一種從金槍魚(yú)骨中提取金槍魚(yú)小分子肽的方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及到用魚(yú)骨提取肽的技術(shù)，具體涉及一種從金槍魚(yú)骨中提取小分子肽的方法以及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0003]從動(dòng)物例如牦牛骨骼中提取的膠原蛋白在吸收率方面有一定的局限性，并且隨著對(duì)瘋牛病帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)，使得這種較為傳統(tǒng)的方式不被人們所認(rèn)可，而人們?cè)絹?lái)越認(rèn)可從魚(yú)類(lèi)中提取相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
[0004]目前的提取主要是從魚(yú)鱗、魚(yú)皮中提取膠原蛋白，例如從羅非魚(yú)魚(yú)鱗中提取，從深海魚(yú)皮例如鱈魚(yú)魚(yú)皮中提取，但是這些提取物產(chǎn)品分子量分布廣不易吸收，大分子導(dǎo)致的吸收率低等突出問(wèn)題的存在，極大的阻止了現(xiàn)代人所追求的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，安全，吸收好等新保健理念的實(shí)現(xiàn)。
[0005]另一方面，傳統(tǒng)的膠原蛋白或蛋白肽提取液體積較大，產(chǎn)品的生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，酶解液除雜不徹底，影響膠原蛋白品質(zhì)，所得成品往往具有苦腥味，口感差，如果過(guò)濾級(jí)別不夠的話，產(chǎn)品水溶性就會(huì)較差，直接影響消化吸收，對(duì)魚(yú)類(lèi)提取物的含鹽量高的問(wèn)題解決效果不理想，影響產(chǎn)品口感。
[0006]雖然隨著技術(shù)進(jìn)步，人們運(yùn)用膜分離技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，在一定程度上提高了產(chǎn)品質(zhì)量，但是還沒(méi)有從根本上得到小分子活性肽。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明為有效解決上述問(wèn)題，提供一種全新的制備方法，以金槍魚(yú)骨為原料，通過(guò)創(chuàng)新手段得到易于吸收，口感好，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，安全的金槍魚(yú)小分子活性肽，且該方法提取效率高，工藝簡(jiǎn)單使用。
[0008]本發(fā)明采用改良的生物酶解修飾復(fù)配法，制備金槍魚(yú)小分子活性肽，具體技術(shù)方案是，一種從金槍魚(yú)骨中提取金槍魚(yú)小分子活性肽的方法，具體包括如下步驟:(I)金槍魚(yú)骨處理:將新鮮的金槍魚(yú)骨清洗干凈，破碎，在蒸煮罐中，采用溫度為100-120 0C的溫度，0.10-0.12Mpa的壓力蒸煮6-8h，骨渣排出，得到骨湯，速凍后，形成冷凍骨湯油凍塊，貯存于-18°C的冷凍庫(kù)內(nèi)備用；(2)低溫粉碎處理:采用粉碎機(jī)在低溫對(duì)所述的冷凍骨湯油凍塊進(jìn)行低溫粉碎，粉碎溫度控制在0-4°C之間，將所述的冷凍骨湯油凍塊粉碎為顆粒直徑在
0.02-0.1毫米的冷凍骨湯油凍塊顆粒；(3)細(xì)胞溶出處理:采用常壓下4°C無(wú)氧水對(duì)粉碎的冷凍骨湯油凍塊顆粒進(jìn)行浸滲水處理，水飽和時(shí)間為5-10小時(shí)，所述無(wú)氧水以完全淹沒(méi)原料為準(zhǔn);然后快速深度冷凍與融凍處理，其中深冷凍處理時(shí)間為l_2h，冷凍溫度為零下20-25°C，緊接著融凍，即以常壓下4°C水浴對(duì)處于深冷凍的冷凍骨湯油凍塊顆粒進(jìn)行快速融冰，融冰處理時(shí)間為3-5h;重復(fù)所述的快速深度冷凍與融凍處理過(guò)程2-3次，細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)被破壞，有效物質(zhì)溶出，形成金槍魚(yú)寡肽骨湯；(4)生物酶解處理:將所述金槍魚(yú)寡肽骨湯導(dǎo)入水解罐中，加入復(fù)合酶，所述的復(fù)合酶制備方法如下，先將草芽孢桿菌、雙歧螺桿菌、鼠李糖乳桿菌、光合菌、地衣芽孢桿菌置于三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度為28-33°C，在200-250rpm/min下培養(yǎng)25-35h，使菌體或者孢子濃度達(dá)到I X 114個(gè)/升(CFU/L)，制得發(fā)酵劑，然后向發(fā)酵劑中加入營(yíng)養(yǎng)素，控制營(yíng)養(yǎng)素的重量是所述發(fā)酵劑重量的1/8-1/10，所述的營(yíng)養(yǎng)素為麥芽汁，即得到所述的復(fù)合酶，按照金槍魚(yú)寡肽骨湯與復(fù)合酶1000-1200:1的重量比加入所述的復(fù)合酶進(jìn)行生物酶解處理，在所述生物酶解過(guò)程中保持水解罐中PH為6.8-7.0，所述酶解溫度為60°C，所述酶解時(shí)間為12-20°C，得到初級(jí)金槍魚(yú)小分子活性肽；(5)后處理:將所述的初級(jí)金槍魚(yú)小分子活性肽滅酶，快速升溫至180_185°C并保持20-25s，然后40-70°C/s降溫至60°C使酶失活;然后采用高速離心機(jī)將酶解液以60000-80000r/min的速度離心3-5min，將上層液和中層液合并輸入稀釋罐體內(nèi)，即酶解分離液，下層液被分離出去，然后采用熱隔膜低溫濃縮技術(shù)進(jìn)行濃縮，濃縮溫度為40-500C，真空度為0.4-2.0MPa，將濃縮液輸送到195-210°C的離心噴霧干燥塔內(nèi)干燥成粉沫，即得到所述的金槍魚(yú)小分子活性肽。
[0009]優(yōu)選，步驟(I)金槍魚(yú)骨處理:將新鮮的金槍魚(yú)骨清洗干凈，破碎，在蒸煮罐中，采用溫度為100°c的溫度，0.1OMpa的壓力蒸煮7h，骨渣排出，得到骨湯，速凍后，形成冷凍骨湯油凍塊，貯存于-18°C的冷凍庫(kù)內(nèi)備用；(2)低溫粉碎處理:采用粉碎機(jī)在低溫對(duì)所述的冷凍骨湯油凍塊進(jìn)行低溫粉碎，粉碎溫度控制在1°C之間，將所述的冷凍骨湯油凍塊粉碎為顆粒直徑在0.1毫米的冷凍骨湯油凍塊顆粒。
[0010]優(yōu)選，步驟(3)細(xì)胞溶出處理:采用常壓下4°C無(wú)氧水對(duì)粉碎的冷凍骨湯油凍塊顆粒進(jìn)行浸滲水處理，水飽和時(shí)間為10小時(shí)，所述無(wú)氧水以完全淹沒(méi)原料為準(zhǔn);然后快速深度冷凍與融凍處理，其中深冷凍處理時(shí)間為2h，冷凍溫度為零下20°C，緊接著融凍，即以常壓下4°C水浴對(duì)處于深冷凍的冷凍骨湯油凍塊顆粒進(jìn)行快速融冰，融冰處理時(shí)間為5h;重復(fù)所述的快速深度冷凍與融凍處理過(guò)程3次，細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)被破壞，有效物質(zhì)溶出，形成金槍魚(yú)寡肽骨湯。
[0011]優(yōu)選，步驟(4)生物酶解處理:將所述金槍魚(yú)寡肽骨湯導(dǎo)入水解罐中，加入復(fù)合酶，所述的復(fù)合酶制備方法如下，先將草芽孢桿菌、雙歧螺桿菌、鼠李糖乳桿菌、光合菌、地衣芽孢桿菌置于三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度為33°C，在250rpm/min下培養(yǎng)25h，使菌體或者孢子濃度達(dá)到I X 114個(gè)/升(CFU/L)，制得發(fā)酵劑，然后向發(fā)酵劑中加入營(yíng)養(yǎng)素，控制營(yíng)養(yǎng)素的重量是所述發(fā)酵劑重量的1/10，所述的營(yíng)養(yǎng)素為麥芽汁，即得到所述的復(fù)合酶，按照金槍魚(yú)寡肽骨湯與復(fù)合酶1000:1的重量比加入所述的復(fù)合酶進(jìn)行生物酶解處理，在所述生物酶解過(guò)程中保持水解罐中PH為6.8，所述酶解溫度為60°C，所述酶解時(shí)間為20°C，得到初級(jí)金槍魚(yú)小分子活性肽。
[0012]優(yōu)選，步驟(5)后處理:將所述的初級(jí)金槍魚(yú)小分子活性肽滅酶，快速升溫至180°C并保持20s，然后40°C/s降溫至60°C使酶失活;然后采用高速離心機(jī)將酶解液以80000r/min的速度離心3_5min，將上層液和中層液合并輸入稀釋罐體內(nèi)，即酶解分離液，下層液被分離出去，然后采用熱隔膜低溫濃縮技術(shù)進(jìn)行濃縮，濃縮溫度為50°C，真空度為0.4MPa，將濃縮液輸送到195°C的離心噴霧干燥塔內(nèi)干燥成粉沫，即得到所述的金槍魚(yú)小分子活性肽。更優(yōu)選高速離心機(jī)將酶解液以60000r/min的速度離心4min。
[0013]本發(fā)明還提供上述方法制備的所述的金槍魚(yú)小分子活性肽，所述的金槍魚(yú)小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比不少于89.2%，具體所述的金槍魚(yú)小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比為89.61%，480-1000道爾頓的占比為9.43%，大于1000道爾頓的占比為0.96%，色澤為淡黃色。
[0014]本發(fā)明還提供上述述的金槍魚(yú)小分子肽的應(yīng)用;所述的金槍魚(yú)小分子肽適用于診斷用肽、肽疫苗、抗菌活性肽、細(xì)胞因子模擬肽、抗病毒肽或抗腫瘤肽，以及肽保健品。
[0015]本發(fā)明的積極效果:
[0016]首先本發(fā)明制備的金槍魚(yú)小分子活性多肽成分純，優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中制備的多肽，本發(fā)明制備的金槍魚(yú)小分子活性多肽含量接近100%，所述的金槍魚(yú)小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比不少于89.2%，具體所述的金槍魚(yú)小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比