一種用于培養(yǎng)雞原籍腸道菌群的培養(yǎng)基及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于培養(yǎng)雞原籍腸道菌群的培養(yǎng)基及其制備方法，屬于微生物培養(yǎng)基制備【技術領域】。本發(fā)明的培養(yǎng)基，其pH為6.8-7.1；其主要成分為豆芽液、魚粉蛋白胨、鹽酸半胱氨酸、大豆蛋白胨、維生素B1、牛肉膏、牛肝浸粉、酵母浸粉、可溶性淀粉、葡萄糖、磷酸氫二鉀、硫酸鎂。本發(fā)明的培養(yǎng)基，呈液態(tài)；其組成及各組分的含量決定了其所培養(yǎng)獲得的菌群中有效活菌含量、益生菌的含量、桿菌球菌的比例、陽性菌陰性菌的比例及益生菌的生物活性有效期。所以，只有采用本發(fā)明的組分及配比，才能培養(yǎng)出與雞原籍腸道菌群的桿菌球菌比例、陽性菌陰性菌比例基本保持一致的菌群。
【專利說明】一種用于培養(yǎng)雞原籍腸道菌群的培養(yǎng)基及其制備方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于培養(yǎng)雞原籍腸道菌群的培養(yǎng)基及其制備方法，屬于微生物培 養(yǎng)基制備【技術領域】。

【背景技術】
[0002] 培養(yǎng)基（Medium)是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的 養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素）以及生長素和水等。有的 培養(yǎng)基還含有抗菌素、色素、激素和血清。雖然，所有微生物生長繁殖均需要培養(yǎng)基含有 碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源，但是不同類型微生物對營養(yǎng)物質的需求是不一樣 的。就微生物主要類型而言，有細菌、放線菌、酵母菌、霉菌、原生動物、藻類及病毒之分，培 養(yǎng)它們所需的培養(yǎng)基各不相同。在實驗室中常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（或簡稱普通肉湯培 養(yǎng)基）培養(yǎng)細菌，用高氏I號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)放線菌，培養(yǎng)酵母菌一般用麥芽汁培養(yǎng)基，培 養(yǎng)霉菌則一般用查氏合成培養(yǎng)基。另外，培養(yǎng)基的pH、控制氧化還原電位及所含營養(yǎng)物質的 濃度都與微生物的生長繁殖狀況密切相關。
[0003]雞原籍腸道菌群，是指雞腸道內固有的菌群；包括3大類：需氧菌、兼性厭氧菌、厭 氧菌，共計約1000種；因此，要想培養(yǎng)雞原籍腸道菌群，首先需要獲取一種能夠同時滿足上 述多種菌種生長需要的培養(yǎng)基。但是，目前并沒有能培養(yǎng)出與雞原籍腸道菌群的桿菌球菌 比例、陽性菌陰性菌比例基本保持一致的菌群的培養(yǎng)基。


【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種能夠同時滿足雞原籍腸道菌群生長需要的培養(yǎng)基既 該培養(yǎng)基的制備方法。
[0005]本發(fā)明為實現(xiàn)上述發(fā)明目的所采用的技術方案： 一種用于培養(yǎng)雞原籍腸道菌群的培養(yǎng)基，其pH為6. 8-7. 1 ;每IOOOml中含有魚粉蛋 白胨8±0. 4g，鹽酸半胱氨酸0. 6±0. 03g，大豆蛋白胨6±0. 3g，維生素B1O. 4±0. 02g， 牛肉膏20±lg，牛肝浸粉10±0. 5g，酵母浸粉2±0.lg，可溶性淀粉0. 5±0. 025g，葡萄糖 10±0. 5g，磷酸氫二鉀25±1. 25g，硫酸鎂10±0. 5g，豆芽液300±15ml，水余量。
[0006] 所述豆芽液是黃豆芽加水，煮沸Ih后，用8層醫(yī)用紗布過濾，濾液于121°C滅菌后 制得的。
[0007]本發(fā)明的培養(yǎng)基，呈液態(tài)；其組成及各組分的含量決定了其所培養(yǎng)獲得的菌群中 有效活菌含量、益生菌的含量、桿菌球菌的比例、陽性菌陰性菌的比例及益生菌的生物活性 有效期。所以，只有采用本發(fā)明的組分及配比，才能培養(yǎng)出與雞原籍腸道菌群的桿菌球菌比 例、陽性菌陰性菌比例基本保持一致的菌群(桿菌球菌的比例在80:20?85:15之間，革蘭 氏陽性菌和陰性菌的比例在75:25?85:15之間);而且所獲得的菌群，其主要益生菌(包括 嗜酸乳桿菌、丁酸梭菌、糞球菌、乳酸片球菌、酵母菌）的含量稍優(yōu)于雞原籍腸道菌群(含量 分別增加了1〇%、5%、5%、10%、5%) ;其有效活菌含量不低于100億0?"1111，所含益生菌的生物 活性有效期在常溫下延長至8個月。除此之外，采用該培養(yǎng)基培養(yǎng)雞原籍腸道菌群時，36h就可達到生長指數(shù)期，并能最大程度的復制雞的腸道原籍菌。
[0008] 上述培養(yǎng)基，優(yōu)選的，每IOOOml中含有魚粉蛋白胨8g，鹽酸半胱氨酸0.6g，大豆蛋 白胨6g，維生素B1O.4g，牛肉膏20g，牛肝浸粉10g，酵母浸粉2g，可溶性淀粉0.5g，葡萄糖 l〇g，磷酸氫二鉀25g，硫酸鎂10g，豆芽液300ml，水余量。在相同的培養(yǎng)條件下，采用該培養(yǎng) 基培養(yǎng)出的菌群，其有效活菌含量更高，主要益生菌的含量更高，所含益生菌在常溫下的生 物活性有效期更長，能在更短時間內達到生長指數(shù)期，與雞原籍腸道菌群的桿菌球菌比例、 陽性菌陰性菌比例更加一致。
[0009] -種上述培養(yǎng)基的制備方法，向豆芽液中加入魚粉蛋白胨、鹽酸半胱氨酸、大豆蛋 白胨、維生素B1、牛肉膏、牛肝浸粉、酵母浸粉、可溶性淀粉、葡萄糖、磷酸氫二鉀、硫酸鎂后 加熱至溶解，然后加水，再調PH值，最后于121°C滅菌30分鐘以上；所述加入不能兩者以上 同時加入,加入順序不限定。
[0010] 上述制備方法，滅菌溫度必須保持在121°c，過低達不到滅菌效果，過高則破壞培 養(yǎng)基的營養(yǎng)成分。
[0011] 上述制備方法，用常規(guī)試劑調pH，本發(fā)明所用的是稀氫氧化鈉溶液。
[0012] 有益效果 (1) 首次公開了一種能培養(yǎng)出與雞原籍腸道菌群的桿菌球菌比例、陽性菌陰性菌比例 基本保持一致的菌群的培養(yǎng)基，并給出了該培養(yǎng)基的制備方法； (2) 采用該培養(yǎng)基培養(yǎng)雞原籍腸道菌群時，菌群繁殖速度快；所培養(yǎng)出的菌群，其有效 活菌含量高，菌群在常溫條件下的生物活性有效期長； (3) 該培養(yǎng)基的原料易得，成本低廉，適合工業(yè)化生產； (4)該培養(yǎng)基的制備方法簡單，制備過程易于控制，所得產品質量穩(wěn)定。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013] 圖1為實施例1-3的菌群生長曲線圖；圖中，曲線A(顏色最深）為實施例1的菌 群生長曲線圖；曲線B為實施例2的菌群生長曲線圖；曲線C(顏色最淺）為實施例3的菌 群生長曲線圖。

【具體實施方式】
[0014]黃豆芽加水煮沸Ih后，用8層醫(yī)用紗布過濾，濾液于121°C滅菌，制得豆芽液。
[0015] 實施例1 取豆芽液300ml，然后向其依次加入魚粉蛋白胨8g、鹽酸半胱氨酸0.6g、大豆蛋白胨6g、維生素B1O. 4g、牛肉膏20g、牛肝浸粉10g、酵母浸粉2g、可溶性淀粉0. 5g、葡萄糖10g、 磷酸氫二鉀25g、硫酸鎂IOg;然后加熱至KKTC使之溶解，各組分均溶解后，再攪拌至混合 均勻；然后加水補足1000ml，再調pH值至7. 0 ;分裝之后于121°C滅菌30分鐘，即得本發(fā)明 的用于培養(yǎng)雞原籍腸道菌群的培養(yǎng)基(簡稱培養(yǎng)基)。
[0016]在無菌環(huán)境中將符合GB/T17999-2008標準的SPF成年母雞解剖，取其全腸內容物 (簡稱腸容物）稱重；然后按腸容物：培養(yǎng)基為1 :10的重量比例將腸容物加入到培養(yǎng)基中， 充分攪拌之后過濾，得濾液；將濾液按10%的接種量接種于培養(yǎng)基中，然后置于厭氧培養(yǎng)系 統(tǒng)中，于41 °C靜止培養(yǎng)36h，得雞原籍腸道菌群種子液，并保存菌種。將種子液按5%的接種 量接種于1噸的發(fā)酵罐(發(fā)酵罐中是培養(yǎng)基)中，將罐內充氮氣，保持壓力為〇. 〇2MPa,pH保 持在6. 8-7. 0,41°C靜止培養(yǎng)48h后，檢測后無菌環(huán)境分裝，制得原生態(tài)制劑。原生態(tài)制劑中 有益菌群在常溫條件下的生物活性有效期為9個月；所述生物活性有效期是指該制劑活菌 含量不低于100億CFU/ml的最大期限。
[0017] 實施例2 取豆芽液315ml、然后向其依次加入魚粉蛋白胨8. 4g、鹽酸半胱氨酸0. 63g、大豆蛋白 胨6. 3g、維生素B1O. 42g、牛肉膏21g、牛肝浸粉10. 5g、酵母浸粉2.lg、可溶性淀粉0. 525g、 葡萄糖10. 5g、磷酸氫二鉀26. 25g、硫酸鎂10. 5g;然后加熱至KKTC使之溶解，各組分均溶 解后，再攪拌至混合均勻；然后加水補足1000ml，再調pH值至7. 0 ;分裝之后于121°C滅菌 30分鐘，即得本發(fā)明的用于培養(yǎng)雞原籍腸道菌群的培養(yǎng)基(簡稱培養(yǎng)基)。
[0018] 在無菌環(huán)境中將符合GB/T17999-2008標準的SPF成年母雞解剖，取其全腸內容物 (簡稱腸容物）稱重；然后按腸容物：培養(yǎng)基為1 :10的重量比例將腸容物加入到培養(yǎng)基中， 充分攪拌之后過濾，得濾液；將濾液按10%的接種量接種于培養(yǎng)基中，然后置于厭氧培養(yǎng)系 統(tǒng)中，于41 °C靜止培養(yǎng)36h，得雞原籍腸道菌群種子液，并保存菌種。將種子液按5%的接種 量接種于1噸的發(fā)酵罐(發(fā)酵罐中是培養(yǎng)基)中，將罐內充氮氣，保持壓力為〇. 〇2MPa,pH保 持在6. 8-7. 0,41°C靜止培養(yǎng)48h后，檢測后無菌環(huán)境分裝，制得原生態(tài)制劑。原生態(tài)制劑中 有益菌群在常溫條件下的生物活性有效期為8個半月；所述生物活性有效期是指該制劑活 菌含量不低于100億CFU/ml的最大期限。
[0019] 實施例3 取豆芽液285ml，然后向其依次加入魚粉蛋白胨7. 6g、鹽酸半胱氨酸0. 57g、大豆蛋白 胨5. 7g、維生素B1O. 38g、牛肉膏19g、牛肝浸粉9. 5g、酵母浸粉I. 9g、可溶性淀粉0. 525g、 葡萄糖9. 5g、磷酸氫二鉀23. 75g、硫酸鎂9. 5g;然后加熱至KKTC使之溶解，各組分均溶解 后，再攪拌至混合均勻；然后加水補足1000ml，再調pH值至7. 0 ;分裝之后于121°C滅菌30 分鐘，即得本發(fā)明的用于培養(yǎng)雞原籍腸道菌群的培養(yǎng)基(簡稱培養(yǎng)基)。
[0020] 在無菌環(huán)境中將符合GB/T17999-2008標準的SPF成年母雞解剖，取其全腸內容物 (簡稱腸容物）稱重；然后按腸容物：培養(yǎng)基為1 :10的重量比例將腸容物加入到培養(yǎng)基中， 充分攪拌之后過濾，得濾液；將濾液按10%的接種量接種于培養(yǎng)基中，然后置于厭氧培養(yǎng)系 統(tǒng)中，于41 °C靜止培養(yǎng)36h，得雞原籍腸道菌群種子液，并保存菌種。將種子液按5%的接種 量接種于1噸的發(fā)酵罐(發(fā)酵罐中是培養(yǎng)基)中，將罐內充氮氣，保持壓力為〇. 〇2MPa,pH保 持在6. 8-7. 0,41°C靜止培養(yǎng)48h后，檢測后無菌環(huán)境分裝，制得原生態(tài)制劑。原生態(tài)制劑中 有益菌群在常溫條件下的生物活性有效期為9個月；所述生物活性有效期是指該制劑活菌 含量不低于100億CFU/ml的最大期限。
[0021] 效果試驗 對實施例1-3所制備的雞用原生態(tài)制劑及用于制備該生態(tài)制劑的雞的腸容物菌群分 別進行檢測。
[0022] 檢測方法：常規(guī)活菌平板計數(shù)法和厭氧活菌平板計數(shù)法 檢測條件：常規(guī)微生物檢測實驗室 檢測結果如表1 ;

【權利要求】
1. 一種用于培養(yǎng)雞原籍腸道菌群的培養(yǎng)基，其特征在于，其pH為6. 8-7. 1 ;每 1000ml中含有魚粉蛋白胨8±0.4g，鹽酸半胱氨酸0.6±0.03g，大豆蛋白胨6±0.3g， 維生素 &0. 4±0. 02g，牛肉膏20±lg，牛肝浸粉10±0. 5g，酵母浸粉2±0. lg，可溶性 淀粉0. 5±0. 025g，葡萄糖10±0. 5g，磷酸氫二鉀25±1. 25g，硫酸鎂10±0. 5g，豆芽液 300 ± 15ml，水余量。
2. 根據(jù)權利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，每1000ml中含有魚粉蛋白胨8g，鹽酸 半胱氨酸〇. 6g，大豆蛋白胨6g，維生素 &0. 4g，牛肉膏20g，牛肝浸粉10g，酵母浸粉2g，可 溶性淀粉0. 5g，葡萄糖10g，磷酸氫二鉀25g，硫酸鎂10g，豆芽液300ml，水余量。
3. 根據(jù)權利要求1或2所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述豆芽液是黃豆芽加水，煮沸l(wèi)h 后，用8層醫(yī)用紗布過濾，濾液于121°C滅菌后制得的。
4. 一種權利要求1-3中任意一項所述的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，向豆芽液中 加入魚粉蛋白胨、鹽酸半胱氨酸、大豆蛋白胨、維生素&、牛肉膏、牛肝浸粉、酵母浸粉、可溶 性淀粉、葡萄糖、磷酸氫二鉀、硫酸鎂后加熱至溶解，然后加水，再調pH值，最后于121°C滅 菌30分鐘以上；所述加入不能兩者以上同時加入，加入順序不限定。
【文檔編號】C12R1/23GK104263663SQ201410457019
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月10日 優(yōu)先權日:2014年9月10日
【發(fā)明者】秦卓明, 王世榮, 黃迪海, 張從敬, 張再輝, 劉霞, 徐秀榮, 盛曉丹 申請人:山東省健牧生物藥業(yè)有限公司