本發(fā)明涉及一種具有飽腹感效果大豆肽的制備方法。

背景技術(shù)：

我國(guó)目前肥胖人口高達(dá)8960萬(wàn)，居世界第二。目前，人們?cè)敢膺x擇高飽腹感的食物來(lái)達(dá)到健康減肥的目的，一般采用膳食纖維。但是膳食纖維不宜長(zhǎng)期食用，會(huì)阻礙維生素和氨基酸的其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。所以本發(fā)明中制備的飽食肽可以替代膳食纖維提供飽腹感，可以長(zhǎng)期攝入而且沒(méi)有副作用，還可以起到補(bǔ)充氨基酸，補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)的效果。

大豆蛋白雖然具有高飽腹感，但其具有消化吸收率較低和溶解性差的缺點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明是要解決現(xiàn)有大豆蛋白消化率較低，吸收較低的問(wèn)題，提供一種高溶解性高吸收率的功能性飽食肽的制備方法。

本發(fā)明高溶解性高吸收率的功能性飽食肽的制備方法，按以下步驟進(jìn)行：

一、將大豆分離蛋白粉末置于蒸餾水中，攪拌均勻，制備成大豆分離蛋白懸濁液，將大豆分離蛋白懸濁液置于90℃恒溫水浴鍋中10～15min，然后冷卻至室溫，調(diào)整懸濁液的pH值為2～3，按照酶底比為(6～8)∶100向大豆分離蛋白懸濁液中加入胃蛋白酶，酶解20～24h，之后至于90℃恒溫水浴鍋中10～15min，冷卻至室溫，得到酶解后的溶液；

二、然后對(duì)酶解后的溶液調(diào)整pH值至4～5，并于4000～5000r/min下離心10～15min，取上清液，對(duì)上清液進(jìn)行透析和超濾處理，除去金屬離子，然后噴霧干燥即得到白色粉末狀飽食肽。

步驟一所述大豆分離蛋白懸濁液的濃度為30～50g/L。

所述胃蛋白酶購(gòu)買(mǎi)自北京鴻潤(rùn)寶順科技有限公司。

所述大豆分離蛋白購(gòu)買(mǎi)自哈高科大豆食品有限責(zé)任公司。

本發(fā)明的有益效果：

飽食肽是蛋白質(zhì)水解產(chǎn)生的，富含精氨酸的活性肽，能刺激機(jī)體產(chǎn)生飽腹感，具有較高的吸收率和溶解度。針對(duì)大豆蛋白吸收率低，溶解性差，利用胃蛋白酶水解大豆蛋白制備的飽食肽，具有提高蛋白的溶解性和消化率，降低過(guò)敏的作用。

本發(fā)明在大豆蛋白這種天然生物大分子的基礎(chǔ)上，采用內(nèi)切酶胃蛋白酶破壞大豆蛋白的空間結(jié)構(gòu)，親水性氨基酸殘基暴露，改善大豆蛋白的溶解性。且肽鏈結(jié)構(gòu)更容易刺激腸粘膜細(xì)胞產(chǎn)生飽腹感，更有利于提高飽腹感，降低過(guò)敏原對(duì)機(jī)體的傷害，提高了溶解性，和吸收率。避免膳食纖維對(duì)機(jī)體氨基酸，維生素和鈣鐵離子的抑制。為減肥產(chǎn)品的飽腹效果方面提供新的生物活性材料。不僅提上大豆蛋白制品的加工技術(shù)水平進(jìn)而拓寬其應(yīng)用范疇具有重要的理論及實(shí)踐價(jià)值，而且對(duì)研發(fā)新型蛋白基生物材料具有重要的科學(xué)意義。

通過(guò)對(duì)本發(fā)明方法制備得到的飽食肽功能性評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)，在pH值為4.0時(shí)，飽食肽的溶解度為90.64±4.15％，飽食肽的消化率可達(dá)到96.67±2.55％。有利于其添加到各類(lèi)食品中。

附圖說(shuō)明

圖1為具體實(shí)施方式七中飽食肽的溶解性評(píng)價(jià)結(jié)果。

圖2為具體實(shí)施方式七中飽食肽的腸粘膜細(xì)胞評(píng)價(jià)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式，還包括各具體實(shí)施方式間的任意組合。

具體實(shí)施方式一：本實(shí)施方式高溶解性高吸收率的功能性飽食肽的制備方法，按以下步驟進(jìn)行：

一、將大豆分離蛋白粉末置于蒸餾水中，攪拌均勻，制備成大豆分離蛋白懸濁液，將大豆分離蛋白懸濁液置于90℃恒溫水浴鍋中10～15min，然后冷卻至室溫，調(diào)整懸濁液的pH值為2～3，按照酶底比為(6～8)∶100向大豆分離蛋白懸濁液中加入胃蛋白酶，酶解20～24h，之后至于90℃恒溫水浴鍋中10～15min，冷卻至室溫，得到酶解后的溶液；

二、然后對(duì)酶解后的溶液調(diào)整pH值至4～5，并于4000～5000r/min下離心10～15min，取上清液，對(duì)上清液進(jìn)行透析和超濾處理，除去金屬離子，然后噴霧干燥即得到白色粉末狀飽食肽。

具體實(shí)施方式二：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是：步驟一所述大豆分離蛋白懸濁液的濃度為30～50g/L。其它與具體實(shí)施方式一相同。

具體實(shí)施方式三：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是：步驟一所述大豆分離蛋白懸濁液的濃度為40g/L。其它與具體實(shí)施方式一相同。

具體實(shí)施方式四：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至三之一不同的是：步驟一中調(diào)整懸濁液的pH值為2.7。其它與具體實(shí)施方式一至三之一相同。

具體實(shí)施方式五：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至四之一不同的是：步驟一中酶底比為7∶100。其它與具體實(shí)施方式一至四之一相同。

具體實(shí)施方式六：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至五之一不同的是：步驟一中對(duì)酶解后的溶液調(diào)整pH值至4.6。其它與具體實(shí)施方式一至五之一相同。

具體實(shí)施方式七：本實(shí)施方式高溶解性高吸收率的功能性飽食肽的制備方法，按以下步驟進(jìn)行：

將4g大豆分離蛋白粉末置于100mL蒸餾水中，攪拌均勻，制備成大豆分離蛋白懸濁液，置于恒溫水浴鍋90℃，10min，冷卻至室溫后，調(diào)整懸濁液的pH值為2.7，按照酶底比為7∶100向大豆分離蛋白懸濁液中加入胃蛋白酶，酶解20h，至于恒溫水浴鍋中90℃，10min，冷卻至室溫，然后對(duì)酶解后的溶液調(diào)整pH值至4.6，并于4000r/min下離心10min，取上清液，對(duì)蛋白水解液進(jìn)行透析和超濾處理后，除去金屬離子。噴霧干燥得到白色粉末狀飽食肽。

所述胃蛋白酶購(gòu)買(mǎi)自北京鴻潤(rùn)寶順科技有限公司。

所述大豆分離蛋白購(gòu)買(mǎi)自哈高科大豆食品有限責(zé)任公司。

對(duì)本實(shí)施方式制備得到飽食肽進(jìn)行以下性能測(cè)定：

1.飽食肽產(chǎn)率的測(cè)定：

采用干重測(cè)定法測(cè)定飽食肽得率，按以下公式計(jì)算產(chǎn)率。

結(jié)果：飽食肽產(chǎn)率高達(dá)39.26±2.62％。

2.溶解性的測(cè)定，具體方法如下：

分別取制備好的固體樣品2.00g，加入去離子水40mL；在校正過(guò)的pH計(jì)指示下，分別加入稀鹽酸或稀氫氧化鈉溶液調(diào)整其pH為2.0、3.0、4.0、4.5、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，定容至50mL，攪拌30min，移入到100mL的離心管中，以2700r/min的速度離心10min，取15mL上清液進(jìn)行凱氏定氮，同時(shí)測(cè)定原樣中蛋白的含量。

對(duì)飽食肽進(jìn)行溶解性評(píng)價(jià)，結(jié)果如圖1所示，飽食肽的溶解度為90.33±5.35％。由圖1可以看出在蛋白的等電點(diǎn)處，如pH值為4時(shí)，飽食肽依然有較高溶解性，溶解度為90.64±4.15％。

3.體外消化測(cè)定，具體方法如下：

取制備好的固體樣品1g溶解于100ml水中，pH為1.5，在37℃水中水浴3-5min后加10mg胃蛋白酶混合，在37℃水浴并反應(yīng)60min，調(diào)pH為7.0，混合30mg胰蛋白酶，在37℃水浴并反應(yīng)60min。取加10％三氯乙酸混合取沉淀，用凱氏定氮的方法測(cè)定沉淀中的氮含量。同時(shí)測(cè)定原樣中蛋白的含量。

對(duì)飽食肽進(jìn)行消化率評(píng)價(jià)，飽食肽的消化率為96.67±2.55％。

4.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)測(cè)定，具體方法如下：

取小腸粘膜細(xì)胞(n＝3，成鼠，250-300g，十二指腸近端)在粘膜細(xì)胞懸液(1mL)被添加到含有100μg/L飽食肽試驗(yàn)，兩組樣品，平行三次。并在37℃的30min培養(yǎng)。培養(yǎng)后，懸液離心7s在10000r/min，取0.5mL的上清液。將上清液濃縮提取出縮膽囊素。

用C₁₈Sep-Pak柱提取縮膽囊素如下。

上清液是通過(guò)10mL乙腈，10mL甲醇和20mL蒸餾水預(yù)處理，以后在用20mL蒸餾水沖洗后，由1mL50％乙腈提取縮膽囊素，保存在-80℃直到檢測(cè)。用縮膽囊素試劑盒測(cè)測(cè)定。

縮膽囊素試劑盒購(gòu)買(mǎi)自上海亞培生物科技有限公司。

對(duì)飽食肽及大豆分離蛋白進(jìn)行飽腹效果評(píng)價(jià)，結(jié)果如圖2所示(注a，b，c為顯著性，P＜0.05)，由圖2可知飽食肽具有一定的飽腹感，本實(shí)施方式制備的飽食肽的縮膽囊素含量為164.66±2.40pg/mg，顯著高于空白組(0.9％的生理鹽水)的63.11±1.68pg/mg。