本發(fā)明涉及魚類產(chǎn)品深加工技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種金槍魚魚精素產(chǎn)品的加工方法。
背景技術(shù)：
金槍魚屬硬骨形目，鯖科動(dòng)物，別名為吞拿魚，活躍于上層大海洋。金槍魚以生物學(xué)分類可分為旗科、箭科和鯖科等。它的品種之中，馬蘇、藍(lán)鰭、黃鰭、輕魚、長(zhǎng)鰭等五種魚屬于商業(yè)利益較高的一類。它們一般洄游在鹽度較高的外洋之中，主要分布在印度洋、大西洋和太平洋地帶，屬于大洋暖水洄游魚類，其中藍(lán)鰭、輕魚、馬蘇等為遠(yuǎn)洋漁業(yè)的主要捕貨對(duì)象。從二十世紀(jì)五十年代起，金槍魚每年的產(chǎn)量一直處于上升的狀態(tài)。目前，世界遠(yuǎn)洋漁業(yè)總產(chǎn)量中金槍魚產(chǎn)量所占比重超過(guò)一半。金槍魚屬于營(yíng)養(yǎng)價(jià)值比較髙的魚類之一，金槍魚肉所含的水分和蛋白質(zhì)都較高，氨基酸含量頗為豐富，生物造價(jià)較高，?；撬?、礦物質(zhì)、微量元素和維生素含量也十分豐富。
魚精蛋白素是一種多聚陽(yáng)離子化，主要存在于鳥類、魚類和哺乳動(dòng)物的精巢組織中。它是一種堿性蛋白質(zhì)，與dna結(jié)合在一起，核精蛋白的形式存在。魚精蛋白素的分子量較小，分子量主要在5.5到13.0kda之間，由30-50個(gè)氨基酸組成，在精子發(fā)生后期的單倍體階段取代組蛋白，被認(rèn)為是精子凝集和dna穩(wěn)定所必不可少的蛋白質(zhì)。魚精蛋白素具有很好的穩(wěn)定性，加熱不易凝固，等電點(diǎn)在12-13之間。魚精素并不是單一的組分，一般是由幾種彼此之間非常類似的成分組成的混合物，在氨基酸組成上存在很大差別。魚精素的一個(gè)重要特點(diǎn)就是具有抑菌特性，所以其在食品中可以開發(fā)成一種天然防腐劑來(lái)應(yīng)用。國(guó)外對(duì)魚精素的研究比國(guó)內(nèi)要早，其主要是從鮭魚精巢中提取魚精素，但在我國(guó)，除了東北黑龍江流域外，其他地方蛙科魚類的產(chǎn)量比較少，在國(guó)內(nèi)以鮭魚精巢為原料生產(chǎn)魚精素存在原料緊缺的問(wèn)題。而金槍魚肉所含蛋白質(zhì)較高，氨基酸含量頗為豐富，因此可以考慮從金槍魚中提取魚精素。
現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公告號(hào)為cn102796189b的中國(guó)發(fā)明專利，公開了一種硫酸魚精蛋白的制備方法，采用3%硫酸提取、50-79℃溫水提取、乙醇沉淀、以及低溫處理四種生化技術(shù)，以鮭魚的魚精為原料，制得硫酸魚精蛋白。該魚精蛋白的比旋度能夠達(dá)到-72.0°，工藝簡(jiǎn)單，成本低，過(guò)程溫和，但是該法所得魚精蛋白素含有一些雜蛋白或核酸等雜質(zhì)，需要進(jìn)一步分離、純化。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種得率高、純度高，抑菌效果好，防腐性能佳，工藝簡(jiǎn)單、可操作性強(qiáng)，適用于工業(yè)化生產(chǎn)的金槍魚魚精素產(chǎn)品的加工方法。
本發(fā)明針對(duì)上述技術(shù)中提到的問(wèn)題，采取的技術(shù)方案為：一種金槍魚魚精素產(chǎn)品的加工方法，包括精巢組織中脫氧核糖核蛋白的提取，硫酸提取，乙醇沉淀，洗滌，具體操作步驟為：
精巢組織中脫氧核糖核蛋白的提?。喝〕墒斓慕饦岕~精巢組織，洗凈，放入組織搗碎機(jī)中，加入0.1~0.2mol/l氯化鈉溶液和苯甲基磺酰氟，氯化鈉溶液與精巢組織的體積重量比為2~3:1，苯甲基磺酰氟的添加量為精巢組織重量的0.01~0.05%，充分勻漿后攪拌20~30min，靜止10~20min，在3500~4500r/min的條件下離心10~15min，氯化鈉與核糖核酸形成易溶于水的核糖核酸鹽，傾倒上清液即可除去核糖核酸，并獲得沉淀脫氧核糖核蛋白，而苯甲基磺酰氟是蛋白酶抑制劑，可保護(hù)魚精蛋白；
硫酸提?。合虺恋砦锛尤霛舛葹?~10%的硫酸溶液，硫酸溶液與沉淀物的體積重量比為3~5:1，在組織搗碎機(jī)中充分?jǐn)囁?，然后再攪拌提?~4h，在4000~5000r/min的條件下離心15~20min，棄去沉淀，收集上清液，該步驟中硫酸與魚精蛋白形成易溶于水的硫酸魚精蛋白，魚精蛋白與脫氧核糖核苷酸之間的鍵斷裂，沉淀物質(zhì)是脫氧核糖核酸；
乙醇沉淀：向上清液中加入的無(wú)水乙醇，在冰浴條件下沉淀靜置2~3h，3500~4500r/min的條件下離心10~15min，留下沉淀物，該步驟利用魚精蛋白素呈堿性，能溶于水和稀酸，不易溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑，穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，利用乙醇除去雜質(zhì)蛋白質(zhì)；
洗滌：向沉淀物中加入丙酮溶液反復(fù)洗滌，去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)，提高魚精素的純度，干燥，即得魚精素，該魚精素具有良好的抑菌活性，能明顯的抑制革蘭氏陽(yáng)性菌（g+）、霉菌、酵母的生長(zhǎng)，對(duì)巨大芽孢桿菌、枯草桿菌等也有一定抑制作用，是一種無(wú)毒、無(wú)副作用、安全性高的天然食品防腐劑，可防止食品腐敗變質(zhì)，延長(zhǎng)食品的貨架期，還能夠與許多種類的蛋白質(zhì)相互結(jié)合從而形成不同的蛋白質(zhì)復(fù)合物，具有很好的藥用價(jià)值，含有豐富的精氨酸，其能夠緩解疲勞，促進(jìn)垂體釋放性腺激素及強(qiáng)化肝功能等作用，對(duì)男性不育癥有輔助的作用；
后處理：將50~60重量份的魚精素、1~5重量份抗氧化多肽，抗氧化多肽的氨基酸序列為hsklcvcvncfccgaakcylcrvlhpgklcvcncsk，具有較好的抗氧化特性，能夠抑制由金屬離子、血紅蛋白、脂酶和單線態(tài)氧、o2-、·oh、roo·催化的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，具有螯合金屬離子的能力，可有效地抑制非金屬離子催化脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，激活機(jī)體本身內(nèi)在的抗氧化防御系統(tǒng)，達(dá)到保健的效果。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：1）本發(fā)明魚精素得率高、純度高，具有良好的抑菌活性，是一種無(wú)毒、無(wú)副作用、安全性高的天然食品防腐劑，可防止食品腐敗變質(zhì)，延長(zhǎng)食品的貨架期；2）魚精素具有很好的藥用價(jià)值，含有豐富的精氨酸，其能夠緩解疲勞，促進(jìn)垂體釋放性腺激素及強(qiáng)化肝功能等作用，對(duì)男性不育癥有輔助的作用；3）提高金槍魚魚精巢附加值，對(duì)有效利用魚類資源，減少浪費(fèi)和環(huán)境污染，變廢為寶，提高經(jīng)濟(jì)效益等具有重大的意義，且加工方法工藝簡(jiǎn)單、可操作性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方案作進(jìn)一步說(shuō)明：
實(shí)施例1：
一種金槍魚魚精素產(chǎn)品的加工方法，包括精巢組織中脫氧核糖核蛋白的提取，硫酸提取，乙醇沉淀，洗滌，具體操作步驟為：
1）精巢組織中脫氧核糖核蛋白的提?。喝〕墒斓慕饦岕~精巢組織，洗凈，放入組織搗碎機(jī)中，加入0.14mol/l氯化鈉溶液和苯甲基磺酰氟，氯化鈉溶液與精巢組織的體積重量比為2.5:1，苯甲基磺酰氟的添加量為精巢組織重量的0.02%，充分勻漿后攪拌25min，靜止12min，在4000r/min的條件下離心12min，氯化鈉與核糖核酸形成易溶于水的核糖核酸鹽，傾倒上清液即可除去核糖核酸，并獲得沉淀脫氧核糖核蛋白，而苯甲基磺酰氟是蛋白酶抑制劑，可保護(hù)魚精蛋白；
2）硫酸提?。合虺恋砦锛尤霛舛葹?%的硫酸溶液，硫酸溶液與沉淀物的體積重量比為5:1，在組織搗碎機(jī)中充分?jǐn)囁?，然后再攪拌提?.5h，在4500r/min的條件下離心18min，棄去沉淀，收集上清液，該步驟中硫酸與魚精蛋白形成易溶于水的硫酸魚精蛋白，魚精蛋白與脫氧核糖核苷酸之間的鍵斷裂，沉淀物質(zhì)是脫氧核糖核酸；
3）乙醇沉淀：向上清液中加入的無(wú)水乙醇，在冰浴條件下沉淀靜置2h，4000r/min的條件下離心15min，留下沉淀物，該步驟利用魚精蛋白素呈堿性，能溶于水和稀酸，不易溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑，穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，利用乙醇除去雜質(zhì)蛋白質(zhì)；
4）洗滌：向沉淀物中加入丙酮溶液反復(fù)洗滌，去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)，提高魚精素的純度，干燥，即得魚精素，產(chǎn)品得率為7.98%，該魚精素具有良好的抑菌活性，能明顯的抑制革蘭氏陽(yáng)性菌（g+）、霉菌、酵母的生長(zhǎng)，對(duì)巨大芽孢桿菌、枯草桿菌等也有一定抑制作用，是一種無(wú)毒、無(wú)副作用、安全性高的天然食品防腐劑，可防止食品腐敗變質(zhì)，延長(zhǎng)食品的貨架期，還能夠與許多種類的蛋白質(zhì)相互結(jié)合從而形成不同的蛋白質(zhì)復(fù)合物，具有很好的藥用價(jià)值，含有豐富的精氨酸，其能夠緩解疲勞，促進(jìn)垂體釋放性腺激素及強(qiáng)化肝功能等作用，對(duì)男性不育癥有輔助的作用；
5）后處理：將60重量份的魚精素、2重量份抗氧化多肽，抗氧化多肽的氨基酸序列為hsklcvcvncfccgaakcylcrvlhpgklcvcncsk，具有較好的抗氧化特性，能夠抑制由金屬離子、血紅蛋白、脂酶和單線態(tài)氧、o2-、·oh、roo·催化的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，具有螯合金屬離子的能力，可有效地抑制非金屬離子催化脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，激活機(jī)體本身內(nèi)在的抗氧化防御系統(tǒng)，達(dá)到保健的效果。
實(shí)施例2：
一種金槍魚魚精素產(chǎn)品的加工方法，包括精巢組織中脫氧核糖核蛋白的提取，硫酸提取，乙醇沉淀，洗滌，具體操作步驟為：
1）精巢組織中脫氧核糖核蛋白的提?。喝〕墒斓慕饦岕~精巢組織，洗凈，放入組織搗碎機(jī)中，加入0.1mol/l氯化鈉溶液和苯甲基磺酰氟，氯化鈉溶液與精巢組織的體積重量比為3:1，苯甲基磺酰氟的添加量為精巢組織重量的0.04%，充分勻漿后攪拌25min，靜止15min，在4000r/min的條件下離心12min，氯化鈉與核糖核酸形成易溶于水的核糖核酸鹽，傾倒上清液即可除去核糖核酸，并獲得沉淀脫氧核糖核蛋白，而苯甲基磺酰氟是蛋白酶抑制劑，可保護(hù)魚精蛋白；
2）硫酸提?。合虺恋砦锛尤霛舛葹?%的硫酸溶液，硫酸溶液與沉淀物的體積重量比為4:1，在組織搗碎機(jī)中充分?jǐn)囁?，然后再攪拌提?h，在5000r/min的條件下離心15min，棄去沉淀，收集上清液，該步驟中硫酸與魚精蛋白形成易溶于水的硫酸魚精蛋白，魚精蛋白與脫氧核糖核苷酸之間的鍵斷裂，沉淀物質(zhì)是脫氧核糖核酸；
3）乙醇沉淀：向上清液中加入的無(wú)水乙醇，在冰浴條件下沉淀靜置2.5h，4500r/min的條件下離心10min，留下沉淀物，該步驟利用魚精蛋白素呈堿性，能溶于水和稀酸，不易溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑，穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，利用乙醇除去雜質(zhì)蛋白質(zhì)；
4）洗滌：向沉淀物中加入丙酮溶液反復(fù)洗滌，去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)，提高魚精素的純度，干燥，即得魚精素，產(chǎn)品得率為6.87%，該魚精素具有良好的抑菌活性，能明顯的抑制革蘭氏陽(yáng)性菌（g+）、霉菌、酵母的生長(zhǎng)，對(duì)巨大芽孢桿菌、枯草桿菌等也有一定抑制作用，是一種無(wú)毒、無(wú)副作用、安全性高的天然食品防腐劑，可防止食品腐敗變質(zhì)，延長(zhǎng)食品的貨架期，還能夠與許多種類的蛋白質(zhì)相互結(jié)合從而形成不同的蛋白質(zhì)復(fù)合物，具有很好的藥用價(jià)值，含有豐富的精氨酸，其能夠緩解疲勞，促進(jìn)垂體釋放性腺激素及強(qiáng)化肝功能等作用，對(duì)男性不育癥有輔助的作用。
5）后處理：將58重量份的魚精素、3重量份抗氧化多肽，抗氧化多肽的氨基酸序列為hsklcvcvncfccgaakcylcrvlhpgklcvcncsk，具有較好的抗氧化特性，能夠抑制由金屬離子、血紅蛋白、脂酶和單線態(tài)氧、o2-、·oh、roo·催化的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，具有螯合金屬離子的能力，可有效地抑制非金屬離子催化脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，激活機(jī)體本身內(nèi)在的抗氧化防御系統(tǒng)，達(dá)到保健的效果。
實(shí)施例3：
金槍魚魚精素對(duì)幾種微生物的最低抑菌濃度（mic）的測(cè)定：
選用的菌種為金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、枯草芽胞桿菌、青霉、酵母，測(cè)定結(jié)果如表2所示，從表中數(shù)據(jù)可知魚精素對(duì)金黃色葡萄球菌和沙門氏菌的mic均小于5‰，抑菌效果較明顯；柔魚魚精蛋白對(duì)另外4種菌的mic均為10‰，均有抑菌效果。
表2：金槍魚魚精素對(duì)幾種微生物的最低抑菌濃度
注：上表中“+”表示培養(yǎng)基中有菌落生長(zhǎng)，“-”表示培養(yǎng)基中無(wú)菌落生長(zhǎng)。
本發(fā)明的操作步驟中的常規(guī)操作為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，在此不進(jìn)行贅述。
以上所述的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，應(yīng)理解的是以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則范圍內(nèi)所做的任何修改、補(bǔ)充或類似方式替代等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
sequencelisting
<110>舟山達(dá)康科技有限公司
<120>一種金槍魚魚精素產(chǎn)品的加工方法
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