一種發(fā)酵中草藥制備復(fù)合型促生長飼料添加劑的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種發(fā)酵中草藥制備復(fù)合型促生長飼料添加劑的方法，屬于飼料添加劑制備的技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]自20世紀(jì)50年代以來，在動物飼養(yǎng)和飼料中廣泛使用抗生素、化學(xué)合成藥物、激素、β-興奮劑、重金屬、鎮(zhèn)靜劑等促生長保健劑?？股氐却偕L保健劑在飼料中的應(yīng)用歷史由來已久，它創(chuàng)造了養(yǎng)殖業(yè)和飼料工業(yè)的革命，使得規(guī)模養(yǎng)殖在全世界范圍內(nèi)得到了迅速發(fā)展，動物的生產(chǎn)數(shù)量和飼料轉(zhuǎn)化率得到大幅度提高。但是，正如所有工業(yè)文明的成果都有它的負(fù)面影響一樣，長期以來使用抗生素等非綠色飼料添加劑，導(dǎo)致了如下的問題:畜禽和水產(chǎn)產(chǎn)品中藥物殘留嚴(yán)重，直接危害人體健康；畜禽和水產(chǎn)產(chǎn)品品質(zhì)下降，缺乏市場競爭力和信任感;細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)、耐藥菌株增多，威脅人類安全;破壞生態(tài)環(huán)境等。隨著飼料工業(yè)和畜牧水產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展，目前我國的畜產(chǎn)品和水產(chǎn)品已從短缺轉(zhuǎn)變?yōu)殡A段性過剩，人們更關(guān)心食品是否安全、衛(wèi)生，因而綠色消費(fèi)已成為今后的發(fā)展趨勢，加之我國已加入WT O，發(fā)達(dá)國家對我國出口的農(nóng)產(chǎn)品要求越來越嚴(yán)格，目前藥物殘留問題成為我國畜產(chǎn)品和水產(chǎn)品走出國門的主要障礙之一。因此加速開發(fā)、推廣和應(yīng)用新型綠色飼料添加劑勢在必行。
[0003]綠色飼料添加劑，最基本要求是無毒副作用、無殘留，并且還要能促進(jìn)動物生長。目前國際公認(rèn)的促生長綠色飼料添加劑主要有以下幾種:小肽、酶制劑、植物源產(chǎn)品及其提取物、微生態(tài)制劑、寡糖和酵母類產(chǎn)品等。
[0004]酶制劑作為一種飼料添加劑具有無殘留、無污染，提高飼料的利用價值，改善動物生產(chǎn)性能和產(chǎn)品品質(zhì)等作用。飼用酶制劑大致可以分為消化酶和非消化酶兩類，通常在營養(yǎng)層面發(fā)揮作用。比如提高畜禽消化道內(nèi)源酶活性，補(bǔ)充內(nèi)源酶的不足;破壞植物細(xì)胞壁，提高飼料的利用效率;消除飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。目前，酶制劑已經(jīng)廣泛應(yīng)用于飼料工業(yè)，主要有蛋白酶、非淀粉多糖酶和植酸酶等酶制劑。然而，市場上現(xiàn)有的飼用酶制劑多不耐高溫，在飼料高溫造粒過程中活性損失非常大。
[0005]中草藥是中國醫(yī)學(xué)寶庫中的瑰寶，且中草藥作為飼料添加劑，在我國古代已經(jīng)開始。中草藥具有無毒副作用、不易引發(fā)細(xì)菌抗藥性、無殘留等特性，作為一種飼用抗生素的綠色替代品在飼料工業(yè)得到了廣泛的認(rèn)可。從20世紀(jì)80年代起，中草藥已被用于作飼用抗生素替代品，且取得了一定的應(yīng)用效果。中草藥經(jīng)過微生物發(fā)酵后，其有效成分被充分釋放，使其更具生物活性和療效近年來更是研究熱點(diǎn)。中國飼料〔2010，419( 15): 13-17〕文獻(xiàn)公開了從不同中草藥原料中分離得到的米曲霉對中草藥進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵料蒸煮液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、普通變形桿菌和鼠傷寒沙門氏菌的抑菌活性分別較對照提高36.03%、60.83%、27.64%、41.32%。
[0006]目前，中草藥發(fā)酵主要采用的菌種有枯草芽孢桿菌和米曲霉等菌種。主要利用這些微生物產(chǎn)生的非淀粉多糖酶將中草藥的細(xì)胞壁主要成分降解，從而使得中草藥有效成分釋放出來。然而，現(xiàn)有的中草藥發(fā)酵菌種都是常溫的菌種，其在發(fā)酵過程中產(chǎn)生的非淀粉多糖酶的活性在產(chǎn)品干燥和飼料的高溫造粒過程中會損失殆盡。因而，現(xiàn)有的中草藥發(fā)酵技術(shù)制備的發(fā)酵中草藥在動物體內(nèi)僅僅只能發(fā)揮中草藥的功效，并不能發(fā)揮酶制劑的功效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對現(xiàn)在的飼用酶制劑的應(yīng)用和中草藥發(fā)酵技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種發(fā)酵中草藥制備復(fù)合型促生長飼料添加劑的方法，使得在中草藥發(fā)酵過程中產(chǎn)生耐高溫的非淀粉多糖酶，以便制備的發(fā)酵中草藥在動物體內(nèi)可以發(fā)揮中草藥和酶制劑的雙重功效，進(jìn)一步提高發(fā)酵中草藥產(chǎn)品的促生長功效。
[0008]為了解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下:一種發(fā)酵中草藥制備復(fù)合型促生長飼料添加劑的方法，包括如下步驟:
(1)將斜面保藏的耐高溫枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)HL-2接入到滅菌后冷卻的LB
液體培養(yǎng)基中，于55 °(:、15(^/11^11培養(yǎng)1211，制備成枯草芽孢桿菌(8&(^11118subtil is )HL_2種子液備用；
(2)將中草藥粉碎后過60目篩備用；
(3)往步驟(2)制得的粉碎中草藥上添加營養(yǎng)物和水，并混勻，獲得含水量為40%?80%的發(fā)酵培養(yǎng)基；
(4)往步驟(3)得到的發(fā)酵培養(yǎng)中接入步驟(I)所制備的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)HL-2種子液，并混勾；
(5)原料的發(fā)酵:將步驟(4)獲得的加入菌的發(fā)酵培養(yǎng)基按照下列方法進(jìn)行發(fā)酵:發(fā)酵培養(yǎng)基分裝在已消毒的發(fā)酵淺盤中，裝料厚度為4cm?8cm，淺盤中發(fā)酵培養(yǎng)基表面覆蓋滅菌的濕紗布，再將淺盤置于已滅菌的固體發(fā)酵房內(nèi)的擱架上發(fā)酵，控制環(huán)境溫度在50t>55°C，發(fā)酵時間為48h?60h;
(6)成品處理:發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵后獲得的產(chǎn)品經(jīng)干燥、粉碎和包裝后，即制得了一種發(fā)酵中草藥飼料添加劑成品。
[0009]所述步驟(I)中所用的耐高溫枯草芽孢桿菌(BaciIIus 811131:;[1丨8)!1-2已于2016年I月18日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號為GDMCC No:60001，保藏地址為廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓廣東省微生物研究所。
[0010]所述步驟(2)中的中草藥為甘草、連翹、車前草、蘇子、五味子、馬鞭草、黃芪、金銀花、石榴皮、地榆、黃連、魚腥草、苦參和土茯苓中的一種或其中兩種以上的混合物。
[0011]所述步驟(3)中的營養(yǎng)物為麩皮、氯化鈣、氯化亞鐵、硫酸銨和磷酸氫二鉀組成的混合物。所述步驟(3)中的營養(yǎng)物的加入量以添加的營養(yǎng)物的質(zhì)量占發(fā)酵培養(yǎng)基總質(zhì)量百分比計(jì)，分別為:麩皮0.01%?15%，氯化鈣0.01%?5%，氯化亞鐵0.01%?5%，硫酸銨0.01%?5%，磷酸氫二鉀0.01%?5%。
[0012]所述步驟(4)中枯草芽孢桿菌(Baci I Ius subtil is )HL_2的接種量以接入種子液的質(zhì)量占發(fā)酵培養(yǎng)基總質(zhì)量百分比計(jì)，為I %?9%。
[0013]本發(fā)明與現(xiàn)有的技術(shù)相比，有如下優(yōu)點(diǎn)。
[0014](I)發(fā)酵產(chǎn)品可以發(fā)揮中草藥和酶制劑的雙重功效。現(xiàn)有的中草藥發(fā)酵菌種都是常溫的菌種，其在發(fā)酵過程中產(chǎn)生的非淀粉多糖酶的活性在產(chǎn)品干燥和用于飼料的高溫造粒過程中會損失殆盡。因而，現(xiàn)有技術(shù)制備的發(fā)酵中草藥在動物體內(nèi)僅僅只能發(fā)揮中草藥的功效，并不能發(fā)揮酶制劑的功效。而本技術(shù)采用耐高溫的枯草芽孢桿菌(Baci Ilussubtilis)進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵產(chǎn)生耐高溫的非淀粉多糖酶，這些耐高溫的非淀粉多糖酶的活性在發(fā)酵中草藥的干燥和用于飼料的高溫造粒過程中基本沒有損失，因而本技術(shù)制備的發(fā)酵中草藥可在動物體內(nèi)發(fā)揮中草藥和酶制劑的雙重功效，進(jìn)一步提