一種鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】一種鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，涉及一種發(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明是要解決現(xiàn)有的鄰苯二甲酸二丁酯降解菌培養(yǎng)基存在生產(chǎn)成本高、發(fā)酵周期長和生物量低的問題。該發(fā)酵培養(yǎng)基由玉米粉、黃豆粉、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、NaCl、FeCl3·6H2O、CaCl2·2H2O和蒸餾水組成。本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)發(fā)酵后生物量為2×1010～4×1010CFU/mL，生產(chǎn)成本低。用于鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵。CGMCC No952620141106
【專利說明】一種鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種發(fā)酵培養(yǎng)基。

【背景技術(shù)】
[0002]設(shè)施農(nóng)業(yè)中主要以簡易大棚和地膜覆蓋為主。鄰苯二甲酸二丁酯類化合物以其可塑性強(qiáng)等優(yōu)勢作為增塑劑，廣泛應(yīng)用于農(nóng)膜中，其與聚烯烴類塑料分子之間僅以氫鍵或范德華力連接，極易逃逸到環(huán)境中，并在水體、大氣，土壤、底泥中富集積累，其中以鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)含量較高。鄰苯二甲酸二丁酯類化合物的致癌性、致畸性和致突變性使其一旦進(jìn)入土壤和水體后，給各生態(tài)環(huán)境帶來了嚴(yán)重污染。微生物修復(fù)技術(shù)被視為最有效的修復(fù)手段。
[0003]目前用于培養(yǎng)鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的培養(yǎng)基主要有無機(jī)鹽培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基。經(jīng)試驗驗證鄰苯二甲酸二丁酯降解菌主要以鄰苯二甲酸二丁酯為碳源被利用的。
[0004]通常使用的無機(jī)鹽培養(yǎng)基由Ig的K2HPO4.3Η20、0.8g的MgSO4.7H20、Ig的NaCl、0.5g 的 NH4NO3^0.075g 的 FeCl3.6Η20、0.Ig 的 CaCl2.2Η20 以及 100mL 的蒸餾水以及 10mg/L的鄰苯二甲酸二丁酯組成。LB培養(yǎng)基由5g的酵母浸粉，1g的蛋白胨，1g的NaCl以及100mL的蒸餾水組成。
[0005]根據(jù)市場價格配制IL的無機(jī)鹽培養(yǎng)基需要花費0.309元，從其產(chǎn)生的活菌生物量成本上看，每生產(chǎn)1000億個菌落需要花費0.0498元；配制IL的LB培養(yǎng)基需要花費2.3元，每生產(chǎn)1000億個菌落需要花費0.153元。
[0006]由此可見，無機(jī)鹽培養(yǎng)基雖然成本相對較低但培養(yǎng)時間長，一般需要2到3天，而LB培養(yǎng)基雖然培養(yǎng)周期短但是相對成本較高，很難在實際生產(chǎn)菌株中使用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明是要解決現(xiàn)有的鄰苯二甲酸二丁酯降解菌培養(yǎng)基存在生產(chǎn)成本高、發(fā)酵周期長和生物量低的問題，提供一種鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0008]本發(fā)明鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基由23.5?24.5g/L玉米粉、37?38g/L 黃豆粉、0.5 ?1.2g/L K2HPO4.3Η20、0.2 ?0.6g/L MgSO4.7Η20、0.2 ?0.6g/L NaCl,0.4 ?0.5g/L FeCl3.6Η20、0.05 ?0.15g/L CaCl2.2H20 和蒸餾水組成。
[0009]本發(fā)明鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基在配制好后于121°C滅菌30min后使用。
[0010]鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基接菌后在30?35°C、轉(zhuǎn)速為125r/min下培養(yǎng)24h。
[0011]玉米粉為玉米深加工產(chǎn)物，黃豆粉為黃豆深加工產(chǎn)物，本發(fā)明中采用的玉米粉和黃豆粉都是東北地區(qū)比較容易獲得的廉價的農(nóng)副產(chǎn)品，極大的降低了生產(chǎn)成本，發(fā)酵周期短僅為24h。
[0012]本發(fā)明中鄰苯二甲酸二丁酯降解菌發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)發(fā)酵后生物量為2X101(I?4X1010CFU/mL,比無機(jī)鹽培養(yǎng)基提高了一個數(shù)量級，比LB培養(yǎng)基提高了一倍；從生產(chǎn)成本上看，本發(fā)明的培養(yǎng)基每生產(chǎn)1000億個菌落需要花費0.0131元，比無機(jī)鹽培養(yǎng)基降低了73.69%，比LB培養(yǎng)基降低了 91.45%。

【具體實施方式】
[0013]本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的任意組合。
[0014]【具體實施方式】一:本實施方式鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基由23.5?24.5g/L玉米粉、37 ?38g/L黃豆粉、0.5 ?1.2g/L K2HPO4.3Η20、0.2 ?0.6g/L MgSO4.7Η20、0.2 ?0.6g/L NaCl、0.4 ?0.5g/L FeCl3.6Η20、0.05 ?0.15g/L CaCl2.2H20 和蒸餾水組成。
[0015]【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】一不同的是:鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基由23.9g/L玉米粉、37.5g/L黃豆粉、0.8g/L K2HPO4.3Η20、0.4g/LMgSO4.7Η20、0.4g/LNaCl、0.428g/L FeCl3.6Η20、0.lg/L CaCl2.2H20 和蒸餾水組成。
[0016]【具體實施方式】三:本實施方式與【具體實施方式】一不同的是:鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基由23.6g/L玉米粉、37.2g/L黃豆粉、lg/L K2HPO4.3Η20、0.3g/LMgSO4.7Η20、0.3g/LNaCl、0.45g/L FeCl3.6Η20、0.08g/L CaCl2.2H20 和蒸餾水組成。
[0017]【具體實施方式】四:本實施方式與【具體實施方式】一不同的是:鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基由24.2g/L玉米粉、37.5g/L黃豆粉、0.7g/L K2HPO4.3Η20、0.5g/LMgSO4.7Η20、0.5g/LNaCl、0.43g/L FeCl3.6Η20、0.12g/L CaCl2.2H20 和蒸餾水組成。
[0018]【具體實施方式】五:本實施方式與【具體實施方式】一至四之一不同的是:所述鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基在配制好后于121°C滅菌30min后使用。其它與【具體實施方式】一至四之一相同。
[0019]【具體實施方式】六:本實施方式與【具體實施方式】一至五之一不同的是:所述鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基接菌后在30?35°C、轉(zhuǎn)速為125r/min的條件下培養(yǎng)24h。其它與【具體實施方式】一至五之一相同。
[0020]為驗證本發(fā)明的有益效果，進(jìn)行以下實驗:
[0021]實驗1:
[0022]將鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的單菌落裝入有無機(jī)鹽培養(yǎng)基的50mL三角瓶中，裝液量為30mL，培養(yǎng)條件為:pH值為7，溫度為35°C，轉(zhuǎn)速為125rpm，振蕩培養(yǎng)3天；將獲得的菌懸液的濃度稀釋到OD6tltl值為0.909后，按體積百分含量0.2%的接種量接入裝有鄰苯二甲酸二丁酯降解菌發(fā)酵培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基以及無機(jī)鹽培養(yǎng)基的150mL三角瓶中，裝液量為均為50mL，發(fā)酵條件為pH值為7，溫度35°C，轉(zhuǎn)速125rpm，培養(yǎng)24?48h，以上培養(yǎng)基都需121°C，滅菌30min后使用。
[0023]所述鄰苯二甲酸二丁酯降解菌為假單胞菌(Pseudomonassp.)DNB_S1,保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，保藏日期為2014年11月6日，保藏編號為CGMCC N0.9526。
[0024]其中鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基由23.9g/L玉米粉、37.5g/L黃豆粉、0.8g/L K2HPO4.3Η20、0.4g/LMgS04.7Η20、0.4g/LNaCl、0.428g/LFeCl3.6Η20、0.lg/LCaCl2.2H20和蒸餾水組成。
[0025]無機(jī)鹽培養(yǎng)基由18的1(2冊04.3Η20、0.8g 的MgSO4.7Η20、Ig 的 NaCl、0.5g 的 ΝΗ4Ν03、0.075g 的 FeCl3.6Η20、0.Ig 的 CaCl2.2H20、100mg/L 的鄰苯二甲酸二丁酯和 100mL 的蒸餾水組成。
[0026]經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)24h后，發(fā)酵培養(yǎng)基的生物量為3.3X1010CFU/mL, LB培養(yǎng)基的生物量為1.5X1010CFU/mL,培養(yǎng)48h后無機(jī)鹽培養(yǎng)基的生物量為6.2X 109CFU/mL。
[0027]發(fā)酵培養(yǎng)基的生物量比無機(jī)鹽培養(yǎng)基提高了一個數(shù)量級，比LB培養(yǎng)基提高了一倍；從生產(chǎn)成本上看,本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基每生產(chǎn)1000億個菌落需要花費0.0131元，比無機(jī)鹽培養(yǎng)基降低了 73.69%，比LB培養(yǎng)基降低了 91.45%。
【權(quán)利要求】
1.一種鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于該發(fā)酵培養(yǎng)基由23.5?24.5g/L玉米粉、37 ?38g/L黃豆粉、0.5 ?1.2g/L K2HPO4.3Η20、0.2 ?0.6g/L MgSO4.7Η20、0.2 ?0.6g/L NaCl、0.4 ?0.5g/L FeCl3.6Η20、0.05 ?0.15g/L CaCl2.2H20 和蒸餾水組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基由23.9g/L玉米粉、37.5g/L黃豆粉、0.8g/LK2HPO4.3Η20、0.4g/L MgSO4.7Η20、0.4g/LNaCl、0.428g/L FeCl3.6Η20、0.lg/L CaCl2.2H20和蒸餾水組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基由23.6g/L玉米粉、37.2g/L黃豆粉、lg/LK2HPO4.3Η20、0.3g/L MgSO4.7Η20、0.3g/LNaCl、0.45g/L FeCl3.6Η20、0.08g/L CaCl2.2H20和蒸餾水組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基由24.2g/L玉米粉、37.5g/L黃豆粉、0.7g/LK2HPO4.3Η20、0.5g/L MgSO4.7Η20、0.5g/LNaCl、0.43g/L FeCl3.6Η20、0.12g/L CaCl2.2H20和蒸餾水組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基在配制好后于121°C滅菌30min后使用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述鄰苯二甲酸二丁酯降解菌的發(fā)酵培養(yǎng)基接菌后在30?35°C、轉(zhuǎn)速為125r/min的條件下培養(yǎng)24h。
【文檔編號】C12R1/38GK104388367SQ201410798420
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年12月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月19日
【發(fā)明者】張穎, 孫鑫, 王志剛, 王蕾, 陶月, 馮程程, 段淑偉, 常琴, 成毅 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)