(yīng)流程圖1，通過Mitsunobu方法，使用三苯基膦，偶氮二羧酸二乙酯和巰基乙酸這樣的試劑，將醇，2，轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的硫代酯或二硫代酯，1b。1b轉(zhuǎn)化為硫醇1a的過程，是通過使用甲醇鈉、硼氫化鈉或類似的試劑，將酯進行水解或還原性裂解得到的。硫醇1a可使用與炔取代基相適應(yīng)的方法，如用空氣或氧氣氧化來轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的二硫化物。
或者，2的醇部分可轉(zhuǎn)化為離去基團J，其中J是鹵化物、甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、三氟甲磺酸酯或具有相似的官能度，得到化合物3。3和親核試劑，如硫化鈉，巰基乙酸，二巰基乙酸或類似試劑或它們形成的鹽起反應(yīng)，從而得到1a或1b。反應(yīng)流程圖1 醇2的制備如反應(yīng)流程圖2所示。氨基-醇4(R30＝H)或它羥基被保護的類似物，在叔胺堿或吡啶存在下，可用7來磺?；蛄柞；?，得到8，其中4上的R30是一個合適的掩蔽基團，如三烷基甲硅烷基或四氫吡喃基，7上的J如反應(yīng)流程圖1所述。在極性非質(zhì)子溶劑(如丙酮、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、或四氫呋喃(THF))中，用R3J和像碳酸鉀或氫化鈉這樣的堿來將化合物8的N-H烷基化，就能得到磺酰胺9。用7和N-取代的氨基-醇衍生物5直接反應(yīng)的方法來制得化合物9也是同樣可行的。將胺4烷基化或還原性烷基化，或?qū)?或其相應(yīng)的環(huán)氧化物胺化可制得化合物5。9轉(zhuǎn)化為醇按與保護基R30的選擇和碳碳三鍵的存在相一致的方式進行。反應(yīng)流程圖2 另外一條制備化合物9的路線如反應(yīng)流程圖3所示。化合物7，如磺酰氯，能和伯胺或氨反應(yīng)，分別得到化合物10或11。10用6或類似的環(huán)氧化物烷基化直接得到9，而11則先用R3J烷基化，然后和6(反之亦然)或它的環(huán)氧化物反應(yīng)得到9。反應(yīng)流程圖3 磺?；噭?的制備方法如反應(yīng)流程圖4所示。磺酸鹽12(其中ZR50是羥基，硫醇或被取代的氨基部分)可用炔13烷基化，得到14，其中13上J是適宜的離去基團，如鹵化物、甲磺酸酯、對甲苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯。炔13是可購得的或已知的化合物，或者能用公知的現(xiàn)行方法合成?；撬猁}14可通過已知方法，如，用草酰氯或其它和取代基R4、R5、R6以及炔相容的試劑起反應(yīng)，就可轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的磺酰氯或其它磺?；噭??；蛘咭部梢詫⒍蚧?5先和化合物13起反應(yīng)，然后還原二硫鍵來轉(zhuǎn)化成聯(lián)乙炔16，從而得到可通過已知方法轉(zhuǎn)化為7的類似硫醇。用13將苯酚、苯硫酚、苯胺或受到保護的苯胺17烷基化得到18，然后與氯磺酸起反應(yīng)得到磺酸19，19易于和草酰氯或類似試劑反應(yīng)得到7。苯硫酚20同樣是制得7的前體，通過保護硫羥基，接著將ZH烷基化(其中Z是O、N或S)的去保護再經(jīng)過氧化反應(yīng)得到19，就能得到7。反應(yīng)流程圖4 使用如反應(yīng)流程圖5所示的類似方法，就能制得含磷的7的類似物。反應(yīng)流程圖5 如反應(yīng)流程圖6所示，在氨基酸衍生物的磺酰化或磷酸化后也能加上炔側(cè)鏈。氨基-醇衍生物4和5能用化合物23來進行磺?；蛄姿峄渲衂R50是羥基或受保護的羥基，巰基或氨基，并且如有需要的話，4和5要像反應(yīng)流程圖2那樣烷基化從而得到24。除去R50掩蔽基團得到25，然后用13將產(chǎn)物苯酚，硫醇，胺烷基化就得到9。在此例中如果ZR50是OH，無需去保護這一步驟就可得到25?；蛘呷绶磻?yīng)流程圖1和2所示，在對化合物24的ZR50部分進行去保護之前，將化合物24的OR30部分轉(zhuǎn)化為硫代酯，硫醇或二硫代物的類似物。隨后，將無掩蔽的-ZH基團烷基化就得到了本發(fā)明的化合物。反應(yīng)流程圖6 9的炔丙基胺類似物的合成如反應(yīng)流程圖7所示，是用氨基-醇衍生物4和/或5作為起始反應(yīng)物。用對硝基芳基化合物26(如4-硝基苯磺酰氯)來磺?；蛄姿峄?，然后用R3J(對4)來烷基化，并在DMF(二甲基甲酰胺)中使用像碳酸鉀或氫化鈉這樣的堿，就能得到27。硝基部分用氫和鈀炭，氯化錫或其它已知的方法還原得到苯胺28，接著用13烷基化就得到9。在用13烷基化之前可先制造苯胺28的衍生物(29)，在烷基化步驟之后去保護28衍生物。如反應(yīng)流程圖6所示，化合物29可先轉(zhuǎn)化為它的硫代酯，二硫化物或受保護的硫醇類似物，接著添加炔丙基基團，然后用13烷基化隨后使苯胺去保護，從而得到本發(fā)明化合物1a-1c。反應(yīng)流程圖7 炔的衍生物9也可如反應(yīng)流程圖8所示，通過容易從氨基-醇衍生物4和/或5和氟代芳烴3O起反應(yīng)得到的氟化物31來制備。在有堿(如氫化鈉)存在的條件下，在極性非質(zhì)子溶劑如DMF(二甲基甲酰胺)中用帶有被掩蔽的羥基，硫羥基或氨基(HZR70，其中R70是適宜的離去基團)，取代31上的氟，再去保護后得到32，它然后被13烷基化就得到9。通過使用Na2S、K2S、NaSH或KS(C＝S)OEt能使31(如果Z是硫)轉(zhuǎn)化為32。在有像氫化鈉這樣的堿存在的條件下，在極性非質(zhì)子溶劑中，31上的氟，能被炔丙基衍生物33(如果Z是O、S或NH)來取代從而直接制得9。如反應(yīng)流程圖6和反應(yīng)流程圖7所述的合成次序可以改變，這樣就可在OR30轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的硫代酯，二硫化物或受保護的硫醇后，再添加炔的部分。反應(yīng)流程圖8 化合物9(其中Z是亞甲基基團)可通過34制得，如反應(yīng)流程圖9所示。在氯化碳氫化合物溶劑中用N-溴代丁二酰亞胺(NBS)進行34的芐基溴化，得到溴化物35。然后用適當?shù)你~酸丙炔基酯取代該溴化物，制得磺酰胺9。反應(yīng)流程圖9 反應(yīng)流程圖10顯示了制備具有結(jié)構(gòu)9(此例中R6為氫)化合物的衍生物的一些可行方法。對末端炔9進行金屬取代，然后和醛或烷基的鹵化物，硫酸酯或三氟甲磺酸酯起加成反應(yīng)就能得到衍生物36和37。將9與甲醛和胺反應(yīng)就能制得曼尼希(Mannich)加成產(chǎn)物38。溴化氰與38加成得到炔丙基溴化物39，39能被各種親核試劑(如醚、硫醚和胺)取代來制得40。用鈀催化9的偶合反應(yīng)來得到芳基炔或雜芳基炔41。有機合成領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該知道，成功地運用這些手段取決于在分子的另一部分上的取代基的相容性。制備時需要這里所描述的基團保護和/或步驟改變。R35、R45、R55、R65和R75是像甲基這樣的烷基基團。反應(yīng)流程圖10 實施例下述示例詳細說明了本發(fā)明典型化合物的制備過程。其原材料，中間物和試劑都是商業(yè)上可購得的，或能按照標準文獻所記載的方法，由有機合成領(lǐng)域的技術(shù)人員制得。
實施例14-(2-丁炔氧基)-苯磺酸鈉鹽在由52.35g(0.225mol)4-羥基苯磺酸鈉鹽在1L異丙醇和225mL的1.0N氫氧化鈉溶液里形成的溶液中，添加59.96g(0.45mol)的1-溴-2-丁炔。將所產(chǎn)生的混合物加熱到70°15個小時，然后異丙醇在真空中通過蒸發(fā)除去。得到的白色沉淀物通過過濾收集，用異丙醇和乙醚洗滌，并在真空中干燥，得到56.0g(100％)丁炔基醚白色固體。
實施例24-(2-丁炔氧基)-苯磺酰氯在由43.8mL(0.087mol)的2M草酰氯/二氯甲烷溶液加入29mL二氯甲烷后形成的0°溶液中，滴加6.77mL(0.087mol)的DMF(N，N-二甲基甲酰胺)，然后再加7.24g(0.029mol)實施例1產(chǎn)物。在0°下攪拌反應(yīng)混合物10分鐘，然后加熱到室溫，并攪拌2天。接著將反應(yīng)混合倒入冰中，并用150mL己烷萃取。用水和鹽水洗滌有機物，用Na2SO4干燥，過濾、在真空中濃縮，從而得到6.23g(88％)磺酰氯黃色固體；熔點63-65℃，EI(電子碰撞)質(zhì)譜法243.9(M+)。
實施例32-丁炔氧基-苯在由6.14g三苯膦(0.023mol)溶解在100mL苯和40mLTHF(四氫呋喃)形成的溶液中，添加1.75mL(0.023mol)2-丁炔-1-醇。5分鐘后將2.00(0.023mol)苯酚在10mLTHF中的溶液加到反應(yīng)混合物中，接著加入3.69mL(0.023mol)的偶氮二羧酸二乙酯。在室溫下攪拌所形成的反應(yīng)混合物18小時，然后在真空中濃縮。殘余物使用色譜法，在硅膠上用乙酸乙酯/己烷洗脫，從而得到2.18g(70％)的丁炔基醚澄清液體。EI(電子碰撞)質(zhì)譜法146.0MH+。
實施例44-(2-丁炔氧基)-苯磺酰氯在氮氣下由0.146g(1.0mmol)的實施例3產(chǎn)物在0.3mL二氯甲烷中所形成的在丙酮/冰浴中的溶液里，逐滴加入0.073mL(1.1mmol)的氯磺酸在0.3mL二氯甲烷中的溶液。滴加完之后，移去冰浴，在室溫下攪拌該反應(yīng)2小時。然后在該反應(yīng)混合物中滴加0.113mL(1.3mmol)的草酰氯，再加入0.015mL的DMF。反應(yīng)加熱至回流2小時，然后用己烷稀釋，并倒入冰水。用鹽水洗滌有機物層，用硫酸鈉干燥，并在真空中濃縮，從而得到0.130mg(53％)的淺棕色固體所需產(chǎn)物。
實施例54-(2-丁炔氧基)-N-(2-羥基-1-甲基-乙基)-苯磺酰胺在由0.279g(3.718mmol)的(R)-(-)-2-氨基-1-丙醇在2.6mLTHF和0.9mL水中形成的溶液里，加入0.62mL的三乙胺，再加入1.00g(4.09mmol)的4-丁基-2-炔氧基-苯磺酰氯，將所得到的混合物在室溫下攪拌15小時。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，用5％HCl溶液及水洗滌，用MgSO4干燥，過濾、在真空中濃縮。得到的固體再用乙醚洗滌，在真空中干燥，制得0.873g(83％)的磺酰胺白色固體。Electrospray(電噴霧)質(zhì)譜法283.8(M＋H)+實施例64-(2-丁炔氧基)-N-(2-羥基-1-甲基-乙基)-N-甲基-苯磺酰胺在由0.400g(1.413mmol)的實施例5產(chǎn)物在3.0mLDMF中形成的溶液里，加入0.585g(4.240mmol)的碳酸鉀，接著加入0.132mL(2.12mmol)的碘代甲烷，在室溫下攪拌所得到的混合物12小時。然后反應(yīng)用乙醚稀釋，用水洗滌，用MgSO4干燥，過濾、在真空中濃縮，得到0.354g(84％)的N-甲基苯磺酰胺白色固體。Electrospray(電噴霧)質(zhì)譜法297.9(M＋H)+。
實施例7硫代乙酸S-{2-[4-(2-丁炔氧基)-苯磺酰基)-甲基-氨基]-丙基}酯在由0.302g(1.017mmol)的實施例6產(chǎn)品和0.293g(1.118mmol)的三苯膦在4.0mL的THF中形成的0℃溶液中，加入0.176mL(1.118mmol)的偶氮二羧酸二乙酯。0℃攪拌得到的混合物0.5小時，然后在真空中濃縮。其殘余物用色譜法，在硅膠上用乙酸乙酯/己烷洗脫，從而得到0.228g(63％)的硫代乙酸酯無色油。Electrospray(電噴霧)質(zhì)譜法355.9(M＋H)+。
實施例84-(2-丁炔氧基)-N-((1R)-2-巰基-1-甲基-乙基)-N-甲基-苯磺酰胺在由0.168g(0.473mmol)的實施例7產(chǎn)品在2.1mL甲醇中形成的溶液中，加入0.092g(1.704mmol)的甲醇鈉。在室溫下攪拌2小時后，用5％的HCL溶液終止反應(yīng)，并用乙醚萃取。有機物用NaSO4干燥，在真空中濃縮。殘余物用色譜法，在硅膠上用乙酸乙酯/己烷以(1∶10)到(1∶3)的梯度來洗脫，從而得到0.148g(100％)的硫醇無色油。Electrospray(電噴霧)質(zhì)譜法313.9(M＋H)+。
實施例94-(2-丁炔氧基)-N-(2-羥基-1-甲基-乙基)-N-(2-嗎啉-4-基-乙基)-苯磺酰胺根據(jù)實施例6方法，用0.400g(1.413mmol)的實施例5產(chǎn)品和0.289g(1.555mmol)的4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽制得0.334g(60％)的N-嗎啉代乙基苯磺酰胺無色油。Electrospray(電噴霧)質(zhì)譜法397.0(M＋H)+。
實施例10S-((2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)-苯基]磺酰基}[2-(4-嗎啉基)乙基]氨基}丙基)硫代乙酸酯在由0.416g(1.16mmol)的實施例9產(chǎn)品在4mLTHF中形成的溶液里，陸續(xù)加入0.304g(1.16mmol)的三苯膦，0.191g(1.16mmol)的偶氮二羧酸二乙酯和0.25mL(3.5mmol)的巰基乙酸。攪拌該反應(yīng)混合物45小時，減壓蒸干，得到的殘余物用色譜法，使用乙酸乙酯/己烷(3∶1)來洗脫，從而得到0.5g(95％)的硫代乙酸酯白色固體。Electrospray(電噴霧)質(zhì)譜法455.3(M＋H)+。
實施例114-(2-丁炔基氧)-N-[(1R)-1-甲基-2-硫烷基乙基]-N-[2-(4-嗎啉基)乙基]苯磺酰胺在放置在-78°可密封試管中，由0.16g(0.352mmol)的實施例10產(chǎn)品在2mL甲醇形成的溶液里，加入20mL液體氨。封閉試管，并將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時。重新把試管冷卻到-78°后，打開反應(yīng)試管，小心地蒸干該溶液。殘余物用色譜法，在硅膠上用二氯甲烷/甲醇(50∶1)洗脫，從而得到121mg(84％)硫醇白色固體所需產(chǎn)物。Electrospray(電噴霧)質(zhì)譜法413.4(M＋H)+。
實施例12(2R)-2-氨基-3-(三苯甲基硫烷基)丙酰胺在由2.68g(7.37mmol)的S-三苯甲基-L-半胱氨酸和40mL的甲醇形成的溶液中，逐滴添加7mL(96mmol)的亞硫酰二氯。加熱回流6小時后，將該溶液冷卻到室溫，并在真空中濃縮。得到的殘余物用20mL甲醇提取，用活性碳處理，過濾、在真空中濃縮，從而得到甲酯灰白色泡沫。將該物質(zhì)溶解于6mL甲醇中，放置在可密封試管中，冷卻到-78°。在該試管中添加30mL液體氨之后，密封該試管，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌14小時，重新冷卻到-78°后，打開反應(yīng)試管，小心地蒸干溶液。殘余物用色譜法，在硅膠上用二氯甲烷/甲醇(10∶1)洗脫，從而得到1.52g(57％)的伯酰胺白色固體。Electrospray(電噴霧)質(zhì)譜法363.2(M＋H)+。
實施例13(2R)-2-({[4-(2-丁炔基氧)苯基]磺?；鶀氨基)-3-(三苯甲基硫烷基)丙酰胺在由1.203g(3.685mmol)的實施例12產(chǎn)物伯酰胺和1.39mL(10mmol)的三乙胺在20mL二氯甲烷中形成的溶液里，一次加入0.954g(3.9mmol)的4-丁-2-炔氧基-苯磺酰氯。攪拌13小時后，添加50mL二氯甲烷和50mL的水。用鹽水洗滌有機層，用硫酸鈉干燥，過濾，在真空中濃縮，然后用快速色譜法，使用己烷/乙酸乙酯(1∶1)來洗脫，從而得到1.65g(79％)的磺酰胺白色固體所需產(chǎn)物。Electrospray(電噴霧)質(zhì)譜法1139.6(2M-H)+。
實施例14(2R)-2-{{[4-(2-丁炔基氧)苯基]磺?；鶀[2-(4-嗎啉基)乙基]氨基}-3-(三苯甲基硫烷基)丙酰胺在由0.6482g(1.136mmol)的實施例13產(chǎn)物在3m LDMF中形成的溶液里，加入0.317g(1.704mmol)的4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽和0.705g(5.1mmol)的碳酸鉀。將所得到的混合物在60°加熱14小時。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫以后，將該混合物用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾，在真空中濃縮，然后用快速色譜法，使用己烷/乙酸乙酯(1∶5)來洗脫，從而得到0.434g(56％)的所要的白色固體化合物。Electrospray(電噴霧)質(zhì)譜法684.5(M＋H)-實施例15(2R)-2-{{[4-(2-丁炔基氧)苯基]磺?；鶀[2-(4-嗎啉基)乙基]氨基}-3-硫烷基丙酰胺在由0.116g(0.170mmol)的實施例14產(chǎn)物在1.5mL二氯甲烷中形成的溶液里，加入三異丙基硅烷，再加三氟乙酸。原料消耗盡后，將溶液在真空中濃縮，并用2mL乙醚洗滌4次。殘余物在乙酸乙酯和飽和的碳酸氫鈉水溶液間分配。用硫酸鈉干燥有機層，過濾，在真空中濃縮，從而得到66mg(88％)的硫醇白色固體。Electrospray(電噴霧)質(zhì)譜法442.4(M＋H)+。
藥理學(xué)本發(fā)明化合物或它們在醫(yī)藥上可用的鹽抑制基質(zhì)金屬蛋白酶或TACE的能力，并能因此證明其在治療受基質(zhì)金屬蛋白酶或TACE介導(dǎo)的疾病方面的效用，如下體外試驗所述。
測量MMP-1，MMP-9和，MMP13抑制作用的測試步驟這些標準藥理學(xué)測試步驟基于用基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-1，MMP-13(膠原酶)或MMP-9(明膠酶)分裂硫肽底物(如乙酰基-脯氨酰-亮氨酰-甘氨酰(2-巰基-4-甲基-戊?；?-亮氨酰-甘氨酸-OEt)，其結(jié)果釋放出一個底物產(chǎn)物，它會和DTNB(5，5’-二硫代雙(2-硝基-苯甲酸)))發(fā)生比色反應(yīng)。酶的活性以色增長率來度量。硫肽底物在100％DMSO(二甲基亞砜)中新鮮配制成20mM貯液，DTNB溶解在100％DMSO中新鮮配制100mM貯液，在室溫下儲存于暗處。酶底物和DTNB在使用前，都要用底物緩沖液(50mM HEPES pH7.5，5mM CaCl)稀釋到1mM。酶的貯液用緩沖液(50mM HEPES，pH 7.5，5mM CaCl2，0.02％Brij(玻雷吉))稀釋到所要的最終濃度。按照緩沖液、酶、載體或抑制劑和DTBN/底物的次序，添加到96孔滴定板(總反應(yīng)體積為200μl)中，色增長用分光光度法，通過一個滴定板讀數(shù)計在405nm檢測5分鐘，顏色隨時間的增長繪成線性直線。
或者可以使用熒光肽底物。在此測試步驟中，肽底物含有熒光基團和淬滅基團。在用MMP分裂底物后，在熒光性滴定板讀數(shù)計上定量測定所產(chǎn)生的熒光讀數(shù)。試驗在HCBC緩沖液(50mM HEPES，pH7.0，5mMCa+2，0.02％Brij(玻雷吉)，0.5％半胱氨酸)中進行，用人重組MMP-1、MMP-9或MMP-13進行化驗。底物在甲醇中溶解，以1mM等分試樣冷藏。進行化驗時，底物和酶都要在HCBC緩沖液中稀釋到所要的濃度。將化合物加到含酶的96孔滴定板，加入底物，反應(yīng)即開始。對反應(yīng)的讀數(shù)(激發(fā)340nm，發(fā)射444nm)持續(xù)10分鐘。熒光隨時間的增長繪成線性直線。
不管是硫肽，還是熒光肽的測試步驟，都要計算出直線的斜率以表示反應(yīng)速率。反應(yīng)速率的線性已被確認(r2＞0.85)。還要計算對照的速率平均值(x±sem)，為了達到統(tǒng)計顯著性(p＜0.05)，并使用Dunnett多重比較測試，將此對照速率同藥物處理組的速率作比較。通過使用多種劑量的藥劑可得到劑量反應(yīng)關(guān)系，而95％CI的IC50數(shù)值則可用線性回歸估測出。
測量TACE抑制作用的測試步驟使用96孔黑色微量滴定板，每個孔容納的溶液由10μLTACE(最終濃度1μg/mL)，70μL Tris緩沖液，pH7.4含10％甘油(最終濃度10mM)，和10μL在DMSO(最終濃度1μM，DMSO濃度＜1％)中的測試化合物溶液組成，孔中的溶液在室溫下培養(yǎng)10分鐘。在每個孔中加入熒光肽底物(最終濃度100μM)，反應(yīng)即被引發(fā)，然后在搖床上搖動5秒鐘。
對反應(yīng)進行10分鐘的讀數(shù)(激發(fā)340nm，發(fā)射420nm)。熒光性隨時間的增長繪成線性直線。計算該線的斜率以表示反應(yīng)速率。
反應(yīng)速率的線性度已被確定(r2＞0.85)。計算對照速率的平均值(x±sem)，為了統(tǒng)計顯著性(p＜0.05)，還要使用Dunnett多重比較測試，將它同藥物處理組的速率進行比較。通過使用多種劑量的藥劑可得到劑量反應(yīng)關(guān)系，而95％CI的IC50數(shù)值則可用線性回歸估測出。
對可溶性蛋白質(zhì)的人單核細胞THP-1細胞分化測定(THP-1可溶性蛋白質(zhì)測定)THP-1細胞的促有絲分裂刺激作用會導(dǎo)致細胞分化為巨噬細胞樣細胞，同時分泌腫瘤壞死因子(TNF-α)和TNF受體(TNF-Rp75/80和TNF-Rp55/60)和白細胞間介素-8(IL-8)以及其它蛋白質(zhì)。另外，未受激的THP-1細胞隨時間推移，脫去75/80和p55/60受體。膜結(jié)合TNF-α和可能的TNF-Rp75/80和TNF-Rp55/60(但沒有IL-8)的釋放，由稱為TNF-α轉(zhuǎn)化酶或TACE的酶作為介導(dǎo)。該測定可用來表明化合物會對TACE酶產(chǎn)生抑制效果還是激發(fā)效果，以及該化合物是否會產(chǎn)生細胞作用。
THP-1細胞(來自于ATCC)是人單核細胞系，它可從患急性單核細胞白血病的一歲男性的周圍血液中獲得。用細胞分裂素刺激，這些細胞會在培養(yǎng)物中生長，并分化為巨噬細胞樣細胞。
為了進行測定，THP-1細胞自ATCC貯液接種，該貯液要預(yù)先生長，并冷藏回5×106/mL/小瓶。一個小瓶接種入含有16mlRPMI-1640的T25燒瓶中，用含10％胎牛血清，100單位/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素和5×10與M2-巰基-乙醇(THP-1介質(zhì))的Glutamax(Gibco)培養(yǎng)基來培養(yǎng)。每個裝細胞的小瓶在用于測定前要培養(yǎng)大約二周，而且只能使用4到6周來篩選化合物。細胞在星期一和星期四傳代培養(yǎng)到1×105/ml。
為了進行測定，THP-1細胞要在24孔滴定板上，和50mL/孔的24mg/mL脂多糖(LPS)(Calbiochem Lot#B13189)貯液一起，在37℃下的5％CO2中，以1.091×106細胞/mL(1.1mL/孔)的濃度，共同培養(yǎng)總共24小時。同時，在適當?shù)目字屑尤?0mL/孔的藥劑，載體或THP-1培養(yǎng)基，從而得到最終體積1.2mL/孔。標準化合物和測試化合物在DMSO以36mM的濃度溶解，并從此濃度開始，在THP-1培養(yǎng)基中稀釋到合適的濃度，并在培養(yǎng)過程開始時添加到孔中，以得到最終濃度100mM，30mM，10mM，3mM，1mM，300nM和100nM。細胞在DMSO中的暴露程度限制到0.1％的最終濃度。測試中使用的正對照孔中加有促細胞分裂素，但沒有藥劑。還使用載體對照孔，它和正對照孔相同，不同的是孔中加有DMSO來得到0.083％的最終濃度。實驗中所用的負對照孔中有加到細胞中去的載體，但沒有促細胞分裂素或藥劑。通過用50mL/孔的THP-1培養(yǎng)基來置換LPS，根據(jù)在化合物對基底(未受激發(fā)的)受體脫落的作用，評估該化合物。滴定板放置在有5％CO的37°培養(yǎng)箱中。培養(yǎng)4小時后，將300mL/孔的組織培養(yǎng)上清液(TCS)移去，以用于TNF-αELISA。培養(yǎng)24小時之后，移去700mL/孔的TCS，用于在TNF-Rp75/80、TNF-Rp55/60和IL-8ELISA中進行分析。
另外，以24小時時間點，通過在500μl/孔THP-1培養(yǎng)基中再懸浮，收集每個試驗組的細胞，并轉(zhuǎn)移到FACS試管中。加入2mL/試管的0.5mg/mL丙錠碘(PI)貯液(BoerhingerMannheimcat.#1348639)。樣品在一臺BectonDickinsonFaxCaliberFLOW血細胞計數(shù)機上進行檢驗，用高紅色波長(FL3)測量每個細胞所吸收的染料量。只有具有受損壞的膜(死的或垂死的)的細胞才能吸收PI?；罴毎俜致视梦慈綪I的細胞的數(shù)量，除以樣品中的總細胞數(shù)來計算。計算經(jīng)藥物處理過的試驗組的生存能力數(shù)值，并和計算出的用載體處理過的催細胞分裂素激發(fā)的試驗組(載體正對照組)的生存能力數(shù)值作比較，以確定“與對照組的百分數(shù)變化”。這個“與對照組的百分數(shù)變化”數(shù)值是藥物毒性的一項指標。
可溶性TNF-α，TNF-Rp75/80和TNF-Rp55/60和IL-8在THP-1細胞的TCS培養(yǎng)物中的數(shù)量，是用購于R&D System的ELISA，通過將由試劑盒標準所產(chǎn)生的曲線外推后獲得。不管是吸收PI，還是排斥PI的細胞數(shù)量，都通過FLOW血細胞計數(shù)機測量，并用購得的Cytologic軟件對包括所有對照組的試驗處理組繪制柱狀反應(yīng)流程圖來使其可視化。
由于THF-1細胞培養(yǎng)物的應(yīng)答值有生物差異，所以該試驗要在在每個藥劑濃度與“載體正對照”所產(chǎn)生的百分數(shù)變化的基礎(chǔ)上進行比較。根據(jù)下列公式，對每個化合物濃度計算每個可溶性蛋白質(zhì)以“載體對照制”估算的百分數(shù)變化 對于在激發(fā)條件下進行的可溶性蛋白質(zhì)(TNF-α、p75/80、p55/60、IL-8)的研究，測定一式二份孔的平均pg/ml，其結(jié)果表示為“載體正對照”產(chǎn)生的百分數(shù)變化。對于在非激發(fā)的條件下進行的可溶性蛋白質(zhì)(p75/80和p55/60受體)的研究測定一式二份孔的平均pg/ml，其結(jié)果利用下述公式表示為“載體正對照”產(chǎn)生的百分數(shù)變化 每個化合物的IC50值利用由JUMP統(tǒng)計程序包定制的軟件，通過非線性回歸分析法來進行計算。
對于細胞生存能力的研究，測定合并的一式二份孔中的細胞生存能力(PI排除)，其結(jié)果表示為“載體正對照”所產(chǎn)生的％變化。將計算出的化合物處理組的生存能力值，和計算出的“載體正對照”的生存能力值作比較，從而確定“對照所產(chǎn)生的百分數(shù)變化”，如下所述。這個“對照所產(chǎn)生的百分數(shù)變化”是藥物毒性的一項指標。
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上述體外基質(zhì)金屬蛋白酶抑制作用，TACE抑制作用和THP標準藥理學(xué)測試過程所得結(jié)果示于下表1。
表1
a)IC50(nM)
基于如上所述的標準藥理學(xué)測試過程，本發(fā)明的化合物在治療一些疾病方面十分有用，這些疾病如，關(guān)節(jié)炎、腫瘤轉(zhuǎn)移、組織潰瘍。它還可醫(yī)治一些異常病癥，如牙周病、移植排斥、抗胰島素、骨病和HIV感染。
也可用本發(fā)明化合物處理或抑制由基質(zhì)金屬蛋白酶介導(dǎo)的病理變化，如動脈硬化癥，動脈粥樣硬化斑塊形成，減少由動脈粥樣硬化斑塊破裂引起的冠狀動脈血栓癥、心瓣再狹窄、MMP-介質(zhì)骨質(zhì)penias、中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥、皮膚老化、血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤生長、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、角膜潰瘍、蛋白尿癥、動脈瘤大動脈疾病、外傷接縫損傷引起的退化軟骨缺失、神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘癥、肝硬化、腎小球病、胎膜早熟破裂、腸炎、與年齡有關(guān)的黃斑變性、糖尿病視網(wǎng)膜病、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病、早熟性視網(wǎng)膜病、眼睛發(fā)炎、圓錐形角膜癥、Sjogren綜合癥、近視、眼瘤、眼睛血管生成/新血管生成及角膜移植排斥。
對病人可單獨使用本發(fā)明化合物，也可和藥物載體一起使用。藥物載體可以是固體或液體。
可用的固體載體可能包括一種或更多種物質(zhì)，這些物質(zhì)還可以起調(diào)味劑，滑潤劑、增溶劑、懸浮劑、填充劑、助流劑、助壓縮劑、粘結(jié)劑或藥片分裂劑或作為密封材料的作用。載體在藥粉中是細微分散固體，和細微分散的活性劑組成混合物?；钚詣┰谒幤校赃m當比例與具有必須的壓縮性的載體混合，這樣就可以壓成所要的形狀和大小。藥粉和藥片所含的活性劑最好可達到99％。適宜的固體載體包括，如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯基吡咯烷、低熔點石蠟和離子交換樹脂。
液體載體可用于制備溶液、懸浮液、乳液、糖漿和西也劑。本發(fā)明的活性劑可溶解或懸浮在醫(yī)藥上可用的液體載體中，這些載體如水、有機溶劑、醫(yī)藥上可用的油或脂或它們的混合物。液體載體可包括其它適宜的藥物添加劑，如，增溶劑、乳化劑、緩沖劑、防腐劑、甜味劑、調(diào)味劑、懸浮劑、增稠劑、色料、粘度調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑或氣味調(diào)節(jié)劑。適用于口服和腸胃外投藥的液體載體的適宜例子，包括水(特別是含上述添加劑，如，纖維素衍生物、羧甲基纖維素鈉溶液則更好)、醇(包括一元醇和多元醇，如二醇類)以及它們的衍生物，還有油(如，經(jīng)分餾的椰子油和花生油)。用于腸胃外投藥的載體，也可以是油脂，如油酸乙酯和豆蔻酸異丙酯。無菌液體載體在無菌液體中形成組合物，用于腸胃外投藥。
液體藥用組合物是無菌溶液或懸浮液，它能通過諸如肌內(nèi)注射、腹膜內(nèi)注射或皮下注射來使用。無菌溶劑可靜脈內(nèi)給藥。液體組合物或是固體組合物都能用于口服。
本發(fā)明化合物能以傳統(tǒng)藥栓的形式用于直腸。為了在鼻內(nèi)或支氣管內(nèi)吸入或噴射，可以把本發(fā)明化合物配成水溶液或部分水溶液，這樣就能以氣霧劑的形式使用。本發(fā)明化合物也可以經(jīng)皮膚吸收來使用，所使用的皮透吸收貼片含活性化合物以及不會和活性化合物反應(yīng)的載體，對皮膚無害，并可將藥劑通過皮膚送入血流達到全身吸收。載體可采用多種形式，油膏、軟膏、貼片、凝膠和閉合裝置。油膏和軟膏是有粘性的液體或半固體乳液，可以是油包水，也可以是水包油。將由吸收性藥粉分散在含活性成分的凡士林或親水性凡士林中形成的膏糊，也是適用的。各種閉合裝置可和載體一起，或單獨將活性成分釋放入血流(如半透性膜)，覆蓋在含活性成分的槽上，或者覆蓋在含活性成分的基質(zhì)上。其它閉合裝置記載于文獻中。
對于患有MMP或TACE依賴性疾病的特殊患者，施藥劑量必須由主治醫(yī)師親自決定。其中的變量包括功能失調(diào)的嚴重性、患者的體重、年齡以及反應(yīng)方式。治療過程先從不超過化合物的最適宜劑量的小劑量開始。然后增加劑量，直到在同一環(huán)境下出現(xiàn)最適宜的效果。用于口服、腸道外投藥、鼻內(nèi)或支氣管內(nèi)投藥的精確劑量應(yīng)該由管理醫(yī)師在個體患者的治療經(jīng)驗和標準醫(yī)療原理的基礎(chǔ)上確定。
藥用組合物最好是以單位劑量的形式，如，藥片或膠囊。這種形式中，組合物被細分成活性成分含量適宜的單位劑量；單位劑量形式可以是包裝組合物的形式，如包裝藥粉、包裝瓶、包裝安瓿、預(yù)裝填注射器或液袋。單位劑量形式也可以是，如膠囊或藥片本身，或是任何包裝形式組合物的適宜數(shù)量。
權(quán)利要求
1.具有結(jié)構(gòu)式B的化合物 式中n’＝1或2當n’＝2時，A不存在(即為二硫化物)當n’＝1時，A為H或R14C(＝W)-；(即，其中B為下列結(jié)構(gòu)式中的一個 在這些結(jié)構(gòu)式中W為氧或硫；X為SO2或-P(O)-R10；Y是如下定義的芳基或雜芳基，條件是X和Z可能不與相鄰的Y的原子連接；Z是O、NH、CH2或S；R1是氫、芳基、含1-6個碳原子的烷基、含2-6個碳原子的鏈烯基、含2-6個碳原子的鏈炔基；R2是氫、如下定義的芳基或雜芳基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、-C5-C8-雜環(huán)烷基、含1-6個碳原子的烷基、含2-6個碳原子的鏈烯基、含2-6個碳原子的鏈炔基或CONR8R9；或R1和R2與和它們相連的原子形成環(huán)，其中R1和R2代表以下結(jié)構(gòu)式中的二價基團 其中Q＝碳-碳單鍵或雙鍵、O、S、SO、-N-R11、或-CONR15；m＝1-3r＝1或2，其條件是當Q是一個鍵，r就等于2；芳基是被選自R7的一到二個取代基任選地取代的苯基或萘基，其中R7如下所述；如下所述的雜芳基 或 任選地被R7單取代或雙取代，其中K為O，S，或-NR15；R3是氫或含1-6個碳原子的烷基；或R1和R3，和與它們所連的原子形成5-8元環(huán)，其中R1和R3代表以下結(jié)構(gòu)式的二價基團 ；和 其中Q和m如上所述；A是芳基或雜芳基；s為0-3；u為1-4；R4和R5各自獨立為氫、含1-6個碳原子的烷基、-CN、-CCH；R6是氫、芳基、雜芳基、含1-6個碳原子的烷基、含2-6個碳原子的鏈烯基、含2-6個碳原子的鏈炔基、含3-6個碳原子環(huán)烷基或如下定義的-C5-C8-雜環(huán)烷基；R7是氫、鹵素、含1-6個碳原子的烷基、含2-6個碳原子的鏈烯基、含2-6個碳原子的鏈炔基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、-OR8、-CN、-COR8、含1-4個碳原子的全氟烷基、含1-4個碳原子的-O-全氟烷基、-CONR8R9、-S(O)nR8、-OPO(OR8)OR9、-PO(OR8)R9、-OC(O)NR8R9、-C(O)NR8OR9、-COOR8、-SO3H、-NR8R9、-N[(CH2)2]2NR8、-NR8COR9、-NR8COOR9、-SO2NR8R9、-NO2、-N(R8)SO2R9、-NR8CONR8R9、-NR8C(＝NR9)NR8R9、5-四唑基、-SO2NHCN、-SO2NHCONR8R9、苯基、如上所述的雜芳基；或者是如下所述的-C5-C8-雜環(huán)烷基；其中-NR8R9可形成吡咯烷、哌啶、嗎啉、硫代嗎啉、噁唑烷、噻唑烷、吡唑烷、哌嗪、或吖丁啶環(huán)；其中-C5-C8-雜環(huán)烷基如下所述 其中K如上所述；R8和R9各自獨立為氫、含1-6個碳原子的烷基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、芳基、雜芳基或-C5-C8雜環(huán)烷基；R10是含1-6個碳原子的烷基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、如上所述的芳基或雜芳基；R11是氫、含1-6個碳原子的烷基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-S(O)nR8、-COOR8、-CONR8R9、-SO2NR8R9或-COR8；R12和R13獨立地選自H、-OR8、-NR8R9、含1-6個碳原子的烷基、含2-6個碳原子的鏈烯基、含2-6個碳原子的鏈炔基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-COOR8；-CONR8R9；或RX12和R13一起形成含3-6個碳原子的-C3-C6-環(huán)烷基或-C5-C8-雜環(huán)烷基的環(huán)；或R12和R13與它們所連的碳原子能形成羰基；其條件是，R10和R12或R11和R12可形成雜環(huán)烷基的環(huán)，其中如果它們連接于相鄰的原子上，就形成如上所述的環(huán)；R14是-OR8、-NR8R9、含1-6個碳原子的烷基、含3-6個碳原子的環(huán)烷基、芳基或雜芳基；R15是氫、芳基、雜芳基、含1-6個碳原子的烷基或含3-6個碳原子的環(huán)烷基；且n為0-2；或者是其醫(yī)藥上可用的鹽。
2.如權(quán)利要求1所述的具有結(jié)構(gòu)式1a結(jié)構(gòu)的化合物或其醫(yī)藥上可用的鹽，其特征是Y是苯基。
3.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的化合物或其醫(yī)藥上可用的鹽，其特征是X是SO2。
4.如權(quán)利要求1到3中任何一項所述的化合物，或其醫(yī)藥上可用的鹽，其特征是Z是氧。
5.如權(quán)利要求1到4中任何一項所述的化合物，或它在醫(yī)藥上可用的鹽，其特征是R4和R5是氫。
6.如權(quán)利要求1到5中任何一項所述的化合物，或它在醫(yī)藥上可用的鹽，其特征是R6是一CH2OH或甲基。
7.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征是R1是氫，以使該化合物具有如結(jié)構(gòu)式1a所示的絕對立體化學(xué)結(jié)構(gòu)。
8.結(jié)構(gòu)式II的化合物，1a條件是R6不是氫并且R4、R5和R6如 1所述。
9.結(jié)構(gòu)式III的化合物，條件是R6不是氫，其特征是J是氟、溴、氯、1，2，4-三唑基、苯并三唑基或咪唑基并且R4、R5和R6如權(quán)利要求1所述。
10.如權(quán)利要求1所述的結(jié)構(gòu)式B化合物的制備方法，它包括下列方法中的一種a)使結(jié)構(gòu)式V的化合物 其中R1-R6、X、Y和Z如權(quán)利要求1所述，在適合發(fā)生Mitsunobu反應(yīng)的條件下，與結(jié)構(gòu)式為R14C(W)SH的化合物反應(yīng)，生成相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式1b的化合物(即，結(jié)構(gòu)式B，其中n’＝1并且A為R14C(＝W)-)；或者b)使結(jié)構(gòu)式VI的化合物起反應(yīng) 其中R1-R6、X、Y和Z如權(quán)利要求1所述，并且J是一個離去基團，與結(jié)構(gòu)式為A’SH的化合物，或它所形成的鹽起反應(yīng)，生成相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式為1a或1b的化合物(即，結(jié)構(gòu)式B，其中n’＝1并且A是H或R14C(＝W)-)，其中A’為堿金屬或R14C(W)基團或者c)使結(jié)構(gòu)式為VII的化合物 其中R1、R2、R3、X、Y、Z和n’如權(quán)利要求1所述，當n’＝1時R40為H或R14C(＝W)-，并當n’＝2時，R40不存在(即為二硫化物)，與結(jié)構(gòu)式為VIII的化合物反應(yīng) 其中R4、R5和R6如上所述，并且J是一個離去基團(如上所述)，得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式為B的化合物或者d)水解結(jié)構(gòu)式B的化合物，其中R1-R6、X、Y和Z如權(quán)利要求1所述，n’＝1并且A為R14C(＝W)-(即為結(jié)構(gòu)式1b)，得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式1a的化合物(即，結(jié)構(gòu)式B，其特征是A為H)；或者e)還原結(jié)構(gòu)式B的化合物，其中R1-R6、X、Y和Z如權(quán)利要求1所述，n’＝1并且A是R14C(＝W)-(即結(jié)構(gòu)式1b)或n’為2(即結(jié)構(gòu)式1c)，得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式1a的化合物(即，結(jié)構(gòu)式B，其特征是A是H)；或者f)氧化結(jié)構(gòu)式B的化合物，其中R1-R6、X、Y和Z如權(quán)利要求1所述，n’＝1并且A為H(即，結(jié)構(gòu)式1a)，得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式1c的化合物(即，結(jié)構(gòu)式B，其中n’＝2)；或者g)拆分結(jié)構(gòu)式B化合物的光學(xué)活性異構(gòu)體混合物(如外消旋體)，將一個對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體同另一個對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體基本上分離；或者h)用醫(yī)藥上可用的酸酸化結(jié)構(gòu)式B的堿性化合物，得到醫(yī)藥上可用的鹽。
11.對哺乳動物中由TNF-α轉(zhuǎn)化酶(TACE)介導(dǎo)的病理變化的抑制方法，包含對所述哺乳動物給予治療有效量的如權(quán)利要求1所述化合物。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于所治療的疾病是風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植排斥、惡病質(zhì)、發(fā)炎、發(fā)燒、抗胰島素、膿毒性休克、充血性心力衰竭、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥、腸炎或HIV感染。
13.一種藥用組合物，包含如權(quán)利要求1所述化合物或其鹽和醫(yī)藥上可用的載體。
14.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于它是4-(2-丁炔氧基)-N-((1R)-2-巰基-1-甲基-乙基)-N-甲基苯-磺酰胺。
15.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于它是(2R)-2-{{[4-(2-丁炔氧基)苯基]-磺酰基}[2-(4-嗎啉基)乙基]氨基}-3-硫烷基丙酰胺。
16.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于它是4-(2-丁炔氧基)-N-[(1R)-1-甲基-2-硫烷基乙基]-N-[2-(4-嗎啉基)乙基]苯磺酰胺。
全文摘要
本發(fā)明提供結(jié)構(gòu)式B的化合物:(1a),或(1b),(1c),其中變量如本說明書所述,它可用于治療由TNF－α介導(dǎo)的疾病,如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)、膿毒癥、艾滋病、潰瘍性腸炎、多發(fā)性硬化、克羅恩氏病和退化軟骨缺失。
文檔編號A61P31/04GK1337947SQ00803028
公開日2002年2月27日 申請日期2000年1月27日 優(yōu)先權(quán)日1999年1月27日
發(fā)明者J·I·萊文, J·M·陳 申請人:美國氰胺公司