1.利用魚(yú)類(lèi)下腳料和固定化酶制備緩釋性海參餌料的方法,其特征在于:其經(jīng)過(guò)下列工藝步驟:
(a)魚(yú)類(lèi)下腳料發(fā)酵處理
(a1)發(fā)酵種子液的培養(yǎng)
在DAE培養(yǎng)基中接入W2菌種,控制溫度20~25℃,在150~180r/min條件下,培養(yǎng)2~3d,得種子菌液,所述的種子菌液OD600為1.0~1.2;其中,所述的DAE培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨0.4~0.8g,酵母膏0.05~0.2g,磷酸鐵0.01~0.02g,海水90~100ml;所述的W2菌種為魚(yú)腸道中分離篩選得到的產(chǎn)蛋白酶菌株,該W2菌種與所述的DAE培養(yǎng)基的接種比例為1:300~500;
(a2)魚(yú)類(lèi)下腳料發(fā)酵液的制備
選取魚(yú)下腳料為原料,研磨至肉糜狀;稱(chēng)量肉糜狀魚(yú)類(lèi)下腳料放入步驟(a1)制得的種子菌液中,控制溫度20~25℃,在150~180r/min條件下,培養(yǎng)2~3d,取發(fā)酵液,得魚(yú)類(lèi)下腳料發(fā)酵液;其中,所述的肉糜狀魚(yú)類(lèi)下腳料與種子菌液的料液比為1:20~25;
(b)固定化酶的制備
(b1)載體制備
稱(chēng)取殼聚糖溶解于濃度為20~30%的鹽酸溶液中,配成殼聚糖溶液;然后將制得的殼聚糖溶液注射到含15%的氫氧化鈉和30%甲醇混合溶液中,凝結(jié)成中空球形殼聚糖;其中,所述的殼聚糖與鹽酸溶液的料液比為1:3~5,所述的殼聚糖的脫乙酰度為80%~85%;
(b2)載體活化
將步驟(b1)制得的中空球形殼聚糖放入濃度為4~8%的戊二醛水溶液中,于室溫下攪拌反應(yīng)4~6h,然后4℃靜置過(guò)夜,去上清液后用水清洗2~3次,去除殘余的戊二醛,得戊二醛活化處理的中空球形殼聚糖;其中,所述的中空球形殼聚糖與戊二醛水溶液的料液比為1:2~3;
(b3)酶的包埋
將步驟(b2)制得的戊二醛活化處理的中空球形殼聚糖分別加入不同pH 值緩沖液配置的中性蛋白酶、堿性蛋白酶和酸性蛋白酶制劑中,室溫下攪拌反應(yīng)2~3h ,于4℃靜置過(guò)夜,用水清洗去除游離酶,即得固定化的中性蛋白酶、堿性蛋白酶和酸性蛋白酶;其中,所述的中性蛋白酶的緩沖液pH 值為6.8~7.5;所述的堿性蛋白酶的緩沖液pH 值為8.5~10.5;所述的酸性蛋白酶的緩沖液pH 值為4.0~4.5;
(c)投放
將步驟(b3)制得的固定化的中性蛋白酶、堿性蛋白酶和酸性蛋白酶與步驟(a2)制得的魚(yú)類(lèi)下腳料發(fā)酵液按料液比為1:50~100投入海參養(yǎng)殖水域中。