毛栓菌菌株及其在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用的制作方法
【專利摘要】一種毛栓菌SEM-6（Trametes?trogii?SEM-6），該菌株已于2014年1月6日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC?No.M2014002。一種毛栓菌菌株在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，屬于生物工程【技術領域】。本發(fā)明利用有機質含量在40-60%（以干重計）的市政脫水污泥作為主要發(fā)酵基質通過液體發(fā)酵或者固體發(fā)酵方式生產漆酶，從而實現污泥中有機成分的高值化利用的目的。本發(fā)明所生產的漆酶可以用于木質纖維素預處理、環(huán)境污染物治理等方面。
【專利說明】毛栓菌菌株及其在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種毛栓菌菌株及其在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用。
【背景技術】
[0002]漆酶(EC 1.10.3.2)屬于銅藍氧化酶家族，其底物范圍十分廣泛，可氧化單酚、二酚、多酚、二胺、芳香胺、甲基酚、抗壞血酸以及非酚類的化合物等。漆酶是一種環(huán)境友好型生物催化劑，能在氧的參與下對底物進行降解，其副產物是水，在環(huán)境污染治理、生物修復、造紙工業(yè)、食品工業(yè)、生物質能源等多個領域，有著極為廣闊的應用前景。漆酶廣泛存在于生物體中，目前已經在真菌、細菌、植物、動物及藻類中發(fā)現，其中產漆酶能力最強的為真菌，尤其是白腐菌。
[0003]近年來，隨著城鎮(zhèn)化進程的發(fā)展，我國污水排放量日益增加，城市污水處理能力也在不斷提升。而污泥作為城市污水處理過程中的體積最大的副產物，其生成量也在迅速增加，這些大量產生的剩余脫水污泥越來越成為嚴重的環(huán)境與社會問題?！笆濉逼陂g，我國節(jié)能減排形式極為嚴峻，因此在污泥處理處置工藝中應首先采用低能耗技術，并優(yōu)先考慮其資源化利用方式。市政脫水污泥中含有大量的水分，其處置難度極大。目前，針對市政脫水污泥處理處置的方法主要為堆肥、焚燒、制造建筑材料及提取污泥蛋白等方法，但未有利用市政脫水污泥發(fā)酵產漆酶的報道。[0004]目前漆酶采用微生物發(fā)酵法進行生產，其所用原料主要為工業(yè)原料如葡萄糖、麥芽糖、硫酸銨、酒石酸銨以及酵母膏、蛋白胨、玉米粉、作物秸桿、麩皮等(高大文，梁紅，陳軍。一種培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基。中國專利CN 200810064055.3 ;馬瑛，賈紅華，周華，韋萍。高活性漆酶產生菌的發(fā)酵條件優(yōu)化。南京工業(yè)大學學報(自然科學版)，32(2):82-86 ;肖亞中，洪宇植、張赫，袁璟，房偉。一種真菌共培養(yǎng)發(fā)酵生產漆酶的方法。中國專利申請書200610037937.1 ;肖亞中，孫芹英，房偉，洪宇植，張敏，葛洪華。栓菌AH-28固態(tài)發(fā)酵生產漆酶的方法。中國專利申請書200610037655.1 ;鄭曉冰，郭麗瓊，付小燕，刁惠萍，林俊芳。木霉LaTrOl菌株產漆酶發(fā)酵的條件。生物加工過程，2007，5 (4):19-24 ;武忠偉，王振河，趙現方，竇艷萍。白腐真菌固體發(fā)酵玉米秸桿產漆酶條件的優(yōu)化。湖北農業(yè)科學，46 (5):735-737)。通過文獻對比發(fā)現，目前漆酶發(fā)酵中所用原料成本較高，不利于其進一步開發(fā)利用。市政脫水污泥中有機質含量較高，能夠用作發(fā)酵漆酶生產的主要原料。由于污泥中成分復雜，且污泥中微生物細胞壁破解難度大，導致很多微生物對其利用效率較低。因此，建立合適的預處理方法并尋找利用污泥能力較強的微生物菌株是提高其資源化利用水平的關鍵。

【發(fā)明內容】

[0005]針對現有技術的局限性和不足，本發(fā)明的目的是提供一種毛栓菌菌株及其在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用。本發(fā)明提供了一種利用市政脫水污泥生產漆酶的方法，該方法利用新獲得的毛栓菌SEM-6 {Trametes trogii SEM-6)高效利用市政脫水污泥生產漆酶，具有良好的應用前景和工業(yè)化潛力。
[0006]本發(fā)明所用菌株為毛栓菌SEM-6,拉丁文學名trogii SEM-6,該菌株已于2014年I月6日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，地址為武漢市武昌珞珈山武漢大學，保藏編號為 CCTCC N0.M 2014002 (.Trametes trogii SEM-6)。
[0007]本發(fā)明提供了一種毛栓菌菌株在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，其特征是它是利用毛栓菌SEM-6液體發(fā)酵產漆酶技術，具體由如下步驟組成:
(1)液體種子培養(yǎng)基:葡萄糖20克/升，豆柏5克/升，酵母粉I克/升，磷酸二氫鉀I克/升，七水硫酸鎂0.5克/升，初始pH 4-7，搖床轉速為200轉/分鐘，接種菌株CCTCCN0.M 2014002毛栓菌SEM-6后，培養(yǎng)時間為48-72小時，獲得液體發(fā)酵種子；
(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)基，以干物質含量計:污泥發(fā)酵基質為20-50克/升，同時加入1-5克/升的磷酸二氫鉀、1-2克/升的七水硫酸鎂、5-15克/升的麩皮，調整初始pH值為3-7，121°C滅菌30分鐘，獲得液體發(fā)酵培養(yǎng)基；所述污泥發(fā)酵基質經過氫氧化鈉預處理的市政脫水污泥，氫氧化鈉預處理的具體方法為:以重量份計，在含水量為60-80%的市政脫水污泥100份中加入氫氧化鈉0.2-1份，市政脫水污泥中干物質有機質含量為40-60%，攪拌均勻后在20-35°C條件下處理2-4天，即可獲得污泥發(fā)酵基質；
(3)漆酶生產:采用步驟(2)所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基，以液體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的5-10%接入液體發(fā)酵種子，控制溶氧相對百分含量大于等于20%，以30°C條件下培養(yǎng)基中飽和氧濃度為100%，攪拌電機轉速為100-200轉/分，發(fā)酵時間為5-10天，獲得含有漆酶的發(fā)酵液，其中漆酶活力達到5.4-15.8U/毫升。
[0008]本發(fā)明所述漆酶活力(U)定義:將1.9毫升100毫摩爾/升的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液(pH 3.0)和0.5毫升10毫摩爾/升2，6-二甲氧基酚組成的反應體系在60 °C保溫5分鐘后，加入0.1毫升酶液，測定470納米處吸光度的增加值。以每分鐘氧化I微摩爾的2，6- 二甲氧基酚生成3，5，3’，5’ -四甲氧基二苯醌(摩爾消光系數(470納米)=49600摩爾―1 ?厘米―1)所需要的漆酶量定義為I個酶活力單位(U)。
[0009]一種毛栓菌菌株在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，其特征是它是利用毛栓菌SEM-6固體發(fā)酵產漆酶技術，具體由如下步驟組成:(I)液體種子培養(yǎng)基:葡萄糖20克/升，豆柏5克/升，酵母粉I克/升，磷酸二氫鉀I克/升，七水硫酸鎂0.5克/升，初始pH
4-7，搖床轉速為200轉/分鐘，接種菌株CCTCC N0.M 2014002毛栓菌SEM-6后，培養(yǎng)時間為48-72小時，獲得液體發(fā)酵種子；
(2)固體發(fā)酵培養(yǎng)基，以重量份計:污泥發(fā)酵基質60-90份，麩皮1-10份，玉米秸桿粉1-10份，蘑菇渣5-15份，磷酸二氫鉀0.1-1份，七水硫酸鎂0.05-0.2份，調整培養(yǎng)基初始含水量為50-65%，121°C滅菌30-60分鐘，獲得固體發(fā)酵培養(yǎng)基；所述市政脫水污泥是經過氫氧化鈉預處理的市政污泥，氫氧化鈉預處理的具體方法為:以重量份計，在含水量為60-80%的市政脫水污泥100份中加入氫氧化鈉0.2-1份，市政脫水污泥中干物質有機質含量為40-60%，攪拌均勻后在20-35°C條件下處理2_4天，獲得污泥發(fā)酵基質； (3)以固體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的2-5%接入液體發(fā)酵種子，攪拌均勻后置入固體發(fā)酵罐中進行固態(tài)發(fā)酵；發(fā)酵條件為25-30°C，攪拌速度為5-30轉/分鐘，通風量體積為培養(yǎng)基實際體積的0.5-1.2倍，發(fā)酵時間為5-10天，獲得含有漆酶的發(fā)酵產物，漆酶活力可達10.4-30.3U/ 克干基。[0010]本發(fā)明所述毛栓菌SEM-6是利用濟南市市政脫水污泥中通過選擇性培養(yǎng)基(污泥浸出液1000毫升，愈創(chuàng)木酚0.06克，玉米淀粉2克，葡萄糖0.5克，瓊脂20克，pH 5，121 °C滅菌30分鐘后倒平板)篩選獲得。其中污泥浸出液是指，將含水量60-80%的污泥烘干至含水量10%以下，以200克干污泥加入1000毫升自來水的比例進行提取并煮沸處理30分鐘，離心獲得的上清液。該毛栓菌有如下特征:在選擇性培養(yǎng)基上生長迅速，5天即可布滿平板，氣生菌絲為白色，毛茸狀，菌落周圍能夠產生明顯鐵紅色氧化帶。
[0011]本發(fā)明所述毛栓菌SEM-6 ITS-5.8S rDNA核苷酸序列如序列表SEQ ID N0.1所示。通過美國生物技術信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)序列同源性分析，將本發(fā)明的菌株毛栓菌SEM-6 {Trametes trogii SEM-6) CCTCC N0.M2014002的ITS-5.8S rDNA核苷酸通過BLAST工具進行比對，比對結果表明該菌株屬于毛栓菌。結合該菌株所培養(yǎng)出的子實體、菌絲體形態(tài)分析和孢子的形態(tài)分析根據《真菌鑒定手冊》(魏景超著)表明該菌株屬于栓菌屬中的毛栓菌。
[0012]序列表SEQ ID N0.1
毛栓菌 SEM-6 (.TrametesSEM-6 ) ITS-5.8S rDNA 核苷酸序列
I AGCTGGCTTC TCCGGAGCCA TGTGCACGCC CTGCTCATCC ACTCTACACC TGTGCACTTA
61 CTGTGGGTAT CGGGAGGTGT CGCGTCGTTT ACGGCGAGGC GTTAACCGTG CCTACGTTTT
121 ACTACAAACG ATTCAGTATC AGAATGTGTA TTGCGATGTA ACGCATCTAT ATACAACTTT
181 CAGCAACGGA TCTCTTGGCT CTCGCATCGA TGAAGAACGC AGCGAAATGC GATAAGTAAT
241 GTGAATTGCA GAATTCAGTG AATCATCGAA TCTTTGAACG CACCTTGCGC TCCTTGGTAT
301 TCCGAGGAGC ATGCCTGTTT GAGTGTCATG AAATTCTCAA ACCCATAAGT CTTTGCGGGC
361 TTACGGGCTT TGGACTTGGA GGCTTGTCGG CGACCGTGAG GTCACATCGA CTCCTCTCAA
421 ATGCATTAGC TTGATTCCTT GCGGATCGGC TCTCGGTGTG ATAATTGTCT ACACCGTGAC
481 CGTGAAGCGC TTTGGCTAGC TTCTAACCGA CTCTAATTAG ACAGCTTACT TTGACCTCTG
541 ATTTCAAATC AGGTTGGACT ACCCGCTGAA CTTAAGCATT TCA
本發(fā)明中如無特殊說明，原料用量均為重量份。
[0013]文中所提到的市政脫水污泥是指市政給排水處理系統(tǒng)給水、雨水、生活污水等收集并由水質凈化廠經活性污泥法處理后經絮凝、脫水后所產生的含水量為60-80%的污泥，尤其是指干物質中有機質含量在40-60%的市政脫水污泥，脫水污泥干物質中含氮量為20-60毫克每克，含碳量為100-300毫克每克。
[0014]本發(fā)明的有益效果:市政脫水污泥來源廣泛，且有機質含量高。本發(fā)明以市政脫水污泥作為發(fā)酵主要原料生產漆酶，能大幅降低漆酶的生產成本，同時對污泥中的部分污染物(酚類、多環(huán)芳烴等有害物質)進行生物降解處理。其中固體發(fā)酵生產漆酶工藝還能作為污泥的預處理手段用于污泥堆 肥、污泥生物干化等方面，可降低污泥中的有害污染物水平，提高污泥的生物利用效率。本發(fā)明利用新獲得的毛栓菌菌株利用市政脫水污泥作為主要原料進行漆酶生產，其液體發(fā)酵最高酶活力達到15.8U/毫升，固體發(fā)酵最高酶活力達到30.3U/克干重，液體發(fā)酵水平為15.8U/毫升。在利用剩余市政脫水污泥為主要原料發(fā)酵產漆酶時，其產酶量和發(fā)酵速度均有明顯優(yōu)勢(以血紅密孔菌GW(CGMCC N0.1008)進行液體發(fā)酵時其產量為0.2U/毫升)。【具體實施方式】
[0015]以下結合實施例對發(fā)明進行進一步說明，但本發(fā)明不僅限于此。
[0016]實施例1
一種毛栓菌菌株在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，它包括脫水如下步驟:(I)液體種子培養(yǎng)基(克/升):葡萄糖20，豆柏5，酵母粉1，磷酸二氫鉀1，七水硫酸鎂0.5，初始pH 5，搖床轉速為200轉/分鐘，接種毛栓菌SEM-6 (CCTCC N0.M 2014002)，培養(yǎng)時間為48小時，獲得液體發(fā)酵種子。(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)基(克/升):烘干后的污泥發(fā)酵基質20(從濟南市光大水務一廠獲得，有機質占其干重的40%，經過氫氧化鈉預處理。其具體方法為:在重量份為100、含水量為60%的市政脫水污泥中加入重量份為0.2的氫氧化鈉，攪拌均勻后在20°C條件下處理2天，即可獲得污泥發(fā)酵基質。)，磷酸二氫鉀5、七水硫酸鎂2、麩皮5，調整初始pH值為3，121 °C滅菌30分鐘，獲得用于漆酶生產的液體發(fā)酵培養(yǎng)基。(3)漆酶生產:采用步驟(2)所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基，以液體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的5%接入液體發(fā)酵種子，控制溶氧水平相對百分含量為20%,以30°C條件下培養(yǎng)基中飽和氧濃度為100%，攪拌電機轉速為100轉/分，發(fā)酵時間為5天，獲得含有漆酶的發(fā)酵液，其漆酶活力水平達到5.4U/毫升。
[0017]實施例2
一種毛栓菌菌株在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，它包括如下步驟:(I)液體種子培養(yǎng)基(克/升):葡萄糖20，豆柏5，酵母粉1，磷酸二氫鉀I，七水硫酸鎂0.5，初始pH4，搖床轉速為200轉/分鐘，接種毛栓菌SEM-6 (CCTCC N0.M 2014002)，培養(yǎng)時間為60小時，獲得液體發(fā)酵種子。(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)基(克/升):烘干后的污泥發(fā)酵基質50 (從濟南市光大水務二廠獲得，有機質占其干重的52%，經氫氧化鈉預處理。其具體方法為:在重量份為100、含水量為80%的市政脫水污泥中加入重量份為I的氫氧化鈉，攪拌均勻后在35°C條件下處理4天，即可獲得污泥發(fā)酵基質)，麩皮10，磷酸二氫鉀I，七水硫酸鎂1.5，調整初始PH值為7，121°C滅菌30分鐘，獲得用于漆酶生產的液體發(fā)酵培養(yǎng)基。(3)漆酶生產:采用步驟(2)所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基，以液體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的8%接入液體發(fā)酵種子，控制溶氧相對百分含量為30%，以30°C條件下培養(yǎng)基中飽和氧濃度為100%，攪拌電機轉速為200轉/分，發(fā)酵時間為7天，獲得含有漆酶的發(fā)酵液，其漆酶活力水平達到8.2U/毫升。
[0018]實施例3
一種毛栓菌菌株在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，它包括如下步驟:(I)液體種子培養(yǎng)基(克/升):葡萄糖20，豆柏5，酵母粉1，磷酸二氫鉀I，七水硫酸鎂0.5，初始pH7，搖床轉速為200轉/分鐘，接種毛栓菌SEM-6 (CCTCC N0.M 2014002)，培養(yǎng)時間為72小時，獲得液體發(fā)酵種子。(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)基(克/升):烘干后的污泥發(fā)酵基質40 (從濟南市光大水務二廠獲得，有機質占其干重的60%，經氫氧化鈉預處理。其具體方法為:在重量份為100、含水量為70%的市政脫水污泥中加入重量份為0.6的氫氧化鈉，攪拌均勻后在30°C條件下處理3天，即可獲得污泥發(fā)酵基質。)，磷酸二氫鉀3、七水硫酸鎂1、麩皮15，調整初始pH值為5，121°C滅菌30分鐘 ，獲得獲得用于漆酶生產的液體發(fā)酵培養(yǎng)基。(3)漆酶生產:采用步驟(2)所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基，以發(fā)酵培養(yǎng)基重量的10%接入液體發(fā)酵種子，控制溶氧相對百分含量為25%，以30°C條件下培養(yǎng)基中飽和氧濃度為100%，攪拌電機轉速為150轉/分，發(fā)酵時間為10天,獲得含有漆酶的發(fā)酵液,其漆酶活力水平達到15.8U/毫升。[0019]實施例4
一種毛栓菌菌株在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，它包括如下步驟:(I)液體種子培養(yǎng)基(克/升):葡萄糖20，豆柏5，酵母粉1，磷酸二氫鉀I，七水硫酸鎂0.5，初始pH4，搖床轉速為200轉/分鐘，接種毛栓菌SEM-6 (CCTCC N0.M 2014002)，培養(yǎng)時間為48小時，獲得液體發(fā)酵種子。(2)固體發(fā)酵培養(yǎng)基(重量份):污泥發(fā)酵基質60 (含水量70%,從濟南光大水務一廠獲得，經氫氧化鈉預處理。其具體方法為:在重量份為100的市政脫水污泥中加入重量份為I的氫氧化鈉，攪拌均勻后在35°C條件下處理2天，獲得污泥發(fā)酵基質)麩皮1，玉米秸桿粉10，蘑菇渣10，磷酸二氫鉀1，七水硫酸鎂0.2，培養(yǎng)基初始含水量為65%，121°C滅菌30分鐘，獲得固體發(fā)酵培養(yǎng)基。(3)以固體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的2%接入液體發(fā)酵種子，攪拌均勻后置入固體發(fā)酵罐中進行固態(tài)發(fā)酵。發(fā)酵條件為25°C，攪拌速度為5轉/分鐘，通風量體積為培養(yǎng)基實際體積的0.5倍，發(fā)酵時間為5天，獲得含有漆酶的發(fā)酵產物，其漆酶活力可達10.4U/克干重。
[0020]實施例5
一種毛栓菌菌株在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，它包括如下步驟:(I)液體種子培養(yǎng)基(克/升):葡萄糖20，豆柏5，酵母粉1，磷酸二氫鉀I，七水硫酸鎂0.5，初始pH5，搖床轉速為200轉/分鐘，接種毛栓菌SEM-6 (CCTCC N0.M 2014002)，培養(yǎng)時間為54小時，獲得液體發(fā)酵種子。(2)固體發(fā)酵培養(yǎng)基(重量份):污泥發(fā)酵基質90 (在重量份為100、含水量為80%的市政脫水污泥中加入重量份為0.2的氫氧化鈉，攪拌均勻后在35°C條件下處理4天，獲得污泥發(fā)酵基質，麩皮10，玉米秸桿粉5，蘑菇渣5，磷酸二氫鉀0.1，七水硫酸鎂0.05，培養(yǎng)基初始含水量為60%，121°C滅菌40分鐘，獲得固體發(fā)酵培養(yǎng)基(3)以固體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的3%接入液體發(fā)酵種子，攪拌均勻后置入固體發(fā)酵罐中進行固態(tài)發(fā)酵。發(fā)酵條件為28°C，攪拌速度為15轉/分鐘，通風量體積為培養(yǎng)基實際體積為I倍，發(fā)酵時間為7天，獲得含有漆酶的發(fā)酵產物，其漆酶活力可達17.2U/克干重。
[0021]實施例6
一種毛栓菌菌株在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，它包括如下步驟:(I)液體種子培養(yǎng)基(克/升):葡萄糖2，豆柏5，酵母粉1，磷酸二氫鉀1，七水硫酸鎂0.5，初始pH7，搖床轉速為200轉/分鐘，接種毛栓菌SEM-6 (CCTCC N0.M 2014002)，培養(yǎng)時間為72小時，獲得液體發(fā)酵種子。(2)固體發(fā)酵培養(yǎng)基(重量份):污泥發(fā)酵基質80 (含水量65%,從濟南光大水務二廠獲得。污泥重量份為100，加入重量份為0.5的氫氧化鈉，攪拌均勻后在30°C條件下處理3天，獲得污泥發(fā)酵基質)，麩皮8，玉米秸桿粉1，蘑菇渣15，磷酸二氫鉀
0.6，七水硫酸鎂0.1，培養(yǎng)基初始含水量為50%，121°C滅菌60分鐘。(3)以固體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的5%接入液體發(fā)酵種子，攪拌均勻后置入固體發(fā)酵罐中進行固態(tài)發(fā)酵。發(fā)酵條件為300C，攪拌速度為30轉/分鐘，通風量體積為培養(yǎng)基實際體積的1.2倍，發(fā)酵時間為10天，獲得含有漆酶的發(fā)酵產物，其漆酶活力可達30.3U/克干重。
[0022]實施例7
一種血紅密孔菌在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，它包括如下步驟:(1)液體種子培養(yǎng)基(克/升):葡萄糖20，豆柏5，酵母粉1，磷酸二氫鉀I，七水硫酸鎂0.5，初始pH7，搖床轉速為200轉/分鐘，接種菌株血紅密孔菌GW (CGMCC N0.1008)(郭林，王文惠，張虎成，李偉。一種血紅密孔菌GW菌漆酶的制備方法。中國專利CN200310118373.0 )，培養(yǎng)時間為72小時，獲得液體發(fā)酵種子。(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)基(克/升):污泥發(fā)酵基質40 (以從濟南市光大水務二廠獲得，有機質占其干重的60%，經氫氧化鈉預處理。其具體方法為:在重量份為100、含水量為70%的市政脫水污泥中加入重量份為0.6的氫氧化鈉，攪拌均勻后在30°C條件下處理3天，獲得污泥發(fā)酵基質。)，磷酸二氫鉀3、七水硫酸鎂1、麩皮15，初始pH值為6，121°C 滅菌30分鐘。(3)漆酶生產:采用步驟(2)所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基，以發(fā)酵培養(yǎng)基體積的10%接入液體發(fā)酵種子，控制溶氧相對百分含量25%，以30°C條件下培養(yǎng)基中飽和氧濃度為100%，攪拌電機轉速為150轉/分，發(fā)酵時間為10天，獲得含有漆酶的發(fā)酵液，其漆酶活力為0.2U/毫升，明顯低于本發(fā)明實施例。
【權利要求】
1.一種毛栓菌SEM-6 (Jrametes trogii SEM-6),該菌株已于2014年I月6日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏編號為CCTCC N0.M 2014002。
2.一種毛栓菌菌株在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，其特征是它是利用毛栓菌SEM-6液體發(fā)酵產漆酶技術，具體由如下步驟組成: (1)液體種子培養(yǎng)基:葡萄糖20克/升，豆柏5克/升，酵母粉I克/升，磷酸二氫鉀I克/升，七水硫酸鎂0.5克/升，初始pH 4-7，搖床轉速為200轉/分鐘，接種菌株CCTCCN0.M 2014002毛栓菌SEM-6后，培養(yǎng)時間為48-72小時，獲得液體發(fā)酵種子； (2)液體發(fā)酵培養(yǎng)基，以干物質含量計:污泥發(fā)酵基質為20-50克/升，同時加入1-5克/升的磷酸二氫鉀、1-2克/升的七水硫酸鎂、5-15克/升的麩皮，調整初始pH值為3-7，121°C滅菌30分鐘，獲得液體發(fā)酵培養(yǎng)基；所述污泥發(fā)酵基質是經過氫氧化鈉處理的市政脫水污泥；處理的具體方法為:以重量份計，在含水量為60-80%的市政脫水污泥100份中加入氫氧化鈉0.2-1份，市政脫水污泥中干物質有機質含量為40-60%，攪拌均勻后在20-35 °C條件下處理2-4天，即可獲得污泥發(fā)酵基質； (3)漆酶生產:采用步驟(2)所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基，以液體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的5-10%接入液體發(fā)酵種子，控制溶氧相對百分含量大于等于20%，以30°C條件下培養(yǎng)基中飽和氧濃度為100%，攪拌電機轉速為100-200轉/分，發(fā)酵時間為5-10天，獲得含有漆酶的發(fā)酵液。
3.—種毛栓菌菌株在利用市政脫水污泥生產漆酶中的應用，其特征是它是利用毛栓菌SEM-6固體發(fā)酵產漆酶技術，具體由如下步驟組成:(I)液體種子培養(yǎng)基:葡萄糖20克/升，豆柏5克/升，酵母粉I克/升，磷酸二氫鉀I克/升，七水硫酸鎂0.5克/升，初始pH4-7，搖床轉速為200轉/分鐘，接種菌株CCTCCN0.M 2014002毛栓菌SEM-6后，培養(yǎng)時間為48-72小時，獲得液體發(fā)酵種子； (2)固體發(fā)酵培養(yǎng)基，以重量份計:污泥發(fā)酵基質60-90份，麩皮1-10份，玉米秸桿粉1-10份，蘑菇渣5-15份，磷酸二氫鉀0.1-1份，七水硫酸鎂0.05-0.2份，調整培養(yǎng)基初始含水量為50-65%，121°C滅菌30-60分鐘，獲得固體發(fā)酵培養(yǎng)基；所述污泥發(fā)酵基質是經過氫氧化鈉預處理的市政脫水污泥，氫氧化鈉預處理的具體方法為:以重量份計，在含水量為60-80%的市政脫水污泥100份中加入氫氧化鈉0.2-1份，市政脫水污泥中干物質有機質含量為40-60%，攪拌均勻后在20-35°C條件下處理2_4天，即可獲得污泥發(fā)酵基質； (3)以固體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的2-5%接入液體發(fā)酵種子，攪拌均勻后置入固體發(fā)酵罐中進 行固態(tài)發(fā)酵；發(fā)酵條件為25-30°C，攪拌速度為5-30轉/分鐘，通風量體積為培養(yǎng)基實際體積的0.5-1.2倍，發(fā)酵時間為5-10天，獲得含有漆酶的發(fā)酵產物。
【文檔編號】C12R1/645GK103911295SQ201410113038
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2014年3月25日 優(yōu)先權日:2014年3月25日
【發(fā)明者】梁曉輝, 張曉東, 華棟梁, 趙玉曉, 張 杰, 司洪宇, 李巖, 許海朋, 牧輝 申請人:山東省科學院能源研究所