一種促進(jìn)蘭花生長和防病的方法
【專利摘要】本發(fā)明為一種促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，涉及一種在防治病害的同時(shí)，還能促進(jìn)蘭花發(fā)枝、延長花期的方法。本發(fā)明在蘭花分株移植時(shí)，按哈茨木霉T216制備的孢子濃度為1×107-1×108個(gè)孢子/g的固態(tài)培養(yǎng)物與培養(yǎng)基質(zhì)1:50的質(zhì)量比，將二者混勻裝盆，再栽入蘭花植株，在蘭花生長期間，該固態(tài)培養(yǎng)物可誘導(dǎo)蘭花植株對(duì)白絹病、立枯病、炭疽病等真菌性病害及歐氏桿菌引起的細(xì)菌性軟腐病的抗性，減少植株發(fā)病率，降低病情指數(shù)；并促進(jìn)蘭花提早發(fā)枝，增加蘭花的葉片數(shù)。此外，本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)在蘭花初現(xiàn)花苞時(shí)，將哈茨木霉T216的液態(tài)培養(yǎng)物調(diào)節(jié)成1×105-1×107個(gè)孢子/mL的濃度，對(duì)蘭花植株進(jìn)行噴霧處理，可增加蘭花的花枝數(shù)及延長蘭花的花期。
【專利說明】一種促進(jìn)蘭花生長和防病的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于促進(jìn)蘭花生長和防病的栽培【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種哈茨木霉T216在防治蘭花病害的同時(shí)，還能促進(jìn)蘭花發(fā)枝、延長花期的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蘭花紫莖綠葉，四季常青，葉姿清雅瀟灑，開花清香幽遠(yuǎn)，更因高潔、典雅的氣質(zhì)名列百花之冠，為世人廣為栽培。在人工條件下栽培，選擇合適的栽培基質(zhì)非常重要。國內(nèi)外用于蘭花栽培植料一般由天然礦物、田園土壤、工農(nóng)業(yè)有機(jī)無機(jī)廢棄物的單質(zhì)或混合(復(fù)合體)，它基本具備了水、肥、汽、熱等類似于自然土壤可供植物生長的肥力特性。目前，人工配制的栽培基質(zhì)也越來越多地應(yīng)用到蘭花栽植中，其中常用的基質(zhì)材料主要有以下幾種:蘭石，浮石，蛭石，蛇木，陶粒，爐渣，木炭，水苔，樹皮，珍珠巖，木屑，花泥，松針，腐葉，稻殼，椰糠，泡沫塑料或泥炭，這些培養(yǎng)基質(zhì)能提供蘭花生長養(yǎng)分供應(yīng)需要。但蘭花在生長過程中常會(huì)受到病原真菌、細(xì)菌及病毒等微生物的為害，從而引起蘭花產(chǎn)生腐爛、發(fā)銹、猝倒、枯萎、潰瘍、炭疽、痂斑、斑點(diǎn)等癥狀，嚴(yán)重影響蘭花的生長和品質(zhì)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，僅為害蘭花的病原真菌就約有30余屬100多種。常見的為:引起炭疽病的刺孢盤屬(Collectotrichum),引起白絹病的小核菌屬(Sclerotium),引起花果枯萎病的葡萄孢屬(Botrytis),引起黑腐病或心腐病的疫霉屬(Phytophthora),引起葉斑病或枯萎病的鐮刀菌屬(Fusarium),以及引起銹病的夏孢銹菌屬(Uerdo)、鞘銹菌屬(Coleosporium)等。而現(xiàn)有的普通培養(yǎng)基質(zhì)自身還不具有防病殺菌的功效。
[0003]目前蘭花病害多采用化學(xué)藥劑防治，常引發(fā)①農(nóng)藥使用過量，引起蘭花藥害；②對(duì)侵染病原菌判斷不準(zhǔn)確，不能對(duì)癥下藥錯(cuò)過防治適期，防治效果低；④長期單一使用殺菌劑，使病原菌產(chǎn)生抗藥性；⑤污染環(huán)境等問題。目前也有一些采用物理、生物等方法防治蘭花的研究報(bào)道，如用一定濃度的食醋防治蘭花的黑斑病和白粉病等，這也存在防治適期不易掌握及防治效果偏低的缺點(diǎn)。此外，蘭花多采用鱗莖分株的方法進(jìn)行擴(kuò)繁種植，若未做好栽植基質(zhì)和種莖消毒，病害也會(huì)很快傳播蔓延。因此，探索出一種適合于蘭花病害防治，而且同時(shí)又能促進(jìn)蘭花生長的方法是目前蘭花栽培【技術(shù)領(lǐng)域】急需解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是針對(duì)蘭花人工栽培中，常受真菌性及細(xì)菌性病原菌侵染為害，但現(xiàn)有防治方法存在諸多缺陷的情況，提供一種在防治病害的同時(shí)，還能促進(jìn)蘭花發(fā)枝、延長花期的方法。
[0005]本發(fā)明的目的是通過以下方式實(shí)現(xiàn)的:
[0006]一種促進(jìn)蘭花生長和防病 的方法，應(yīng)用木霉菌的固態(tài)培養(yǎng)物與蘭花培養(yǎng)基質(zhì)混勻，應(yīng)用木霉菌的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)物對(duì)蘭花植株進(jìn)行噴霧，促進(jìn)蘭花的發(fā)枝，延長花期，減少病害的發(fā)生。
[0007]上述方法中優(yōu)選在蘭花以球莖分株移栽時(shí)，應(yīng)用木霉菌的固態(tài)培養(yǎng)物與蘭花培養(yǎng)基質(zhì)混勻作為移栽栽培基質(zhì)；在蘭花現(xiàn)苞時(shí)，應(yīng)用木霉菌的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)物對(duì)蘭花植株進(jìn)行噴霧。
[0008]上述方法中所述的木霉菌是保藏編號(hào)為CCTCC NO:M207141的哈茨木霉(Trichoderma harzianum) T216。
[0009]上述方法中所述的木霉菌的固態(tài)培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程為:
[0010]配制稻麩粉固體培養(yǎng)基，用水拌濕，分裝，滅菌冷卻；在無菌條件下，接入木霉菌的種子菌，24-26°C培養(yǎng)，經(jīng)常搖動(dòng)瓶體，待木霉菌絲長滿培養(yǎng)基并產(chǎn)生大量綠色分生孢子后，倒出，攤開粉碎陰干，過40目篩，此時(shí)孢子濃度為I X IO8-1 X IO9個(gè)孢子/g，加珍珠巖將孢子濃度調(diào)節(jié)為I X IO7-1 X IO8個(gè)孢子/g，得到固態(tài)培養(yǎng)物。
[0011]上述方法中蘭花移植時(shí)，按固態(tài)培養(yǎng)物與栽培基質(zhì)1:50的質(zhì)量比，將二者混勻裝盆，再栽入蘭花植株即可。
[0012]上述方法中所述的稻麩粉固體培養(yǎng)基是每1000g培養(yǎng)基中含麥麩500g，米糠450g,玉米粉 30g, (NH4)2SO4IOg,葡萄糖 IOg0
[0013]上述方法中木霉菌液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)物按如下方法獲得:發(fā)酵罐發(fā)酵:按體積比10%的接種量將種子菌接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵控制參數(shù)為:溫度控制，分為兩個(gè)階段，發(fā)酵第一階段(菌體培養(yǎng)階段):0-72小時(shí)，26-28°C，發(fā)酵第二階段(代謝產(chǎn)物產(chǎn)生階段):72-200 小時(shí)，23-25°C;通氣量(V/V):0-20 小時(shí):1:0.6 ;20_40 小時(shí):1:0.8 ;40_80 小時(shí):1:1.2 ；80小時(shí)以后:1:0.6 ;攪拌速度:250-300rpm ;整個(gè)發(fā)酵過程pH值控制為6.5-6.8 ；發(fā)酵完成后將發(fā)酵醪用氫氧化鈉溶液調(diào)至PH為7.5，悶罐過夜，過濾，即可。
[0014]上述方法中發(fā)酵罐培養(yǎng)基:1.5-2.0%麥麩汁液，0.5-1.0%葡萄糖，2.0-3.0%玉米粉，1.0-2.0% 酵母膏，0.1-0.5%CaC03, 0.01-0.03%MgS04.7H20,0.5-0.8%KH2P04 和 K2HPO4, pH值為6.5-6.8，余量為水，所述 百分比均為重量百分比；通入蒸汽達(dá)121°C滅菌30分鐘；其中麥麩汁液為每200g麥麩加水1000mL的浸潰液。
[0015]上述方法中種子菌的培養(yǎng):培養(yǎng)基配方:可溶性淀粉30g,葡萄糖20g,蛋白胨5g,KH2PO4Ig, MgSO4.7Η200.5g, CaCO30.25g, (NH4) 2S042g, 7jC 1000mL, pH6.9，分裝于 500mL 三角瓶中，裝液量為200mL，經(jīng)115°C滅菌20分鐘；在無菌條件下，將培養(yǎng)于PDA試管斜面培養(yǎng)基上的哈茨木霉T216菌株接入三角瓶中，于27± I°C的培養(yǎng)溫度，150轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速條件下，培養(yǎng)60小時(shí)，獲到制備的種子菌。
[0016]上述方法中在蘭花初現(xiàn)花苞時(shí)，將液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)物用水調(diào)節(jié)成I X IO5-1 X IO7個(gè)孢子/mL的濃度，對(duì)蘭花植株進(jìn)行噴霧處理，優(yōu)選I X IO6個(gè)孢子/mL。
[0017]本發(fā)明的有益效果:
[0018]1、本發(fā)明首次提出了一種促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，現(xiàn)有技術(shù)中多采用化學(xué)殺菌劑對(duì)蘭花進(jìn)行防病，往往造成環(huán)境污染、引起蘭花藥害、使病原菌產(chǎn)生抗藥性等一系列問題；即便偶爾應(yīng)用物理、生物等防治方法，也會(huì)出現(xiàn)防治適期不易掌握及防治效果偏低的缺點(diǎn)，更沒有在防病的同時(shí)還能促進(jìn)蘭花生長的制劑或者方法出現(xiàn)；可以說目前幾乎沒有關(guān)于達(dá)到蘭花病害生物防治以及促進(jìn)蘭花生長，延長花期共同效果的研究報(bào)道。
[0019]2、本發(fā)明應(yīng)用木霉菌的固態(tài)培養(yǎng)物與蘭花培養(yǎng)基質(zhì)混勻，應(yīng)用木霉菌的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)物對(duì)蘭花植株進(jìn)行噴霧，能有效減少病害的發(fā)生，促進(jìn)蘭花的發(fā)枝，延長花期。
[0020]3、本發(fā)明優(yōu)選在蘭花移栽時(shí)，應(yīng)用木霉菌的固態(tài)培養(yǎng)物與蘭花培養(yǎng)基質(zhì)混勻，優(yōu)選在蘭花現(xiàn)苞時(shí)，應(yīng)用木霉菌的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)物對(duì)蘭花植株進(jìn)行噴霧，通過大量的研究表明，選擇在合適的時(shí)間，以及合適的處理方式能夠進(jìn)一步體現(xiàn)本發(fā)明的效果和優(yōu)勢(shì)。
[0021]4、本發(fā)明優(yōu)選木霉菌是保藏編號(hào)為CCTCC NO:M207141的哈茨木霉(Trichodermaharzianum)T216。該木霉菌有抗化學(xué)殺菌劑的優(yōu)勢(shì)，在蘭花栽培過程中如果使用了其他的化學(xué)殺菌劑，則能有效防止其對(duì)該木霉的殺滅作用，保證木霉菌的存活和防病、促進(jìn)生長功倉泛。
[0022]5、本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)在蘭花分株移植時(shí)，在常用的栽培基質(zhì)中按孢子濃度為
IX IO7-1 X IO8個(gè)孢子/g的固態(tài)制劑與培養(yǎng)基質(zhì)1:50的質(zhì)量比，將二者混勻裝盆，再栽入蘭花植株，在蘭花生長期間，該固態(tài)培養(yǎng)物可誘導(dǎo)蘭花植株對(duì)白絹病、立枯病、炭疽病等真菌性病害及歐氏桿菌(Erwinia)引起的細(xì)菌性軟腐病的抗性，減少發(fā)病率，降低病情指數(shù)；并促進(jìn)蘭花的新葉提早發(fā)枝，增加蘭花的葉片數(shù)。
[0023]6、本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)在蘭花初現(xiàn)花苞時(shí)，將液態(tài)培養(yǎng)物調(diào)節(jié)成I X IO5-1 X IO7個(gè)孢子/mL的濃度，優(yōu)選I X IO6個(gè)孢子/mL的濃度，對(duì)蘭花植株進(jìn)行噴霧處理，可增加蘭花的花枝數(shù)及延長的花期。
[0024]本發(fā)明涉及的哈茨木霉(Trichodermaharzianum)T216
[0025]保藏日期:2007年9月7日
[0026]保藏單位名稱:中國典型培養(yǎng)物保藏中心
[0027]保藏單位簡稱:CCTCC
[0028]保藏號(hào)為:CCTCCN0.M207141
[0029]保藏地址:中國.武漢.武漢大學(xué)。
【具體實(shí)施方式】
[0030]以下結(jié)合實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。
[0031]實(shí)施例1制備實(shí)施例
[0032](I)母種的保存:哈茨木霉(Trichoderma harzianum)突變型菌株T216采用試管PDA斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)；
[0033](2)種子菌的培養(yǎng):培養(yǎng)基配方:可溶性淀粉30g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，KH2P04lg，MgSO4.7Η200.5g, CaCO30.25g, (NH4) 2S042g，水 1000mL, ρΗ6.9，分裝于 500mL 三角瓶中，裝液量為200mL，經(jīng)115°C滅菌20分鐘。在無菌條件下，將培養(yǎng)于PDA試管斜面培養(yǎng)基上的哈茨木霉T216菌株接入三角瓶中，于27± 1°C的培養(yǎng)溫度，150轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速條件下，培養(yǎng)60小時(shí)，獲到制備的種子菌。
[0034](3)T216菌株固態(tài)培養(yǎng)物的制備:配制稻麩粉固體培養(yǎng)基:每1000g培養(yǎng)基中含麥麩500g，米糠450g，玉米粉30g，(NH4) 2S0410g,葡萄糖10g，加水至培養(yǎng)基含水量為70_80%，分裝于罐頭瓶中，滅菌冷卻；在無菌條件下，接入種子菌，24-26°C培養(yǎng)，經(jīng)常搖動(dòng)瓶體，待木霉菌絲長滿培養(yǎng)基并產(chǎn)生大量綠色分生孢子后，倒出，攤開粉碎陰干，過40目篩，孢子濃度一般為I X IO8-1 X IO9個(gè)孢子/g，再加入珍珠巖將孢子濃度調(diào)節(jié)為I X IO7-1 X IO8個(gè)孢子/g，即為T216菌株固態(tài)培養(yǎng)物。
[0035](4)T216菌株液態(tài)培養(yǎng)物的制備:配制發(fā)酵罐培養(yǎng)基:1.5_2.0%麥麩汁液，
0.5-1.0% 葡萄糖，2.0-3.0% 玉米粉，1.0-2.0% 酵母膏。0.1-0.5%CaC03, 0.01-0.03%MgS04.7H2O, 0.5-0.8%KH2P04和K2HPO4, pH值為6.5-6.8，余量為水(所述百分比均為重量百分比);通入蒸汽達(dá)121°C在位滅菌30分鐘。按10% (V/V)的接種量將三角瓶中培養(yǎng)的種子菌接入發(fā)酵罐，進(jìn)行控制發(fā)酵，發(fā)酵控制參數(shù)為:溫度控制，分為兩個(gè)階段，發(fā)酵第一階段菌體培養(yǎng)階段0-72小時(shí)，26-28°C，發(fā)酵第二階段代謝產(chǎn)物產(chǎn)生階段72-200小時(shí)，23_25°C ;通氣量(V/V):0-20 小時(shí):1:0.6 ；20-40 小時(shí):1:0.8 ;40_80 小時(shí):1:1.2 ；80 小時(shí)以后:1:0.6 ;攪拌速度:250-300rpm ;發(fā)酵全過程pH值控制在6.5-6.8 ;發(fā)酵醪用氫氧化鈉溶液調(diào)pH為7.5，悶罐過夜，滅菌紗布真空過濾，密封包裝，即成T216菌株液態(tài)培養(yǎng)物。
[0036]實(shí)施例2應(yīng)用實(shí)施例①
[0037]應(yīng)用按照實(shí)施例1方法制備的T216固態(tài)培養(yǎng)物(以下稱T216固態(tài)菌劑，孢子濃度為I X IO7個(gè)孢子/g)進(jìn)行蘭花栽培試驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)是在長沙市馬坡嶺湖南省園藝研究所蘭花栽培園進(jìn)行。在蘭花(建蘭)分株移植時(shí)，在常用的栽培基質(zhì)中按T216固態(tài)菌劑與培養(yǎng)基質(zhì)1:50的質(zhì)量比，將二者混勻裝盆，再移入蘭花植株，按常規(guī)方法管理，30d、120d后調(diào)查每盆蘭花所生新苗。120d后調(diào)查植株發(fā)病情況，每株如有一片及一片以上葉片有明顯病害癥狀，就算為發(fā)病株。試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。
[0038]表1木霉T216固態(tài)制劑對(duì)蘭花防病促生長的效果
【權(quán)利要求】
1.一種促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，其特征在于，應(yīng)用木霉菌的固態(tài)培養(yǎng)物與蘭花培養(yǎng)基質(zhì)混勻，應(yīng)用木霉菌的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)物對(duì)蘭花植株進(jìn)行噴霧，促進(jìn)蘭花的發(fā)枝，延長花期，減少病害的發(fā)生。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，其特征在于，在蘭花以球莖分株移栽時(shí)，應(yīng)用木霉菌的固態(tài)培養(yǎng)物與蘭花培養(yǎng)基質(zhì)混勻，在蘭花現(xiàn)苞時(shí)，應(yīng)用木霉菌的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)物對(duì)蘭花植株進(jìn)行噴霧。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，其特征在于，所述的木霉菌是保藏編號(hào)為 CCTCC NO:M207141 的哈茨木霉(Trichoderma harzianum) T216。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，其特征在于，所述的木霉菌的固態(tài)培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程為: 配制稻麩粉固體培養(yǎng)基，用水拌濕，分裝，滅菌冷卻；在無菌條件下，接入木霉菌的種子菌，24-26°C培養(yǎng)，經(jīng)常搖動(dòng)瓶體，待木霉菌絲長滿培養(yǎng)基并產(chǎn)生大量綠色分生孢子后，倒出，攤開粉碎陰干，過40目篩，此時(shí)孢子濃度為1 X 108-1 X 109個(gè)孢子/g，加珍珠巖將孢子濃度調(diào)節(jié)為1 X10-1 X 108個(gè)孢子/g，得到固態(tài)培養(yǎng)物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，其特征在于，蘭花移植時(shí)，按固態(tài)培養(yǎng)物與栽培基質(zhì)1:50的質(zhì)量比，將二者混勻，再栽入蘭花植株即可。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，其特征在于，所述的稻麩粉固體培養(yǎng)基是每1000g培養(yǎng)基中含麥麩500g，米糠450g，玉米粉30g，(NH4)2S0410g，葡萄糖10g。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，其特征在于，木霉菌液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)物按如下方法獲得:發(fā)酵罐發(fā)酵:按體積比10%的接種量將種子菌接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵控制參數(shù)為:溫度控制，分為兩個(gè)階段，發(fā)酵第一階段:0-72小時(shí)，26-28°C，發(fā)酵第二階段=72-200 小時(shí)，23_25°C ;通氣量(V/V):0-20 小時(shí):1:0.6 ；20-40小時(shí):1:0.8 ；40-80小時(shí):1:1.2 ；80小時(shí)以后:1:0.6 ;攪拌速度:250-300rpm ;整個(gè)發(fā)酵過程PH值控制為6.5-6.8 ;發(fā)酵完成后將發(fā)酵醪用氫氧化鈉溶液調(diào)至pH為7.5，悶罐過夜，過濾，即可。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，其特征在于，發(fā)酵罐培養(yǎng)基:1.5-2.0% 麥麩汁液，0.5-1.0% 葡萄糖，2.0-3.0% 玉米粉，1.0-2.0% 酵母膏，0.1-0.5%CaC03,0.01-0.03%MgS04.7H20,0.5-0.8%KH2P04 和 K2HPO4, pH 值為 6.5-6.8，余量為水，所述百分比均為重量百分比；通入蒸汽達(dá)121°C滅菌30分鐘；其中麥麩汁液為每200g麥麩加水1000mL的浸潰液。
9.根據(jù)權(quán)利要求4或7所述的促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，其特征在于，種子菌的培養(yǎng):培養(yǎng)基配方:可溶性淀粉30g,葡萄糖20g，蛋白胨5g，KH2PO4Ig, MgSO4.7Η200.5g，CaCO30.25g，(NH4)2S042g,水 1000mL, pΗ6.9，分裝于 500mL 三角瓶中，裝液量為 200mL,經(jīng)115°C滅菌20分鐘；在無菌條件下，將培養(yǎng)于PDA試管斜面培養(yǎng)基上的哈茨木霉T216菌株接入三角瓶中，于27± 1°C的培養(yǎng)溫度，150轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速條件下，培養(yǎng)60小時(shí)，獲到制備的種子菌。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的促進(jìn)蘭花生長和防病的方法，其特征在于，在蘭花初現(xiàn)花苞時(shí)，將液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)物用水調(diào)節(jié)成1X 105-1X 107個(gè)孢子/mL的濃度，對(duì)蘭花植株進(jìn)行噴霧處理。
【文檔編號(hào)】C12N1/14GK103875717SQ201410130978
【公開日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2014年4月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月2日
【發(fā)明者】魏林, 梁志懷, 張屹, 李麗輝, 李萌, 陳玉榮, 李衛(wèi)東 申請(qǐng)人:湖南省植物保護(hù)研究所