本發(fā)明屬于發(fā)酵乳領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵乳的制備方法。此外，本發(fā)明還涉及一種發(fā)酵乳及發(fā)酵乳粉。
背景技術(shù)：
近年來，糖尿病在全世界廣泛流行，目前已成為繼腫瘤、心血管疾病之后第三大類嚴(yán)重危害人類健康的慢性疾病。隨著我國經(jīng)濟(jì)、社會的迅速發(fā)展，膳食結(jié)構(gòu)和生活方式的改變，人口老齡化速度的加快，糖尿病的患病率也呈現(xiàn)快速增加的趨勢。在糖尿病患病率快速上升的同時(shí)，我國糖尿病的知曉率、治療率及控制率明顯偏低。糖尿病已成為一個(gè)嚴(yán)重危害我國人群健康的公共衛(wèi)生問題，對經(jīng)濟(jì)社會發(fā)展產(chǎn)生越來越嚴(yán)重的影響。
根據(jù)發(fā)病機(jī)制不同，糖尿病分為I型糖尿病(胰島素依賴型)和II型糖尿病(非胰島素依賴型)，后者約占糖尿病總數(shù)的85％以上。迄今為止，治療II型糖尿病的藥物根據(jù)治療機(jī)制不同主要分為：(1)促胰島素分泌劑；(2)胰島素增敏劑；(3)α-葡萄糖苷酶抑制劑(α-GI)。由于α-GI具有作用溫和持久、毒副作用小甚至無毒的優(yōu)點(diǎn)，因此得到越來越多國內(nèi)外研究者的青睞。
研究表明，α-葡萄糖苷酶抑制劑(α-GI)可有效地降低糖尿病人的餐后高血糖，作為口服降糖藥的一種，其發(fā)生作用的場所位于小腸，作用方式是抑制小腸體內(nèi)的α-葡萄糖苷酶活性，從而達(dá)到降低餐后高血糖的目的。如果使用者飲食中碳水化合物占50％以上，則降糖效果更為明顯，因此其適用于以碳水化合物為主食的人群，尤其是中老年糖尿病患者。
普通發(fā)酵乳中通常會含有大量的糖，所以高血糖的病人不能飲用。而目前所發(fā)現(xiàn)的α-GI雖能克服傳統(tǒng)降糖藥的一些缺點(diǎn)，但其來源相對狹窄，主要集中于放線菌，這些菌株無法代謝脫脂乳產(chǎn)生α-葡萄糖苷酶抑制劑，因此，市場上至今未有具備顯著抑制α-葡萄糖苷酶活性的發(fā)酵型乳制品面市，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
基于上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種新的發(fā)酵乳的制備方法，采用該方法可以制得具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的發(fā)酵乳制品。
具體的，一方面，提供了一種發(fā)酵乳的制備方法，包括以下步驟：將牛類芽孢桿菌(Paenibacillus bovis)CGMCC No.8333接種于脫脂乳中進(jìn)行發(fā)酵，得到發(fā)酵乳。
進(jìn)一步地，上述牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333的接種量為1.25x106～1x107cfu/mL。
進(jìn)一步地，上述脫脂乳包括脫脂乳粉和水，脫脂乳粉占脫脂乳的質(zhì)量百分比為6～12％。
進(jìn)一步地，上述發(fā)酵的溫度為20℃～35℃。
進(jìn)一步地，上述發(fā)酵的時(shí)間為3～12h。
進(jìn)一步地，上述發(fā)酵為振蕩培養(yǎng)，振蕩速度為100～300rpm。
第二方面，還提供了一種發(fā)酵乳，由上述任一種制備方法制得。
第三方面，還提供一種發(fā)酵乳粉，由上述發(fā)酵乳進(jìn)行冷凍干燥制得。
進(jìn)一步地，上述發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度IC50≤86mg/mL。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，上述技術(shù)方案中的制備方法，首次采用牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333，以脫脂乳作為培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，制備得到具有α-葡萄糖苷酶抑制活性發(fā)酵乳，披露了牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333具有發(fā)酵脫脂乳生成α-葡萄糖苷酶抑制劑的新用途。與其他常規(guī)發(fā)酵脫脂乳的菌株相比，牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333所制備的發(fā)酵乳對α-葡萄糖苷酶的抑制活性更顯著，并且穩(wěn)定性較好。
具體實(shí)施方式
為更清楚的對本發(fā)明技術(shù)方案予以闡述，下面將結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步闡述：
在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，提供了一種發(fā)酵乳的制備方法，包括以下步驟：將牛類芽孢桿菌(Paenibacillus bovis)CGMCC No.8333接種于脫脂乳中進(jìn)行發(fā)酵，得到發(fā)酵乳。
上述技術(shù)方案中的制備方法，首次采用牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333，以脫脂乳作為培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，制備得到具有α-葡萄糖苷酶抑制活性發(fā)酵乳，披露了牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333具有發(fā)酵脫脂乳生成α-葡萄糖苷酶抑制劑的新用途。與其他常規(guī)發(fā)酵脫脂乳的菌株相比，牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333所制備的發(fā)酵乳對α-葡萄糖苷酶的抑制活性更顯著，并且穩(wěn)定性較好。
此外，上述技術(shù)方案中的制備方法極大簡化了生產(chǎn)步驟，節(jié)省了生產(chǎn)成本，同時(shí)降低了非連續(xù)性操作中帶來的污染風(fēng)險(xiǎn)；制備所采用的發(fā)酵培養(yǎng)基來源廣泛、成本低廉、天然安全，在降低物料成本的同時(shí)，提高了食品的安全性。
進(jìn)一步地，牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333的接種量為1.25x106～1x107cfu/mL；較佳地為2.5x106～7.5x106cfu/mL，更佳地為5x106cfu/mL。
脫脂乳可以是新鮮的脫脂乳，也可以是配制而成的脫脂乳。優(yōu)選的為配制的脫脂乳，配制的脫脂乳包括脫脂乳粉和水，脫脂乳粉占脫脂乳的質(zhì)量百分比為6～12％。制備方法可以包括以下步驟：在蒸餾水中加入脫脂乳粉，混勻充分溶解后，95～125℃滅菌5～20分鐘，冷卻即得。
優(yōu)選的發(fā)酵溫度為20℃～35℃；較佳地為25℃～35℃；更佳地為30℃。
優(yōu)選的發(fā)酵時(shí)間為3～12h；較佳地為6～12小時(shí)；更佳地為6小時(shí)。
優(yōu)選的發(fā)酵方式為振蕩培養(yǎng)，振蕩速度為100～300rpm；較佳地為150～250rpm；更佳地為200rpm。
結(jié)合實(shí)施例和比較例1亦可知，在優(yōu)選發(fā)酵參數(shù)的范圍之外時(shí)，牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333發(fā)酵脫脂乳的產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶抑制效果明顯下降。而在優(yōu)選范圍之內(nèi)，接種量、脫脂乳濃度、發(fā)酵溫度和時(shí)間相互影響，使得牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333發(fā)酵產(chǎn)生的具有α-葡萄糖苷酶抑制效果的發(fā)酵乳的抑制效果更佳。例如，在接種量過少時(shí)，菌種繁殖速度慢，使得最終獲得的發(fā)酵乳對α-葡萄糖苷酶的抑制活性低于優(yōu)選的接種量范圍；當(dāng)接種量過多時(shí)，一定時(shí)間后菌種個(gè)體因生存空間及營養(yǎng)的限制而死亡或停滯生長，不利于代謝物的積累，也使得最終獲得的發(fā)酵乳對α-葡萄糖苷酶的抑制活性低于優(yōu)選的接種量范圍。又例如，當(dāng)發(fā)酵溫度低于優(yōu)選范圍值時(shí)，菌種代謝緩慢，會導(dǎo)致發(fā)酵乳的α-葡萄糖苷酶抑制活性有所降低。還例如，發(fā)酵的振蕩速度低于優(yōu)選范圍時(shí)，菌種發(fā)酵的溶氧量不夠，生產(chǎn)和代謝受到限制，導(dǎo)致發(fā)酵乳的α-葡萄糖苷酶抑制劑活性降低。
在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，提供了一種發(fā)酵乳，該發(fā)酵乳由上述任一種發(fā)酵乳的制備方法制得。此外，提供了一種發(fā)酵乳粉，該發(fā)酵乳粉由上述的發(fā)酵乳進(jìn)行冷凍干燥制得。
由于發(fā)酵乳的制備方法具備上述的有益效果，由該制備方法制得的發(fā)酵乳以及發(fā)酵乳粉也具有相應(yīng)的有益效果，此處不再贅述。
較佳地，上述的冷凍干燥為真空冷凍干燥，真空冷凍干燥條件較佳地為：板層極限溫度≤-60℃，冷阱極限溫度-70℃，板層裝料厚度0.5～2.0mm，真空度10～30Pa。
采用冷凍干燥，將發(fā)酵乳制備成發(fā)酵乳粉，從而更便于消費(fèi)者使用和運(yùn)輸，同時(shí)，冷凍干燥得到的發(fā)酵乳粉的α-葡萄糖苷酶抑制活性不會產(chǎn)生較大的變化。
進(jìn)一步的，上述發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度IC50≤86mg/mL。結(jié)合實(shí)施例亦可知，上述發(fā)酵乳粉的α-葡萄糖苷酶的抑制活性顯著高于其他常規(guī)脫脂乳發(fā)酵菌株。
下面通過實(shí)施例進(jìn)一步說明上述具體實(shí)施方式，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。
下述實(shí)施例中，所有原料均為市售，并均符合相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)。
實(shí)施例1
1、材料與方法
(a)種子(發(fā)酵菌種)的制備：將牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333(該菌株的來源請參見公開號為CN 103740618A的中國專利)的凍干粉用少量無菌蒸餾水溶解，用接種環(huán)取一環(huán)劃線于TYC固體培養(yǎng)基(購買自O(shè)XOID Co.，英國)，30℃好氧培養(yǎng)48h取出，用接種環(huán)挑取單菌落放入10mL TYC液體培養(yǎng)基(購買自O(shè)XOID Co.，英國)，運(yùn)用渦旋振蕩器將菌落均勻分散于液體培養(yǎng)基內(nèi)，30℃、180rpm振蕩培養(yǎng)24h取出，以2％(v/v)接種量接種于TYC液體培養(yǎng)基(購買自O(shè)XOID Co.，英國)，30℃、180rpm振蕩培養(yǎng)24h后，培養(yǎng)物15,000rpm離心10分鐘，棄去上清，菌體用無菌蒸餾水洗滌2次后，用原培養(yǎng)體積的無菌蒸餾水懸浮，得到發(fā)酵用的種子，種子液的菌濃度為2.5x108cfu/mL。
(b)脫脂乳的制備：將質(zhì)量百分比為10％的脫脂乳粉與蒸餾水混勻，充分溶解后，在125℃下滅菌5min，冷卻至室溫，即得所需濃度的脫脂乳。
(c)待測樣品制備：將發(fā)酵乳粉溶解于無菌水中，煮沸10min后冷卻至室溫，再4℃、10,000rpm離心10min，取上清，pH調(diào)節(jié)至6.80，再次4℃、10,000rpm離心10min，取得的上清即可用于α-葡萄糖苷酶抑制活性的檢測。
α-葡萄糖苷酶抑制活性的檢測：取100μL待測樣品于1.5mL EP(Eppendorf)管，接著加入50μLα-葡萄糖苷酶(100mU/mL，sigma，美國)，混勻，37℃溫育15min，然后加入80μL 2mM的PNPG(sigma，美國)，混勻，37℃反應(yīng)15min，最后加入80μL 0.2M的Na2CO3終止反應(yīng)，再4℃、10,000rpm離心2min，取200μL上清于96孔微孔板(Greinerbio-one，德國)，在405nm波長下用Spectra Max M5多功能酶標(biāo)儀(MolecularDevices,美國)測定吸光度值。待測樣品對α-葡萄糖苷酶的抑制活性如以下公式所示：
其中：陰性對照組為空白脫脂乳替代待測樣品；
陰性空白組為0.1M、pH＝6.8的磷酸鹽緩沖液(PBS)替代陰性對照組中的α-葡萄糖苷酶；
樣品空白組為PBS替代待測樣品組中的α-葡萄糖苷酶。
α-葡萄糖苷酶半抑制率濃度IC50的測定：以倍半稀釋的方法將待測樣品溶液進(jìn)行稀釋，獲得不同濃度的待測樣品組，利用上述檢測方法測定不同濃度的待測樣品對α-葡萄糖苷酶的抑制率，根據(jù)濃度與α-葡萄糖苷酶抑制率構(gòu)成的線性關(guān)系計(jì)算得出樣品對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度(IC50)。
2、具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的發(fā)酵乳及發(fā)酵乳粉的制備
將牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333種子以接種量2％(v/v，種子液占發(fā)酵液的體積百分比，下同)無菌接種于10％(w/w)脫脂乳，30℃、200rpm培養(yǎng)6小時(shí)得發(fā)酵乳。
將發(fā)酵乳冷凍干燥即得發(fā)酵乳粉A。
3、α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定
將發(fā)酵乳粉A以上述方法制備為待測樣品后測定其對α-葡萄糖苷酶抑制活性，結(jié)果表明該發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度IC50＝59mg/mL。
實(shí)施例2
1、材料與方法
(a)種子(發(fā)酵菌種)的制備：同實(shí)施例1。
(b)脫脂乳的制備：將質(zhì)量百分比為12％的脫脂乳粉與蒸餾水混勻，充分溶解后，在95℃下滅菌20min，冷卻至室溫，即得所需濃度的脫脂乳。
(c)待測樣品制備：同實(shí)施例1。
2、具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的發(fā)酵乳及發(fā)酵乳粉的制備
將牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333種子以接種量0.5％(v/v)無菌接種于12％(w/w)脫脂乳，35℃、100rpm培養(yǎng)12小時(shí)得發(fā)酵乳。
將發(fā)酵乳冷凍干燥即得發(fā)酵乳粉B。
3、α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定
將發(fā)酵乳粉B以上述方法制備為待測樣品后測定其對α-葡萄糖苷酶抑制活性，結(jié)果表明該發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度IC50＝68mg/mL。
實(shí)施例3
1、材料與方法
(a)種子(發(fā)酵菌種)的制備：同實(shí)施例1。
(b)脫脂乳的制備：將質(zhì)量百分比為6％的脫脂乳粉與蒸餾水混勻，充分溶解后，在100℃下滅菌15min，冷卻至室溫，即得所需濃度的脫脂乳。
(c)待測樣品制備：同實(shí)施例1。
2、具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的發(fā)酵乳及發(fā)酵乳粉的制備
將牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333種子以接種量4％(v/v)無菌接種于6％(w/w)脫脂乳，20℃、300rpm培養(yǎng)3小時(shí)得發(fā)酵乳。
將發(fā)酵乳冷凍干燥即得發(fā)酵乳粉C。
3、α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定
將發(fā)酵乳C以上述方法制備為待測樣品后測定其對α-葡萄糖苷酶抑制活性，結(jié)果表明該發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度IC50＝86mg/mL。
實(shí)施例4
1、材料與方法
(a)種子(發(fā)酵菌種)的制備：同實(shí)施例1。
(b)脫脂乳的制備：將質(zhì)量百分比為8％的脫脂乳粉與蒸餾水混勻，充分溶解后，在120℃下滅菌10min，冷卻至室溫，即得所需濃度的脫脂乳。
(c)待測樣品制備：同實(shí)施例1。
2、具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的發(fā)酵乳及發(fā)酵乳粉的制備
將牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333種子以接種量3％(v/v)無菌接種于8％(w/w)脫脂乳，25℃、250rpm培養(yǎng)5小時(shí)得發(fā)酵乳。
將發(fā)酵乳冷凍干燥即得發(fā)酵乳粉D。
3、α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定
將發(fā)酵乳D以上述方法制備為待測樣品后測定其對α-葡萄糖苷酶抑制活性，結(jié)果表明該發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度IC50＝66mg/mL。
實(shí)施例5
1、材料與方法
(a)種子(發(fā)酵菌種)的制備：同實(shí)施例1。
(b)脫脂乳的制備：將質(zhì)量百分比為9％的脫脂乳粉與蒸餾水混勻，充分溶解后，在115℃下滅菌12min，冷卻至室溫，即得所需濃度的脫脂乳。
(c)待測樣品制備：同實(shí)施例1。
2、具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的發(fā)酵乳及發(fā)酵乳粉的制備
將牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333種子以接種量1％(v/v)無菌接種于9％(w/w)脫脂乳，28℃、150rpm培養(yǎng)9小時(shí)得發(fā)酵乳。
將發(fā)酵乳冷凍干燥即得發(fā)酵乳粉E。
3、α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定
將發(fā)酵乳E以上述方法制備為待測樣品后測定其對α-葡萄糖苷酶抑制活性，結(jié)果表明該發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度IC50＝72mg/mL。
效果實(shí)施例1產(chǎn)品口味與喜好程度測試
取上述實(shí)施例1-5所制備的發(fā)酵乳粉產(chǎn)品A、B、C、D和E溶解于溫水中，得到濃度為100mg/mL的發(fā)酵乳溶液，以此為實(shí)驗(yàn)對象，進(jìn)行產(chǎn)品的口味測試。測試人數(shù)50人。品嘗方式：采用不記名打分的方式進(jìn)行品嘗；分別對上述發(fā)酵乳粉產(chǎn)品A、B、C、D和E的色澤、風(fēng)味、口感、營養(yǎng)項(xiàng)進(jìn)行單獨(dú)打分，每一項(xiàng)滿分是25分，計(jì)算平均分及其總分，統(tǒng)計(jì)結(jié)果記錄于表1。同時(shí)，根據(jù)對產(chǎn)品的整體喜好程度給出的意見，統(tǒng)計(jì)對每個(gè)單品的喜好人數(shù)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果記錄于表2。
表1產(chǎn)品口味測試結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表
表2產(chǎn)品喜好程度測試結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表
從產(chǎn)品口味測試和喜好程度統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，總體而言，通過本發(fā)明技術(shù)方案中的方法所制得的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的發(fā)酵乳粉在產(chǎn)品風(fēng)味、口感、營養(yǎng)方面可被大部分消費(fèi)者所接受。
效果實(shí)施例2冷藏條件下發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶抑制效果的穩(wěn)定性
將實(shí)施例1-5制備的發(fā)酵乳粉A、B、C、D和E置于常溫條件(25℃)保存0、10、20和30天后取出，分別測定各樣品對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度IC50值，結(jié)果如表3所示。
表3常溫條件下發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶抑制效果的穩(wěn)定性
由表3可知，所有測試的發(fā)酵乳粉在常溫(25℃)保存30天后，對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度IC50穩(wěn)定保持在同一水平，穩(wěn)定性較好。
對比例1
將實(shí)施例1中的接種量，脫脂乳濃度，培養(yǎng)溫度，發(fā)酵時(shí)間以及發(fā)酵振蕩的速度逐一進(jìn)行調(diào)整，獲得了以下一組不同方法制備的發(fā)酵乳粉，各組所得發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的抑制效果如表4所示。
表4不同方法制備所得發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的抑制效果
從表4所示的結(jié)果中可以得出，將所述發(fā)酵乳粉的制備方法中接種量，脫脂乳濃度，培養(yǎng)溫度，發(fā)酵時(shí)間以及發(fā)酵振蕩的速度調(diào)整到優(yōu)選范圍之外的時(shí)候，牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333依然可以發(fā)酵脫脂乳產(chǎn)生α-葡萄糖苷酶抑制劑，但是產(chǎn)物的α-葡萄糖苷酶抑制效果明顯下降。
對比例2
參考實(shí)施例1所述方法，比較由牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333、干酪乳桿菌(L.casei)ATCC 393(購買自ATCC)、保加利亞乳桿菌(L.bulgaricus)LB340(由丹尼斯科公司提供)、嗜熱鏈球菌(S.thermophilus)ST-BODY-3(由科.漢森公司提供)制備的發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的抑制效果，具體操作如下：
1、材料與方法
(a)種子(發(fā)酵菌種)的制備：
干酪乳桿菌和保加利亞乳桿菌種子的制備：將干酪乳桿菌ATCC 393和保加利亞乳桿菌LB340的凍干粉分別用少量無菌蒸餾水溶解，各自用接種環(huán)取一環(huán)劃線于MRS固體培養(yǎng)基(購買自Merck Co.德國)上，37℃厭氧培養(yǎng)24h取出，用接種環(huán)挑取單菌落放入1mL MRS液體(購買自Merck Co.德國)，運(yùn)用渦旋震蕩器將菌落均勻分散于液體培養(yǎng)基內(nèi)，37℃厭氧培養(yǎng)24h取出，以2％(v/v)接種量接種于50mL MRS液體，37℃培養(yǎng)24h后，培養(yǎng)物9,000rpm離心10分鐘，棄去上清，菌體用無菌蒸餾水洗滌2次后，用原培養(yǎng)體積的無菌蒸餾水懸浮，得到相應(yīng)的發(fā)酵用的種子。
嗜熱鏈球菌種子的制備：將嗜熱鏈球菌ST-BODY-3的凍干粉用少量無菌蒸餾水溶解，用接種環(huán)取一環(huán)劃線于M17固體培養(yǎng)基(購買自Merck Co.德國)上，40℃厭氧培養(yǎng)24h取出，用接種環(huán)挑取單菌落放入1mL M17液體(購買自Merck Co.德國)，運(yùn)用渦旋震蕩器將菌落均勻分散于液體培養(yǎng)基內(nèi)，40℃厭氧培養(yǎng)24h取出，以2％(v/v)接種量接種于50mLM17液體，40℃培養(yǎng)24h后，培養(yǎng)物9,000rpm離心10分鐘，棄去上清，菌體用無菌蒸餾水洗滌2次后，用原培養(yǎng)體積的無菌蒸餾水懸浮，得到發(fā)酵用的種子。
(b)脫脂乳的制備：同實(shí)施例1。
(c)待測樣品制備：同實(shí)施例1。
2、發(fā)酵乳及發(fā)酵乳粉的制備
將各菌株以2％(v/v)接種量無菌接種于10％(w/w)脫脂乳，分別培養(yǎng)(保加利亞乳桿菌和干酪乳桿菌37℃厭氧培養(yǎng)，嗜熱鏈球菌40℃厭氧培養(yǎng)，牛類芽孢桿菌30℃、200rpm振蕩培養(yǎng))6h，獲得相應(yīng)的發(fā)酵乳。
將相應(yīng)的發(fā)酵乳冷凍干燥制得相應(yīng)的發(fā)酵乳粉。
3、α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定
上述不同菌株制備的發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度IC50如表5所示：
表5不同菌株制備的發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的半抑制率濃度IC50
由表5可知，其他常規(guī)脫脂乳發(fā)酵菌株發(fā)酵脫脂乳的產(chǎn)物不具有α-葡萄糖苷酶的抑制活性，而牛類芽孢桿菌CGMCC No.8333制備的發(fā)酵乳粉對α-葡萄糖苷酶的抑制活性非常顯著。
以上對本發(fā)明所提供的發(fā)酵乳、發(fā)酵乳的制備方法以及發(fā)酵乳粉進(jìn)行了詳細(xì)介紹。本文中應(yīng)用了具體個(gè)例對本發(fā)明的原理及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。