是在沒(méi)有延遲一段時(shí)間（該時(shí)間足以允許在微藻中產(chǎn)生酶促 發(fā)展的異味）的情況下進(jìn)行的。在酸性PH下培養(yǎng)還可以允許使用一種甚至更溫和的巴氏 消毒法。例如，可以在從5至6. 5的pH下培養(yǎng)微藻細(xì)胞，隨后在從約60°C至約70°C下進(jìn)行 巴氏消毒持續(xù)1分鐘，并且在干燥之前進(jìn)行中和。
[0033] 為了進(jìn)一步改善味道，可以洗滌微藻細(xì)胞（步驟115)。不希望受理論約束的情況 下，該洗滌可以去除異味。此外，在洗滌前使用滅活步驟可以透化細(xì)胞或以其他方式促進(jìn)從 微藻生物質(zhì)中去除不希望的味道或氣味。洗滌可以通過(guò)離心、過(guò)濾、滲析或其他本領(lǐng)域已知 的方法進(jìn)行。可任選地，用一定體積的洗液（例如，水或緩沖劑）進(jìn)行洗滌，該洗液的體積 是與微藻細(xì)胞體積一樣大或更大（例如，按通過(guò)離心測(cè)量的）。洗液的體積可以是細(xì)胞體積 的兩倍，或優(yōu)選的是細(xì)胞體積的至少3倍。已發(fā)現(xiàn)以6. 4倍細(xì)胞體積的離心給出了具有良 好味道的微藻生物質(zhì)。因此，在本發(fā)明的實(shí)施例中，用在3和12個(gè)體積之間的水洗滌細(xì)胞。 針對(duì)這些目的，通過(guò)對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行脫水（即，從液體培養(yǎng)基中去除它們）來(lái)完成細(xì)胞體積 的測(cè)量。例如，可以通過(guò)離心或過(guò)濾對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行脫水?？扇芜x地，洗滌步驟可以重復(fù)一 次或多次。
[0034] 可任選地，洗滌后，可以添加防腐劑（步驟120)。例如，可以添加苯甲酸鈉和/或 山梨酸鉀作為抑細(xì)菌劑和抑真菌劑。由于苯甲酸鈉在酸性條件下更具活性，可以按照需要 降低pH。在那樣的情況下，可以在該方法后期提高pH以避免不想要的酸味。
[0035] 可任選地，然后裂解微藻細(xì)胞（步驟125)。該裂解可以是部分的或完全的。例如， 可以裂解從5%至95%或大部分（>50%)的細(xì)胞。在高脂質(zhì)微藻中可以尤其希望的是 進(jìn)行裂解以釋放脂質(zhì)，其中脂質(zhì)的釋放改善了摻入微藻生物質(zhì)的食物產(chǎn)品的質(zhì)量和營(yíng)養(yǎng)價(jià) 值?？梢杂弥槟C(jī)、或本領(lǐng)域中已知的任何其他適合的方法來(lái)完成裂解?？扇芜x地，大多數(shù) 的細(xì)胞可以被裂解。在一個(gè)實(shí)施例中，約30%-75%的微藻細(xì)胞被裂解。在另一個(gè)實(shí)施例 中，約30% -75%的微藻細(xì)胞被裂解并且這些微藻細(xì)胞按干細(xì)胞重量計(jì)具有約30% -75% 的脂質(zhì)。在又一個(gè)實(shí)施例中，60% -90%的微藻細(xì)胞被裂解。認(rèn)為這種參數(shù)的組合導(dǎo)致了以 下的微藻生物質(zhì)，該微藻生物質(zhì)改善了將其整合進(jìn)去的食物的口感、持空氣性或其他功能 性參數(shù)，同時(shí)避免了在干燥或其他可與高度裂解的細(xì)胞相關(guān)聯(lián)的處理步驟中的困難。在以 下實(shí)例3中，細(xì)胞被裂解至約80 %。
[0036] 可任選地，可以將生物質(zhì)進(jìn)行均質(zhì)化（步驟130)。例如，包含細(xì)胞或裂解細(xì)胞的懸 浮液可以在升高的壓力（即使用高壓均質(zhì)器）下被迫使通過(guò)窄通道或孔。還可采用其他類 型的均質(zhì)器例如葉片均質(zhì)器或超聲均質(zhì)器。
[0037] 可以添加抗氧化劑以提高生物質(zhì)的保質(zhì)期（步驟135)。例如，可以使用生育酚、 BHA、BHT、迷迭香提取物、或其他適合的食品級(jí)抗氧化劑。除了提高保質(zhì)期，在該階段添加抗 氧化劑可以防止在干燥步驟中形成不想要的氧化味道。在此階段，如果在上游過(guò)程使用低 pH條件，那么添加堿以提高pH可以防止與低pH相關(guān)的澀味。
[0038] 干燥之前（例如，均質(zhì)化后并且在任選的添加抗氧化劑之前或之后），將微藻保 持在升高的溫度持續(xù)一段時(shí)間（140)。不希望受理論約束，認(rèn)為此步驟促進(jìn)了味道的穩(wěn)定 性，確保了酶的失活，并且可以促進(jìn)正味道的形成。例如，裂解的微藻懸浮液可以保持在 70° -85°持續(xù)1-6分鐘。在以下實(shí)例3中，為了在產(chǎn)生的粉中獲得可接受的感官特性，在 77°C下進(jìn)行該加熱步驟持續(xù)3分鐘。例如，通過(guò)在約87°C下加熱約90秒或在67°C下加熱 約6分鐘，可以獲得可比的結(jié)果。
[0039] 然后干燥該生物質(zhì)（步驟145)。在一種實(shí)施例中，為了形成一種粉（一種粉末樣 的）物質(zhì)，對(duì)該生物質(zhì)進(jìn)行噴霧干燥。該噴霧干燥可以使用，例如，箱式干燥器、或高型噴霧 干燥器、流化床干燥器、或移動(dòng)流化床干燥器（例如FilterMat?噴霧干燥器，GEA工藝工程 公司（GEA Process Engineering，Inc.))。實(shí)例3描述了用于用FilterMat干燥器干燥的 條件。
[0040] 即使產(chǎn)生的粉富含脂質(zhì)（例如，按干細(xì)胞重量計(jì)30% -70%或40% -60%脂質(zhì)）， 其也是可以測(cè)量的或流動(dòng)的。在一個(gè)具體實(shí)施例中，該粉具有0. 30至0. 50的充氣密度， 0.50至0.65的堆積密度，在2000 μ m按重量計(jì)15%-35%的篩上物（即，％太大而不能 通過(guò)2000 μπι篩）、在1400 μπι時(shí)40% -70%的篩上物和在800 μπι時(shí)1% -20%的篩上物， l-25mm的濕度，以及0. 1至0. 7m2/g的表面積。
[0041] 測(cè)試濕度：
[0042] -在20 °C將500ml去離子水引入一個(gè)600ml的矮寬式燒杯（Fisherbrand FB33114)中，
[0043] -將25g微藻粉粉末均勻放在水面上，不混合，
[0044] -接觸3小時(shí)后觀察粉末的行為，
[0045] -測(cè)量已經(jīng)滲透水面并在燒杯底部沉降的產(chǎn)品的高度。
[0046] 該充氣松密度是使用測(cè)量充氣松密度的常規(guī)方法確定的，即，通過(guò)測(cè)量一個(gè)已知 容積的空容器（g)的質(zhì)量，并測(cè)量填充有待測(cè)產(chǎn)品的相同容器的質(zhì)量。
[0047] -然后用填充容器的質(zhì)量和空容器的質(zhì)量之差除以容積（ml)得出充氣松密度的 值。
[0048] -就本測(cè)試而言，該100mL容器、用于填充的勺子和所使用的刮鏟是隨細(xì)川 (Hosokawa)公司以商標(biāo)Powder Tester型PTE出售的裝置一起提供的。
[0049] -為進(jìn)行本測(cè)量，通過(guò)孔徑為2000 μ m的篩網(wǎng)（SAULAS出售的）對(duì)產(chǎn)品過(guò)篩。密度 是在沒(méi)有留在篩網(wǎng)上的產(chǎn)品上測(cè)量的。
[0050] 在該微藻粉顆粒的整個(gè)粒度分布上確定比表面積，例如，采用康塔公司 (Quantachrome)比表面積分析儀基于對(duì)被分析產(chǎn)品表面上的氮吸收測(cè)試，該測(cè)試是在 來(lái)自貝克曼庫(kù)爾公司（Beckmann Coulter)的SA3100裝置上進(jìn)行的，根據(jù)S.布魯諾爾 (BRUNAUER)等人（美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)期刊，60,309，1938)的"通過(guò)氮吸收發(fā)測(cè)定BET表面積 (BET Surface Area by Nitrogen Absorption) y, 一文中所描述的技術(shù)。
[0051] 針對(duì)可以接受的味道、顏色、氣味、和/或口感測(cè)試該微藻粉（步驟150)。例如，可 以采用人類感官小組和/或分析技術(shù)例如頂空GC-MS、SPME、或SBSE。可任選地，可以對(duì)味 道進(jìn)行評(píng)估以確定它是否歸類于或落入與通過(guò)現(xiàn)有感官小組和/或分析測(cè)試所確定的可 接受的味道相關(guān)聯(lián)的邊界內(nèi)?？梢允褂弥鞒煞址治觯≒CA)來(lái)確定這些組群/邊界（參見(jiàn)以 下實(shí)例）。然后可接受的批次可以被選擇用于包裝和進(jìn)一步使用。
[0052] 在干燥和可任選的測(cè)試之后，該生物質(zhì)可經(jīng)歷任何所需的進(jìn)一步的處理或包裝 (步驟155)以制作微藻粉或摻有該生物質(zhì)的食物產(chǎn)品。例如，為了制作微藻粉，可以將生物 質(zhì)攪拌或通過(guò)篩網(wǎng)。該微藻粉還可以與其他成分一起混合以制作湯、調(diào)味汁、面團(tuán)、蛋糕、餅 干、干烘焙食物混合物，等等。還可以根據(jù)以下實(shí)例4、5和8進(jìn)行測(cè)試。
[0053] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，任何兩種或更多種的上述技術(shù)可以組合以獲得在微藻生物 質(zhì)產(chǎn)品（例如微藻粉）中一種迄今史無(wú)前例的味道。例如，如上所述的HTST處理隨后用液 體進(jìn)行洗滌可以產(chǎn)生具有少異味的微藻粉。在如上所述的培養(yǎng)和其他步驟期間，氧合可以 進(jìn)一步改善味道。
[0054] 通過(guò)選擇一種適當(dāng)?shù)奈⒃逯旰褪褂迷诖伺兜姆椒ǎ梢缘玫揭环N從具有可接受 的感官特征的生物質(zhì)中制得的微藻生物質(zhì)或微藻粉。當(dāng)將該微藻粉以1 : 2、1 : 5、1 : 10、 1 : 20、1 : 30、或1 : 40的比率（按體積計(jì)）稀釋于水中時(shí)，其可以是非綠色的并且具有 不可檢測(cè)水平的魚(yú)味、蘑菇味或甘藍(lán)味。在一個(gè)實(shí)施例中，根據(jù)通過(guò)品嘗小組檢測(cè)的，當(dāng)按 體積計(jì)以1 : 20稀釋于水中時(shí)，魚(yú)味和甘藍(lán)味異味是不可檢測(cè)的。
[0055] 以下味道/氣味化合物是通過(guò)實(shí)例4或5的方法確定的并且被認(rèn)為與可接 受的感官測(cè)試相關(guān)。十一內(nèi)酯（400_1800ppb)，3-甲基-丁醛（0-11，OOOppb)，戊醛 (160-10, 700ppb)，2-甲基-丁醛（0-2500ppb)，2-戊酮（39-10, 600ppb)，3-戊烯-2-酮 (0-1500ppb)〇
[0056] 可接受的樣品還具有少于閾值量的吡咯、吡嗪、或含吡啶的化合物，然而這些化合 物發(fā)現(xiàn)于從nuts, com獲得的普通小球藻的樣品中，該普通小球藻是綠愾并目.在味道 和氣味方面是不可接受的。
[0057] 在一個(gè)實(shí)施例中，當(dāng)將由上述方法所產(chǎn)生的微藻粉儲(chǔ)存在黑暗中、室溫、在水分和 氧氣不滲透的包裝中（例如Mylar?食物貯藏袋）時(shí)，其保留提到的少量的異味持續(xù)了至 少2周、1個(gè)月、3個(gè)月或6個(gè)月。
[0058] 可任選地，較大的顆粒、細(xì)?；蛄Ａ峡梢杂筛稍锏奈⒃宀牧现瞥伞＠?，可以使用 本領(lǐng)域中已知的多種方法來(lái)對(duì)該粉進(jìn)行結(jié)團(tuán)、?；?、擠出、或制粒。
[0059] 實(shí)例1.在低pH下并且使用地低色素株生產(chǎn)微藻粉
[0060] 在從7L至1000L的規(guī)模上進(jìn)行原殼小球藻的多重發(fā)酵。使用原殼小球藻的兩種 株:A株、和B株（一個(gè)低色素突變體）。在黑暗中以葡萄糖作為固定的碳源在約5至6的 PH下進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵后，將含有微藻的發(fā)酵液進(jìn)行加熱處理以滅活微藻，立即用過(guò)量的水稀 釋，離心以洗滌和濃縮該微藻，將細(xì)胞通過(guò)碾磨來(lái)裂解，然后對(duì)其進(jìn)行噴霧干燥以制作微藻 粉。從A株制得的微藻粉在顏色上是淺黃色的，并且從B株制得的微藻粉在顏色上是黃褐 色的。還在約中性pH下進(jìn)行B株的發(fā)酵。
[0061] 實(shí)例2.使用高氧條件的淺色粉
[0062] 將B株在高（約60% -70% )和低（約30-40% )的溶解氧中進(jìn)行培養(yǎng)并且如在 實(shí)例1中的進(jìn)行處理以形成微藻粉。針對(duì)高氧實(shí)驗(yàn)，與在低氧下產(chǎn)生的微藻相比，在培養(yǎng) 液、離心的生物質(zhì)中并且在最終的粉中注意到黃色的減少。
[0063] 實(shí)例3 :改善的微藻粉的生產(chǎn)
[0064] 將原殼小球藻的種子培養(yǎng)物添加至確定成分的培養(yǎng)液中以給出9, 000L的培養(yǎng) 物。使用加熱滅菌的葡萄糖（55% w/w)作為碳源。在發(fā)酵罐中通過(guò)控制通氣、背壓和攪拌 將溶解氧保持在最低值30%。培養(yǎng)溫度為28°C。在培養(yǎng)起始時(shí)培養(yǎng)液的pH為6. 8并且 經(jīng)培養(yǎng)歷程降至約6。將葡萄糖進(jìn)料至3-10g/L濃度的濃度。經(jīng)4-5天連續(xù)生長(zhǎng)至如通過(guò) 0D750測(cè)量的對(duì)數(shù)