一種干酪乳桿菌及其組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種干酪乳桿菌及其組合物，屬于微生物應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明所提供的干酪乳桿菌的保藏號為CGMCC No.4520，于2010年12月29日，保藏在位于北京的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。本發(fā)明所提供的干酪乳桿菌與動物雙歧桿菌、糞腸桿菌和蠟樣胞桿菌具有協(xié)同生長作用，同時對糖肽類、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類和碳青霉烯類抗生素及磺胺具有耐受性，適用于食品、藥品和/或保健品中。
CGMCC NO4520
20101229
【專利說明】一種干酪乳桿菌及其組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種干酪乳桿菌及其組合物，屬于微生物應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】。 技術(shù)背景
[0002] 眾所周知，作為一種益生菌，乳桿菌以其所具備的優(yōu)良的益生特性，諸如耐酸性、 耐受膽鹽膽汁、在消化道中定植生長以及緩解乳糖不耐癥、抗變異突變、降低血清膽固醇、 抗腫瘤、抑制腸道病原菌、改善腸道菌群和提高機(jī)體免疫功能等已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于食品發(fā) 酵、動物飼料及醫(yī)療保健等領(lǐng)域中。
[0003] 干酪乳桿菌與目前常用的嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌被稱為"健康三益菌"。我國 《益生菌類保健食品申報與審評規(guī)定（試行）》列出了可用于保健食品的益生菌菌種名單 (2005年7月1日實施），即兩歧雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌、短雙歧桿菌、青春 雙歧桿菌、保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、嗜熱鏈球菌。干酪乳桿菌 (Lactobacillus casei)屬于乳桿菌屬（Lactobacillus),是革蘭氏陽性菌，不產(chǎn)芽孢，無 鞭毛，不運動，兼性異型發(fā)酵乳糖，不液化明膠；最適生長溫度為37°C，G+C含量為45. 6%? 47.2% ;菌體長短不一，兩端呈方形，常成鏈；菌落粗糙，灰白色，有時呈微黃色，能發(fā)酵多種 糖。干酪乳桿菌存在于人的口腔、腸道內(nèi)含物和大便及陰道中。干酪乳桿菌作為益生菌之一 被用作牛奶、酸乳、豆奶、奶油和干酪等乳制品的發(fā)酵劑及輔助發(fā)酵劑，尤其在干酪中的應(yīng) 用較多，適應(yīng)干酪中的高含量鹽及低pH值，通過一些重要氨基酸的代謝以增加風(fēng)味并促進(jìn) 干酪的成熟。同時干酪乳桿菌還具有良好的耐酸及膽汁抗性，可降低血漿膽固醇，增強(qiáng)宿主 對微生物病原體的非特異性抵抗力，加快清除腸道內(nèi)病原體，治療腸道菌群紊亂和增強(qiáng)腸 道透性，從而防止食物過敏和急性腹瀉。此外，干酪乳桿菌還可以使抗低密度氧化脂抗體和 淋巴細(xì)胞增加，使粒細(xì)胞的噬菌作用明顯增強(qiáng)，對宿主進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)，防止腫瘤的產(chǎn)生。由 于能夠在人體腸道內(nèi)穩(wěn)定存活并具有眾多醫(yī)療保健功能，干酪乳桿菌作為益生菌被廣泛應(yīng) 用于功能性食品。
[0004] 國內(nèi)許多企業(yè)利用干酪乳桿菌凍干菌粉為原料生產(chǎn)生物制品。然而凍干菌粉中的 活菌數(shù)量是評價益生菌產(chǎn)品質(zhì)量好壞的關(guān)鍵，而當(dāng)前許多產(chǎn)品都不能有效地防止活菌數(shù)的 衰減。在菌粉制備過程中優(yōu)化生產(chǎn)工藝，如：發(fā)酵條件的優(yōu)化和冷凍干燥工藝參數(shù)的優(yōu)化是 最為關(guān)鍵的。所以，使產(chǎn)品能夠保持足夠多的活菌數(shù)量并延長菌種的保藏期，以便充分發(fā)揮 其生理功能，降低成本，已成為干酪乳桿菌活菌制劑產(chǎn)品研究開發(fā)及其應(yīng)用的技術(shù)關(guān)鍵。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種干酪乳桿菌，所采取的技術(shù)方案如下：
[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種干酪乳桿菌，該干酪乳桿菌對糖肽類、單環(huán)￠-內(nèi)酰 胺類、碳青霉烯類抗生素和磺胺具有耐受性。
[0007] 所述干酪乳桿菌，其特征在于，保藏號為CGMCC No. 4520,于2010年12月29日，保 藏在位于北京的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
[0008] 所述糖肽類抗生素為萬古霉素和替考拉寧。
[0009] 所述單環(huán)P _內(nèi)酰胺類抗生素為氨曲南。
[0010] 所述碳青霉烯類抗生素為美洛培南。
[0011] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種含有所述干酪乳桿菌的組合物，該組合物含有干 酪乳桿菌活菌和載體。
[0012] 所述載體由脫脂乳、海藻糖、麥芽糖糊精、L-谷氨酸鈉和低聚異麥芽糖組成。
[0013] 所述載體組成如下：10%脫脂乳、4%海藻糖、4%麥芽糖糊精、4% L-谷氨酸鈉和 4%低聚異麥芽糖。
[0014] 所述組合物含有干酪乳桿菌的活菌數(shù)在1 x 106CFU/g_l x 10nCFU/g。
[0015] 所述組合物劑型為粉劑，片劑，膠囊或顆粒劑。
[0016] 本發(fā)明有益效果如下：
[0017] 1.本發(fā)明根據(jù)人體腸胃的生理條件，從健康兒童的腸道內(nèi)篩選出一種干酪乳桿 菌。本發(fā)明所提供的干酪乳桿菌可以再人體內(nèi)定植，發(fā)揮益生作用。對腸道內(nèi)的有害菌群 有較好的抑制作用，從而提到調(diào)節(jié)腸道微生物菌群的作用。
[0018] 2.本發(fā)明所提供的干酪乳桿菌對對糖肽類、單環(huán)0 _內(nèi)酰胺類和碳青霉烯類抗生 素及磺胺具有耐受性。
[0019] 3.本發(fā)明所提供的干酪乳桿菌，與其他益生菌具有良好的協(xié)同生長作用，復(fù)配效 果較好。尤其是與干酪乳桿菌、糞鏈球菌和蠟樣芽胞桿菌，適用于制備多聯(lián)益生菌制劑。所 制備的益生菌制劑的活菌數(shù)高，可達(dá)1 x 10nCFU/g。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0020] 圖1為實施例2中酪乳桿菌的顯微鏡圖；
[0021] (放大倍數(shù)為100倍）。

【具體實施方式】
[0022] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明不受實施例的限制。
[0023] 以下實施例中所述方法未經(jīng)特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0024] 以下實施例中所述試劑和儀器未經(jīng)特殊說明，均為本領(lǐng)域中常規(guī)試劑和儀器可從 商業(yè)渠道獲取。
[0025] 實施例1菌株的獲得
[0026] 干酪乳桿菌，為分離自杭州市江干區(qū)健康人體腸道，篩選出適合人體的菌株，干酪 乳桿菌的保藏號為CGMCC No. 4520,于2010年12月29日，保藏在位于北京的中國微生物菌 種保藏管理委員會普通微生物中心。
[0027] 干酪乳桿菌采自杭州市江干區(qū)20名2-6歲的健康兒童，男女各10名，均無胃腸病 史，采樣前兩周內(nèi)均為服用任何抗菌類藥物。采樣時用無菌玻璃棒挑取自然排出的新鮮糞 便4-10g，置于無菌平皿中，迅速放入?yún)捬豕拗?，帶回實驗室分離。
[0028] 實施例2菌株的鑒定和培養(yǎng)
[0029] 2. 1采用稀釋涂布的方法，分別對采集的菌株樣品進(jìn)行分離純化。純化培養(yǎng)后觀察 菌落形態(tài)，取新鮮培養(yǎng)物，接種糖發(fā)酵試管，鑒定菌株的生化反應(yīng)特性。同時取待測菌株的 新鮮培養(yǎng)物，采用法國梅里埃公司的API 50CHL生化鑒定條，參照梅里埃公司的生化判定 數(shù)據(jù)庫對待測菌株進(jìn)行API生化鑒定。同時將提取分離純化號菌株的16SrRNA，并測定序 列，并將測序結(jié)果與NCBI的GeneBank已有的序列進(jìn)行比對。分離純化好的菌種于2-8°C下 保存。
[0030] 經(jīng)過鑒定，待測菌株的菌落特征為乳白色，圓形，邊緣整齊，隆起，濕潤。菌株形態(tài) 為：革蘭氏陽性，無芽孢、無莢膜、短桿菌，兩端鈍圓。鏈狀排列或單一排列。菌株的生化反 應(yīng)特性見表1。
[0031] 表1待測菌株的生化反應(yīng)特性
[0032]

【權(quán)利要求】
1. 一種干酪乳桿菌，其特征在于，對糖肽類、單環(huán)￠-內(nèi)酰胺類、碳青霉烯類抗生素和 磺胺具有耐受性。
2. 權(quán)利要求1所述干酪乳桿菌，其特征在于，保藏號為CGMCC No. 4520,于2010年12 月29日，保藏在位于北京的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
3. 權(quán)利要求1所述干酪乳桿菌，其特征在于，所述糖肽類抗生素為萬古霉素和替考拉 寧。
4. 權(quán)利要求1所述干酪乳桿菌，其特征在于，所述單環(huán)￠-內(nèi)酰胺類抗生素為氨曲南。
5. 權(quán)利要求1所述干酪乳桿菌，其特征在于，所述碳青霉烯類抗生素為美洛培南。
6. -種含有權(quán)利要求1所述干酪乳桿菌的組合物，其特征在于，含有干酪乳桿菌活菌 和載體。
7. 權(quán)利要求6所述組合物，其特征在于，所述載體由脫脂乳、海藻糖、麥芽糖糊精、L-谷 氨酸鈉和低聚異麥芽糖組成。
8. 權(quán)利要求6所述組合物，其特征在于，所述載體組成如下：10%脫脂乳、4%海藻糖、 4 %麥芽糖糊精、4 % L-谷氨酸鈉和4 %低聚異麥芽糖。
9. 權(quán)利要求6所述組合物，其特征在于，所述組合物含有干酪乳桿菌的活菌數(shù)在 1 x 106CFU/g-l x 10nCFU/g。
10. 權(quán)利要求6所述組合物，其特征在于，所述組合物劑型為粉劑，片劑，膠囊或顆粒 劑。
【文檔編號】C12N1/20GK104450586SQ201410791105
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月18日
【發(fā)明者】曹勇, 閆天文 申請人:杭州龍達(dá)新科生物制藥有限公司