一種用醋酸提取激肽釋放酶的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用醋酸提取激肽釋放酶的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是以豬胰為原料提取、沉淀豬胰制成丙酮粉后，靈活運(yùn)用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脫脂脫水等傳統(tǒng)蛋白純化技術(shù)，制備激肽釋放酶。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)周期短，成本低廉，非常適用于規(guī)?；笊a(chǎn)。
【專利說明】一種用醋酸提取激肽釋放酶的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說是以豬胰為原料提取、沉淀豬胰制成丙酮粉后，靈活運(yùn)用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脫脂脫水等傳統(tǒng)蛋白純化技術(shù)，制備激肽釋放酶。
【背景技術(shù)】
[0002]激肽釋放酶(kallikein)是從豬胰臟中分離純化制得的天然酶類藥物，臨床上又稱血管舒緩素，具有舒展毛細(xì)血管和小動(dòng)脈的作用，在臨床上常用來治療高血脂，防治脂肪肝、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、心絞痛等多種疾病，它的開發(fā)具有重要的醫(yī)學(xué)和社會(huì)價(jià)值。在我國(guó)，激肽釋放酶生產(chǎn)還存在很大的發(fā)展空間。
[0003]傳統(tǒng)的純化激肽釋放酶的工藝由于工藝復(fù)雜、成本較高；離子交換層析是目前是適合激肽釋放酶工業(yè)化生產(chǎn)的最普遍方法；而選擇離子交換樹脂的主要依據(jù)是被分離物的性質(zhì)和分離目的，包括被分離物和主要雜質(zhì)的解離特性、分子量、濃度、穩(wěn)定性、所處介質(zhì)的性質(zhì)以及分離的具體條件和要求。其中最重要的一條是根據(jù)分離要求和分離環(huán)境保證分離目的物與主要雜質(zhì)對(duì)樹脂的吸附力有足夠的差異。被分離物中雜質(zhì)越多，這種差異性顯然會(huì)越不明顯。在實(shí)際大生產(chǎn)中，原料中都含有雜質(zhì)，如果在采用這些高端色譜技術(shù)之前，不對(duì)原料或者粗制品進(jìn)行預(yù)處理，勢(shì)必會(huì)因?yàn)樵现械碾s質(zhì)含量過多而減短離子交換介質(zhì)的壽命，降低樹脂吸附效率，且洗脫中會(huì)存在拖尾現(xiàn)象，延長(zhǎng)生產(chǎn)周期，影響產(chǎn)品收率及比活。
[0004]激肽釋放酶是以的豬胰臟為原料，因此，必須對(duì)原料進(jìn)行預(yù)處理、提純得到粗制的激肽釋放酶，然后再采用離子交換層析技術(shù)進(jìn)行精制生產(chǎn)。
[0005]本發(fā)明是靈活運(yùn)用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脫脂、脫水等傳統(tǒng)蛋白純化技術(shù)，從豬胰臟中制備激肽釋放酶，該技術(shù)不僅操作簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低廉，而且避免了激肽釋放酶降解失活，提高產(chǎn)品比活。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是用醋酸溶液從合格的豬胰臟中提取激肽釋放酶。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案是:以豬胰為原料提取、沉淀豬胰制成丙酮粉后，靈活運(yùn)用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脫脂脫水等傳統(tǒng)蛋白純化技術(shù)，制備激肽釋放酶。本發(fā)明具有生產(chǎn)周期短，操作簡(jiǎn)單、成本低廉的特點(diǎn)，非常適用于規(guī)?；笊a(chǎn)。包括如下步驟:
[0008]1、醋酸提取:將豬胰臟制成丙酮粉后，加入18~22倍量0.01~0.03mol / L醋酸溶液，于10°C攪拌提取10~14小時(shí)，離心，得上清液；將殘?jiān)?~12倍量0.01~
0.03mol / L醋酸溶液再次進(jìn)行攪拌提取4~8小時(shí)，離心，合并兩次上清液；
[0009]2、丙酮沉淀:收集上清液，加入2~10°C丙酮使溶液的濃度達(dá)到33%，攪勻，過濾，得濾液；將濾液中補(bǔ)加2~10°C丙酮至溶液的濃度達(dá)到70%，攪勻，靜置3~6小時(shí)，離心，收集沉淀。沉淀用丙酮、乙醚脫脂、脫水，干燥，得激肽釋放酶；
【具體實(shí)施方式】[0010]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0011]實(shí)施例1
[0012]所述的以豬胰為原料提取、沉淀豬胰制成丙酮粉后，靈活運(yùn)用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脫脂脫水等傳統(tǒng)蛋白純化技術(shù)，制備激肽釋放酶，包括如下步驟:
[0013]1、醋酸提取:將豬胰臟IOKg制成丙酮粉后，加入20倍量0.02mol / L醋酸溶液，于10°C攪拌提取12小時(shí)，離心，得上清液；將殘?jiān)?0倍量0.02mol / L醋酸溶液再次進(jìn)行攪拌提取6小時(shí) ，離心，合并兩次上清液29.8L。
[0014]2、丙酮沉淀:收集上清液，加入5°C丙酮使溶液的濃度達(dá)到33%，攪勻，過濾，得濾液；將濾液中補(bǔ)加5°C丙酮至溶液的濃度達(dá)到70%，攪勻，靜置4小時(shí)，離心，收集沉淀。沉淀用丙酮、乙醚脫脂、脫水，干燥，得激肽釋放酶97g。
[0015]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種用醋酸提取激肽釋放酶的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟: (1)醋酸提取:將豬胰臟制成丙酮粉后，加醋酸溶液攪拌提取，離心，得上清液；將殘?jiān)哟姿崛芤涸俅芜M(jìn)行攪拌提取，離心，合并兩次上清液； (2)丙酮沉淀:收集上清液，加入丙酮攪勻，過濾，得濾液；將濾液中補(bǔ)加丙酮，靜置，離心，收集沉淀。沉淀用丙酮、乙醚脫脂、脫水，干燥，得激肽釋放酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(1)中，丙酮粉與醋酸溶液的比例為IKg:18~22L，醋酸溶液的濃度為:0.01~0.03mol / L ;加入醋酸溶液的提取時(shí)間為:10~14小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，所用丙酮的溫度為2~10°C;第一次加入丙酮的量為至溶液 濃度達(dá)到33% ;補(bǔ)加丙酮的量為至溶液濃度達(dá)到70%。
【文檔編號(hào)】C12N9/64GK103740686SQ201310638710
【公開日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2013年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月29日
【發(fā)明者】劉乃山, 林曉磊, 李靜潔, 劉君 申請(qǐng)人:青島康原藥業(yè)有限公司