專利名稱：細胞核仁活體染色法的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬細胞核仁活體染色法，用于各醫(yī)療單位實驗室作顯微鏡下細胞核仁的觀察。
通常生物體細胞內含有細胞漿和細胞核，細胞核內含有核仁。構成細胞核的主要成份是脫氧核糖核酸(DNA)，構成核仁的主要成份是核糖核酸(RNA)。核仁的有無及其數量和形態(tài)的改變對鑒別細胞性質及成熟程度具有重要的意義。
為了能在光學顯微鏡下通過觀察核仁來診斷疾病，1924年Fenlgen等發(fā)明了DNA染色法，根據核內DNA染色結果，為陰性者屬RNA密集的地方，即判斷為核仁。1974年Cook等發(fā)明了RNA染色法，染紅色者為RNA密集的地方，即判斷為核仁。1987年Crocker創(chuàng)立了核仁組成區(qū)嗜銀蛋白(AgNOR)染色法，來判斷核仁，用于鑒別良惡性腫瘤。這些直接或間接的核仁染色法，所用試劑種類多，價貴，難購，操作繁，PH、溫度、時間等實驗條件要求高，染色結果易失敗，難在臨床普及應用。Wright和Giemsa染色法常用于觀察血細胞核和漿的形態(tài)結構。但對核仁染色效果差，難以辨認。實質上至今還沒有一種簡便易行的專門用于細胞核仁染色的良好方法。
本發(fā)明的目的是要提供一種簡便的細胞核仁活體染色法，它能從細胞內清晰地分辨出核仁，為相關疾病的診斷提供依據。
本發(fā)明的目的是這樣實現的細胞與煌焦油藍染料混合作活體染色后，不顯示細胞核及其膜的結構，核漿染色結果相似。核仁內的嗜堿性物質(RNA)被染成藍色顆粒，其顆粒又聚集成致密的點粒狀或重疊成圓形團塊狀結構，越近團塊中心的地方，藍色顆粒重疊得越密集。而在核仁以外的細胞內，藍色顆粒稀疏散在分布，或由藍絲相連。由此襯托出明顯突出、易于分辨的核仁。
本發(fā)明只需將細胞與煌焦油藍混合染色5-10min，即可制成薄片進行油鏡觀察。操作簡便，條件易于控制，且核仁明顯易辨，具有推廣應用價值。
本發(fā)明用煌焦油藍作染料，配制成10g/L煌焦油藍乙醇溶液，即取煌焦油藍1g研碎，溶于95％乙醇100ml中，過濾備用。或配制成煌焦油藍鹽水溶液，即取煌焦油藍1g，溶于109mmol枸橡酸鈉20ml中，加8.5g/L NaCl至100ml，混勻，過濾備用。也可用新亞甲藍N或天青B溶液染色。
本發(fā)明在操作過程中，先滴加煌焦油藍乙醇溶液1滴于載玻片上，自然干燥后，取被檢細胞1滴放在干燥的染料上混勻，放置5-10min(可用兩載玻片重合將細胞和染料夾在中央，以防止干燥)，然后制成薄片，在油鏡下觀察。或在新鮮組織切片上滴加煌焦油藍鹽水溶液染色10-15min，水洗，干后油鏡觀察。如附

圖1所示，細胞1經本發(fā)明的核仁活體染色后，不顯示細胞核與核膜的結構，核與漿染色結果相似，均出現了稀疏、散在分布的藍色顆粒2。藍色顆粒2呈點粒狀密集排列或重疊、溶合成團塊狀結構即為核仁3。
本發(fā)明經臨床觀察，已知對惡性腫瘤特別是血液病的診斷或鑒別診斷具有重要的意義①幫助識別細胞的成熟程度。如原始細胞有核仁，中晚幼或成熟細胞無核仁。②幫助鑒別急性白血病的類型。如原粒細胞有2-5個較小的核仁，原淋細胞有1-2個較大的核仁，原單細胞常為1個較大的核仁，原漿細胞有2-5個核仁，原巨核細胞有2-3個核仁，原紅細胞有1-2個大小不等的核仁。③判斷細胞性質。增生旺盛或惡性細胞，核漿內藍色顆粒深染、粗大、增多。
權利要求
1.一種細胞核仁活體染色法，其特征是細胞用煌焦油藍或新亞甲蘭N或天青B染料活體染色后，不顯示細胞核及其膜的結構，核與漿染色結果相似。核仁內的物質(RNA)被染成藍色顆粒，其顆粒呈點粒狀致密排列或溶合成圓形團塊狀結構，越近團塊中心的地方，藍色顆粒重疊得越密集。而在核仁以外的細胞內，藍色顆粒稀疏散在分布，或由藍絲相連成細索狀。
2.根據權利要求1所述的細胞核仁活體染色法，其特征在于作骨髓、外周血、漿膜腔積液標本中細胞核仁活體染色及新鮮組織切片中細胞核仁活體染色。
3.根據權利要求1所述的細胞核仁活體染色法，其特征在于煌焦油藍染料的配方是配制成10g/L煌焦油藍乙醇溶液，即取煌焦油藍1g研碎，溶于95％乙醇100ml中，過濾備用。或配制成煌焦油藍鹽水溶液，即取煌焦油藍1g，溶于109mmol枸橡酸鈉20ml中，加8.5g/L NaCl至100ml，混勻，過濾備用。
全文摘要
一種應用于醫(yī)療衛(wèi)生單位及教學科研單位實驗室的細胞核仁活體染色法,其特征是細胞用煌焦油藍活體染色后,不顯示細胞核及其膜的結構,核與漿染色結果相似。核仁內的物質(RNA)被染成藍色顆粒,其顆粒呈點粒狀致密排列或溶合成圓形團塊狀結構,越近團塊中心的地方,藍色顆粒重疊得越密集。而在核仁以外的細胞內,藍色顆粒稀疏散在分布,或由藍絲相連成細索狀。由此襯托出明顯易辨的核仁結構。主要用于識別細胞的成熟程度,鑒別惡性腫瘤細胞及急性白血病的類型。
文檔編號C12Q1/02GK1256317SQ9911761
公開日2000年6月14日 申請日期1999年8月3日 優(yōu)先權日1999年8月3日
發(fā)明者翁炳煥, 楊振華 申請人:翁炳煥