專利名稱：1-n-乙基慶大霉素衍生物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗生素領(lǐng)域。
本發(fā)明公開了新的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物及其制備方法。
慶大霉素(Gentamicin，下文簡(jiǎn)稱(GM)是美國(guó)先令公司M.J.Weisten等人于1963年首先發(fā)現(xiàn)，并于1966年上市的氨基糖甙類抗生素。
慶大霉素是一族多組份的氨基糖甙類抗生素，其主要成分為慶大霉素C1(GMC1)，慶大霉素C2(GMC2)和慶大霉素C1a(GMC1a)，見下式 ＊慶大霉素國(guó)外稱為Gentamicin，音譯為艮他霉素。
R1R2Gentamicin C2H CH3C1CH3CH3C1aH H
慶大霉素三個(gè)主要成分的含量多少與它的質(zhì)量和療效有密切的關(guān)系，經(jīng)國(guó)內(nèi)外有關(guān)專家研究證實(shí)GMC1組份毒性較低，療效較好。中國(guó)科學(xué)院楊蘊(yùn)劉等人曾于1982年在《抗生素》7(1)12～15報(bào)道GMC1，GMC2，GMC1a單組份對(duì)74株臨床分離到綠膿桿菌的最低抑菌濃度(MIC)及各組份的LD50值，認(rèn)為GMC1a組份較好。
近十多年來(lái)，國(guó)際上已有十多個(gè)國(guó)家生產(chǎn)慶大霉素，并廣泛被人們使用，但是，伴之而來(lái)的耳、腎毒性副作用在醫(yī)療上受到了一定的限制。因此，尋求耳、腎毒性低的氨基糖甙類抗生素引起人們的關(guān)注。
本發(fā)明的目的在于開發(fā)一類新的半合成抗生素，降低毒性、提高抗菌效力，尤其能對(duì)GM耐藥菌株有效。
本發(fā)明人經(jīng)過(guò)不斷研究，半合成一類新的1-N-乙基-慶大霉素衍生物。
本發(fā)明提供了以下式表示的一類1-N-乙基-慶大霉素衍生物。
注[1]表示1-N-乙基慶大霉素C1，[2]表示1-N-乙基慶大霉素C2，[3]表示1-N-乙基慶大霉素C1a(愛大霉素)，[4]表示1-N乙基慶大霉素C2b(乙基小諾霉素)。
在上述中，1-N-乙基慶大霉素C1a又命名為愛大霉素(其代號(hào)為8907)。
其拉丁名為1-N-Ethagentamycin C1a分子式C12H43N5O7分子量477英文化學(xué)名O-2-amino-2，3，4，6-tertradeoxy-6-(amino)-2-D-erythro-hexopyranosyl-(1→4)-O-[3-deoxy-4-C-methyl-3-(methylamino)-β-L-arabinopy-ranosyl-(1→6)]-2-deoxy-N-ethyl-L-streptamine hemipenta sulfate經(jīng)儀器分析測(cè)定如下一.紅外吸收光譜見附

圖1。
儀器399-B(V.S.PECO)。
條件KBr壓片測(cè)試測(cè)定數(shù)據(jù)吸收峰 振動(dòng)類型 基團(tuán) 吸收峰強(qiáng)度cm-13450-3000 υO(shè)-H-OH SυN-H-NH2920 υC-HC-H S1580 υH-N-H-NH2S1470-1440 δCH2-CH2- SδCH3-CH3-1370-1300 δC-HC-H S1100 υC-O-CC-O-C m1050-1010 υC-CC-C和五碳環(huán)狀醚 S
根據(jù)89-07的IR解析表示該分子內(nèi)有-NH，-NH2，-OH，不對(duì)稱-CH2-，-CH3和C-O-C等功能基團(tuán)，系典型氨基糖苷類抗生素的紅外光譜。
二.紫外吸收光譜(見附圖2)儀器島津UV-240紫外分光光度計(jì)。
溶劑H2O測(cè)定數(shù)據(jù)在200nm-400nm均無(wú)吸收峰解析說(shuō)明具有氨基糖苷類抗生素均無(wú)紫外吸收峰的特性。
三.1H核磁共振(見附圖3)儀器AM500核磁共振儀(BRURER公司)溶劑D2O，內(nèi)標(biāo)TMS，1H共振頻率為500.13測(cè)定數(shù)據(jù)質(zhì)子序號(hào) 化學(xué)位移(ppm) 多重性 質(zhì)子數(shù) 相應(yīng)質(zhì)子89-07 文獻(xiàn)記載a 1.09 1.06 三重峰 3 -C-CH3b 1.20 1.19 單峰 3 -C-CH3c 2.51 2.51 單峰 3 -N-CH3d 4.98 4.97 二重峰 1 -He 5.22 5.16 二重峰 1 -H解析a.δ1.07為一個(gè)三重，峰偶合常數(shù)J＝7.0Hz為2-脫氧鏈霉胺1-N-CH2CH3中-CH3(3H J＝7.0Hz-N-C-CH3);
b.δ1.20為一單峰，相當(dāng)于三個(gè)質(zhì)子，為加拉糖4″位上4″-CH3(3H，S，-C-CH3)c.δ2.51為一單峰，相當(dāng)于3個(gè)質(zhì)子數(shù)，為加拉糖3″-N-CH3(3H，S，-N-CH3)d.δ4.97為一雙重峰，偶合常數(shù)J＝4.0Hz，為加拉糖1″位H(H，d，J＝4.0Hz)e.δ5.22為一雙重峰，偶合常數(shù)J＝3.5Hz為絳紅糖1’位H(H，d，J＝3.5Hz)從1H-NMR得知分子中有1-N-CH2CH3四.13CNMR核磁共振譜(見附圖4)儀器AM-500核磁共振儀溶劑D2O，TMS為內(nèi)標(biāo)(13C共振頻率為125.76)測(cè)定數(shù)據(jù)Cabor GMC1m文獻(xiàn)值愛大霉素(測(cè)定值)(序號(hào)) (ppm) (ppm)1 51.7 59.602 36.7 35.043 50.6 52.174 88.3 89.085 75.4 77.576 87.8 88.461-N-CH2- / 47.021-N-CH2-Me / 16.431' 102.2 103.792' 51.0 52.543' 27.0 30.064' 28.5 28.045' 71.5 72.496' 46.1 43.01
(接上頁(yè))Cabor GMC1m文獻(xiàn)值愛大霉素(測(cè)定值)1" 101.3 103.342" 70.2 72.103" 64.4 66.284" 73.3 75.025" 68.7 70.713"-N-Me 38.0 39.524"-C-Me 23.0 24.44解析圖上有21個(gè)峰，對(duì)應(yīng)于分子中的21個(gè)碳，說(shuō)明分子無(wú)對(duì)稱性。
δ47.02為1-N-CH2CH3中亞甲基上的C。
δ16.43為1-N-CH2CH3中甲基上的C。
故從13C-NMR譜得知89-07的化學(xué)結(jié)構(gòu)為慶大霉素C1a在二脫氧鏈霉胺1-N上接一個(gè)乙基而成。
五.質(zhì)譜(見附圖5)儀器ZAB-2F型質(zhì)譜儀條件EI源測(cè)定數(shù)據(jù) 解析質(zhì)譜測(cè)得分子離子峰+1(M+1)+為478即其分子量為477與C21H43N5O7分子量相符，其余各m/e均與文獻(xiàn)值完全一致。
綜合解析1.質(zhì)譜測(cè)得其分子離子峰m/e為477與C12H43N5O7相符。
2.質(zhì)譜測(cè)得m/e317和m/e258系1-N-乙基慶大霉素C1a裂解出來(lái)的碎片峰;而沒有3-N-乙基慶大霉素C1a裂解出來(lái)的碎片峰(m/e 289和m/e286)。
3.在核磁共振圖譜中(1H，15C，1H-1H，1H-15C-NMR)均證實(shí)在二脫氧鏈霉胺1-N位上確實(shí)接上了一個(gè)乙基。
4.紅外光譜與紫外光譜均證實(shí)了其具有氨基糖苷類抗生素的基本特性。
綜上所述慶大霉素C1a分子中二脫氧鏈霉胺(2-DOS)1-N位被乙基取代與愛大霉素結(jié)構(gòu)相符。
本發(fā)明公開的1-N-乙基慶大霉素衍生物如愛大霉素(以8907表示)經(jīng)體外抗菌作用研究，結(jié)果表明它對(duì)臨床分離的1106株常見致病菌抗菌活性，殺菌作用均與慶大霉素相似或優(yōu)于慶大霉素;對(duì)耐慶大霉素，耐小諾霉素和耐頭孢唑啉耐藥菌株有半數(shù)或半數(shù)以上的菌株的最低抑菌濃度(MIC)值仍在其安全有效的血藥濃度范圍內(nèi)，用同等劑量或參考乙基紫蘇霉素，經(jīng)過(guò)劑量與療效及毒性相關(guān)研究，若能獲得類似乙基紫蘇霉素的結(jié)果，因而能適當(dāng)提高臨床劑量，適當(dāng)提高臨床劑量則對(duì)耐藥菌的感染療效可能會(huì)優(yōu)于慶大霉素與小諾霉素，特別是53株高度耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)有66%的菌株可被≤8mg/1的濃度進(jìn)行抑制。因此，本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物對(duì)提高對(duì)甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌的療效發(fā)揮積極作用(見表1-8)。
本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物經(jīng)對(duì)小鼠體內(nèi)藥效測(cè)定表明對(duì)小鼠體內(nèi)的細(xì)菌感染具有良好的療效。它的體內(nèi)保護(hù)作用與丁胺卡那霉素(AMK)相近，但優(yōu)于慶大霉素，妥布霉素(Tobramycin)，低于1-N-乙基紫蘇霉素。它尤其對(duì)慶大霉素耐藥菌株感染小鼠的體內(nèi)療效比丁胺卡那霉素、慶大霉素和妥布霉素強(qiáng)1-4倍(見表9)。
本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物對(duì)所試各菌株感染小鼠體內(nèi)療效重復(fù)性好，而且對(duì)存活小鼠作心臟血培養(yǎng)，轉(zhuǎn)陰率較高，說(shuō)明其體內(nèi)抑菌、殺菌活力很強(qiáng)，并與體外抑菌活力基本一致。
(體內(nèi)試驗(yàn)表)見表10-15。
表1、89-07和其它抗菌藥物對(duì)1108株臨床分離致病菌抗菌活性的比較菌種抗菌藥物 MIC50MIC90Mode MIC MICrange(No.)綠膿桿菌 慶大霉素 4 >256 2 0.125->6(204) 89-07 8 >256 8 0.125->6卡那霉素 64 >256 64 0.5->6丁胺卡那霉素 4 32 2 0.125->6妥布霉素 1 256 1 0.125->6乙基紫蘇霉素 8 >256 4 0.062->6小諾霉素 4 >256 2 0.125->6氧哌嗪青霉素 4 256 4 0.5->6頭孢唑啉 >256 >256 >256 >256環(huán)丙氟沙星 0.25 2 0.25 0.062-256陰溝腸桿菌 慶大霉素 4 256 0.25 0.125->6(29) 89-07 2 64 0.25 0.25->6卡那霉素 16 >256 1 0.5->6丁胺卡那霉素 0.5 32 0.5 0.5->6妥布霉素 8 32 0.5 0.25->6乙基紫蘇霉素 0.25 32 0.25 0.25->6小諾霉素 4 >256 0.25 0.25->6氧哌嗪青霉素 128 256 256 2->6頭孢唑啉 >256 >256 >256 256->6環(huán)丙氟沙星 0.062 1 0.031 <0.015-1產(chǎn)氣腸桿菌 慶大霉素 0.25 32 0.25 0.125-128(27) 89-07 0.25 16 0.125 0.062-32卡那霉素 1 32 1 0.25->6丁胺卡那霉素 0.5 1 0.5 0.062-16妥布霉素 0.5 1 0.25 0.125-16乙基紫蘇霉素 0.25 2 0.25 0.062-8小諾霉素 0.25 64 0.25 0.125-128氧哌嗪青霉素 4 256 2 0.5->6頭孢唑啉 32 >256 2 0.5->6環(huán)丙氟沙星 <0.015 0.062 <0.015 <0.015-2大腸桿菌 慶大霉素 0.5 32 0.25 0.062->6(146) 89-07 0.25 16 0.25 0.125-64卡那霉素 2 256 1 0.25->6丁胺卡那霉素 0.5 1 0.5 0.125-32妥布霉素 0.5 8 0.5 0.062->6乙基紫蘇霉素 0.5 8 0.25 0.062-64小諾霉素 0.5 64 0.125 0.125->6氧哌嗪青霉素 8 32 8 0.062->6頭孢唑啉 2 4 2 0.25->6環(huán)丙氟沙星 <0.015 1 <0.015 <0.015-64
表1、89-07和其它抗菌藥物對(duì)1108株臨床分離致病菌抗菌活性的比較菌種抗菌藥物 MIC50MIC90Mode MIC MICrange(No.)奇異變形桿菌 慶大霉素 0.5 16 0.5 0.25-256(60) 89-07 0.5 2 0.5 0.125-128卡那霉素 1 256 1 0.5->6丁胺卡那霉素 1 2 1 0.25-64妥布霉素 0.5 8 0.5 0.25-64乙基紫蘇霉素 0.5 2 0.5 0.25-128小諾霉素 0.5 16 0.5 0.125-256氧哌嗪青霉素 0.5 4 0.5 0.25->6頭孢唑啉 4 128 4 2->6環(huán)丙氟沙星 0.062 0.125 0.062 0.031-8流感嗜血桿菌 慶大霉素 0.125 8 0.062 0.031-8(8) 89-07 0.031 4 0.031 0.031-4卡那霉素 0.5 64 0.25 0.125-64丁胺卡那霉素 0.25 64 0.125 0.062-64妥布霉素 0.125 16 0.062 0.062-16乙基紫蘇霉素 0.125 2 0.031 0.031-2小諾霉素 0.125 8 0.062 0.031-8氧哌嗪青霉素 2 32 0.125 0.125-3頭孢唑啉 0.25 >256 0.125 0.125->6環(huán)丙氟沙星 0.25 4 0.25 0.031-4綠色鏈球菌 慶大霉素 1 4 1 0.125-4(27) 89-07 1 4 2 0.062-4卡那霉素 8 16 8 0.5-32丁胺卡那霉素 8 32 4 0.5-64妥布霉素 4 8 4 0.25-16乙基紫蘇霉素 1 2 1 0.125-4小諾霉素 2 4 4 0.125-4氧哌嗪青霉素 0.25 16 0.5 0.031-16頭孢唑啉 0.5 16 0.125 0.031-64環(huán)丙氟沙星 2 4 2 0.062-32肺炎鏈球菌 慶大霉素 0.25 4 0.062 0.062->6(14) 89-07 0.25 4 0.031 0.031-16卡那霉素 4 64 4 0.125->6丁胺卡那霉素 8 16 16 0.031->6妥布霉素 2 32 0.125 0.062->6乙基紫蘇霉素 1 16 1 0.062-64小諾霉素 0.5 4 2 0.062->6氧哌嗪青霉素 0.5 8 0.5 0.25-16頭孢唑啉 0.5 256 0.5 0.125->6環(huán)丙氟沙星 0.5 1 0.5 0.125-2表皮葡萄球菌 慶大霉素 0.062 2 0.062 0.062-4(27) 89-07 0.031 1 0.031 0.031-16卡那霉素 0.5 128 0.125 0.125-128丁胺卡那霉素 0.25 0.5 0.25 0.062-2妥布霉素 0.062 2 0.062 0.062-16乙基紫蘇霉素 0.062 0.5 0.062 0.031-128小諾霉素 0.062 32 0.062 0.062-64氧哌嗪青霉素 1 16 0.125 0.125-256頭孢唑啉 0.5 32 1 0.125-32環(huán)丙氟沙星 0.25 1 0.125 0.062-2
(續(xù))菌種抗菌藥物 MIC50MIC90Mode MIC MICrange(No.)金黃色葡萄球菌 慶大霉素 4 32 16 0.031->689-07 1 16 0.062 0.031-128(190) 卡那霉素 128 >256 >256 0.25->6丁胺卡那霉素 1 8 0.25 0.125-128妥布霉素 4 32 0.125 0.125->6乙基紫蘇霉素 1 4 1 0.031-32小諾霉素 8 256 0.062 0.002->6氧哌嗪青霉素 8 256 4 0.25->6頭孢唑啉 1 128 1 0.125->6環(huán)丙氟沙星 0.5 2 0.5 0.031-64糞鏈球菌 慶大霉素 32 >256 1 0.25->689-07 32 256 1 0.5-256(33) 卡那霉素 256 >256 256 4->6丁胺卡那霉素 32 128 16 2-256妥布霉素 128 256 256 1-256乙基紫蘇霉素 4 32 1 0.5-128小諾霉素 2 256 2 0.5-256氧哌嗪青霉素 2 2 2 0.062-128頭孢唑啉 16 32 16 0.062->6環(huán)丙氟沙星 1 1 1 0.5-2釀膿鏈球菌 慶大霉素 1 128 1 0.25->689-07 1 32 1 0.25-128(27) 卡那霉素 16 >256 16 4->6丁胺卡那霉素 16 16 16 4-32妥布霉素 4 64 1 1-128乙基紫蘇霉素 1 8 1 0.25-32小諾霉素 0.5 256 0.5 0.25-256氧哌嗪青霉素 <0.015 1 <0.015 <0.015-4頭孢唑啉 0.125 8 0.125 0.031-16環(huán)丙氟沙星 0.5 1 0.5 0.125-8甲氧苯青霉素 >256 >256 >256 64->6耐甲氧苯青霉素 苯唑青霉素 >256 >256 >256 16->6金黃色葡萄球菌 頭孢唑啉 128 256 128 16->6慶大霉素 32 64 16 8->6(53) 89-07 8 32 8 0.5-128
(續(xù))菌種抗菌藥物 MIC50MIC90Mode MIC MICrange(No.)克雷伯氏肺炎桿菌 慶大霉素 0.125 32 0.125 0.002-25689-07 0.125 8 0.125 0.002-128(115) 卡那霉素 0.5 128 0.5 0.25-256丁胺卡那霉素 0.5 2 0.5 0.125-128妥布霉素 0.25 8 0.25 0.062->6乙基紫蘇霉素 0.25 4 0.125 0.062-128小諾霉素 0.125 16 0.125 0.062->6氧哌嗪青霉素 4 128 4 1->6頭孢唑啉 2 32 2 1->6環(huán)丙氟沙星 0.031 0.25 0.031 <0.015-8沙門氏菌屬 慶大霉素 4 32 4 0.25-12889-07 0.5 8 0.5 0.062-32(58) 卡那霉素 32 >256 32 0.5->6丁胺卡那霉素 1 1 1 0.25-16妥布霉素 8 16 8 0.125-16乙基紫蘇霉素 0.25 4 0.25 0.125-16小諾霉素 8 64 16 0.062-128氧哌嗪青霉素 128 256 256 1-256頭孢唑啉 8 64 64 1-128環(huán)丙氟沙星 0.25 0.5 0.25 <0.015-2痢疾志賀氏菌屬 慶大霉素 0.25 0.5 0.25 0.25-6489-07 0.25 0.5 0.25 0.125-64(60) 卡那霉素 2 2 1 1->6丁胺卡那霉素 1 2 1 0.5-16妥布霉素 0.5 1 0.5 0.25-32乙基紫蘇霉素 0.25 1 0.125 0.125-64小諾霉素 0.5 2 0.5 0.25-256氧哌嗪青霉素 0.5 16 0.125 0.062-32頭孢唑啉 2 4 1 1-32環(huán)丙氟沙星 <0.015 0.062 0.015 <0.015-0.5不動(dòng)桿菌屬 慶大霉素 0.5 >256 0.25 0.125->689-07 0.5 256 0.25 0.125-256(27) 卡那霉素 1 >256 0.5 0.25->6丁胺卡那霉素 1 64 0.5 0.25-256妥布霉素 0.5 256 0.5 0.062-256乙基紫蘇霉素 1 256 0.5 0.125-256小諾霉素 0.5 256 256 0.125-512氧哌嗪青霉素 32 256 256 4-256頭孢唑啉 256 >256 >256 8-256環(huán)丙氟沙星 0.25 2 0.25 0.062-4枸櫞酸:桿菌屬 慶大霉素 0.25 64 0.25 0.125->6(30) 89-07 0.25 16 0.25 0.125-128卡那霉素 1 64 1 0.5->6丁胺卡那霉素 0.5 1 0.5 0.25-32妥布霉素 0.5 8 0.5 0.125->6乙基紫蘇霉素 0.25 8 0.25 0.125->6小諾霉素 0.25 128 0.25 0.125-256氧哌嗪青霉素 2 64 2 2-128頭孢唑啉 16 >256 >256 2->6環(huán)丙氟沙星 0.031 0.125 <0.015 <0.015-2沙雷氏桿菌屬 慶大霉素 0.25 128 0.25 0.125->6(24) 89-07 0.5 32 0.5 0.062-256卡那霉素 1 16 1 0.125->6丁胺卡那霉素 0.5 2 0.5 0.062-64妥布霉素 1 32 1 0.062-256乙基紫蘇霉素 0.5 4 1 0.062-256小諾霉素 0.25 256 0.25 0.125-256氧哌嗪青霉素 2 128 2 0.25->6頭孢唑啉 >256 >256 >256 >256環(huán)丙氟沙星 0.062 0.25 0.062 <0.015-1
表2.89-07與慶大霉素的HIC和MBC作用比較89-07 慶大霉素菌種 株數(shù)MIC50MBC50MIC MBC MIC50MBC50MIC MBC 綠膿桿菌 20 1 2 4 8 2 2 4 8金黃色葡萄球菌 31 0.062 0.5 0.25 2 0.125 0.5 0.5 2大腸桿菌 20 0.125 0.25 0.5 1 0.125 0.5 0.25 1克雷伯氏肺炎桿菌 20 0.125 0.25 0.125 0.5 0.125 0.25 0.25 1志賀氏菌屬 10 0.062 0.5 0.125 1 0.125 0.25 0.25 1表2.89-07與慶大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素的MBC作用比較 續(xù)89-07 慶大霉素 卡那霉素 丁胺卡那霉素菌種 株數(shù)MBC MBCrangeMBC MBCrangeMBC MBCrangeMBC MBCrange綠膿桿菌 20 8 0.25-16 8 0.5-16 128 2-256 64 1-64金黃色葡萄球菌312 0.062-4 2 0.062-4 64 0.125-128 320.125-128大腸桿菌 20 1 0.125-8 1 0.125-8 8 0.5-128 2 0.25-8克雷伯氏肺炎桿菌 20 0.5 0.062-1 1 0.062-2 4 0.25-4 1 0.125-2志賀氏菌屬 10 1 0.125-1 1 0.125-1 2 0.5-4 0.5 0.25-1
表3.細(xì)菌接種量對(duì)89-07最低抑菌濃度的影響89-07菌種 MICmg/l 103104105106107克雷伯氏肺炎桿菌 MIC900.125 0.125 0.125 0.125 0.25大腸桿菌 MIC900.5 0.5 1 2 2綠膿桿菌 MIC902 2 4 4 4陰溝腸桿菌 MIC900.031 0.25 0.25 0.25 0.5志賀氏菌屬 MIC900.031 0.062 0.25 0.25 1金黃色葡萄球菌 MIC900.25 0.25 0.25 0.5 0.5表4.PH值對(duì)89-07最低抑菌濃度的影響菌種 MIC 89-07mg/l PH5.0PH0.5PH7.0PH7.5PH7.8-8.0PH8.5PH9.0綠膿桿菌 MIC9064 32 16 8 4 8 無(wú)克雷伯氏 MIC9064 4 0.5 0.25 0.125 0.25 細(xì)肺炎桿菌 菌大腸桿菌 MIC9064 4 1 0.5 0.25 0.25 生長(zhǎng)表5.89-07對(duì)53株MRSA菌株MIC值的比較Methicillin Oxacillin Cefazolin Gentamicin 89-071 91-131 128 128 128 32 82 106 >256 >256 128 32 163 528 >256 >256 128 32 84 281 >256 >256 128 16 45 1124 128 >256 64 32 86 210 32 32 32 >256 327 1044 256 256 64 64 18 480 >256 >256 128 32 49 525 32 32 32 16 810 1057 128 256 32 128 1611 1140 256 128 32 16 412 126 128 128 32 32 813 134 64 64 16 32 1614 57 128 128 32 32 815 912 128 128 32 32 1616 624 >256 >256 32 >256 3217 130 128 128 64 >256 6418 408 256 >256 64 32 219 124 128 128 64 32 820 351 128 128 64 8 421 58 256 128 128 32 822 259 >256 >256 256 32 823 92-20 >256 >256 >256 16 824 22 64 32 64 32 1625 24 >256 >256 >256 16 226 107 >256 256 128 16 6427 85 >256 >256 256 16 1628 90 64 16 32 32 829 50 >256 >256 128 32 1630 92-49 >256 128 128 32 3231 70 >256 >256 128 16 432 73 >256 >256 256 16 433 75 >256 256 256 16 834 40 >256 >256 128 32 1635 43 >256 >256 256 16 836 44 >256 >256 256 16 837 45 >256 >256 128 16 838 91 >256 >256 256 16 439 89 >256 >256 128 16 440 108 >256 >256 128 64 1641 79 >256 >256 128 16 142 19 64 16 >256 32 1643 93 >256 >256 256 16 444 116 >256 >256 256 32 1645 77 >256 >256 256 >256 12846 80 >256 >256 256 16 847 84 >256 >256 128 >256 3248 111 >256 >256 256 16 849 110 >256 >256 256 16 850 334 >256 >256 64 16 451 55 >256 >256 32 16 152 347 64 256 128 16 853 495 64 256 128 64 0.5
表6.89-07和其它九種抗菌物藥對(duì)慶大霉素耐藥菌的作用比較菌種抗菌藥物 MIC50MIC90Mode MIC MICrange(No.)金黃色葡萄球菌 慶大霉素 16 64 16 8→256(92) 89-07 8 32 8 1-128卡那霉素 >256 >256 >256 16→256丁胺卡那霉素 4 32 4 0.5-128妥布霉素 16 128 16 1→256乙基紫蘇霉素 2 8 2 0.25-32小諾霉素 128 >256 64 8→256氧哌嗪青霉素 32 256 256 2→256頭孢唑啉 32 128 32 0.5→256環(huán)丙氟沙星 0.5 8 0.25 0.25-64綠膿桿菌 慶大霉素 256 >256 >256 8→256(78) 89-07 64 >256 >256 1→256卡那霉素 256 >256 >256 2→256丁胺卡那霉素 8 64 4 0.25→256妥布霉素 64 >256 >256 1→256乙基紫蘇霉素 32 >256 >256 0.125→256小諾霉素 >256 >256 >256 4→256氧哌嗪青霉素 16 >256 4 2→256頭孢唑啉 >256 >256 >256 >256環(huán)丙氟沙星 0.5 4 0.5 0.125-256大腸桿菌 慶大霉素 32 64 16 8→256(54) 89-07 8 32 16 0.25-64卡那霉素 4 >256 4 2→256丁胺卡那霉素 0.5 1 0.5 0.25-32妥布霉素 8 32 8 0.5→256乙基紫蘇霉素 4 8 4 1-16小諾霉素 64 256 64 8→256氧哌嗪青霉素 16 32 16 1→256頭孢唑啉 2 16 2 1→256環(huán)丙氟沙星 <0.015 32 <0.015 <0.015-64克雷伯氏肺炎菌 慶大霉素 64 256 32 16-256(14) 89-07 16 128 16 0.5-128卡那霉素 >256 >256 >256 8→256丁胺卡那霉素 4 128 32 0.5-128妥布霉素 64 >256 64 4→256乙基紫蘇霉素 16 128 128 1-128小諾霉素 128 >256 >256 1→256氧哌嗪青霉素 128 >256 >256 1→256頭孢唑啉 16 >256 >256 2→256環(huán)丙氟沙星 0.125 4 1 <0.015-8
表7.89-07與其它九種抗菌藥物對(duì)頭孢唑啉耐藥菌的作用比較菌種抗菌藥物 MIC50MIC90Mode MIC MICrange(No.)金黃色葡萄球菌 頭孢唑啉 64 256 32 32->6(55) 89-07 8 32 8 0.5-128慶大霉素 16 64 16 0.5->6卡那霉素 >256 >256 >256 1->6丁胺卡那霉素 4 32 4 0.5-128妥布霉素 16 256 16 1->6乙基紫蘇霉素 2 8 2 0.25-32小諾霉素 128 >256 128 2->6氧哌嗪青霉素 256 >256 256 0.25->6環(huán)丙氟沙星 1 16 0.5 0.25-64綠膿桿菌 頭孢唑啉 >256 >256 >256 >256(204) 89-07 8 >256 8 0.125->6慶大霉素 4 >256 4 4->6卡那霉素 64 >256 32 0.5->6丁胺卡那霉素 4 32 2 0.125->6妥布霉素 1 256 1 0.125->6乙基紫蘇霉素 8 >256 4 0.062->6小諾霉素 4 >256 2 0.125->6氧哌嗪青霉素 4 >256 4 0.25->6環(huán)丙氟沙星 0.25 2 0.25 0.062-256大腸桿菌 頭孢唑啉 32 >256 32 32->6(6) 89-07 16 64 16 1-64慶大霉素 16 >256 16 0.125->6卡那霉素 128 >256 128 4->6丁胺卡那霉素 0.5 32 0.5 0.5-32妥布霉素 8 >256 8 2->6乙基紫蘇霉素 4 8 8 0.5-8小諾霉素 64 256 256 1-256氧哌嗪青霉素 32 >256 32 8->6環(huán)丙氟沙星 0.125 4 0.125 0.015-4克雷伯氏肺炎桿菌 頭孢唑啉 >256 >256 >256 32->6(15) 89-07 0.5 128 0.125 0.125-128慶大霉素 2 256 0.125 0.125-256卡那霉素 16 >256 >256 0.5->6丁胺卡那霉素 4 128 32 0.5-128妥布霉素 8 >256 0.25 0.25->6乙基紫蘇霉素 1 128 0.125 0.125-128小諾霉素 1 >256 0.125 0.125->6氧哌嗪青霉素 8 >256 1 1->6環(huán)丙氟沙星 0.25 4 0.015 0.015-4
表8.89-07與其它九種抗菌藥物對(duì)頭胞唑啉耐藥的作用比較菌種抗菌藥物 MIC50MIC90Mode MIC MICrange(No.)金黃色葡萄球菌 頭孢唑啉 64 256 32 32→256(55) 89-07 8 32 8 0.5-128慶大霉素 16 64 16 0.5→256卡那霉素 >256 >256 >256 >256丁胺卡那霉素 4 32 4 0.5-128妥布霉素 16 256 16 1→256乙基紫蘇霉素 2 8 2 0.25-32小諾霉素 128 >256 128 2→256氧哌嗪青霉素 256 >256 256 0.25→256環(huán)丙氟沙星 1 16 0.5 0.25-64綠膿桿菌 頭孢唑啉 >256 >256 >256 >256(204) 89-07 8 >256 8 0.125→256慶大霉素 4 >256 4 4→256卡那霉素 64 >256 32 0.5→256丁胺卡那霉素 4 32 2 0.125→256妥布霉素 1 256 1 0.125→256乙基紫蘇霉素 8 >256 4 0.062→256小諾霉素 4 >256 2 0.125→256氧哌嗪青霉素 4 >256 4 0.25→256環(huán)丙氟沙星 0.25 2 0.25 0.062-256大腸桿菌 頭孢唑啉 32 >256 32 32→256(6) 89-07 16 64 16 1-64慶大霉素 16 >256 16 0.125→256卡那霉素 128 >256 128 4→256丁胺卡那霉素 0.5 32 0.5 0.5-32妥布霉素 8 >256 8 2→256乙基紫蘇霉素 4 8 8 0.5-8小諾霉素 64 256 256 1-256氧哌嗪青霉素 32 >256 32 8→256環(huán)丙氟沙星 0.125 4 0.125 0.015-4克雷伯氏肺炎桿菌 頭孢唑啉 >256 >256 >256 32→256(15) 89-07 0.5 128 0.125 0.125-128慶大霉素 2 256 0.125 0.125-256卡那霉素 16 >256 >256 0.5→256丁胺卡那霉素 4 128 32 0.5-128妥布霉素 8 >256 0.25 0.25→256乙基紫蘇霉素 1 128 0.125 0.125-128小諾霉素 1 >256 0.125 0.125→256氧哌嗪青霉素 8 >256 1 1→256環(huán)丙氟沙星 0.25 4 0.015 0.015-4






＊皮下給藥為感染后即刻與6小時(shí)各給藥一次。
ED50值以單次給藥劑量計(jì)算。
本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物動(dòng)物體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布研究結(jié)果如下1.狗分別肌注89-07 1.5mg/Kg、3.0mg/Kg和4.5mg/Kg均能很快吸收;達(dá)峰時(shí)間分別為0.60±0.08hr，0.65±0.23hr和0.56±0.20hr;峰濃度Cmax分別為5.39±0.99，8.26±2.10和17.54±2.68mg/L，均無(wú)吸收遲滯時(shí)間，其血藥濃度-時(shí)間曲線均附合一室模型。三種劑量的藥時(shí)曲線下面積AUC分別12.32±3.47，22.70±4.68和41.23±8.28mg/Lh。消除半衰期分別為1.08±0.43，1.40±0.25和1.20±0.26hr。上述結(jié)果和GM藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)相近。
2.比較了89-07與GM在狗肌注3mg/kg及大鼠肌注2mg/kg時(shí)藥代動(dòng)力學(xué)，結(jié)果表明上述兩藥在動(dòng)物體內(nèi)動(dòng)態(tài)變化規(guī)律相似，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)相近，其血藥濃度-時(shí)間曲線均符合一室模型，詳見下表。

由以上藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)表明，89-07吸收迅速，消除半衰期較短，且血藥濃度隨劑量增加而增高;此項(xiàng)研究結(jié)果對(duì)今后Ⅰ期臨床試驗(yàn)的進(jìn)行提供了理論依據(jù)。
3.89-07和GM的排泄實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(1)狗分別肌注89-07和GM 3mg/Kg，12hr尿中排出率分別為85.11%和93.03%;肌注89-071.5mg/Kg和4.5mg/Kg，12hr尿中排出率分別為77.07%和83.97%。
(2)大鼠肌注89-07和GM 2mg/Kg，12hr尿中排出率分別為76.76%和90.49%;8hr膽汁中的濃度分別為0.93～2.69和1.25～3.18mg/L。膽汁中藥物排出總量為給藥量的0.38%和0.85%;糞中濃度分別為1.62μg/g和2.29μg/g糞中藥物排出總量為給藥量的2.5%和3.4%。由此可見腎排泄為89-07的主要代謝途徑。
4.89-07在大鼠體內(nèi)組織分布于正常人血漿蛋白結(jié)合率，結(jié)果表明(1)大鼠體內(nèi)組織分布情況，大鼠單次肌注2mg/Kg89-0730分鐘時(shí)，89-07組腎濃度為相應(yīng)時(shí)間血藥濃度的320%;其次為肺、心、脾，分別為相應(yīng)時(shí)間血濃度的75.74%，45.25%，46.88%在240分鐘時(shí)腦、腸、胰、生殖腺、脂肪組織中僅能測(cè)出少量藥物濃度，此時(shí)，腎中藥物濃度仍為12.27μg/g。值得一提的是在實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)89-07較GM能透過(guò)血腦屏障進(jìn)入腦組織，在臨床使用時(shí)將有參考價(jià)值。
(2)89-07及GM三種血藥濃度10，4，2μg/ml都在臨床有效血藥濃度范圍內(nèi)，其蛋白結(jié)合率分別為23.21%和25.51%，兩藥間無(wú)顯著性差異，皆屬于血漿蛋白結(jié)合率較低藥物。
本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物的藥理研究結(jié)果89-07對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響。實(shí)驗(yàn)選用昆明種小鼠，從89-07的3個(gè)劑量(6.24，48mg/Kg s.c.)四個(gè)方面，17個(gè)指標(biāo)的觀察分析，結(jié)合與陰性對(duì)照組(生理鹽水)的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，及參比各陽(yáng)性對(duì)照組，結(jié)果表明89-07對(duì)清醒小鼠的神經(jīng)活動(dòng)，自主神經(jīng)系統(tǒng)、姿勢(shì)、步態(tài)及肌肉收縮和對(duì)刺激的應(yīng)答反應(yīng)，并無(wú)明顯的興奮或抑制作用。
89-07對(duì)麻醉貓的心血管、呼吸系統(tǒng)的影響。89-07采用5mg/ml和20mg/ml二個(gè)劑量，在頸靜脈恒連給藥，在60分鐘的試驗(yàn)期內(nèi)，各參數(shù)比較穩(wěn)定，5mg/Kg劑量組的各測(cè)定值均在正常范圍內(nèi)波動(dòng);20mg/Kg劑量組的血壓，呼吸頻率和通氣量有下降趨勢(shì)，但與前提值相比無(wú)明顯差別(P＞0.05)，結(jié)合生理鹽水對(duì)照組及89-07 5mg/Kg組各參數(shù)值分析認(rèn)為20mg/Kg組顯示變化趨勢(shì)，不象是藥物所致，故認(rèn)為89-07i.v.治療劑量應(yīng)對(duì)血壓、心率、心電圖及呼吸均無(wú)明顯影響。
本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物的肌肉刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)果89-07系堿性水溶性抗生素，臨床使用其硫酸鹽注射液，給藥途徑為肌注和靜注。為評(píng)價(jià)肌注的刺激性，單次肌肉注射法及注射刺激反應(yīng)的分級(jí)和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，以丁胺卡那霉素為陽(yáng)性對(duì)照藥物，同時(shí)進(jìn)行比較試驗(yàn)。從肉眼和病理學(xué)檢查均表明，89-07肌注的局部刺激性比丁胺卡那霉素小，即使有輕微刺激，96hr觀察顯示出恢復(fù)的趨勢(shì)。
本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物的毒理研究結(jié)果1.89-07動(dòng)物急性毒性研究89-07對(duì)昆明小白鼠i.v.，s.c.，i.m.給藥LD50分別為65.47，479.91，172.89mg/kg;對(duì)NIH小鼠i.v.，s.c.給藥LD50分別為79.88mg/Kg和460.42mg/Kg，89-07的急性毒性明顯低于NTL與GM接近。
89-07對(duì)大鼠i.v.，s.c.，i.m.，i.p.給藥LD50分別為73.75，402.65，565.16和627.98mg/Kg。
2.動(dòng)物長(zhǎng)期毒性研究為評(píng)價(jià)89-07反復(fù)用藥的安全性，進(jìn)行了大白鼠腹腔注射89-0790天和Beagle狗靜注89-07 90天毒性試驗(yàn)。
大鼠低，中，高三劑量分別為30，100，180mg(效價(jià))/Kg，經(jīng)腹腔給藥，實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行一般生理學(xué)觀察，血液學(xué)檢查和病理學(xué)檢查。結(jié)果表明89-07腹腔注射90天，中毒表現(xiàn)明顯的劑量大于100MKD;基本安全劑量為30MKD，與小諾霉素(MCR)有關(guān)文獻(xiàn)相比(MCR基本安全劑量為25MKD，主要的中毒表現(xiàn)劑量為63MKD以上)認(rèn)為大鼠反復(fù)給藥的毒性，89-07不比小諾霉素大。
Beagle狗靜脈注射給藥劑量分別為10、30、60mg(效價(jià))/Kg三組，除按大鼠作上述三項(xiàng)觀察、檢查外，還進(jìn)行了眼底檢查。將試驗(yàn)結(jié)果與MCR文獻(xiàn)相比較，作者認(rèn)為89-07 10MKD連續(xù)90天的靜注效應(yīng)，基本上相當(dāng)于MCR10MKD連續(xù)30天的肌注效應(yīng)，因此在89-07的臨床研究中，MRC的臨床用量具有比較大的參考價(jià)值。
3.耳毒性研究89-07的聽毒性和前庭毒性;采用大鼠聽源性反應(yīng)模型和小鼠游泳實(shí)驗(yàn)研究了89-07，GM和KM三種氨基糖苷類抗生素的耳毒性。研究結(jié)果表明89-07的耳毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于GM和KM。
89-07與GM，AMK對(duì)豚鼠耳毒性的比較;實(shí)驗(yàn)中各種藥物均設(shè)低、中、高三個(gè)劑量，每天一次肌肉注射，連續(xù)給藥28日，實(shí)驗(yàn)中分別進(jìn)行聽力和前庭機(jī)能測(cè)定;給藥結(jié)束后次日，斷頭處死豚鼠，取顳骨固定，制作內(nèi)耳標(biāo)本，進(jìn)行全耳蝸鋪片，計(jì)數(shù)壞死毛細(xì)胞，掃描電鏡觀察和火棉膠切片。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(1)耳蝸毒性89-07與生理鹽水對(duì)照組相比較，在低、中、高三個(gè)劑量組均未觀察到明顯的耳蝸毒性;而GM及AMK除小劑量外，在中劑量組即顯示聽閾升高;高劑量組則出現(xiàn)動(dòng)物聽力幾乎全部喪失的情況。由形態(tài)學(xué)觀察89-07組豚鼠耳蝸切片中毛細(xì)胞沒有任何變化，螺旋神經(jīng)節(jié)正常;即使是100mg/Kg/day大劑量組，柯替氏器也完全正常，在本實(shí)驗(yàn)的劑量范圍內(nèi)，未觀察到89-07的耳蝸毒性。而GM，AMK各組均顯示出耳蝸毒性，中、小劑量組已可觀察到毛細(xì)胞散在性或灶狀壞死，大劑量組則發(fā)現(xiàn)柯替氏器毛細(xì)胞大量壞死，嚴(yán)重時(shí)還可波及支持細(xì)胞與神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。故認(rèn)為89-07的耳蝸毒性極小而GM及AMK對(duì)耳蝸的損傷較明顯。
(2)前庭毒性三種藥物與對(duì)照組相比較均顯示一定差異。89-07組僅在大劑量時(shí)出現(xiàn)眼震抑制率增高現(xiàn)象，形態(tài)學(xué)觀察大劑量89-07組出現(xiàn)對(duì)橢圓束斑與壺腹嵴的位覺毛粘連，但膠質(zhì)膜完好;而GM和AMK均能引起動(dòng)物前庭機(jī)能損傷和形態(tài)破壞，掃描電鏡觀察，兩者大劑量組橢圓束斑中央部的膠質(zhì)膜與位覺毛消失，殘留的少量位覺毛毛束粘連，耳石較小或境界不清，球束斑上皮位覺毛殘缺或消失。故認(rèn)為89-07與GM，AMK相比，89-07的前庭毒性程度要低得多，屬低水平;AMK稍大些，GM的前庭毒性最為嚴(yán)重。
綜合以上情況，認(rèn)為89-07的耳毒性極低，在本實(shí)驗(yàn)中幾乎沒有觀察到耳蝸毒性，雖有輕度的前庭毒性，但也遠(yuǎn)低于GM和AMK。
4.89-07腎毒性的研究新藥89-07屬氨基糖苷類化合物，腎是毒性靶器官之一。為此在進(jìn)行89-07毒理研究時(shí)，又專門比較大鼠肌注89-07，丁胺卡那和慶大霉素的腎毒性比較。試驗(yàn)中選擇了評(píng)價(jià)腎毒性作用常用的6項(xiàng)尿液指標(biāo)和2項(xiàng)血液生化指標(biāo)，結(jié)合腎臟的病理形態(tài)學(xué)觀察，以比較三者的腎毒作用。
各試驗(yàn)組動(dòng)物隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)和劑量的增加，出現(xiàn)異常的指標(biāo)也相應(yīng)增多，病理變化也逐漸加重。自給藥第七天開始，慶大霉素150MKD，100MKD組，中毒死亡的動(dòng)物逐漸增加，89-07和丁胺卡那霉素各劑量組均未出現(xiàn)死亡。因此，三個(gè)藥物的腎毒作用，可比性較強(qiáng)的是低劑量，即50MKD組。
50MKD組給藥5-15天，慶大霉素組的異常指標(biāo)由3項(xiàng)(u-LDH，u-pr和BUN)增至6項(xiàng)(u-GOT，u-LDH，u-pr，u-su，BUN，Scr)。腎小管上皮細(xì)胞也由給藥5天的單個(gè)散在性的壞死發(fā)展到多數(shù)動(dòng)物的腎臟大片狀和廣泛性的嚴(yán)重壞死。而89-07和丁胺卡那組動(dòng)物在此期間僅出現(xiàn)個(gè)別指標(biāo)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的異?；蚵杂猩叩内厔?shì)，病理形態(tài)學(xué)上也僅由給藥5天的輕微變性發(fā)展到單個(gè)散在性的細(xì)胞壞死。因此，從功能和形態(tài)學(xué)上的比較，89-07的腎毒作用明顯比慶大霉素輕，與丁胺卡那無(wú)明顯差異。
致突變?cè)囼?yàn)研究1.Ams's試驗(yàn)，結(jié)果為陰性。
2.小鼠微核試驗(yàn)的研究，結(jié)論是89-07小鼠骨髓多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
3.89-07體外對(duì)CHL細(xì)胞染色體畸變的影響研究，研究結(jié)果為陰性。
上述三個(gè)結(jié)果均表明89-07無(wú)致突變作用。因89-07系抗生素類藥物，在Ams's試驗(yàn)中平皿加藥量還達(dá)不到5mg/皿，故2，3試驗(yàn)作為一重要的驗(yàn)證。
生殖毒性試驗(yàn)研究89-07對(duì)SD孕大鼠的胚胎胎仔毒性和致畸性(二段試驗(yàn))，研究結(jié)果表明89-07是不具有胚胎毒性藥物。
本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物系廣譜抗生素，對(duì)慶大霉素耐藥菌有較好的作用，而且耳、腎毒性低，因此適合于對(duì)本品敏感的綠膿桿菌、變形桿菌、沙雷氏菌屬等引起的感染以及對(duì)慶大霉素、卡那霉素(KM)、甲氧西林、丁胺卡那霉素等多種藥物耐藥的大腸桿菌、克雷伯氏菌屬、大腸桿菌屬、葡萄球菌屬引起的感染如敗血癥、支氣管炎、支氣管擴(kuò)張癥、肺炎、腹膜炎、腎盂腎炎、膀胱炎等癥，此外還適用于對(duì)青霉素過(guò)敏的患者作為優(yōu)良的治療劑，特別對(duì)兒童和老年使用本發(fā)明的抗生素比用GM、KM和AMK更安全可靠。對(duì)耐GM、KM、AMK、甲氧西林的耐藥菌感染可以作為首選藥物，與AMK無(wú)交叉耐藥、故可用于治療對(duì)AMK耐藥的細(xì)菌感染。因而，本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物是較好的新的半合成抗生素。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述1-N-乙基慶大霉素衍生物的制備方法。該方法包括從慶大霉素C1a單組份菌種棘孢小單孢菌JIM-202突變株制得慶大霉素C1a母核，再通過(guò)半合成方法在其1-N位置上引入乙基而制得本發(fā)明的1N-乙基慶大霉素衍生物。
本發(fā)明的制備方法具體敘述如下一.制備慶大霉素C1a母核1.菌種誘變產(chǎn)生JIM-202突變株棘孢小單孢菌JIM-401(M.echinospora JIM-401)為出發(fā)菌株以紫外光三分鐘，0.5%LiCl半小時(shí)處理后單孢子懸浮液涂布于含小諾霉素粗品(2000u/ml)的平板上，37℃培養(yǎng)14天后挑取單個(gè)菌落，經(jīng)篩選得到JIM202，然后斜面培養(yǎng)后制成沙土(或冷凍管)保藏。
經(jīng)提取精制得到的JIM-202硫酸鹽的核磁共振譜分析采用JIM-FX90Q型核磁共振波譜儀(D2O);紅外光譜的分析采用577型紅外分光光度計(jì)(KBr壓片);紫外光譜測(cè)定采用554型紫外分光光度計(jì)(H2O)質(zhì)譜的測(cè)定采用JIMS-D300型色-質(zhì)聯(lián)用儀(EI)。
注色譜標(biāo)用鏈霉菌鑒定手冊(cè)中色譜。

對(duì)JIM-202菌株進(jìn)行的全細(xì)胞水解物氨基酸分析表明其含有甘氨酸和meso-DAP。
薄層層析JIM-202菌株發(fā)酵產(chǎn)物在硅膠G薄層層析上主要呈現(xiàn)一個(gè)斑點(diǎn)，其Rf值與GMC1a相同(圖6)。
UV、IR、NMR和Ms見圖7、8、9、10。
從圖7可知該抗生素?zé)o紫外吸收峰符合于氨基糖苷類抗生素特性，在IR中該抗生素顯示了典型的氨基糖苷類抗生素特性，該抗生素的NMR各質(zhì)子信號(hào)見圖標(biāo)示，與文獻(xiàn)GMC1a完全一致;該抗生素Ms各分子離子碎片峰與文獻(xiàn)值一致，其(M+1)峰為450(即分子量為449)與慶大霉素C1a分子量相同，因此從UV、IR、NMR、Ms等四大譜解析可知該抗生素與慶大霉素C1a同質(zhì)。
本發(fā)明人在對(duì)棘孢小單孢菌突變型菌株JIM-401進(jìn)行誘變育種時(shí)，得到了一株JIM-202突變株，由突變株產(chǎn)生了一個(gè)單組份的抗生素GMC1a，效價(jià)可達(dá)800u/ml。因而，本發(fā)明提供了從改變遺傳學(xué)途徑辦法產(chǎn)生GMC1a的方法。
日本公開特許公報(bào)(昭和54-160795)曾報(bào)道將SIM通過(guò)微生物轉(zhuǎn)化的方法使其產(chǎn)生GMC1a。但至今為止，尚未發(fā)現(xiàn)從菌種選育一改變遺傳學(xué)途徑的辦法得到阻斷型的突變株產(chǎn)生GMC1a或SIM，也沒有發(fā)現(xiàn)報(bào)告由小單孢菌產(chǎn)生單一的GMC1a的方法。
本發(fā)明人用上述方法得到的GMC1a菌株生產(chǎn)能力較強(qiáng)，能直接應(yīng)用于生產(chǎn)，從而為慶大霉素C1a的衍生物提供了母核制備。
2.母核慶大霉素C1a(GMC1a)的制備慶大霉素C1a單組份菌種棘孢小單孢菌JIM-202＃突變株;(發(fā)酵效價(jià)800u/ml左右，GMC1a組份85%以上)經(jīng)三級(jí)發(fā)酵得GMC1a發(fā)酵液，經(jīng)離子交換提取后，精制得到含量為90～95%GMC1a供半合成用。
工藝流程JIM202#沙土孢子 (孢子培養(yǎng))/(35℃ 9天) 斜面孢子 (搖瓶培養(yǎng))/(35℃ 2天) 搖瓶菌絲(種子培養(yǎng))/() 一級(jí)種子罐 (35℃±1℃)/(48小時(shí)) 二級(jí)繁殖罐 (35℃±1℃)/(42小時(shí))三級(jí)發(fā)酵罐 (35～32℃)/(126小時(shí)) 放罐 (酸化)/(PH2～3) 酸化液 (中和)/(PH6.8)732樹脂吸附 ( )/() 上柱 (去Ca++,Mg++,Cl-)/() 飽和樹脂(4.5%氨水解析)/() 解析液 (711樹脂脫色)/() 脫色液 (薄膜濃縮)/() 濃縮液(柱層析)/(精制) 得到組份為90％以上慶大霉素C1a.
培養(yǎng)基孢子斜面培養(yǎng)基(%)可溶性淀粉1.0 氯化鈉0.05KNO30.1 CaCO30.1K2HPO40.03 麩皮1.7～1.8MgSO40.05 瓊脂1.8～2.0種子培養(yǎng)基(%)淀粉1.0 玉米粉1.5黃豆餅粉1.0 葡萄糖0.5蛋白胨0.2 硝酸鉀0.05碳酸鈣0.5 豆油0.15
二級(jí)繁殖培養(yǎng)基(%)淀粉2 蛋白胨0.1黃豆餅粉1.5 CoCl24r/ml玉米粉1.5 豆油0.2發(fā)酵培養(yǎng)基(%)淀粉4 葡萄糖0.5玉米粉1.5 黃豆餅粉3.5蛋白胨0.2 魚粉0.5硝酸鉀0.01 碳酸鈣0.5硫酸銨0.05 泡敵適量在小諾霉素生產(chǎn)時(shí)，其分離工段分離小諾霉素時(shí)可得一定純度的GMC1a取純度較高的GMC1a也可直接供半合成用。
1-N-乙基慶大霉素衍生物的合成工藝路線GMC1＝ (醋酸鈷.乙酐)/(溶劑中〔1〕) 3，2’，6’一三一N一乙?；鵊MC1a(pl)(提取濃縮)/(通H2S除Co++;分離) P1(純度90～95％) (乙醛)/(還原劑〔2〕氫化) 3，2’，6’－0－5℃冰水浴三－N－乙?；?－N－乙基GMC1a(P2)經(jīng)吸附型大孔樹脂分離后得純度較高P2(1N NaOH)/(水解回流48hr) 水解液 (吸附型大孔樹脂分離)/()得含量在90％以上的1－N－乙基慶大霉素 ( )/() 成鹽 (碳脫色)/()冷凍干燥(或乙醇沉淀)即得1－N－乙基慶大霉素C1a鹽。
注[1]非質(zhì)子極性的有機(jī)熔劑如二甲基甲酰胺，二甲亞砜等[2]為還原劑LiAlH4，嗎啉甲硼烷，氰基硼氫化合物。
反應(yīng)式如下
本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物系堿性水溶性抗生素，在臨床使用時(shí)可制備成易溶于水的無(wú)機(jī)酸鹽如鹽酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽硫酸鹽等，或是有機(jī)酸鹽如馬來(lái)酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、草酸鹽等，其中常用硫酸鹽。
本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物可以制備成藥用制劑，以口服或非腸胃道的途徑給藥，如片劑、水針劑、粉針劑、眼藥水、油膏、氣霧劑等。
本發(fā)明的又一目的是公開了1-N-乙基慶大霉素衍生物的藥用制劑的制備方法。具體的方法是將1-N-乙基慶大霉素衍生物的鹽作為活性成份與藥物上可應(yīng)用的載體如緩沖劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、粘合劑、表面活性劑、防腐劑、甜味劑、等滲劑等，以重量比為活性成份占0.01～99.99%與藥用載體占99.99%～0.01%的比例配制而成。
上述藥用載體中的潤(rùn)滑劑有緩沖劑為磷酸鹽緩沖劑、醋酸鹽緩沖劑等，崩解劑為淀粉、羧甲基淀粉鈉等，甜味劑為果糖、麥芽糖醇、木糖醇等，粘合劑為淀粉漿、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、明膠等，防腐劑為苯酚(石碳酸)、尼泊金甲酯(對(duì)羥基苯甲酸甲酯)、苯甲醇等，等滲劑為氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖等，賦形劑為右旋糖酐(低分子量)、蔗糖等，表面活性劑為吐溫80，潤(rùn)滑劑為白凡士林、聚甘油硬脂酸酯、液體石臘等，氣霧劑為內(nèi)拋射劑，氟氯烷類如氟里昂;鹵代烷類如氯乙烯、氯化甲烯等;非鹵素烷類如丙烷，丁烷，二甲醚等;壓縮氣體拋射劑如氮、氦、氛、CD2，NO等惰性氣體等。
本發(fā)明的1-N-乙基慶大霉素衍生物系廣譜抗生素，對(duì)GM耐藥菌有較好的作用，且耳、腎毒性低，因此適合于對(duì)本品敏感的綠膿桿菌，變形桿菌，沙雷氏菌屬等引起的下列感染以及對(duì)GM、KM、甲氧西林AMK等多種藥物耐藥的大腸桿菌，克雷伯氏菌屬，大腸桿菌屬，葡萄球菌屬引起的下列感染敗血癥，支氣管炎，支氣管擴(kuò)張癥，肺炎，腹膜炎，腎盂腎炎，膀胱炎等癥，此外還適用于對(duì)青霉素過(guò)敏的患者作為優(yōu)良的治療劑，特別對(duì)兒童和老年，使用本品比用GM，KM和AMK更安全可靠。對(duì)耐GM，KM，MCR，甲氧西林的耐藥菌感染可以作為首選藥物，與AMK無(wú)交叉耐藥，故可用于治療對(duì)AMK耐藥的細(xì)菌感染。該新藥的問世無(wú)疑給社會(huì)帶來(lái)福音。
以愛大霉素為例按100mg/支為5.00元/支計(jì)，年產(chǎn)1000年十億原料藥，針劑每年可獲得稅利2500萬(wàn)元，故經(jīng)濟(jì)效益可觀。
實(shí)施例1制備硫酸慶大霉素C1a將JIM-202菌種孢子懸浮液接種于內(nèi)含100ml種子培養(yǎng)基的500ml種子瓶中，在35℃±0.5℃，搖床培養(yǎng)40小時(shí)(220rpm)，取5只種子瓶的種子液接種于10L發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)，通氣(1vvm)，攪拌，35℃±0.5℃培養(yǎng)120小時(shí)，其間補(bǔ)水以補(bǔ)充水分的揮發(fā)，得到含GMGa的發(fā)酵液9.5L，用草酸調(diào)PH至3，加熱至70℃，維持10分鐘后，用6N NaOH回調(diào)PH至6.8，過(guò)濾，濾液用120ml 732(NH+4)樹脂柱吸附，水洗后用2N NH3H2O解析，解析液先用120ml 711(OH-)樹脂柱脫色后減壓濃縮至60ml，用6NH2SO4調(diào)PH至5.0，加入5g活性炭，60℃保溫30分鐘，過(guò)濾，濾液冷凍干燥得9g GM1a硫酸鹽，其純度93%。
實(shí)施例2制備慶大霉素C1a將JIM-202菌種孢子懸浮液接種于100L種子培養(yǎng)基中，在35℃±0.5℃通氣(1.2vvm)，攪拌190rpm)下培養(yǎng)40小時(shí)后移種于2000L種子培養(yǎng)基內(nèi)繁殖、培養(yǎng)條件同上，24小時(shí)后接入6500L發(fā)酵培養(yǎng)基中，開始通氣0.5vvm，6小時(shí)后通氣1.0vvm，84℃±0.50℃攪拌(90rpm)培養(yǎng)140小時(shí)，其間在24小時(shí)和60小時(shí)時(shí)補(bǔ)料1500L，在84小時(shí)時(shí)補(bǔ)水1000L。最后得到含GMC1a的培養(yǎng)液9000L。用草酸或硫酸或鹽酸調(diào)PH2.5，加熱至70℃，維持10分鐘用6N氫氧化鈉回調(diào)PH至6.8，加入120 L732(NH+4)樹脂攪拌吸附5小時(shí)。篩出樹脂并經(jīng)漂洗后裝柱，水洗后用2N NH3·H2O解析，解析液經(jīng)120升711(OH-)柱脫色后減壓濃縮至80L，用450 LYPR-Ⅱ樹脂柱(40×400cm)吸附，經(jīng)水洗后用20%乙醇水溶液解析，含GMC1a組分的解析液減壓濃縮至80L，凍干得7000gGMC1a粉。其純度90%。
實(shí)施例3制備愛大霉素硫酸鹽在室溫下，將10g GMC1a凍干粉在攪拌下溶解于40ml水中，加入360ml二甲基甲酰胺，再加入20g CaAc2·4H2O并溶解。攪拌1小時(shí)，滴加56ml新鮮配制的M乙酐四氫呋喃溶液。速度1ml/min，滴加完后繼續(xù)攪拌1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束。反應(yīng)液加一倍水混合，通入500ml 732(H+)樹脂柱吸附。水洗后用2N NH3·H2O解析。解析液減壓濃縮后用YPR-Ⅱ樹脂柱(40×500mm)純化。用6%-30%的乙醇濃度梯度洗脫，收集10%-15%乙醇濃度的洗脫液，合并濃縮后凍干得9.5g 3，2'，6'-三乙酰GMC1a。
上述產(chǎn)物的凍干品溶解于300ml水中，用6N H2SO4調(diào)PH5，自然冷卻后，用冰浴冷至3℃，用1N HCl調(diào)PH至2.5，加6ml 40%乙醛-四氫呋喃(1∶1)溶液。攪拌下滴加5%硼氫化鈉水溶液至PH4.0，攪拌1小時(shí)后重復(fù)上述操作至轉(zhuǎn)化完全(硅膠TLC分析，溶媒系統(tǒng)，氯仿∶甲醇∶28%氨水∶2∶1∶1)。反應(yīng)液減壓濃縮后用400ml YPR-Ⅱ樹脂柱純化，乙醇濃度梯度洗脫，收集15-20%乙醇濃度的洗脫液并濃縮50ml，濃縮液用6N氫氧化鈉調(diào)整至1N氫氧化鈉濃度，于100℃水解48小時(shí)，冷卻并稀釋至1000ml，用160ml732(H+)樹脂攪拌吸附2小時(shí)，裝柱，水洗后用2N氨水解析。解析液減壓濃縮后用YPR-Ⅱ樹脂柱(30×300mm)純化，乙醇濃度梯度洗脫，合并90%以上純度的愛大霉素的洗脫液并經(jīng)減壓濃縮后用6N H2SO4調(diào)PH6.0，加1.5g活性炭，60℃攪拌保溫30'，過(guò)濾，濾液凍干得3.0g愛大霉素硫酸鹽粉，重量收率30%。
實(shí)施例4制備愛大霉素硫酸鹽在室溫下將100g GMC1a凍干粉400ml水中，加入3600ml二甲基亞砜，加150g CoAc2·4H2O，攪拌溶解后，滴加560ml新鮮酸制的M乙酐的四氫呋喃溶液，速度3ml/min，加完后繼續(xù)攪拌1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束。反應(yīng)液加一倍水，混勻，用2NHCl調(diào)PH2.5，用5000ml 732(NH+4)柱吸附，水洗后用2N NH3·H2O解析。解析液經(jīng)減壓濃縮后用6N H2SO4調(diào)PH5.0，自然冷卻后用冰浴冷至3℃，2NHCl調(diào)PH2.5，加80ml 40%乙醛-四氫呋喃(1∶1)溶液，攪拌下滴加5%硼氫化鈉水溶液至PH4.0，攪拌1小時(shí)后，重復(fù)上述操作至轉(zhuǎn)化完全，反應(yīng)液經(jīng)減壓濃縮至1000ml，用YPR-Ⅱ樹脂柱(85×900mm)純化，乙醇濃度梯度洗脫，收集15-20%乙醇濃度的洗脫液并減壓濃縮至500ml后，用6N HaOH調(diào)整溶液至1N NaOH濃度于100℃下水解48小時(shí)。冷卻并稀釋后用1000ml 732(H+)樹脂攪拌下吸附。吸附樹脂裝柱，水洗后用2N NH3·H2O解析，解析液經(jīng)減壓濃縮后用YPR-Ⅱ樹脂柱(65×650mm)純化，乙醇濃度梯度洗脫，收集愛大霉素90%以上純度的洗脫液并經(jīng)減壓濃縮后用6N H2SO4調(diào)PH5.0，加20g活性炭60℃攪拌保溫30分鐘，后過(guò)濾，濾液凍干得45g愛大霉素硫酸鹽，重量收率45%。
實(shí)施例5制備硫酸愛大霉素水針劑硫酸愛大霉素或其溶于水的鹽均可制成水針劑供臨床使用，配方如下硫酸愛大霉素 50g無(wú)水亞硫酸鈉 2g注射用水 加至 1LPH 5.0～7.0工藝稱取主輔料，溶于配液量80%注射用水中，調(diào)整PH加活性炭適量，加水至全量，去炭后微孔濾膜、精濾至凈，充氮、灌封滅菌即得。
上述配方中還可加入焦亞硫酸鈉(抗氧劑)和少量對(duì)羥基苯甲酸甲酯(1.3mg/50mg(效價(jià))/支)，對(duì)羥基苯甲酸丙酯(0.2mg/50mg/支)作為防腐劑。
規(guī)格50mg(效價(jià))/1ml;75mg(效價(jià))/1.5ml及100mg(效價(jià))/2ml。
實(shí)施例6制備硫酸愛大霉素粉針劑 5萬(wàn)單位/支愛大霉素硫酸鹽 5萬(wàn)單位/支NaCl(注射用) 9mg/支低分子右旋糖酐 7mg/支焦亞硫酸鈉(分析純) 3mg/支注射用水加至 0.5ml/支工藝取占體積70%的新鮮滅菌注射用水，加入焦亞硫酸鈉(分析純)，氯化鈉，愛大霉素硫酸鹽原料，使其溶解后加入低分子右旋糖酐液，最后用滅菌注射用水加至全量，測(cè)藥液PH，用0.22um微孔濾膜兩次無(wú)菌過(guò)濾后，灌裝每支0.5～0.54ml，凍干封口、檢漏、燈檢、印色。
實(shí)施例7制備愛大霉素片劑(包括緩釋劑型，腸溶劑型)10萬(wàn)單位/片配方Ⅰ硫酸愛大霉素 10Kg蔗糖粉 12.4KgCaCO36.8Kg淀粉 5Kg枸櫞酸 0.3Kg乙醇(70%) 約8L硬脂酸鎂 0.4Kg/10萬(wàn)片配方Ⅱ硫酸愛大霉素 50Kg糊精 4.7Kg
20%淀粉漿 適量攪拌透后立即制片(16目)，顆粒65℃烘干14目整粒，壓片前加1%硬脂酸鎂。
適應(yīng)癥，用于細(xì)菌性痢疾，腸炎，腹瀉。
實(shí)施例8制備愛大霉素眼藥水配方硫酸愛大霉素 5000單位(效價(jià))NaCl 8.0g焦亞硫酸鈉 2g蒸餾水 適量/制成1000ml工藝準(zhǔn)確按處方稱取NaCl焦亞硫酸鈉，用適量蒸餾水溶解后加入硫酸愛大霉素?cái)嚢枞芙庥?.5NaOH調(diào)PH至7.0左右，補(bǔ)加蒸餾水至1000ml過(guò)濾，過(guò)澄明，灌裝于已處理合格的滴眼瓶中，蓋腹塞及鋁蓋，壓蓋，100℃流通空氣滅菌30分鐘，澄明后檢查，印標(biāo)鑒，包裝，成品檢驗(yàn)合格。
適應(yīng)癥細(xì)菌性結(jié)膜炎，紅眼病等。
實(shí)施例9制備愛大霉素搽劑配方硫酸愛大霉素 1.6克液體石蠟 3.3克凡士林 適量全量 100克工藝硫酸愛大霉素與液體石醋混合后加入凡士林再混合均勻后即可。
適應(yīng)癥膿皰瘡、糜爛瘡傷，燙傷，燒傷及其它細(xì)菌性皮膚感染。
實(shí)施例10制備愛大霉素氣霧劑配方硫酸愛大霉素 10mg(效價(jià))乙醇 4.5mg
二氟二氯甲烷 適量每罐 5ml適應(yīng)癥細(xì)菌性感染氣管炎和重癥扁桃腺發(fā)炎及喉炎等實(shí)施例11制備愛大霉素軟膏劑乳劑型基質(zhì)實(shí)例1.水包油型(油/水)基質(zhì)處方硫酸愛大霉素 1.6g乳化蠟 30g白凡士林 50g液體石蠟 20g2.油包水型基質(zhì)處方硫酸愛大霉素 1.6g聚甘油硬脂酸酯Ⅲ 6g凡士林 96.8g3.水溶性基質(zhì)處方硫酸愛大霉素 1.6g明膠 3g甘油 30g水 適量全量100g
權(quán)利要求
1.一種半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物，其特征以下式表示 R1R2[1]1-N-乙基慶大霉素C1CH3CH3[2]1-N-乙基慶大霉素C2， CH3H[3]1-N-乙基慶大霉素C1a(愛大霉素) H H[4]1-N乙基慶大霉素C2b(乙基小諾霉素) H CH3式中R1和R2可以相同或不同，它們可以分別為氫原子或-CH3基。
2.一種如權(quán)利要求1所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物和其鹽的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)制備慶大霉素C1a母核A.菌種誘變產(chǎn)生JIM-202突變株棘孢小單孢菌JIM-401(M.echinospora JIM-401)為出發(fā)菌株以紫外光三分鐘，0.5%LiCl半小時(shí)處理后單孢子懸浮液涂布于含小諾霉素粗品(2000u/ml)的平板上，37℃培養(yǎng)14天后挑取單個(gè)菌落，經(jīng)篩選得到JIM202，然后斜面培養(yǎng)后制成沙土(或冷凍管)保藏。B.母核慶大霉素C1a的制備慶大霉素C1a單組份菌種棘孢小單孢菌JIM-202＃突變株;(發(fā)酵效價(jià)800u/ml左右，GMC1a組份85%以上)經(jīng)三級(jí)發(fā)酵得GMC1a發(fā)酵液，經(jīng)離子交換提取后，精制得到含量為90～95%GMC1a供半合成用。工藝流程JIM202#沙土孢子 (孢子培養(yǎng))/(35℃ 9天) 斜面孢子 (搖瓶培養(yǎng))/(35℃ 2天) 搖瓶菌絲(種子培養(yǎng))/() 一級(jí)種子罐 (35℃±1℃)/(48小時(shí)) 二級(jí)繁殖罐 (35℃±1℃)/(42小時(shí))三級(jí)發(fā)酵罐 (35～32℃)/(126小時(shí)) 放罐 (酸化)/(PH2～3) 酸化液 (中和)/(PH6.8)732樹脂吸附 ( )/() 上柱 (去Ca++,Mg++,Cl-)/() 飽和樹脂(4.5%氨水解析)/() 解析液 (711樹脂脫色)/() 脫色液 (薄膜濃縮)/() 濃縮液(柱層析)/(精制) 得到組份為90％以上慶大霉素C1a.(2)1-N-乙基慶大霉素衍生物和其鹽的制備GMC1＝ (醋酸鈷.乙酐)/(溶劑中) 3，2’，6’一三一N一乙?；鵊MC1a(pl)(提取濃縮)/(通H2S除Co++;分離) P1(純度90～95％) (乙醛)/(還原劑氫化) 3，2’，6’－0－5℃冰水浴三－N－乙?；?－N－乙基GMC1a(P2)經(jīng)吸附型大孔樹脂分離后得純度較高P2(1N NaOH)/(水解回流48hr) 水解液 (吸附型大孔樹脂分離)/()得含量在90％以上的1－N－乙基慶大霉素 ( )/() 成鹽 (碳脫色)/()冷凍干燥(或乙醇沉淀)即得1－N－乙基慶大霉素C1a鹽。
3.一種如權(quán)利要求1所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物藥用制劑的制備方法，其特征在于將1-N-乙基慶大霉素衍生物鹽作為活性成份與藥物上可應(yīng)用的載體緩沖劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、粘合劑、表面活性劑、防腐劑、甜味劑、等滲劑或氣霧劑等，以重量比為活性成份占0.01～99.99%與藥用載體占99.99～0.01%的比例配制而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物和鹽的制備方法，其中所述的鹽為鹽酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽等無(wú)機(jī)酸鹽及馬來(lái)酸鹽、乳酸鹽、灑石酸鹽、檸檬酸鹽、苯果酸鹽、草酸鹽等有機(jī)酸鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物藥用制劑的制備方法，其中所述的藥用制劑為片劑、水針劑、粉針劑、眼藥水、油膏、氣霧劑和軟膏劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物藥用制劑的制備方法，其中所述的潤(rùn)滑劑為白凡士林、聚甘油硬脂酸酯、液體石臘。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物藥用制劑的制備方法，其中所述的崩解劑為淀粉、羧甲基、纖維素鈉。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物藥用制劑的制備方法，其中所述的粘合劑為淀粉漿、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、明膠。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物藥用制劑的制備方法，其中所述的表面活性劑為吐溫80。
10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物藥用制劑的制備方法，其中所述的防腐劑為苯酚(石碳酸)、尼泊金甲酯(對(duì)羥基苯甲酸甲酯)、苯甲醇。
11.根據(jù)權(quán)利要求3所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物藥用制劑的制備方法，其中所述的甜味劑為果糖、麥芽糖醇、木糖醇。
12.根據(jù)權(quán)利要求3所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物藥用制劑的制備方法，其中所述的等滲劑為氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖。
13.根據(jù)權(quán)利要求3所述的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物藥用制劑的制備方法，其中所述的氣劑為氟氯烷、非鹵素烷及氮、氦、氛、CD2、NO等惰性氣體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類新的半合成抗生素1-N-乙基慶大霉素衍生物。該類抗生素系廣譜抗生素，尤其對(duì)慶大霉素耐藥菌有較好的作用，而且耳、腎毒性低。本發(fā)明敘述了制備方法。
文檔編號(hào)C12R1/29GK1100467SQ9311241
公開日1995年3月22日 申請(qǐng)日期1993年4月23日 優(yōu)先權(quán)日1993年4月23日
發(fā)明者趙敏, 范瑾, 劉軍, 謝鳳龍, 胡小玲, 楊曉偉, 范銘琦, 汪潔 申請(qǐng)人:江蘇省微生物研究所