一種飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法。本生產(chǎn)方法通過(guò)對(duì)地頂孢霉菌種生長(zhǎng)特性的研究，將地頂孢霉培養(yǎng)物生產(chǎn)工藝進(jìn)行了改進(jìn)，改進(jìn)后將地頂孢霉培養(yǎng)物生產(chǎn)周期由原先的11~15天縮短至5天，大幅度降低了地頂孢霉培養(yǎng)物的生產(chǎn)成本，對(duì)這一高端飼料添加劑的市場(chǎng)推廣有著極為重要的意義；同時(shí)大大減少了生產(chǎn)過(guò)程中水電氣的能源損耗。本發(fā)明中“地頂孢霉培養(yǎng)物”生產(chǎn)工藝過(guò)程主要包括“液體菌種發(fā)酵”和“固體發(fā)酵”。動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明：該飼料添加劑可顯著提高動(dòng)物免疫力、較低料肉比、提高肉質(zhì)品質(zhì)。本方法生產(chǎn)“地頂孢霉培養(yǎng)物”飼料添加劑具有成本低廉、生產(chǎn)周期短、質(zhì)量可控和應(yīng)用效果好等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】一種飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于飼料添加劑加工【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，更具體地說(shuō)是用地頂孢霉(Acremonium terricola,保藏號(hào)CGMCC0346 )進(jìn)行液體菌種發(fā)酵和固體發(fā)酵所獲得的地頂孢霉培養(yǎng)物的制作方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我國(guó)農(nóng)業(yè)部頒發(fā)《飼料添加劑品種目錄》中大部分飼料添加劑為傳統(tǒng)的抗生素、化學(xué)合成藥物等，長(zhǎng)期使用此類添加劑會(huì)使動(dòng)物產(chǎn)生抗藥性，并存在動(dòng)物源性耐藥細(xì)菌的耐藥性向人類的轉(zhuǎn)移，給人類的健康形成巨大影響，甚至威脅到人類的生命安全；而且人體經(jīng)常從肉質(zhì)中攝入低劑量的抗生素殘留物，會(huì)逐步在體內(nèi)蓄積而導(dǎo)致各種器官發(fā)生病變，導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)、免疫抑制、致畸、致癌、致突變等作用。
[0003]因此，綠色飼料添加劑是未來(lái)發(fā)展方向，我國(guó)《十二五規(guī)劃》也將“發(fā)展優(yōu)質(zhì)安全高效飼料產(chǎn)品”列為行業(yè)主要任務(wù)之一。規(guī)劃指出:十二五期間需加強(qiáng)酶制劑、微生物制劑等新型飼料添加劑研發(fā)、生產(chǎn)與應(yīng)用；綜合利用微生物制劑等新型安全飼料添加劑產(chǎn)品，減少抗生素等藥物飼料添加劑使用。
[0004]“地頂孢霉培養(yǎng)物”是我國(guó)農(nóng)業(yè)部《飼料添加劑品種目錄》所收錄的一種綠色飼料添加劑?！暗仨旀呙埂笔且环N真菌，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)對(duì)其發(fā)酵培養(yǎng)所得產(chǎn)物可提高動(dòng)物機(jī)體免疫力、降低料肉比，因此“ 地頂孢霉培養(yǎng)物”被列入農(nóng)業(yè)部《飼料添加劑品種目錄》。
[0005]“地頂孢霉”為中國(guó)新紀(jì)錄種，國(guó)外尚無(wú)專利報(bào)道，國(guó)內(nèi)目前與“地頂孢霉”菌種相關(guān)的專利有CN1091150C “地頂孢霉CGMCC0346及分離培養(yǎng)方法和發(fā)酵工藝方法”、CN200910008656 “一種低膽固醇營(yíng)養(yǎng)禽蛋的生產(chǎn)方法及其產(chǎn)品”。
[0006]其中，專利CN1091150C “地頂孢霉CGMCC0346及分離培養(yǎng)方法和發(fā)酵工藝方法”是在地頂孢霉尚未開(kāi)發(fā)成飼料添加劑時(shí)申請(qǐng)的，其保護(hù)技術(shù)包括“地頂孢霉菌種分離方法”和“液體發(fā)酵工藝方法”，該專利中的“發(fā)酵工藝方法”目的為獲得發(fā)酵罐培養(yǎng)的菌絲，保護(hù)技術(shù)包括“一級(jí)斜面菌種培養(yǎng)”、“液體搖瓶種子培養(yǎng)”和“發(fā)酵罐培養(yǎng)”，只用到一次發(fā)酵罐。
[0007]專利CN200910008656 “一種低膽固醇營(yíng)養(yǎng)禽蛋的生產(chǎn)方法及其產(chǎn)品”目的在于保護(hù)一種低膽固醇禽蛋的生產(chǎn)方法，在其生產(chǎn)過(guò)程中用地頂孢霉培養(yǎng)物飼喂了動(dòng)物，因此介紹了地頂孢霉培養(yǎng)物的獲得方法。①該專利中地頂孢霉培養(yǎng)物培養(yǎng)周期為If 15天；②一次液體發(fā)酵時(shí)間:T4天；③采用“20°C~30°C恒溫固體發(fā)酵”，周期5~7.5天。長(zhǎng)期中試試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)“20°C~30°C恒溫固體發(fā)酵”恒溫固體發(fā)酵存在問(wèn)題:發(fā)菌期時(shí)間長(zhǎng)易污染，對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)過(guò)快散熱不及時(shí)易燒盤。即:如低溫20°C恒溫培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致發(fā)菌慢，發(fā)菌期延長(zhǎng)易污染，發(fā)菌點(diǎn)少導(dǎo)致后期菌種生長(zhǎng)不旺；若高溫30°C恒溫培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)散熱不及時(shí)，溫度過(guò)高導(dǎo)致燒盤污染、發(fā)酵失?。虎芄腆w發(fā)酵接種量29^20%。長(zhǎng)期中試試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)低接種量易導(dǎo)致發(fā)菌慢、后期長(zhǎng)勢(shì)不旺、終產(chǎn)品有效物質(zhì)成分含量不達(dá)標(biāo)等問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0008]本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)周期短、資源利用率高的飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，其包括“液體菌種發(fā)酵”和“固體發(fā)酵”兩個(gè)步驟。
[0009]本發(fā)明的一種飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，包括步驟(1)液體菌種發(fā)酵和步驟(2)固體發(fā)酵兩個(gè)步驟,所述菌種為地頂孢霉terricoIaCGMCC0346);所述液體菌種發(fā)酵包括一級(jí)種子罐發(fā)酵和二級(jí)種子罐發(fā)酵；所述固體發(fā)酵為將滅菌后的固體培養(yǎng)基與步驟(1)所得液體發(fā)酵菌種混合培養(yǎng)，干燥，粉碎。
[0010]所述一級(jí)種子罐發(fā)酵是指:在50L氣升式發(fā)酵罐中裝入約35L液體培養(yǎng)基，121°C~126°C滅菌30分鐘；滅菌后，冷卻至23°C時(shí)接種，培養(yǎng)溫度為23°C，通氣量為1:1V/V ? min，保壓0.05~0.1MPa，經(jīng)24h通氣培養(yǎng)，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即可；
所述二級(jí)種子罐發(fā)酵是指:在500L種子罐中裝入350L液體培養(yǎng)基，121°C~126°C滅菌30分鐘；滅菌后，冷卻至23°C，將一級(jí)種子罐所得的液體種子全部接入二級(jí)種子罐培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度23°C，通氣量為1:1 V/V ^min,保壓0.05~0.1MPa，經(jīng)過(guò)24h通氣培養(yǎng)，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即可；
所述固體發(fā)酵是將固體培養(yǎng)基混合均勻后，加入固體培養(yǎng)基質(zhì)量40%~60%的水，拌勻后滅菌；將滅菌后的固體培養(yǎng)基于無(wú)菌通風(fēng)室中冷卻至25-30°C，以25%~50% (質(zhì)量)的接種量接入經(jīng)二級(jí)種子罐發(fā)酵后的液體菌種；將接種后的物料平鋪在帶孔淺盤中放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)；培養(yǎng)72小時(shí)后出料、烘干、粉碎即得成品。
[0011]所述一級(jí)種子罐發(fā)酵和二級(jí)種子罐發(fā)酵所用液體培養(yǎng)基中包括下述質(zhì)量配比的原料:黃豆粉1-5%、白砂糖1-5%、玉米粉1_3%、酵母粉0.5-2%、酵母浸出粉0.5-2%、蠶蛹粉
0.3-0.8%、MgSO40.02-0.06%、KH2PO40.02-0.06%、消泡劑 0.02-0.06%、水余量；優(yōu)選的，所述液體培養(yǎng)基中包括下述質(zhì)量配比的原料:黃豆粉3%、白砂糖3%、玉米粉2%、酵母粉1%、酵母浸出粉 1%、蠶蛹粉 0.5%、MgSO40.05%、KH2PO40.05%、消泡劑 0.05%、水余量。
[0012]所述液體培養(yǎng)基用堿調(diào)pH值為6-7為佳。
[0013]所述固體發(fā)酵的固體培養(yǎng)基原料重量配比為:玉米粉55-70%、豆柏25-40%、麩皮5-12% ;優(yōu)選的，所述固體培養(yǎng)基原料質(zhì)量配比為:玉米粉60%、豆柏30%、麩皮10%。
[0014]所述固體發(fā)酵時(shí)，培養(yǎng)72小時(shí)出料、烘干、粉碎后，過(guò)300目篩為佳。
[0015]地頂孢霉作為一種微生物有其生長(zhǎng)的四個(gè)個(gè)階段:適應(yīng)期(發(fā)菌期)、對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期、穩(wěn)定期、衰亡期?？筛鶕?jù)地頂孢霉在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的不同階段所需要的最適溫度，所述固體發(fā)酵在培養(yǎng)室中培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)室內(nèi)溫濕度條件設(shè)定為:于(T24小時(shí)內(nèi)保持在28°C，于24^48小時(shí)內(nèi)保持在16°C，于48~72小時(shí)內(nèi)保持在20°C ;培養(yǎng)室濕度于0~24小時(shí)內(nèi)保持在100%,于24~48小時(shí)內(nèi)保持在90%，于48~72小時(shí)內(nèi)保持在60%。
[0016]本發(fā)明通過(guò)液體菌種發(fā)酵和固體發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)地頂孢霉制作的功能型飼料添加劑是一類更具潛力的飼料添加劑，它不同于微生物活菌制劑，在本質(zhì)上可看成是中草藥飼料添加劑，但是它克服了中草藥的缺點(diǎn)，保留甚至超過(guò)其優(yōu)點(diǎn)。不僅可以提高飼料轉(zhuǎn)化率而節(jié)約成本，更快增加肉用動(dòng)物體重而提高產(chǎn)量，而且可以在不用藥或少用藥的前提下因增強(qiáng)動(dòng)物的免疫調(diào)節(jié)能力提高其成活率而降低成本。
[0017]本發(fā)明的“液體菌種發(fā)酵”目的在于獲得固體發(fā)酵所用的菌種，且用到了兩級(jí)發(fā)酵罐，分別為“一級(jí)種子罐生產(chǎn)”和“二級(jí)種子罐生產(chǎn)”；而“地頂孢霉CGMCC0346及分離培養(yǎng)方法和發(fā)酵工藝方法”專利中的“發(fā)酵工藝方法”目的為獲得發(fā)酵罐培養(yǎng)的菌絲，保護(hù)技術(shù)包括“一級(jí)斜面菌種培養(yǎng)”、“液體搖瓶種子培養(yǎng)”和“發(fā)酵罐培養(yǎng)”，只用到一次發(fā)酵罐，因此與本發(fā)明保護(hù)的“液體菌種培養(yǎng)技術(shù)”的目的和過(guò)程都有明顯區(qū)別，發(fā)酵工藝參數(shù)也完全不同，如培養(yǎng)基、通氣量、發(fā)酵周期等。
[0018]本發(fā)明生產(chǎn)工藝與專利CN200910008656介紹的傳統(tǒng)地頂孢霉培養(yǎng)物獲得方法的區(qū)別為:①本發(fā)明為改進(jìn)后的新工藝，整個(gè)生產(chǎn)周期僅為5天，而CN200910008656中地頂孢霉培養(yǎng)物傳統(tǒng)培養(yǎng)周期為11-15天；②本發(fā)明液體菌種發(fā)酵工藝中所用培養(yǎng)基、通氣量、培養(yǎng)溫度、滅菌時(shí)間等參數(shù)都與CN200910008656中液體發(fā)酵工藝有很大區(qū)別，其中培養(yǎng)基和通氣量的改變是將一次液體發(fā)酵時(shí)間從3-4天減少到I天的主要原因本發(fā)明的固體發(fā)酵工藝根據(jù)地頂孢霉的微生物生長(zhǎng)曲線，對(duì)不同生長(zhǎng)期制定不同的環(huán)境溫度和濕度，將CN200910008656中的“恒溫固體發(fā)酵”周期的5-7.5天縮短至3天，同時(shí)解決了“發(fā)菌期時(shí)間長(zhǎng)易污染”和“對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)過(guò)快散熱不及時(shí)易燒盤”的問(wèn)題；④固體發(fā)酵接種量由2%-20%提高到25%-50%。長(zhǎng)期中試試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)低接種量易導(dǎo)致發(fā)菌慢、后期長(zhǎng)勢(shì)不旺、終產(chǎn)品有效物質(zhì)成分含量不達(dá)標(biāo)等問(wèn)題；⑤本發(fā)明中固體發(fā)酵培養(yǎng)基原料減少到3種，且比例明確，降低了固體發(fā)酵成本。
[0019]本發(fā)明的有益效果在于:
(1)本發(fā)明將地頂孢霉培養(yǎng)物生產(chǎn)周期降低了一倍以上，大大降低了生產(chǎn)成本以及水電氣等能源損耗，本產(chǎn)品屬飼料市場(chǎng)一種高端產(chǎn)品，定價(jià)較高，降低成本對(duì)推廣本產(chǎn)品有很大意義；
(2)本發(fā)明固體培養(yǎng)的菌絲及其分泌到剩余培養(yǎng)基質(zhì)中的活性成分一起被用作添加劑原料，從而最大限度地利用資源，追求更大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，而無(wú)污染。
[0020]本發(fā)明的生產(chǎn)方法大大降低地頂孢霉培養(yǎng)物傳統(tǒng)生產(chǎn)方法的周期和成本，工藝穩(wěn)定、易調(diào)控、成功率高；采用本發(fā)明方法生產(chǎn)投資少，占地小、無(wú)三廢問(wèn)題，適于大中型企業(yè)采用。適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，并可根據(jù)市場(chǎng)的需求增加或縮減生產(chǎn)規(guī)模。其產(chǎn)品是一種功能型的飼料添加劑，在農(nóng)業(yè)部《飼料添加劑品種目錄》范圍內(nèi)，可用于飼喂雞、豬。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下述實(shí)施例是對(duì)于本
【發(fā)明內(nèi)容】
的進(jìn)一步說(shuō)明以作為對(duì)本發(fā)明技術(shù)內(nèi)容的闡釋，但本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容并不僅限于下述實(shí)施例所述，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以且應(yīng)當(dāng)知曉任何基于本發(fā)明實(shí)質(zhì)精神的簡(jiǎn)單變化或替換均應(yīng)屬于本發(fā)明所要求的保護(hù)范圍。
[0022]實(shí)施例1
本發(fā)明“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，包括下述生產(chǎn)工序:
A、一級(jí)種子罐生產(chǎn)
在50L氣升式發(fā)酵罐中裝入約35L液體培養(yǎng)基，121°C?126°C滅菌30分鐘；滅菌后，冷卻至23°C時(shí)接種，培養(yǎng)溫度為23°C，通氣量為1:1 V/V.min,保壓0.05?0.1MPa，經(jīng)24h通氣培養(yǎng)，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即可；
一級(jí)種子罐液體培養(yǎng)基原料質(zhì)量配比為:黃豆粉3%、白砂糖3%、玉米粉2%、酵母粉1%、酵母浸出粉1%、蠶蛹粉0.5%、MgSO40.05%、KH2PO40.05%、消泡劑0.05%、余量的水，并用飽和NaOH (氫氧化鈉)調(diào)pH值為6.5。
[0023]B、二級(jí)種子罐生產(chǎn)在500L種子罐中裝入350L液體培養(yǎng)基，121°C~126°C滅菌30分鐘；滅菌后，冷卻至23°C，將一級(jí)種子罐所得的液體種子全部接入二級(jí)種子罐培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度23°C，通氣量為I:1 V/V.min,保壓0.05~0.1MPa，經(jīng)過(guò)24h通氣培養(yǎng)，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即可；
二級(jí)種子罐液體培養(yǎng)基原料重量配比為:黃豆粉3%、白砂糖3%、玉米粉2%、酵母粉1%、酵母浸出粉1%、蠶蛹粉0.5%、MgSO40.05%、KH2PO40.05%、消泡劑0.05%,余量的水，并用飽和NaOH (氫氧化鈉)調(diào)pH值為6.5。
[0024]C、菌種的固體發(fā)酵按如下方法進(jìn)行:
在1000kg培養(yǎng)基中含玉米粉600kg、豆柏300kg、麥麩100kg。將固體物料混合均勻后，加入適量的水約550kg拌勻裝入布袋中滅菌；抽真空式滅菌鍋滅菌30分鐘。在無(wú)菌通風(fēng)室中冷卻至28°C以35% (質(zhì)量)的接種量接入液體菌種；將接種后的物料平鋪在帶孔淺盤中放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)；通過(guò)恒溫恒濕空調(diào)將培養(yǎng)室內(nèi)溫度(T24小時(shí)保持在28°C，24~48小時(shí)保持在16°C，48~72小時(shí)保持在20°C。培養(yǎng)室濕度0~24小時(shí)保持在100%，24~48小時(shí)保持在90%，48~72小時(shí)保持在60%。培養(yǎng)72小時(shí)即可出料；烘干、粉碎、過(guò)300目篩后即得成品。
[0025]實(shí)施例2
本發(fā)明“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，包括下述生產(chǎn)工序:
A、一級(jí)種子罐生產(chǎn)
在50L氣升式發(fā)酵罐中裝入約35L液體培養(yǎng)基，121°C~126°C滅菌30分鐘；滅菌后，冷卻至23°C時(shí)接種，培養(yǎng)溫度為23°C，通氣量為1:1 V/V.min,保壓0.05~0.1MPa，經(jīng)24h通氣培養(yǎng)，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即可；
一級(jí)種子罐液體培養(yǎng)基原料質(zhì)量配比為:黃豆粉5%、白砂糖5%、玉米粉3%、酵母粉2%、酵母浸出粉2%、蠶蛹粉0.8%、MgSO40.06%、KH2PO40.06%、消泡劑0.06%、余量的水，并用飽和NaOH (氫氧化鈉)調(diào)pH值為6.5。
[0026]B、二級(jí)種子罐生產(chǎn)
在500L種子罐中裝入350L液體培養(yǎng)基，121°C~126°C滅菌30分鐘；滅菌后，冷卻至23°C，將一級(jí)種子罐所得的液體種子全部接入二級(jí)種子罐培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度23°C，通氣量為1:1 ￥/^*1^11，保壓0.05~0.1MPa，經(jīng)過(guò)24h通氣培養(yǎng)，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即可；
二級(jí)種子罐液體培養(yǎng)基原料重量配比為:黃豆粉5%、白砂糖5%、玉米粉3%、酵母粉2%、酵母浸出粉2%、蠶蛹粉0.8%、MgSO40.06%、KH2PO40.06%、消泡劑0.06%、余量的水，并用飽和NaOH (氫氧化鈉)調(diào)pH值為6.5。
[0027]C、菌種的固體發(fā)酵按如下方法進(jìn)行:
在1000kg培養(yǎng)基中含玉米粉550kg、豆柏350kg、麥麩100kg。將固體物料混合均勻后，加入適量的水約600kg拌勻裝入布袋中滅菌；抽真空式滅菌鍋滅菌30分鐘。在無(wú)菌通風(fēng)室中冷卻至28°C以25% (質(zhì)量比)的接種量接入液體菌種；將接種后的物料平鋪在帶孔淺盤中放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)；通過(guò)恒溫恒濕空調(diào)將培養(yǎng)室內(nèi)溫度(T24小時(shí)保持在28°C，24~48小時(shí)保持在16°C，48~72小時(shí)保持在20°C。培養(yǎng)室濕度0~24小時(shí)保持在100%，24~48小時(shí)保持在90%，48~72小時(shí)保持在60%。培養(yǎng)72小時(shí)即可出料；烘干、粉碎、過(guò)300目篩后即得成品。
[0028]實(shí)施例 3
本發(fā)明“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，包括下述生產(chǎn)工序:A、一級(jí)種子罐生產(chǎn)
在50L氣升式發(fā)酵罐中裝入約35L液體培養(yǎng)基，121°C~126°C滅菌30分鐘；滅菌后，冷卻至23°C時(shí)接種，培養(yǎng)溫度為23°C，通氣量為1:1 V/V.min,保壓0.05~0.1MPa，經(jīng)24h通氣培養(yǎng)，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即可；
一級(jí)種子罐液體培養(yǎng)基原料質(zhì)量配比為:黃豆粉2%、白砂糖2%、玉米粉2%、酵母粉1%、酵母浸出粉1%、蠶蛹粉0.4%、MgSO40.04%、KH2PO40.04%、消泡劑0.04%、余量的水，并用飽和NaOH (氫氧化鈉)調(diào)pH值為6.5。
[0029]B、二級(jí)種子罐生產(chǎn)
在500L種子罐中裝入350L液體培養(yǎng)基，121°C~126°C滅菌30分鐘；滅菌后，冷卻至23°C，將一級(jí)種子罐所得的液體種子全部接入二級(jí)種子罐培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度23°C，通氣量為1:1 ￥/^*1^11，保壓0.05~0.1MPa，經(jīng)過(guò)24h通氣培養(yǎng)，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即可；
二級(jí)種子罐液體培養(yǎng)基原料重量配比為:黃豆粉2%、白砂糖2%、玉米粉2%、酵母粉
0.8%、酵母浸出粉0.8%、蠶蛹粉0.4%、MgSO40.04%、KH2PO40.04%、消泡劑0.04%、余量的水，并用飽和NaOH (氫氧化鈉)調(diào)pH值為6.5。
[0030]C、菌種的固體發(fā)酵按如下方法進(jìn)行: 在1000kg培養(yǎng)基中含玉米粉700kg、豆柏250kg、麥麩50kg。將固體物料混合均勻后，加入適量的水約400kg拌勻裝入布袋中滅菌；抽真空式滅菌鍋滅菌30分鐘。在無(wú)菌通風(fēng)室中冷卻至28°C以50% (質(zhì)量比)的接種量接入液體菌種；將接種后的物料平鋪在帶孔淺盤中放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)；通過(guò)恒溫恒濕空調(diào)將培養(yǎng)室內(nèi)溫度(T24小時(shí)保持在28°C，24~48小時(shí)保持在16°C，48~72小時(shí)保持在20°C。培養(yǎng)室濕度0~24小時(shí)保持在100%，24~48小時(shí)保持在90%，48~72小時(shí)保持在60%。培養(yǎng)72小時(shí)即可出料；烘干、粉碎、過(guò)300目篩后即得成品。
【權(quán)利要求】
1.一種飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，包括步驟(1)液體菌種發(fā)酵和步驟(2)固體發(fā)酵兩個(gè)步驟,所述菌種為地頂抱霉terricola CGMCC0346);所述液體菌種發(fā)酵包括一級(jí)種子罐發(fā)酵和二級(jí)種子罐發(fā)酵；所述固體發(fā)酵為將滅菌后的固體培養(yǎng)基與步驟(1)所得液體發(fā)酵菌種混合培養(yǎng)，干燥，粉碎。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，其特征在于， 所述一級(jí)種子罐發(fā)酵是指:在50L氣升式發(fā)酵罐中裝入約35L液體培養(yǎng)基，121°C~126°C滅菌30分鐘；滅菌后，冷卻至23°C時(shí)接種，培養(yǎng)溫度為23°C，通氣量為1:1 V/V -min,保壓0.05~0.1MPa,經(jīng)24h通氣培養(yǎng)，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即可； 所述二級(jí)種子罐發(fā)酵是指:在500L種子罐中裝入350L液體培養(yǎng)基，121°C~126°C滅菌30分鐘；滅菌后，冷卻至23°C，將一級(jí)種子罐所得的液體種子全部接入二級(jí)種子罐培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度23°C，通氣量為1:1 ￥/￥*111111，保壓0.05~0.1MPa，經(jīng)過(guò)24h通氣培養(yǎng)，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即可； 所述固體發(fā)酵是向固體培養(yǎng)基加入固體培養(yǎng)基質(zhì)量40%~60%的水，拌勻后滅菌；將滅菌后的固體培養(yǎng)基于無(wú)菌通風(fēng)室中冷卻至25-30°C，以接種量25%~50%接入經(jīng)二級(jí)種子罐發(fā)酵后的液體菌種；將接種后的物料平鋪在帶孔淺盤中放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)；培養(yǎng)72小時(shí)后出料、烘干、粉碎即得成品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述一級(jí)種子罐發(fā)酵和二級(jí)種子罐發(fā)酵所用液體培養(yǎng)基中包括下述質(zhì)量配比的原料:黃豆粉1-5%、白砂糖1-5%、玉米粉1_3%、酵`母粉0.5-2%、酵母浸出粉0.5-2%、蠶蛹粉0.3-0.8%、MgSO40.02-0.06%、KH2PO40.02-0.06%、消泡劑 0.02-0.06%、水余量。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述原料質(zhì)量配比為:黃豆粉3%、白砂糖3%、玉米粉2%、酵母粉1%、酵母浸出粉1%、蠶蛹粉0.5%, MgSO40.05%、KH2PO40.05%、消泡劑 0.05%、水余量。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述液體培養(yǎng)基用堿調(diào)PH值為6-7。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，其特征在于:所述固體發(fā)酵的固體培養(yǎng)基原料重量配比為:玉米粉55-70%、豆柏25-40%、麩皮5_12%。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基原料質(zhì)量配比為:玉米粉60%、豆柏30%、麩皮10%。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述固體發(fā)酵時(shí)，培養(yǎng)72小時(shí)出料、烘干、粉碎后，過(guò)300目篩。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的飼料添加劑“地頂孢霉培養(yǎng)物”的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述固體發(fā)酵在培養(yǎng)室中培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)室內(nèi)溫濕度條件為:于(T24小時(shí)內(nèi)保持在28°C，于24^48小時(shí)內(nèi)保持在16°C，于48~72小時(shí)內(nèi)保持在20°C ;培養(yǎng)室濕度于0~24小時(shí)內(nèi)保持在100%,于24~48小時(shí)內(nèi)保持在90%，于48~72小時(shí)內(nèi)保持在60%。
【文檔編號(hào)】C12N1/14GK103734482SQ201410024600
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月20日
【發(fā)明者】史曉宇, 謝韜, 樊美珍, 黃勃 申請(qǐng)人:安徽康智生物科技有限責(zé)任公司