一種銅綠假單胞菌菌劑和鼠李糖脂發(fā)酵液的制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于石油生物技術(shù)和環(huán)境生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說(shuō)，它涉及一種銅綠假單胞菌菌劑和鼠李糖脂發(fā)酵液的制備方法。將擴(kuò)培好的銅綠假單胞菌種子液按照體積比2％-8％的接種量轉(zhuǎn)接至滅菌后的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵培養(yǎng)基中含有必要的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及微量元素，并調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值，進(jìn)行通氣、攪拌發(fā)酵，得到銅綠假單胞菌菌劑或鼠李糖脂發(fā)酵液。采用本發(fā)明方法制備的銅綠假單胞菌菌劑和鼠李糖脂發(fā)酵液可以很好地適應(yīng)油藏環(huán)境，同時(shí)具有較好的驅(qū)油效果。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種銅綠假單胞菌菌劑和鼠李糖脂發(fā)酵液的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于石油生物技術(shù)和環(huán)境生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說(shuō)，它涉及一種銅綠假單胞菌菌劑和鼠李糖脂發(fā)酵液的制備方法，該菌劑及發(fā)酵液能很好地適應(yīng)油藏環(huán)境，同時(shí)具有較好的驅(qū)油效果，另外鼠李糖脂發(fā)酵液也可用于鼠李糖脂的其他應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]石油經(jīng)降解菌(hydrocarbon degradat1n bacteria, HDB)是能將石油經(jīng)作為唯一碳源進(jìn)行生物降解，并產(chǎn)生氣體、脂肪酸及生物表面活性劑等代謝產(chǎn)物的一類(lèi)微生物的總稱(chēng)。石油烴降解菌能清除石油中的部分石蠟，代謝產(chǎn)物主要是有機(jī)酸、糖脂類(lèi)、脂肽類(lèi)表面活性劑，可進(jìn)一步改善原有的流動(dòng)性，降低油水之間的界面張力，有利于提高石油采出率。
[0003]銅綠假單胞菌(Pseudomonoas aeruginosa)是一種油藏中常見(jiàn)的、能以原油為唯一碳源大量合成表面活性劑鼠李糖脂的烴降解菌，已被廣泛應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)采油、原油污染物降解，取得了一定的效果。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種銅綠假單胞菌菌劑的制備方法，該菌劑適用于油藏環(huán)境，且具有高產(chǎn)生物表面活性劑的能力，用于油藏環(huán)境原位降解原油、改變?cè)土鲃?dòng)性具有獨(dú)特效果。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種鼠李糖脂發(fā)酵液的制備方法，該發(fā)酵液既可以油藏環(huán)境原位降解原油、改變?cè)土鲃?dòng)性，同時(shí)用于鼠李糖脂的其他應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0007]—種銅綠假單胞菌菌劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟:
[0008]Al.將擴(kuò)培后的種子液按照體積比為2% -8%的接種量轉(zhuǎn)接至滅菌后的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵培養(yǎng)基中含有必要的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及微量元素，并調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值；
[0009]A2.進(jìn)行通氣、攪拌發(fā)酵。
[0010]根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備銅綠假單胞菌菌劑的方法，其特征在于所述步驟A中的發(fā)酵培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成:
[0011]糖蜜0.5% -1.0%，酵母膏 0.1 % -0.5%，大豆油 0.1 % -0.5 %，磷酸氫二鉀0.1% -0.5% ;余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)基pH = 7.0-7.4。
[0012]一種鼠李糖脂發(fā)酵液的制備方法，其特征在于包括如下步驟:
[0013]B1.將擴(kuò)培后的種子液按照體積比為2% -8%的接種量轉(zhuǎn)接至滅菌后的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵培養(yǎng)基中含有必要的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及微量元素，并調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值；
[0014]B2.進(jìn)行通氣、攪拌發(fā)酵；
[0015]根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備鼠李糖脂發(fā)酵液的方法，其特征在于所述步驟A中的發(fā)酵培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成:
[0016]大豆油2% _4%，玉米漿干粉0.5% _1.0%，磷酸氫二鉀0.1% -0.5%，磷酸二氫鉀0.1% -0.5%，硫酸鎂0.01% -0.05% ;余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)基pH = 7.0-7.4。
[0017]根據(jù)權(quán)利要求1、3所述的制備鼠李糖脂發(fā)酵液的方法，其特征在于所述步驟中的擴(kuò)培過(guò)程包括:
[0018]Cl.將斜面菌種制成搖瓶種子；
[0019]C2.將搖瓶種子制成一級(jí)種子；
[0020]C3.將一級(jí)種子制成二級(jí)種子，將二級(jí)種子接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵。
[0021]一種微生物菌劑用于提高原油采收率的應(yīng)用，其特征在于所述微生物為銅綠假單胞菌。
[0022]一種鼠李糖脂發(fā)酵液用于提高原油采收率的應(yīng)用。

【具體實(shí)施方式】
本發(fā)明所述的實(shí)例是對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明而不能限制本發(fā)明，在與本發(fā)明相當(dāng)?shù)暮x和范圍內(nèi)的任何改變和調(diào)整，都應(yīng)認(rèn)為是在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例1銅綠假單胞菌液體菌劑的制備
本實(shí)施例中，利用本發(fā)明的銅綠假單胞菌發(fā)酵制備液體菌劑，其具體發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下:
A.菌種接入搖瓶培養(yǎng)，溫度為37°C，180-200r/min，培養(yǎng)12_16h，得到搖瓶菌種；
B.一級(jí)發(fā)酵培養(yǎng):將A步驟中的搖瓶菌種按照5% -10%的接種量接種至裝有培養(yǎng)基的一級(jí)發(fā)酵罐中，溫度為37±2°C、pH7.0-7.5、通氣比為1: 0.5及攪拌速度為150_180r/min的條件下發(fā)酵培養(yǎng)12-18h，得到一級(jí)發(fā)酵菌種；
C.二級(jí)發(fā)酵培養(yǎng):將B步驟中的一級(jí)發(fā)酵菌種按照5% -10%的接種量接種至裝有培養(yǎng)基的二級(jí)發(fā)酵罐中，溫度為37±2°C、PH7.0-7.5、通氣比為1: 0.5及攪拌速度為150-180r/min的條件下發(fā)酵培養(yǎng)12_18h，得到二級(jí)發(fā)酵菌種；
D.發(fā)酵培養(yǎng):將C步驟中的二級(jí)發(fā)酵菌種按照5%-10%的接種量接種至裝有培養(yǎng)基的三級(jí)發(fā)酵罐中，溫度為37±2°C、pH7.0-7.5、通氣比為1: 0.5及攪拌速度為150_180r/min的條件下發(fā)酵培養(yǎng)24-36h，得到銅綠假單胞菌菌液；
所述步驟A中的發(fā)酵培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成:
蛋白胨0.5% -1.0%，酵母膏0.1% -0.5%，氯化鈉0.5% -1.0%;余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)基 pH = 7.0-7.4。
所述步驟B、C、D中的發(fā)酵培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成:
糖蜜0.5 % -1.0 %，酵母膏0.1 % -0.5 %，大豆油0.1 % -0.5 %，磷酸氫二鉀0.1% -0.5% ;余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)基pH = 7.0-7.4。
經(jīng)檢測(cè)，發(fā)酵結(jié)束發(fā)酵液中銅綠假單胞菌菌濃為5.8X 101(lCfu/mL。
實(shí)施例2鼠李糖脂發(fā)酵液的制備本實(shí)施例與實(shí)施例1的區(qū)別在于: 所述步驟B、C、D中的發(fā)酵培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成:
大豆油2 % -4 %，玉米漿干粉0.5 % -1.0 %，磷酸氫二鉀0.1 % -0.5 %，磷酸二氫鉀
0.1% -0.5%，硫酸鎂0.01% -0.05% ;余量為水;發(fā)酵培養(yǎng)基pH = 7.0-7.4。
所述步驟D中的發(fā)酵條件為:
發(fā)酵0h-24h溫度為37±2°C、發(fā)酵24h以后溫度為34±2°C、pH7.0-7.5、通氣比為I: 0.5及攪拌速度為100-180r/min的條件下發(fā)酵培養(yǎng)72h-108h，得到鼠李糖脂發(fā)酵液。經(jīng)檢測(cè)，發(fā)酵結(jié)束發(fā)酵液中鼠李糖脂濃度為45g/L。
【權(quán)利要求】
1.一種銅綠假單胞菌菌劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟: 八.將擴(kuò)培后的種子液按照體積比為2% -8%的接種量轉(zhuǎn)接至滅菌后的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵培養(yǎng)基中含有必要的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及微量元素，并調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的1)?值； 8.進(jìn)行通氣、攪拌發(fā)酵。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備銅綠假單胞菌菌劑的方法，其特征在于所述步驟八中的發(fā)酵培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成: 糖蜜0.5 % -1.0 %，酵母膏0.1 % -0.5 %，大豆油0.1 % -0.5 %，磷酸氫二鉀0.1% -0.5% ；余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)基邱=7.0-7.4。
3.一種鼠李糖脂發(fā)酵液的制備方法，其特征在于包括如下步驟: 八.將擴(kuò)培后的種子液按照體積比為2% -8%的接種量轉(zhuǎn)接至滅菌后的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵培養(yǎng)基中含有必要的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及微量元素，并調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的1)?值； 8.進(jìn)行通氣、攪拌發(fā)酵。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備鼠李糖脂發(fā)酵液的方法，其特征在于所述步驟八中的發(fā)酵培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成: 大豆油2 % -4 %，玉米漿干粉0.5 % -1.0 %，磷酸氫二鉀0.1 % -0.5 %，磷酸二氫鉀0.1% -0.5%，硫酸鎂0.01% -0.05% ；余量為水；發(fā)酵培養(yǎng)基邱=7.0-7.4。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、3所述的制備鼠李糖脂發(fā)酵液的方法，其特征在于所述步驟中的擴(kuò)培過(guò)程包括: 八1.將斜面菌種制成搖瓶種子； 八2.將搖瓶種子制成一級(jí)種子； 八3.將一級(jí)種子制成二級(jí)種子，將二級(jí)種子接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵。
6.一種微生物菌劑用于提高原油采收率的應(yīng)用，其特征在于所述微生物為銅綠假單胞菌。
7.一種鼠李糖脂發(fā)酵液用于提高原油采收率的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12R1/385GK104312942SQ201410493813
【公開(kāi)日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年9月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月25日
【發(fā)明者】章厚名, 盧彥珍, 陳亮, 徐真 申請(qǐng)人:北京華納斯科技有限公司