獲得固體沉淀物，然后將過濾所得的固體物和離心所得的固體沉淀物混合均勻，置 于65°C電熱恒溫干燥箱內(nèi)進(jìn)行干燥處理，至物料水分損失至10%左右即為干燥，干燥后用 粉碎機(jī)將其粉碎并過60目篩，從而獲得酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑； (9) 包裝 以1000 g為單位，將步驟（8)所獲得的酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑用復(fù)合薄膜進(jìn)行真空 包裝，真空度為0. 〇9Mpa。
[0013] 在酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑制備好之后，采用原子吸收光譜法對(duì)添加劑中錳含量 分析，發(fā)現(xiàn)錳含量為8. llg/kg。
[0014] 本發(fā)明所制得的酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑在動(dòng)物飼料中的推薦添加量為 300~800g/100kg 全價(jià)料。
[0015] 試驗(yàn)例I :利用本發(fā)明所提供的方法制備酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑之后，對(duì)所制 備的酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑與五水硫酸錳分別采用Caco-2細(xì)胞模型分析，分析表明，本 發(fā)明提供的酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑中的錳生物有效性為33. 10%，五水硫酸錳的生物有效 性僅為6. 13%，酵母發(fā)酵態(tài)錳生物有效性較五水硫酸錳高26. 97%。
[0016] 試驗(yàn)例2:蛋雞飼養(yǎng)試驗(yàn)。
[0017] (1)試驗(yàn)設(shè)計(jì)：選取420日齡海蘭褐殼蛋雞2800只，隨機(jī)分為4組，每組5個(gè)重復(fù)， 每重復(fù)140只蛋雞。具體分組為：對(duì)照組飼喂五水硫酸錳，添加水平（以Mn計(jì)）85mg/kg，試 驗(yàn)一組、試驗(yàn)二組和試驗(yàn)三組均飼喂本專利提供的發(fā)酵態(tài)錳制劑，添加水平（以Mn計(jì)）分別 為85mg/kg (與對(duì)照組添加水平相同）、56.7mg/kg (相當(dāng)于對(duì)照組的2/3)和42.5mg/kg (相 當(dāng)于對(duì)照組的1/2)。采用3層階梯籠養(yǎng)，自由采食，自由飲水，定期清糞、消毒，試驗(yàn)期30 天。
[0018] 每天記錄各重復(fù)產(chǎn)蛋數(shù)量，每10 d對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)一次，包括產(chǎn)蛋率、料蛋比和死 淘率。
[0019] 采用SPSS13. 0中的單因素方差分析（ONE-WAY AN0VA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，均值的多重 比較采用Duncan' s法進(jìn)行，以P〈0. 05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果以平均值土標(biāo)準(zhǔn)差 (X 士 SD)表示。
[0020] 其中，基礎(chǔ)飼糧組成以及營養(yǎng)水平見表1，其中預(yù)混料為每千克飼糧提供：VA 7500 IU，VD3 2500 IU，VE 35mg，VK3 lmg，VB1 I. 5mg，VB2 4mg，VB6 2mg，VB12 0· 02mg，煙酸 30mg， 葉酸 0.55mg，泛酸 10mg，生物素 0· 16mg，氯化膽堿 420mg，F(xiàn)e 64mg，Zn 72mg，Cu 15mg，I 0. 4mg〇
[0021] (2)試驗(yàn)結(jié)果 表2為發(fā)酵態(tài)錳對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響。從表2中可以看出，當(dāng)發(fā)酵態(tài)錳添加量與對(duì) 照組相同時(shí)，發(fā)酵態(tài)錳組產(chǎn)蛋率較對(duì)照組提高了 2. 17%，料蛋比和死淘率分別降低了 1.59% 和27. 19% ;當(dāng)其添加量為對(duì)照組的2/3時(shí)，產(chǎn)蛋率提高了 0. 04%，料蛋比和死淘率分別降 低了 0. 4%和23. 88% ;但，當(dāng)發(fā)酵態(tài)錳添加水平相當(dāng)于五水硫酸錳的1/2時(shí)，產(chǎn)蛋率降低了 4. 03%，料蛋比也增加了 1.59%。
[0022] (3)小結(jié) 以上結(jié)果表明，本發(fā)明提供的發(fā)酵態(tài)錳在與無機(jī)硫酸錳添加水平相同或無機(jī)硫酸錳的 2/3,均可不同程度提高蛋雞生產(chǎn)性能。尤其是，發(fā)酵態(tài)錳的使用可以降低其添加水平，從 而減少錳隨糞便排出對(duì)環(huán)境的污染。本試驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵態(tài)錳在蛋雞飼料中最多可降低 28. 3mg/kg的添加量。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種利用啤酒廢液生產(chǎn)酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑的方法，所用的發(fā)酵菌種為啤酒酵 母和產(chǎn)朊假絲酵母，所用的錳為可溶解在稀酸溶液中的無機(jī)錳化合物，其特征在于：包括如 下步驟： (1) 培養(yǎng)基制備以及微生物培養(yǎng) 取葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母浸膏10g、瓊脂20g，用蒸餾水溶解、定容至lOOOmL，用高 壓鍋在121°C滅菌20min-30min，調(diào)整pH至5. 0~5. 5,制得培養(yǎng)基，然后將啤酒酵母和產(chǎn)朊 假絲酵母從冰箱中取出復(fù)蘇，在該培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h，以獲得復(fù)活的啤酒酵母和產(chǎn)朊假絲酵 母； (2) 基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基與錳梯度培養(yǎng)基制備 基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基的制法為：依次向1000 ml蒸餾水中加入葡萄糖20g、蛋白胨20g以及 酵母浸膏l(xiāng)〇g，并攪拌混勻，調(diào)整PH至5. 0~5. 2,備用； 錳梯度培養(yǎng)基的制法為：在上述基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基中加入可溶解在稀酸溶液中的無機(jī) 錳化合物，得到錳含量分別為 50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L 和 1000mg/L的培養(yǎng)基，并與錳含量為Omg/L的基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基構(gòu)成錳梯度培養(yǎng)基，備用； (3) 微生物梯度培養(yǎng) 將經(jīng)步驟（1)處理所獲得的啤酒酵母和產(chǎn)朊假絲酵母分別依次培養(yǎng)于步驟（2)所制得 的錳梯度培養(yǎng)基中，培養(yǎng)時(shí)間為24h，培養(yǎng)溫度為30. 5°C ; (4) 種子培養(yǎng)基的制備 獲取啤酒生產(chǎn)過程中新鮮的糖化廢液，在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5~10min，然后按照 重量比添加3. 5%的蔗糖、0. 3%的尿素、0. 25%的食鹽、0. 02%的硫化鈉，混勻后121°C滅菌 15~20min，并調(diào)整pH至5. 0~5. 5,即制成種子培養(yǎng)基，然后將其平均分做兩份，備用； (5) 發(fā)酵種子的制備 將經(jīng)過步驟（3)處理的啤酒酵母和產(chǎn)朊假絲酵母按照10%的接種比例分別接種于步驟 (4 )所制備的兩份種子培養(yǎng)基中，一份種子培養(yǎng)基接種一種酵母菌，然后將接種后的培養(yǎng)基 放置于30. 5°C的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，即獲得啤酒酵母發(fā)酵種子和產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵種 子； (6) 發(fā)酵液的制備 發(fā)酵液是利用啤酒生產(chǎn)過程中的糖化廢液或發(fā)酵廢液制成的，具體制備方法如下： a、 利用糖化廢液制作發(fā)酵液：取啤酒生產(chǎn)過程中新鮮的糖化廢液，在3500~4000r/min 轉(zhuǎn)速下離心5~10min，然后按照重量比依次加入1. 0%的蔗糖、20%的玉米面、0. 3%的尿素、 0. 25%的食鹽以及0. 02%的硫化鈉，并于121°C滅菌15~20min，調(diào)整pH至5. 0~5. 5,即可制 成發(fā)酵液； b、 利用發(fā)酵廢液制作發(fā)酵液：取啤酒生產(chǎn)過程中新鮮的發(fā)酵廢液，在3500~4000r/min 轉(zhuǎn)速下離心5~10min，再在60~65°C水浴鍋內(nèi)水浴加熱30~40min，加熱期間不斷用滅菌的玻 璃棒攪拌，使發(fā)酵廢液中殘留的乙醇揮發(fā)，同時(shí)達(dá)到滅菌效果，然后按照重量比，向滅菌后 的發(fā)酵廢液中加入2. 0%的蔗糖、20%的玉米面、0. 5%的尿素、0. 25%的食鹽以及0. 02%的硫 化鈉，并調(diào)整PH至5. 0~5. 5,即可制成發(fā)酵液； (7) 微生物發(fā)酵 將待發(fā)酵的無機(jī)錳化合物按照重量取其中的20%混合在步驟（6)所制得發(fā)酵液中，置 于發(fā)酵容器內(nèi)，并按照10%的接種比例向發(fā)酵容器內(nèi)的發(fā)酵液中接種步驟（5)所制得的啤 酒酵母發(fā)酵種子和產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵種子，然后調(diào)節(jié)溫度至30. 5°C進(jìn)行發(fā)酵，2h后，向發(fā) 酵容器內(nèi)再次加入20%的待發(fā)酵的無機(jī)錳化合物，并攪拌均勻，再繼續(xù)發(fā)酵至6h后，再次加 入20%的待發(fā)酵的無機(jī)錳化合物，攪拌均勻，使發(fā)酵培養(yǎng)基中錳含量達(dá)到1200mg/L，繼續(xù)發(fā) 酵至12h后，加入剩余的40%的待發(fā)酵的無機(jī)錳化合物，攪拌均勻，繼續(xù)發(fā)酵24h后，完成發(fā) 酵過程； (8) 酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑的制作 將步驟（7)所得的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行過濾，收取固體物，所得濾液在3500~4000r/min條件 下離心10min，獲得固體沉淀物，然后將過濾所得的固體物和離心所得的固體沉淀物混合均 勻，置于65°C電熱恒溫干燥箱內(nèi)進(jìn)行干燥處理，干燥后用粉碎機(jī)將其粉碎并過60目篩，從 而獲得酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑； (9) 包裝 以1000 g為單位，將步驟（8)所獲得的酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑用復(fù)合薄膜進(jìn)行真空 包裝，真空度為0. 085~0. 095Mpa。
【專利摘要】一種利用啤酒廢液生產(chǎn)酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑的方法，其步驟包括培養(yǎng)基制備以及微生物培養(yǎng)、制備基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基與錳梯度培養(yǎng)基、微生物梯度培養(yǎng)、制備種子培養(yǎng)基、制備發(fā)酵種子、制備發(fā)酵液、微生物發(fā)酵、制作酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑與包裝。本發(fā)明提供了一種利用啤酒生產(chǎn)過程中糖化廢水和發(fā)酵廢水生產(chǎn)酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑的處理方法，方法簡(jiǎn)單，容易操作，效果理想，既提高了資源利用效率，降低了生產(chǎn)成本，又可以對(duì)啤酒生產(chǎn)中的廢水進(jìn)行生物處理，減少了環(huán)境污染，所制備的酵母發(fā)酵態(tài)錳飼料添加劑生物有效性高，對(duì)動(dòng)物的添加量低，并能提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能。
【IPC分類】A23K1/06, A23K1/00
【公開號(hào)】CN105010735
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510516018
【發(fā)明人】何萬領(lǐng), 李曉麗, 李遠(yuǎn)方
【申請(qǐng)人】河南艾格多科技有限公司
【公開日】2015年11月4日
【申請(qǐng)日】2015年8月21日