中期。得到的產(chǎn)物具有18. 5% w/v的干細胞重量（DCW)。在生長培養(yǎng)基 中限制氮的水平，以迫使微藻由于延長的糖補料而累積約50%的脂質(zhì)。
[0065] 然后將該培養(yǎng)液通過在線HTST在75 °C下進行熱處理持續(xù)Imin并且冷卻至 6. 2°C，然后在TC下儲存。然后將經(jīng)HTST處理的培養(yǎng)液通過6. 4倍稀釋于脫碳酸水中進行 洗滌并且使用Alfa Laval FEUX 510離心機進行離心。
[0066] 用75 %磷酸將pH降低至4. 1的pH，并且添加 500ppm苯甲酸鈉 /1000 ppm山梨酸 鉀（基于干的）作為一種防腐劑。
[0067] 然后在攪拌下在低于KTC貯存該材料。
[0068] 通過使用0. 5mm硅酸鋯珠粒在NETZSCH LME500珠磨機中碾磨來完成裂解，以給出 88 %的細胞破碎。將排出物冷卻至6 °C。
[0069] 將抗壞血酸（150ppm，基于干的）和混合的生育酸（500ppm，基于干的）添加至材 料中以防止氧化。添加氫氧化鉀以中和pH。
[0070] 然后將該材料加熱至77°C持續(xù)3分鐘。
[0071] 在具有旋流器的Filtermat FMD125干燥器上完成干燥。噴嘴壓力是160-170bar。
[0072] 實例4 :SPME (固相微萃?。?br>[0073] 將樣品（500mg)加3mL蒸餾水加 Igm NaCl加在乙醇中的5uL的0· 022ug/uL2_^ 烷酮內(nèi)標物在50°C下孵育lOmin，并且然后通過SPME在50°C下萃取20min，同時用Gerstel MPS2的定軌搖床進行攪動。使用的SPME纖維是DVB/CAR/PDMS (二乙烯基苯/碳分子篩/ 聚二甲基硅氧烷）df 50/30 μπι。將該纖維在安捷倫分流/不分流注入器中在260°C下解吸 3min。揮發(fā)物被解吸到 Leco Pegasus GC-TOFMS 中并且在 DB5-MS 柱（30m，0· 25mm，0. 25um) 上隨著1.0 mL/min的氦載氣流進行分離。初始柱溫是40°C (持續(xù)3min)并且然后以15°C / min增加至270°C并且保持在270°C持續(xù)5min。以電子轟擊模式（EI)進行質(zhì)量檢測。所有 的注入是無分流的峰鑒別是基于樣品中的EI質(zhì)譜與NIST庫的EI質(zhì)譜的比較。數(shù)據(jù)被報 告為與以PPb計的內(nèi)標物相比的相對濃度。
[0074] 實例5 :SBSE (攪拌棒吸附萃?。?br>[0075] 將樣品（500mg)加 IOml蒸餾水加在乙醇中的5uL 0. 022ug/uL 2-^^ -烷酮內(nèi) 標物萃取lh，同時使用2cm的Gerstel PDMS Twister以1000 rpm攪拌。然后添加一克的 NaCl至樣品并且繼續(xù)萃取持續(xù)再一個小時。該技術(shù)稱為連續(xù)SBSE。然后將Twister從樣 品中移除，用蒸餾水進行沖洗，用無絨布（lintless cloth)輕拍干并且在以無分流模式使 用的Gerstel TDU中進行熱解吸。使用TDU，解吸的揮發(fā)物最初在-100°C下截留；然后將 在Twister上捕獲的揮發(fā)物在280°C下解吸3min。揮發(fā)物被解吸到安捷倫GC-MSD中并且 在DB5-MS柱（30m，0. 25mm，0. 25um)上隨著1.0 mL/min的氦載氣流進行分離。初始柱溫是 40°C (持續(xù)3min)并且然后以10°C /min增加至270°C并且保持在270°C持續(xù)5min。以電 子轟擊模式（EI)進行質(zhì)量檢測。所有的注入是無分流的峰鑒別是基于樣品中的EI質(zhì)譜與 NIST庫的EI質(zhì)譜的比較。數(shù)據(jù)被報告為與以ppb計的內(nèi)標物相比的相對濃度。
[0076] 實例6 :針對實例3的可接受樣品的味道/氣味數(shù)據(jù)
[0077] 將在實例3中產(chǎn)生的樣品通過感官小組測試并且如實例4和5中的通過SPME和 SBSE進行分析。以十億分率的單位在下表中報導結(jié)果，這些結(jié)果是相對于2-十一烷酮內(nèi)標 物進行確定的。在下表中，a用來代表a，d代表δ，g代表γ?；衔锏腃AS號在實例7 中列出。



[0083] 根據(jù)以上給出的方法生產(chǎn)原殼小球藻微藻粉的多重生產(chǎn)批次。此外，從nuts, com 獲得小球藻屬粉末的商業(yè)樣品；申請日時的產(chǎn)品信息。http://www. nuts, com/將該粉歸 為韓國（Korean)來源，以異養(yǎng)生產(chǎn)。使用如在實例4和5中通過SBSE和SPME -式兩份 地所測量的總共12個的樣品。此外，使用一個志愿者小組完成感官測試。用R軟件版本 2. 15. 1 (針對統(tǒng)計計算的R項目,www. r-proiect. org)使用prcomp函數(shù)進行按比例的主成 分分析（使用相關(guān)矩陣）。發(fā)現(xiàn)三個主成分良好地表征了味道/氣味化合物中的變化。定 義了這三種主成分且作為PCI、PC2、和PC3的向量連同所使用的針對確定每個化合物的方 法一起列于下表中。發(fā)現(xiàn)一個集群的樣品在這種降維空間中，該降維空間與具有可接受的 感官特征的樣品相關(guān)。

[0086]


[0090] 圖2顯示了 PCA分析聚類。每個標繪的點代表了在由主成分PC1、PC2、和PC3(對 應(yīng)地維度1、維度2和維度3)所定義的空間中所標繪的微藻粉末樣品。實心環(huán)代表具有可 接受味道的原殼小球藻粉樣品。空心環(huán)代表具有差的味道的原殼小球藻粉樣品。空心正方 形代表從Nuts, com獲得的普通小球藻。
[0091] 實例8 :針對可接受味道的界限的確定
[0092] 基于實例7的PCA分析，使用FactomineR程序包V. I. 2. 1 (哈森（Husson)，等人） 以從統(tǒng)計學上定義與可接受的感官測試相關(guān)的樣品集群。FactomineR分析的結(jié)果是在 PCI、PC2和PC3的三個維度中的3個橢圓體；這些橢圓體表征了偏離正向人類感官分析相 關(guān)聯(lián)的集群的中心點的1、2、和3個標準偏差（實心環(huán)來自實例7的圖表）。每個3-維橢 圓體是通過3個正交2-維橢圓來定義，這些橢圓是由方程Ax2+Bxy+Cy2+Dx+Ey+F = 0使用 在下表中針對A、B、C、D、E、和F值的數(shù)據(jù)來進行定義。因此，落入最小橢圓體內(nèi)的樣品將預(yù) 期約99. 7%的可能性具有由人類小組做出的正向感官分析，僅落入中間大小的橢圓體內(nèi)的 樣品將預(yù)期約95%的可能性具有由人類小組做出的正向的感官分析，并且僅落入最大的橢 圓體內(nèi)的樣品將預(yù)期約68%的可能性具有由人類小組做出的正向的感官分析。
[0093] 置彳目區(qū)間方程：方程：Ax2+Bxy+Cy2+Dx+Ey+F = 0
[0096] 實例9 :使用PCA分析結(jié)果進行QC分析
[0097] 實例8的橢圓體可以用來確定樣品是否落入與正味道（positive flavor)相關(guān)聯(lián) 的集群內(nèi)。例如，可以對根據(jù)以上給出的方法生產(chǎn)的微藻粉的一個批次進行質(zhì)量控制實驗。 如在實例4和5中的通過SPME和SBSE分析該粉，并且然后技術(shù)人員確定數(shù)據(jù)是否落入實 例8的一個或多個橢圓體內(nèi)。
[0098] 為此，技術(shù)人員可以使用以下步驟（盡管其他的也是可以應(yīng)用的）。以針對105 種化合物的相對濃度開始。從每個濃度中減去其中心因子并且除以其比例因子（在下表中 給出），這使得數(shù)據(jù)中心化和比例化。采用比例化和中心化數(shù)據(jù)的點積以及主成分（PC)載 荷，這將產(chǎn)生針對每個PC的一個值。將每個值除以其相關(guān)聯(lián)的標繪因子，這將允許數(shù)據(jù)點 在三維的藻類-化學品空間中進行標繪。如果該點落入以置信橢圓體為邊界的空間內(nèi)，那 么它是沒有統(tǒng)計學差異的（P< 0.05)。例如，如果該點落入以95%置信橢圓體為邊界的空 間內(nèi)，那么它是沒有統(tǒng)計學差異的（P < 0. 05)。





[0105] 本發(fā)明實施例的進一步討論
[0106] 在以下段落中，為了方便起見本發(fā)明的某些實施例已經(jīng)被編號。與每個實施例相 關(guān)的數(shù)字是任意的并且不旨在表明不同實施例的相對重要性。
[0107] 1. -種適合用于食品中的微藻粉，該粉包括綠藻門的微藻細胞，其中通過根據(jù)實 例4的SPME和/或根據(jù)實例5的SBSE的分析來確定實例6的化合物相對于內(nèi)標物的濃度， 隨后根據(jù)實例9的程序的分析產(chǎn)生一個味道描述詞，該味道描述詞落入實例8的橢圓體內(nèi)， 所述實例8的橢圓體定義了相對于正味道集群的3個標準偏差，該正味道集群對應(yīng)于在實 例7的圖表中的封閉環(huán)（即圖2)。
[0108] 2.如實施例1所述的微藻粉，其中該味道描述詞落入實例8的橢圓體內(nèi)，該橢圓體 定義了相對于正味道集群的2個標準偏差，該正味道集群對應(yīng)于在實例7的圖表中的封閉 環(huán)（即圖2)。
[0109] 3.如前述實施例中任一項所述的微藻粉，其中該味道描述詞落入實例8的橢圓體 內(nèi)，該橢圓體定義了相對于正味道集群的1個標準偏差，該正味道集群對應(yīng)于在實例7的圖 表中的封閉環(huán)（即圖2)。
[0110] 4.如前述實施例中任一項所述的微藻粉，該微藻粉可以通過以下方法獲得：
[0111] 在黑暗中，在作為一種固定碳源的葡萄糖的存在下，起始pH為6. 8,對原殼小球藻 細胞的一種培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，同時將溶解氧水平保持在高于30%，使該培養(yǎng)液經(jīng)歷75°C的 高溫短時處理持續(xù)1分鐘，通過以一種在水中6. 4倍的稀釋物進行離心收獲這些細胞，添加 一種抗氧化劑，通過碾磨來裂解這些細胞，并且使用噴霧干燥噴嘴輸出到一條移動帶上進 行干燥。
[0112] 5.如前述實施例中任一項所述的微藻粉，該微藻粉包括根據(jù)由SPME或SBSE確定 的十一內(nèi)酯（400-1800ppb)、3-甲基-丁醛（0-11，OOOppb)、戊醛（160-10, 700ppb)、2-甲 基-丁醛（0_2500ppb)、2_ 戊酮（39-10, 600ppb)、和 / 或 3-戊烯-2-酮（0-1500ppb)。
[0113] 6.如前述實施例中任一項所述的微藻粉，根據(jù)由品嘗小組檢測的，當該粉以10% (w/v)分散于去離子水中時，該微藻粉具有一種不可檢測的魚味或甘藍味。
[0114] 7.如前述實施例中任一項所述的微藻粉，該微藻粉具有以在2000 μπι按重量計 15% -35%的篩上物為特征的流動性。
[0115] 8.根據(jù)前述實施例中任一項所述的微藻粉，其中該粉在顏色上是白色的、淡黃色 的或黃色的。
[0116] 9.根據(jù)前述實施例中任一項所述的微藻粉，該微藻粉不包括明顯的綠顏色。
[0117] 10.根據(jù)前述實施例中任一項所述的微藻粉，其中該粉包括5% -20%脂質(zhì)。
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