一種禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種禽腦脊髓炎病毒YBF02株（禽腦脊髓炎病毒Avian?Encephalomyelitis?virus），該病毒株于2013年11月08日保藏在北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC?No.8505。本發(fā)明篩選的禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株通過水平傳播感染在雞體連續(xù)傳代，均未見毒力返強現(xiàn)象，遺傳性穩(wěn)定，符合禽腦脊髓炎弱毒疫苗株無毒力返強的標準，制成的疫苗能夠提供有效的免疫保護，具有很好的商品化開發(fā)前景。
【專利說明】一種禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于疫苗抗原選育【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]禽腦脊髓炎(AE)是由禽腦脊髓炎病毒(AEV)引起的一種主要危害4周齡以下雛雞，以侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起非化膿性腦炎為主要病理特征的病毒性傳染病，表現(xiàn)為運動失調(diào)、頭頸震顫和后趾麻痹等神經(jīng)癥狀，特別是頭和頸部的震顫。因此，過去常稱為“流行性震顫”。4周齡以下雛雞感染AEV后，發(fā)病率一般為20%~60%，死亡率平均為25%，也可超過50% ;成年雞感染不表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，但可引起一過性產(chǎn)蛋下降，下降幅度為16%~43%，有的高達60%以上，但不出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，約兩周后產(chǎn)蛋可恢復正常。但此時期所產(chǎn)的種蛋高度帶毒，在孵化時呈現(xiàn)兩種趨勢:一部分雞胚在孵化后期死亡；另一部分雖可孵化出殼，但在出殼時或出殼后數(shù)天內(nèi)即能表現(xiàn)癥狀，這些雛雞的糞便中帶有大量病毒，能造成其他雛雞的感染。禽腦脊髓炎在全世界均有發(fā)生，易感雞群在一年四季均可發(fā)病，冬春發(fā)生較多。幾乎所有雞群最終都會被病毒感染，但臨床發(fā)病率較低。
[0003]1930年，Jones首先在2周齡商品代洛島紅雞發(fā)現(xiàn)AE，表現(xiàn)為震顫。1931年觀察到兩次暴發(fā)，發(fā)生在不同雞場的I周齡和4周齡雞群，這兩個群源于同一種雞群。在以后的兩年間，在新英格蘭地區(qū)多 個州均發(fā)現(xiàn)了 AE的暴發(fā)，因此又稱為“新英格蘭病”。1934年，Jones取自然發(fā)病雞的腦組織濾液經(jīng)腦內(nèi)接種易感雞復制出了本病。1938年，Van Roekel等指出:并不是總能觀察到震顫，當出現(xiàn)震顫時隨后會出現(xiàn)共濟失調(diào)，因為此病有傳染性和主要侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，所以提出稱為“傳染性禽腦脊髓炎”，后來縮為“禽腦脊髓炎”并于1939年被美國獸醫(yī)協(xié)會委員會采用。1958年，Schaaf第一次報道通過免疫成功控制了本病。1960年Calnek等闡明了 AE的流行病學，隨后開發(fā)出了口服疫苗，成為當今世界商品雞群控制AE的基礎(chǔ)。該病現(xiàn)已遍布世界各地，很多國家和地區(qū)都有該病發(fā)生的報道。
[0004]我國許多省市，均有發(fā)生本病的報道，已給養(yǎng)禽業(yè)造成多方面的損失。1980年張澤紀首先在廣東的雛雞群中發(fā)現(xiàn)疑似AE。1982年李心平通過病理組織學確診該病。1983年畢英佐通過流行病學、病理組織學確診此病。姚大明、秦愛建、趙振華、姚永秀等相繼進行了AEV的分離和鑒定工作及疫苗的研制與應用試驗。近年來遼寧、江蘇、黑龍江、河北、山東、內(nèi)蒙古、福建、上海、河南、江西、陜西等地陸續(xù)出現(xiàn)AE的報道。黃駿明等用雞腦敏感試驗檢測了哈爾濱市17個蛋雞群，發(fā)現(xiàn)這些蛋雞群對AE的污染率為95.1%。由此可見，該病在我國是廣泛存在的。
[0005]對急性暴發(fā)AE的雛雞沒有有效的治療方法，在育成期接種疫苗，能控制種雞群在性成熟后不再發(fā)生感染，同時也能防止病毒經(jīng)蛋途徑擴散。此外，母源抗體能保護雛雞在最易感的頭2~3周抵抗AEV感染。商品產(chǎn)蛋雞群也可以進行免疫接種，以防止由AE引起的一過性產(chǎn)蛋下降。但活疫苗制備中最關(guān)鍵的是獲得低毒且具有免疫原性的疫苗株。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明的目的是提供一種禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株，用該弱毒疫苗株所制備的疫苗對AEV的攻擊能提供良好的免疫保護效力。
[0007]本發(fā)明的禽腦脊髓炎病毒YBF02株(禽腦脊髓炎病毒Avian Encephalomyelitisvirus),該病毒株于2013年11月08日保藏在北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學院中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為=CGMCC N0.8505。
[0008]本發(fā)明篩選的弱毒疫苗株用來制備用于預防禽腦脊髓炎的疫苗。
[0009]本發(fā)明篩選的禽腦脊髓炎病毒弱毒疫苗株通過水平傳播感染在雞體連續(xù)傳代，均未見毒力返強現(xiàn)象，遺傳性穩(wěn)定，符合禽腦脊髓炎弱毒疫苗株無毒力返強的標準，制成的疫苗能提供有效的免疫保護，具有很好的商品化開發(fā)前景。
【具體實施方式】
[0010]下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明。
[0011]—、禽腦脊髓炎病毒株的選育
[0012]取患有禽腦脊髓炎雛雞的腦、胰腺和十二指腸，在無菌條件下研磨，用滅菌生理鹽水作1:5稀釋、反復凍融3次、4000rpm離心30分鐘，取上清液濾器過濾后，腦內(nèi)接種I日齡SPF雛雞10只，0.1ml/只，待出現(xiàn)運動失調(diào)、頭頸震顫等癥狀后采血致死，無菌取病雛雞的腦、胰腺和十二指腸，在無菌條件下研磨，用滅菌生理鹽水作1:5稀釋，反復凍融3次、4000rpm離心30分鐘,取上清液作為第I代分離毒(Fl)保存?zhèn)溆?。取Fl代同上方法腦內(nèi)接種I日齡SPF雛雞傳代，制備第2代分離毒(F2)。如此連傳4代。雞胚致病性試驗表明分離毒為一株非雞胚適應性的禽腦脊髓炎病毒弱毒。取I日齡SPF雛雞傳代的F4代種毒，10倍稀釋后，卵黃囊接種6日齡SPF雞胚，繼續(xù)在37~38°C孵育至16日齡收毒:吸取胚液，觀察胚體活動和發(fā)育情況，稱胚體重和腦重，檢查胚體，胚腦病變(出血，積水，萎縮等)；并取胚腦，胃，腸，胰腺，用胚`液作1:5稀釋,加雙抗,研磨，反復凍融3次，4000rpm離心30分鐘，制成懸液備用。這樣連續(xù)傳至第18代。選取作為疫苗研制的候選毒株，命名為AEVYBF02株，并于2013年11月08日保藏在北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學院中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為=CGMCC N0.8505。
[0013]二、AEV YBF02株的安全性檢測
[0014]AEV YBF02株毒種安全性試驗:分別將基礎(chǔ)種子的第5、7、10代毒種稀釋，取I~10周齡SPF雞各10只，每只刺種或口服IO4EID5tl的YBF02株病毒，觀察28日，并記錄結(jié)果。結(jié)果表明:AEV YBF02株基礎(chǔ)種子第5、7、10代毒種對I~10周齡SPF雞是安全的，無任何禽腦脊髓炎特異性癥狀，不影響生長發(fā)育。
[0015]表1:毒種安全性試驗
[0016]
【權(quán)利要求】
1.一種禽腦脊髓炎病毒，所述的禽腦脊髓炎病毒的保藏編號為:CGMCC N0.8505。
2.權(quán)利要求1所述的病毒在制備用于預防禽腦脊髓炎的疫苗中的應用。
3.如權(quán)利要求1所述的禽腦脊髓炎病毒，為YBF02株。
4.如權(quán)利要求1所述 的禽腦脊髓炎病毒的應用，其特征在于，是對雛雞進行免疫。
【文檔編號】C12N7/00GK103710314SQ201410001306
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2014年1月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月2日
【發(fā)明者】王紅, 范根成, 杜元釗 申請人:青島易邦生物工程有限公司