（PCB)誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體酶（S-9)作 為體外代謝活化系統(tǒng)。試驗(yàn)設(shè)五個(gè)劑量，分別為5000 ii g/皿、1000 ii g/皿、200 ii g/皿、 40 y g/皿、8 y g/皿，同時(shí)設(shè)自發(fā)回變、溶劑對(duì)照和陽性突變劑對(duì)照。樣品配制時(shí)，取樣品浸 泡濃縮液1. 25mL加蒸餾水至25mL，為5000 ii g/皿劑量，取此液5mL加蒸餾水至25mL配成 1000 yg/皿，以下三個(gè)劑量如此類推配制。滅菌后備用。試驗(yàn)時(shí)，在頂層瓊脂中加入O.lmL 試驗(yàn)菌株增菌液、0. lmL受試物溶液和0. 5mLS-9混合液（當(dāng)需要代謝活化時(shí))，混勻后倒入 底層培養(yǎng)基平板上。37°C培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)數(shù)每皿菌落數(shù)。如果受試物的回變菌落數(shù)超過自 發(fā)回變菌落數(shù)的2倍以上，并有劑量--反應(yīng)關(guān)系者定為陽性。整套試驗(yàn)在相同試驗(yàn)條件 下重復(fù)一次。
[0066] 1. 5小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)：采用間隔24小時(shí)兩次經(jīng)口灌胃法進(jìn)行試 驗(yàn)。取體重為25~30g的昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半。以 0. 04g/kg ? bw劑量的環(huán)磷酰胺為陽性對(duì)照，蒸餾水為陰性對(duì)照。試驗(yàn)組高、中、低劑量分別 為 10. 00g/kg ? bw、5. 00g/kg ? bw、2. 50g/kg ? bw，分別取樣品浸泡濃縮液 50. 0mL、25. OmL 和 12. 5mL加蒸饋水至lOOmL，陽性對(duì)照取0. lOOOg環(huán)磷酰胺加蒸饋水定容至50mL，配成相應(yīng)的 受試液給小鼠灌胃（〇. 20mL/10g ? bw)。末次給樣后6小時(shí)頸椎脫臼處死動(dòng)物，取胸骨骨髓 用小牛血清稀釋涂片，甲醇固定，Giemsa染色。光學(xué)顯微鏡下，每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多 染紅細(xì)胞（PCE)，微核發(fā)生率以含微核的PCE千分率計(jì)。計(jì)數(shù)200個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，計(jì)算嗜 多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比值（PCE/NCE)。用Spssll.O軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
[0067] 1. 6小鼠精子畸形試驗(yàn)：取體重25g~35g的雄性昆明種小鼠25只，隨機(jī)分為5 組，每組5只。以0.04g/kg*bw劑量的環(huán)磷酰胺為陽性對(duì)照，蒸餾水為陰性對(duì)照。試驗(yàn)組 高、中、低劑量分別為10. 〇〇g/kg *bw、5. 00g/kg *bw、2. 50g/kg *bw，分別取樣品浸泡濃縮液 50. 0mL、25mL和12. 5mL加蒸饋水至lOOmL，陽性對(duì)照取0. 1000g環(huán)磷酰胺加蒸饋水定容至 50mL，配成相應(yīng)的受試液給小鼠灌胃（0. 20mL/10g ? bw)。每日灌胃一次，連續(xù)5天，于末次 灌胃后的第30天處死動(dòng)物，取副睪涂片，伊紅染色，每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)結(jié)構(gòu)完整的精子， 計(jì)算畸變精子發(fā)生率。用Spssll. 0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
[0068] 1.73〇天喂養(yǎng)試驗(yàn)：
[0069] 1. 7. 1劑量組選擇與受試物給予方式：取SD大鼠80只，雌雄各半。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨 機(jī)分為四組，即對(duì)照組及三個(gè)受試物組，每組20只，雌雄各半。設(shè)低、中、高三個(gè)受試物組劑 量分別為1. 25g/kg *bw、2. 50g/kg *bw、5. 00g/kg *bw，約相當(dāng)于人體推薦劑量的25、50、100 倍。分別取樣品浸泡濃縮液25. 0mL、50.0 mL、100mL加蒸餾水至200mL，配成低、中、高劑量所 需濃度，對(duì)照組給予等體積的蒸餾水，每日灌胃一次，灌胃體積為1. 0mL/100g ? bw，連續(xù)30 天。
[0070] 1.7. 2主要儀器與試劑：主要儀器：雅培⑶3700全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀，OLYMPUS AU400全自動(dòng)生化分析儀等。主要試劑：總蛋白（TP)、白蛋白（ALB)、尿素氮（BUN)、血糖 (GLU)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST)、膽固醇（CH0L)、甘油三酯（TG)試劑盒購自上 海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司；肌酐（Cr)試劑盒購自上海申能一德賽診斷技術(shù)有限公司。
[0071] 1. 7. 3實(shí)驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)期間所有動(dòng)物給予普通飼料，單籠飼養(yǎng)，自由攝食飲水，每 天觀察動(dòng)物的活動(dòng)和生長(zhǎng)情況，每周加食2次，記錄給食量和剩食量，每周稱一次體重，計(jì) 算進(jìn)食量和食物利用率，給受試物30天后禁食16次小時(shí)采血。禁食前和禁食后(采血前） 稱量動(dòng)物體重。采血時(shí)，每只大鼠摘眼球采集兩份血：抗凝血用雅培⑶3700全自動(dòng)血球計(jì) 數(shù)儀測(cè)定血紅蛋白（Hb)、紅細(xì)胞壓積（HCT)，進(jìn)行紅細(xì)胞（RBC)、白細(xì)胞（WBC)、血小板（PLT) 計(jì)數(shù)及WBC分類。非抗凝血分離血清，用OLYMPUS AU400全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定TP、ALB、 ALT、Cr、BUN、AST、CHOL、TG和GLU。采血后頸椎脫臼處死動(dòng)物作大體解剖、稱肝、腎、脾、睪 丸重量，計(jì)算臟/體比值，取肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸、卵巢作病理切片檢查。在對(duì)各劑 量組動(dòng)物作大體檢查未發(fā)現(xiàn)明顯病變和生化指標(biāo)改變時(shí)，只進(jìn)行最高劑量組及對(duì)照動(dòng)物主 要臟器的組織病理學(xué)檢查，如發(fā)現(xiàn)病變則對(duì)較低劑量組相應(yīng)器官及組織進(jìn)行檢查。
[0072] L 7. 4實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：用Excel2003、Spssll. 0、INSTAT軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。分析 時(shí)，先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差劑，采用單因素方差分析進(jìn)行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異 再用Dunnett法進(jìn)行多個(gè)劑量組與一個(gè)對(duì)照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊則對(duì)原始數(shù) 據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，滿足方差齊性檢驗(yàn)后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍 未達(dá)到方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)總體比較有差異，則采用不要求方差齊 性的Tamhane' s T2檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。
[0073] 2 結(jié)果
[0074] 2.1急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)
[0075] 表1樣品急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)小鼠體重結(jié)果)
[0077] 表2樣品小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果
[0079]由表1、2可見，以20. 00g/kg ? bw劑量的輔助降血脂茶給兩種性別的昆明種小鼠 灌胃后未見明顯中毒癥狀，觀察14天無死亡。觀察期末將受試動(dòng)物處死進(jìn)行解剖檢查，肝、 脾、腎、胃、腸、心、肺等主要臟器，未見明顯異常改變。輔助降血脂茶對(duì)昆明種雌、雄小鼠的 最大耐受劑量（MTD)大于20.00g/kg*bw。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年 版）中的急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，屬無毒級(jí)。
[0080] 2. 2Ames 試驗(yàn)
[0081] 表3樣品Ames試驗(yàn)結(jié)果(第一次）
[0083]
[0084] 注：以上結(jié)果為3個(gè)平皿的均值土標(biāo)準(zhǔn)差。
[0085]陽性對(duì)照：TA97+S9、TA98+S9、TA100+S9 采用 2-AF (劑量：10. 0 ii g/ 皿）;TA97-S9、 TA98-S9 采用 9-芴酮（劑量：0? 2 ii g/ 皿）；TA100-S9 采用 NaN3(劑量：1. 5 ii g/ 皿）;TA102+S9 采用1，8_二羥蒽醌(劑量：50.0iig/皿);TA102-S9采用MMC (劑量：0.5iig/皿)。表4同。
[0086] 表4樣品Ames試驗(yàn)結(jié)果(第二次）
[0088] 由表3、4可見，對(duì)了497、了498、了4100、了4102四株試驗(yàn)菌株，加與不加5-9，樣品各 劑量組回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍，亦無劑量一反應(yīng)關(guān)系。
[0089] 2. 3小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn) [0090]表5樣品對(duì)小鼠骨髓微核發(fā)生率的影響
[0091]
[0092] *與陰性對(duì)照組比較，P〈0. 01
[0093] 由表5可見，樣品各劑量組微核率與陰性對(duì)照組比較差異無顯著性（P>0.05)，而 環(huán)磷酰胺組與陰性對(duì)照組比較差異有顯著性（P〈〇.01)。
[0094] 2. 4小鼠精子畸形試驗(yàn)：
[0095] 表6樣品對(duì)小鼠精子畸形發(fā)生率的影響
[0097] *與陰性對(duì)照組比較，P〈0. 01
[0098] 由表6可見，樣品各劑量組小鼠精子畸形發(fā)生率與陰性對(duì)照組比較差異無顯著性 (P>0. 05)，而環(huán)磷酰胺陽性對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較差異有顯著性（P〈0. 01)。
[0099] 2. 530天喂養(yǎng)試驗(yàn)
[0100]30天喂養(yǎng)期間，各組動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育良好，無異常行為和中毒癥狀，無死亡。
[0101] 2. 5. 1樣品對(duì)大鼠體重及食物利用率的影響
[0102] 見表7-12。喂養(yǎng)期間，各劑量組雌雄鼠各時(shí)點(diǎn)體重、末重和增重、每周及總進(jìn)食量、 每周及總食物利用率與對(duì)照組比較差異無顯著性（P>〇. 05)。
[0103]表7樣品對(duì)大鼠體重的影響（f ±s)
[0104]
[0105] 表8樣品對(duì)大鼠食物利用率(第1周）的影響（jfirs)
[0107]
[0108] 表9樣品對(duì)大鼠食物利用率(第2周）的影響（f±s)
[0110] 表10樣品對(duì)大鼠食物利用率(第3周）的影響（v :s)
[0111]
[0112] 表11樣品對(duì)大鼠食物利用率(第4周）的影響（r
[0114]表12樣品對(duì)大鼠總食物利用率的影響（r ：ts)
[0116] 2. 5. 2樣品對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響
[0117] 見表13-14。各劑量組雌雄大鼠的血紅蛋白、紅細(xì)胞總數(shù)、紅細(xì)胞壓積、血小板數(shù)、 白細(xì)胞總數(shù)及分類與對(duì)照組比較，差異無顯著性（P>〇. 05)。
[0118] 表13樣品30天喂養(yǎng)試驗(yàn)血液學(xué)檢查結(jié)果（r二0
[0119]
[0120] 表14樣品對(duì)大鼠WBC計(jì)數(shù)及其分類的影響（±s)
[0122]續(xù)表14樣品對(duì)大鼠WBC計(jì)數(shù)及其分類的影響（F±s)
[0124] 2. 5. 3樣品對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響
[0125] 見表15-16。各劑量組雌雄大鼠的總蛋白、白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、膽固 醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐、血糖與對(duì)照組比較均無顯著性差異（P>〇. 05)。
[0126] 表15樣品30天喂養(yǎng)試驗(yàn)?zāi)┢谏瘷z驗(yàn)結(jié)果±s)
[0127]
[0128]表16樣品30天喂養(yǎng)試驗(yàn)?zāi)┢谏瘷z驗(yàn)結(jié)果（r ：bs)
[0130] 2. 5. 4樣品對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)┙澈篌w重、臟器重量和臟器/體重比值的影響
[0131] 由表17-18可見，各劑量組大鼠的實(shí)驗(yàn)?zāi)┙澈篌w重及肝臟、腎臟、脾臟、睪丸的 絕對(duì)重量和肝/體、脾/體、腎/體、雄鼠睪/體比值和對(duì)照組比較，差異無顯著性（P>0. 05)。
[0132] 表17樣品對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)┙澈篌w重及臟器重量的影響（r h)
[0134] 表18樣品對(duì)大鼠臟體比的影響（r
[0135]
[0136] 2. 5. 5大體解剖及組織學(xué)檢查結(jié)果
[0137] 2. 5. 5. 1大體解剖檢查
[0138] 共檢查對(duì)照組和各劑量組共80只大鼠，雌、雄各半。剖檢后肉眼觀察，心、肺、肝、 脾、腎、胃、腸、睪丸(卵