專利名稱：魚類的生理活化劑及養(yǎng)魚用飼料添加物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及魚類的生理活化劑及養(yǎng)魚用飼料添加物。已有技術(shù)以往，作為鰻魚、泥鰍、香魚、比目魚、真鯛、對蝦等養(yǎng)殖魚類，特別是，作為上述魚類的魚苗的飼料添加劑，是添加綠硫細菌，由此，比起不添加該綠硫細菌的飼料來，可有效地提高飼料的利用效率，這一點已被人們確認。發(fā)明欲解決的課題但是，在不加處理，直接添加綠硫細菌時，由于該細菌中的蛋白質(zhì)等，易發(fā)生腐敗，2-3個月后易導(dǎo)致品質(zhì)下降。為此，人們希望有一種可消除腐敗的原因、改善保存性能的魚類的生理活化劑及養(yǎng)魚用飼料添加物。
本發(fā)明的目的是，提供一種經(jīng)濟性好、具有優(yōu)異的保存性能的魚類的生理化性劑及養(yǎng)魚用飼料添加物，所述的魚類的生理活化性劑及養(yǎng)魚用飼料添加物具有優(yōu)異的飼料的添加效率，且容易大量培養(yǎng)。解決課題的技術(shù)方案本發(fā)明者們?yōu)榱私鉀Q上述課題，就如何消除成為腐敗原因的菌體本身作了刻意的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)比起以往所著眼的綠硫細菌的菌體來，綠硫細菌的代謝產(chǎn)物中含有更多的用于促進生長的有效成分，并發(fā)現(xiàn)一個方法，將其提取出，可由此得到具有優(yōu)異的保存性能的魚類的生理活化劑及養(yǎng)魚用飼料添加物。
本發(fā)明在于提供了以綠硫細菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物為有效成分的魚類的生理活化劑。
為得到綠硫細菌的代謝產(chǎn)物，過濾綠硫細菌的培養(yǎng)液，去除細菌，由此，可取得僅含有代謝產(chǎn)物和培養(yǎng)基成分的過濾液，再從中去除鹽類等培養(yǎng)基成分，由此可以得到代謝產(chǎn)物。去除培養(yǎng)基成分的理由可以認為是由于在如冷凍干燥等的干燥過程中，培養(yǎng)基成分大量地作為鹽出現(xiàn)，有效成分的回收率變差，又，培養(yǎng)基成分中不含有對生理活性有效的成分。作為去除培養(yǎng)基成分的方法，有，例如用反滲透膜和超濾膜僅去除低分子的培養(yǎng)基成分的方法。由于促進生長有效的代謝產(chǎn)物的成分據(jù)推斷其平均分子量在200以上，因此，該方法是有效的。然而，本發(fā)明并不局限于該方法。另外，本發(fā)明中的綠硫細菌，其培養(yǎng)期間短，在24小時之內(nèi)，即達到109/ml以上的高密度，而且，其培養(yǎng)基的成本低，容易大量生產(chǎn)，經(jīng)濟性好。在連續(xù)培養(yǎng)時，不進行滅菌及無菌操作，雜菌的繁殖也較少，穩(wěn)定性高。再有，本發(fā)明的綠硫細菌對魚類無攝食禁忌和毒性，還可提高攝食功能，具有促進魚類生長的效果。
由上述可知，綠硫細菌作為魚類的飼料添加物是最合適的，另外，當分離、提取出該細菌的代謝產(chǎn)物，作為飼料添加物添加時，也具有大致同等的效果，而且具有優(yōu)異的保存性。
通常，綠硫細菌利用硫化氫、膠體硫、硫代硫酸鹽、分子氫作為電子供體，為一類進行厭氧性的光合成的綠色光合成細菌。只有進行光合成才能生活，具有完全不需要生長因子的性質(zhì)。其細胞內(nèi)的獨立的小胞結(jié)構(gòu)內(nèi)具備光合成體系，除了綠菌屬葉綠素之外，還含有少量的菌葉綠素，在此二種色素之間顯示了能量的轉(zhuǎn)移。又在綠菌屬的場合，僅在醋酸和H2S共存的條件下發(fā)生同化。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)作為有效成分的綠硫細菌的代謝產(chǎn)物可發(fā)揮出的作用優(yōu)于菌體，由此，將綠硫細菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物用作生理活化劑，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)，綠硫細菌有助于顯著地提高魚類的攝食能力，可以提高飼料的效率。發(fā)明的實施形態(tài)本發(fā)明中的綠硫細菌可舉出Chlorobium limicola DSM245，Chlorobium vibriofome DSM260，Chlorobium phaeobacteroides DSM266，Chlorobium phaeovibrioides DSM269，Prosthecochloris aestualii DSM271，Chlorobium tepidum ATCC49652，Pelodictyon luteolum DSM273，Pelodictyon phaeum DSM728，可利用人工培養(yǎng)的。可人工培養(yǎng)的、且可大量培養(yǎng)的優(yōu)選的細菌是綠菌屬。
細菌培養(yǎng)方法依菌種、培養(yǎng)條件的不同，其培養(yǎng)溫度、pH等都有變化，但是，作為較好的培養(yǎng)例，pH在7.5-6.3，培養(yǎng)器皿表面光的照度在2000勒克斯以上即可。有時，理想的是，培養(yǎng)溫度在20-30℃，采用完全厭氧的條件，作為有機物添加約0.05％的醋酸鈉。
養(yǎng)魚用飼料有以魚粉、淀粉等為主要成分的、添加增稠劑、維生素、礦物質(zhì)等的復(fù)合飼料及如磷蝦等的活餌飼料等。放餌時，通常是作成拌餌，形成顆粒狀等投放。在將綠硫細菌的代謝產(chǎn)物及含此代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)過濾液、或菌體、或上述產(chǎn)物、菌體及過濾液的復(fù)合物的培養(yǎng)液作為養(yǎng)魚用飼料添加物添加時，可將這些物質(zhì)直接加入于拌餌，或用水稀釋后添加、混合于拌餌，顆粒飼料可浸漬培養(yǎng)液。
但是，本發(fā)明中使用的綠硫細菌及其代謝產(chǎn)物的應(yīng)用領(lǐng)域并不限于養(yǎng)魚用飼料添加劑。例如，綠硫細菌及其代謝產(chǎn)物中也含有維生素、礦物質(zhì)、氨基酸等，也可用作為營養(yǎng)輔助劑?？傊捎行У赜米黥~類的生理活化劑。
在將綠硫細菌直接以其菌體的形式添加時，其細菌添加量，最好為培養(yǎng)液干重0.1％的程度，作為培養(yǎng)液加入時，其濃縮雖有差別，最好是在1-50％的程度范圍。如該添加量少于上述范圍，則攝食的功能改善效果差，如過多，則不太可能期待得到在其之上的效果。
本發(fā)明涉及以綠硫細菌及其代謝產(chǎn)物為有效成分的魚類的生理活化劑，在將本發(fā)明的魚類生理活化劑作為養(yǎng)魚用飼料添加物添加于飼料時，可有效地發(fā)揮促進生長的作用。而且，特別顯著的是，比起其它的細菌來，其培養(yǎng)時間短，在24小時之內(nèi)即可達到109/ml以上的高密度。另外，其培養(yǎng)基的成本低，容易大量生產(chǎn)，具有優(yōu)異的經(jīng)濟性。在連續(xù)培養(yǎng)時，不進行滅菌及無菌操作，雜菌的繁殖也較少，穩(wěn)定性高。再有，本發(fā)明的綠硫細菌對魚類無攝食禁忌和毒性，攝食還有促進魚類生長的效果。然而，如果不加處理地放置，則易腐敗，即使保存在4℃以下，在2-3個月后也發(fā)生品質(zhì)劣化，所以，用0.2μm的膜濾器等過濾，僅分離出代謝產(chǎn)物，由此，可去除成為腐敗原因的菌體自身，使其長期的保存成為可能。
另外，本發(fā)明在特別需考慮保存性的場合，最好是使用以代謝產(chǎn)物為有效成分的生理活化劑及養(yǎng)魚用飼料添加物；但是在無需特別考慮保存性的用途時，所述生理化性劑及養(yǎng)魚用飼料添加物也可含有菌體，或不分離代謝產(chǎn)物，將綠硫細菌的培養(yǎng)液作為有效成分。再有，以綠硫細菌的代謝產(chǎn)物和其菌體作為有效成分時，此時利用率的提高在代謝產(chǎn)物單體以上，可以發(fā)揮生理活性的協(xié)同效果。實施例實施例1(試驗方法)在4個水槽(30×30×30cm)中分別飼養(yǎng)金魚各15尾，飼養(yǎng)至其總體重為77.0g，每日，分別以上述金魚的體重的5％的比例，對對照區(qū)的金魚僅給予金魚用飼料(ェンゼル·フロ-ト日本Pet Food株式會社)，對試驗區(qū)給予其中添加了重量占4％的綠硫細菌Chlorobium limicola培養(yǎng)過濾液(除去菌體)的飼料，按時測得其總體重。再有，作為比較例I，給予添加了重量為4％ 的Chlorobium limicola培養(yǎng)液(過濾液+菌體)的飼料。作為比較例2，給予用0.2μm的膜濾器過濾、洗凈與比較例1中所添加的相同量的培養(yǎng)液的菌體。另外，作為比較例3，同樣地僅僅添加了綠硫細菌培養(yǎng)用的培養(yǎng)基4％。
試驗區(qū)僅有過濾液對照區(qū)無添加物比較例1菌體+過濾液比較例2僅菌體比較例3僅培養(yǎng)基表1總體重(g)飼養(yǎng)期間 試驗區(qū) 對照區(qū) 比較例1 比較例2 比較例3第0日 77.077.077.0 77.0 77.0第5日 89.282.191.5 84.3 81.6第10日 100.1 88.9102.191.4 87.4第15日 110.9 98.7113.3100.796.9菌體添加區(qū)(比較例2)的成長與對照區(qū)比較稍有提高，然而，相比之下，Chlorobiumlimicola培養(yǎng)液添加區(qū)(比較例1)和Chlorobium limicola培養(yǎng)過濾液添加區(qū)(試驗區(qū))所見的成長則皆有顯著的提高。還有，培養(yǎng)基添加區(qū)(比較例3)與對照區(qū)比較，因培養(yǎng)基的成長稍微不佳，在培養(yǎng)基上未見到有效性。
表2增加體重(g)飼養(yǎng)期間試驗區(qū)對照區(qū)比較例1 比較例2 比較例3第0日 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0第5日 12.2 5.1 14.5 7.3 4.6第10日23.1 11.9 25.1 14.4 10.4第15日33.9 21.7 36.3 23.7 19.9上表是對飼養(yǎng)期間產(chǎn)生的金魚的體重增加量(n天后的總體重—初期的總體重77.0g)所作的比較，可以顯見Chlorobium limicola培養(yǎng)液添加區(qū)(比較例1)和Chlorobium limicola培養(yǎng)過濾液添加區(qū)(試驗區(qū))中的金魚的體重增加。


圖1是根據(jù)表2所作的表示金魚體重增加量(g)和試驗天數(shù)之間的關(guān)系的坐標圖。
實施例2(試驗方法)在4個水槽(75×45×45cm)中分別飼養(yǎng)平均體重各為0.2g的真鯛苗各60尾，對照區(qū)的真稠給予真稠用復(fù)合飼料，對試驗區(qū)給予其中添加了重量占2％的綠硫細菌Chlorobium limicola培養(yǎng)液(試驗區(qū)1)的飼料、添加了Chlorobium limicola培養(yǎng)過濾液(試驗區(qū)2)的飼料及添加了上述培養(yǎng)過濾液中的菌體(試驗區(qū)3)的飼料，進行為期一個月的飼養(yǎng)試驗。又，在試驗區(qū)2中，使用了經(jīng)0.2μm的膜濾器過濾的試驗區(qū)1的綠硫細菌培養(yǎng)液，殘留的菌體用蒸餾水洗凈，用于試驗區(qū)3。
對照區(qū)混合飼料試驗區(qū)1混合飼料+過濾液+菌體試驗區(qū)2混合飼料+過濾液試驗區(qū)3混合飼料+菌體表3飼養(yǎng)期間對照區(qū) 試驗區(qū)1 試驗區(qū)2 試驗區(qū)3初期體重(g)12.0 12.0 12.0 12.0試驗后體重(g) 264.0300.0289.0266.0增加體重(g)252.0288.0277.0254.0給餌量(g) 239.0239.0239.0239.0飼料效率(％) 105.4120.5115.9106.3增重率(％) 2200 2500 2408 2217存活數(shù) 54 59 56 59存活率(％) 90.0 98.3 93.3 98.3(結(jié)果)試驗結(jié)束時的成長促進效果、存活率示于表3、表中，最初體重為試驗開始時的魚的總體重(g)，試驗后體重為試驗結(jié)束時的魚的總體重(g)，體重的增加量(試驗后體重-最初的體重)(g)，給餌量為在試驗期間所給予的飼料的總重量(g)，飼料利用效率為(體重增加量/給餌量)×100％，體重增加率為(試驗后體重/最初的體重)×100％，存活率為(試驗結(jié)束時存活的魚尾數(shù)/60)×100％。
從上述結(jié)果可以看出，綠硫細菌Chlorobium limicola培養(yǎng)液(試驗區(qū)1)、Chlorobium limicola培養(yǎng)過濾液(試驗區(qū)2)的成長良好。另外，在本試驗期間，魚苗的存活率在對照區(qū)中為90.0％，而在試驗區(qū)1中為98.3％，試驗區(qū)2中為93.3％，在試驗區(qū)3中為98.3％。顯示了較高的數(shù)值，存活率得到改善。
此外，在本實施例中所使用的綠硫細菌Chlorobium limicola培養(yǎng)基的組成為
磷酸氫二鉀0.5g硫酸胺0.5g硫酸鎂0.2g氯化鈣0.05g氯化鈉0.1g碳酸氫鈉 1.0g硫化鈉1.0g硫代硫酸鈉1.0gEDTA 痕量EDTA-鐵鹽 痕量EDTA-鈷鹽 痕量硼酸 痕量硫酸銅痕量硫酸鋅痕量鉬酸鈉痕量氯化鎳痕量氯化錳痕量水1000mlpH6.8±0.2照度為5000LX，溫度為30℃，培養(yǎng)一天。
在上述的實施例中，是使用了金魚、真鯛，但是，本發(fā)明并不限于這些。總之，鑒于本發(fā)明的綠硫細菌對魚類無攝食禁忌和毒性，還可提高攝食功能，由此產(chǎn)生促進魚類生長的效果；綠硫細菌如采用一定的條件，培養(yǎng)時間短，另外，有培養(yǎng)基的成本低，容易大量生產(chǎn)，經(jīng)濟性優(yōu)異；僅以培養(yǎng)過濾液促進魚類等的生長，也可獲得充分的效果；在連續(xù)培養(yǎng)時，不進行滅菌及無菌操作，雜菌的繁殖也較少，穩(wěn)定性高等的優(yōu)點，本發(fā)明不僅適用于淡水魚，也適用于海水魚等魚類。
另外，在實施例中，作為綠硫細菌是列舉了Chlorobium limicola，但是，除此之外，Chlorobium vibriofome，Chlorobium phaeobacteroides，Chlorobiumphaeovibrioides，Prosthecochloris aestualii，Chlorobium tepidum，Pelodictyonluteolum，Pelodictyon phaeum，比起空白的對照區(qū)，同樣能使飼料利用效率得到改善，也能使重量增加率得到改善。發(fā)明效果本發(fā)明為以綠硫細菌的代謝產(chǎn)物為有效成分的魚類的生理活化劑，在將本發(fā)明的魚類生理活化劑作為養(yǎng)魚用飼料添加物添加于飼料時，比起僅在飼料中添加綠硫細菌的菌體的飼料來，其保存性特別優(yōu)異，可有效地發(fā)揮促進生長的作用。而且，綠硫細菌的自身的培養(yǎng)時間特別短，可在短時間內(nèi)高密度地培養(yǎng)。另外，其培養(yǎng)基的成本低，容極其適于大批量的生產(chǎn)。再有，本發(fā)明的綠硫細菌對魚類無攝食禁忌和毒性，飼料的添加效率特別顯著。附圖的簡單說明圖1所示為根據(jù)飼料添加物的有無等的不同，相對于自試驗開始時起的天數(shù)的體重增加量的變化圖表。
權(quán)利要求
1.一種魚類的生理活化劑，其特征在于，所述的魚類生理活化劑以綠硫細菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物為有效成分。
2.如權(quán)利要求1所述的魚類生理活化劑，其特征在于，所述的魚類生理活化劑以綠硫細菌的培養(yǎng)液為有效成分。
3.如權(quán)利要求1或2所述的魚類生理活化劑，其特征在于，所述的綠硫細菌屬于綠菌屬(Chlorobium)。
4.如權(quán)利要求1，2或3中之任一項所述的魚類生理活化劑，其特征在于，所述的綠硫細菌為選自下述細菌的至少一種Chlorobium limicola，Chlorobium vibriofome，Chlorobium phaeobacteroides，Chlorobium phaeovibrioides，Prosthecochloris aestualii，Chlorobium tepidum，Pelodictyon luteoum，Pelodictyon phaeum。
5.一種養(yǎng)魚用飼料添加物，其特征在于，所述的飼料添加物含有權(quán)利要求1，2，3或4中之任一項所述的生理活化劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種經(jīng)濟性好、具有優(yōu)異的保存性能的、以綠硫細菌的代謝產(chǎn)物為有效成分的魚類的生理活化劑及養(yǎng)魚用飼料添加物，所述的魚類的生理活化劑及養(yǎng)魚用飼料添加物具有優(yōu)異的飼料的添加效率，且容易大量培養(yǎng)。
文檔編號C12N1/20GK1150524SQ96108248
公開日1997年5月28日 申請日期1996年9月13日 優(yōu)先權(quán)日1995年9月18日
發(fā)明者松浦明久 申請人:阿拉亞株式會社