一種乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物發(fā)酵中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑 及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著抗生素、激素等作為畜禽飼養(yǎng)添加劑的濫用，其危害性已逐漸被人們認(rèn)識，因 此，禁止以添加劑形式添加抗生素和激素類物質(zhì)已經(jīng)成為現(xiàn)代飼料行業(yè)的發(fā)展趨勢，安全 高效的微生態(tài)制劑作為添加劑在畜牧業(yè)生產(chǎn)中將會有越來越重要的應(yīng)用。隨著微生態(tài)學(xué)的 發(fā)展，微生態(tài)學(xué)理論、方法開始被引入中草藥藥學(xué)的研宄，丁軻等利用益生乳桿菌和中藥制 成的合生元試驗(yàn)結(jié)果表明，合生元提高AA肉雞的免疫功能，提高胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和 脾臟指數(shù)，提高腸道中的蛋白酶和淀粉酶酶活性；苗曉微等在肉仔雞日糧中添加乳酸菌與 中藥合生元制劑，提高日增重、存活率、降低死淘率、提高蛋白質(zhì)營養(yǎng)成分的利用率。這些研 宄結(jié)果表明利用益生菌和中藥開發(fā)微生態(tài)制劑作為畜禽飼養(yǎng)添加劑具有中藥的意義。
[0003] 乳酸菌是一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細(xì)菌的統(tǒng)稱，是動物腸道內(nèi)的常在菌，具有 調(diào)節(jié)畜禽硝化到菌群平衡，提高動物免疫性能的作用，目前市場上常用的乳酸菌微生態(tài)制 劑多以普通培養(yǎng)基培養(yǎng)乳酸菌，然后以液體或粉劑形式存在；黃芪是一種常用中藥，主要活 性物質(zhì)為多糖、皂苷和總黃酮，具有提高動物機(jī)體免疫力和生產(chǎn)性能的作用，但是目前對于 乳酸菌和黃芪作為添加劑的使用通常是將二者簡單的組合添加入飼料中或畜禽飲水中，沒 有發(fā)揮乳酸菌的強(qiáng)大生物轉(zhuǎn)化功能，也沒有研宄發(fā)酵后中藥活性成分的變化情況。針對現(xiàn) 有技術(shù)的這種缺陷，朱新術(shù)在《發(fā)酵黃芪的乳酸菌的馴化及其與黃芪相互作用研宄》中公開 了從土雞腸道中篩選出的生產(chǎn)性能好的優(yōu)良乳桿菌，利用黃芪藥液首先馴化該乳桿菌，將 馴化后生產(chǎn)性能優(yōu)異的乳桿菌再接種發(fā)酵黃芪，提高黃芪多糖的得率和菌體數(shù)量，但是這 種需要首先馴化乳桿菌，再利用馴化后功能優(yōu)異的菌體發(fā)酵黃芪的方法，操作復(fù)雜，且益生 菌菌群單一，并且對于黃芪多糖增率和菌體數(shù)量的增率還有待于進(jìn)一步的提高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的之一在于提供一種黃芪多糖和乳酸菌增 率高的乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑。
[0005] 本發(fā)明的目的之二在于提供一種乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑的制備方法。
[0006] 同時(shí)，本發(fā)明還在于提供一種乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑的應(yīng)用。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0008] -種乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑，由以下原料發(fā)酵而成：乳酸菌種子液、黃芪水 提取液、MRS液體培養(yǎng)基；其中所述乳酸菌種子液由屎腸球菌與植物乳桿菌按2-8 :8_2比例 混合培養(yǎng)制得；以所述黃芪水提取液對應(yīng)提取前黃芪的重量計(jì)，每〇. 3克~6克的黃芪對應(yīng) 接種的乳酸菌種子液中活菌的個(gè)數(shù)為5X IO9個(gè)。
[0009] 上述黃芪水提取液為黃芪加水提取制得，其濃度為：每25克黃芪對應(yīng)加水提取得 到225ml~300ml的黃芪水提取液。
[0010] 所述黃芪提取物由以下方法制備而得：取黃芪加水煎煮三次，合并三次煎煮液，過 濾，取上清液，即得。
[0011] 為了完全提取出黃芪中的水溶性有效成分，優(yōu)選的，每次煎煮的煎煮時(shí)間為30~ 60min;第一次煎煮加水質(zhì)量與黃芪的質(zhì)量比為4~5 :1;第二次煎煮加水質(zhì)量與黃芪的質(zhì) 量比為3~4 :1;第三次煎煮加水質(zhì)量與黃芪的質(zhì)量比為2~3 :1。
[0012] 所述黃芪水提取液與MRS液體培養(yǎng)基的用量比例為（3~60):(97~40);
[0013] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述黃芪水提取液與MRS液體培養(yǎng)基的用量比例為25 :75。
[0014] 所述MRS液體培養(yǎng)基由以下方法制備而得：取酪蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏 8g，葡萄糖5g，乙酸鈉5g，檸檬酸氫二銨2g，吐溫-801g，磷酸氫二鉀2g，硫酸鎂0. 2g，硫酸 錳0. 05g，碳酸鈣10g，加水lOOOmL，各原料完全溶解后，調(diào)pH為6. 8,高壓滅菌，即得。
[0015] 所述乳酸菌種由以下方法制備而得：將屎腸球菌和植物乳桿菌按2-8 :8-2比例接 入如權(quán)利要求4所述的MRS液體培養(yǎng)基中，37°C -39°C厭氧培養(yǎng)24-36h，，即得。
[0016] 上述乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于，包括取黃芪提取 物、MRS液體培養(yǎng)基，加水混合均勻后，調(diào)節(jié)pH為6. 8,高壓滅菌后，接種乳酸菌種子液， 37°C -39°C厭氧培養(yǎng)48-72小時(shí)，即得。
[0017] 上述乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑作為畜禽飲水添加劑的應(yīng)用，乳酸菌發(fā)酵黃芪 的微生態(tài)制劑在畜禽飲水中的質(zhì)量百分含量為0. 4%~0. 6%。
[0018] 本發(fā)明乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑，在黃芪水提取液、MRS液體培養(yǎng)基組成的發(fā) 酵基質(zhì)中接種乳酸菌種發(fā)酵而成，其中屎腸球菌和植物乳桿菌按比例混合培養(yǎng)復(fù)配成乳酸 菌種，豐富益生菌群，同時(shí)通過選擇合適的乳酸菌種的接種量，使乳酸菌種和黃芪之間產(chǎn)生 協(xié)同增效作用，相比傳統(tǒng)的直接將乳酸菌和黃芪混合的添加劑，提高了黃芪多糖等活性物 質(zhì)和乳酸菌的含量，降低黃芪的毒副作用，生產(chǎn)成本低。
[0019] 進(jìn)一步的，優(yōu)選發(fā)酵基質(zhì)中黃芪水提取液的體積分?jǐn)?shù)為25%，最大限度的發(fā)揮屎 腸球菌和植物乳桿菌復(fù)配乳酸菌種的生物轉(zhuǎn)化功能，提高乳酸菌的增率達(dá)到289%，黃芪多 糖的增率達(dá)到499%。
[0020] 本發(fā)明乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑的制備方法，通過選擇合適的發(fā)酵溫度和發(fā) 酵時(shí)間，提高制備的微生態(tài)制劑中粗多糖和乳酸菌含量，提高黃芪和乳酸菌的協(xié)同作用效 果，操作簡便，易于控制，適于工業(yè)化推廣應(yīng)用。
[0021] 本發(fā)明乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑作為畜禽飼料添加劑，利用屎腸球菌和植物 乳桿菌復(fù)配的乳酸菌種液體發(fā)酵黃芪，使黃芪和乳酸菌種產(chǎn)生協(xié)同增效作用，增加黃芪粗 多糖含量和乳酸菌活菌量，使該微生態(tài)制劑添加于畜禽飲水中，提高動物生產(chǎn)性能、消化率 和機(jī)體免疫力。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限 制。
[0023]下述實(shí)施例中植物乳桿菌和屎腸球菌均購自中國普通微生物菌種保藏中心；植物 乳桿菌的CGMCC編號為1. 557;屎腸球菌的CGMCC編號為1. 130。
[0024] 實(shí)施例1
[0025] 本實(shí)施例乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑，由以下方法制備而得，具體操作步驟 為：
[0026] 1)制備MRS培養(yǎng)基：取酪蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏8g、葡萄糖5g、乙酸鈉5g、 檸檬酸氫二銨2g、吐溫-801g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0. 2g、硫酸錳0. 05g、碳酸鈣10g，加入 1000 ml水中，各原料完全溶解后，調(diào)pH為6. 8,高壓滅菌制得MRS培養(yǎng)基，備用；
[0027] 2)制備乳酸菌種：將屎腸球菌和植物乳桿菌等比例接入步驟1)制備的MRS培養(yǎng) 基中，37°C培養(yǎng)24小時(shí)，制得濃度為I X IO9個(gè)/mL的乳酸菌種子液；
[0028] 制備黃芪水提取液：取黃芪25g加入4倍量的水，煎煮60min，收集煎煮液，再加入 3倍量的水，煎煮40min，收集煎煮液，再加入3倍量的水，煎煮30min，收集煎煮液，合并三次 收集的煎煮液，過濾，即得黃芪水提取液250mL ;
[0029] 3)發(fā)酵黃芪：取步驟2)制備的黃芪水提取液3ml和步驟1)制備的MRS培養(yǎng)基， 混合均勻后，調(diào)節(jié)pH為6. 8,高壓滅菌后，接種步驟2)制備的乳酸菌種液5ml，37°C厭氧振 搖培養(yǎng)72小時(shí)，即得；其中黃芪水提取液與MRS培養(yǎng)基的用量比例為3 :97。
[0030] 本實(shí)施例乳酸菌發(fā)酵黃芪的微生態(tài)制劑可作為畜禽飲水添加劑，乳酸菌發(fā)酵黃芪 的微生態(tài)制劑在畜禽飲水中的質(zhì)量百分含量為0