一種帶狀皰疹病毒的制備方法
【專利摘要】一種帶狀皰疹病毒的制備方法，直接檢測到的抗體，該抗體特異性地結(jié)合到水痘-帶狀皰疹的多肽，檢測水痘帶狀皰疹病毒在動物的存在下，由水痘帶狀皰疹病毒引起的疾病的診斷，檢測水痘帶狀皰疹病毒具有的單核苷酸多態(tài)性O(shè)RF68。本發(fā)明還提供了一種疫苗組合物的制造改進(jìn)的減毒水痘-帶狀皰疹病毒的方法，分離的多核苷酸，和孤立的多肽，和病毒。
【專利說明】一種帶狀皰疹病毒的制備方法
[0001]發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是一種帶狀皰疹病毒的制備方法。
[0002]發(fā)明背景
水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)是一種古老的病毒。估計(jì)它的起源已建立調(diào)制解調(diào)器皰疹病毒產(chǎn)生約60-80萬年前。VZV的alphaherpesvirus皰疫病毒亞科的成員。在童年，這是水痘的病原體后，病毒進(jìn)入潛伏狀態(tài)，在背根神經(jīng)節(jié)，幾十年后，同樣的病毒重新激活，并導(dǎo)致疾病，帶狀皰疹(帶狀皰疹)。125 kbp的VZV基因組的全部序列已經(jīng)發(fā)表(Davison等人，普通病毒學(xué)雜志，67:1759-1816 (1986))。從其他皰疹病毒的序列數(shù)據(jù)隨后公布，現(xiàn)在已經(jīng)被細(xì)分 alphaherpesvimuses 分為兩個(gè)屬稱為 Simplexvirus Varicellovirus。VZV 被認(rèn)為具有最穩(wěn)定的抱疫病毒基因組的所有。
[0003]目前，對帶狀皰疹病毒沒有特異的治療方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的分離的多核苷酸多態(tài)性是由于，在增加優(yōu)先順序排列，I個(gè)單核苷酸多態(tài)性的存在下，至少I個(gè)，至少2個(gè)，至少3個(gè)，最優(yōu)選至少4個(gè)單核苷酸多態(tài)性的多核苷酸。優(yōu)選地，本發(fā)明的分離的多核苷酸包括不大于4的單核苷酸多態(tài)性。甲單核苷酸多態(tài)性，可以只由一個(gè)核苷酸的分離的另一單核苷酸多態(tài)性，本發(fā)明的多核苷酸的一個(gè)例子是一個(gè)多態(tài)0RF37或它們的補(bǔ)碼，其中多態(tài)性是0RF37核苷酸806。在核苷酸806的核苷酸可以是鳥嘌呤，腺嘌呤，胸腺嘧啶，優(yōu)選為胸腺嘧啶。又如本發(fā)明的多核苷酸的核苷酸序列的核苷酸101650至103081本發(fā)明的多核苷酸的另一個(gè)例子是一個(gè)多態(tài)0RF68或它們的補(bǔ)碼，其中多態(tài)性位點(diǎn)是在核苷酸448 0RF68。在核苷酸448的核苷酸可以是腺嘌呤，胞嘧啶，胸腺嘧啶，優(yōu)選為腺嘌呤，本發(fā)明的多核苷酸包括，例如，克隆由水痘帶狀皰疹的成員或誘變的多核苷酸本領(lǐng)域已知的重組技術(shù)，以便它具有本發(fā)明的多核苷酸的堿基序列可以通過以下方式獲得?；蛘撸景l(fā)明的多核苷酸可以是化學(xué)或酶促合成的，例如，合成的寡核苷酸或PCR0本發(fā)明還包括，類似于本發(fā)明的多核苷酸的多核苷酸，如上所述，包括多態(tài)0RF37核苷酸或一個(gè)多態(tài)的0RF68，或它們的補(bǔ)充。結(jié)構(gòu)的相似性的相似性被稱為是由對準(zhǔn)的兩個(gè)多聚核苷酸的殘基優(yōu)化相同的核苷酸的數(shù)目沿它們的序列的長度，在一個(gè)或兩個(gè)序列的間隙是被允許在以優(yōu)化共享的核苷酸的數(shù)量的對應(yīng)。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的多核苷酸的堿基序列，本發(fā)明還包括隔離多核苷酸片段的多核苷酸的片段是如本文所述的分離的多核苷酸的一部分，其中的部分，優(yōu)選至少約15，更優(yōu)選至少約20，最優(yōu)選至少約25個(gè)連續(xù)核苷酸并且包括至少一個(gè)單核苷酸多態(tài)性。的單核苷酸多態(tài)性，可以在任何位置中的多核苷酸片段，優(yōu)選在其中一個(gè)片段(雙鏈多核苷酸片段時(shí))或核苷酸的3’末端的片段的3’末端的堿基(的多核苷酸片段的單鏈)?？梢圆迦氡景l(fā)明的多核苷酸的載體。包含本發(fā)明的多核苷酸的載體的構(gòu)建使用本領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)連接技術(shù)。本發(fā)明的一個(gè)孤立的水痘帶狀皰疹病毒基因組包括不大于4的單核苷酸多態(tài)性。孤立的水痘-帶狀皰疹病毒的本發(fā)明的實(shí)施例的VZV MSP, VZV-VSD, VZV-VIA，VZV，冰島，或者，分離的水痘帶狀皰疹病毒可以是一個(gè)修改后的水痘帶狀皰疹病毒，優(yōu)選改進(jìn)的減毒水痘-帶狀皰疹病毒。改性的水痘-帶狀皰疹病毒在本文中更詳細(xì)地描述一個(gè)單一的核苷酸多態(tài)性可以存在另外，單核苷酸多態(tài)性可以是沉默的，即不能在一個(gè)編碼序列，它可以導(dǎo)致在編碼的多肽含有比較序列X04370的堿基序列所編碼的多肽時(shí)，一個(gè)單一的氨基酸多態(tài)性。在一個(gè)孤立的水痘帶狀皰疹病毒編碼的多肽具有的本發(fā)明的改變的編碼序列所編碼的多肽的氨基酸序列。的是不是一個(gè)編碼序列的基因組的區(qū)域中可以存在單核苷酸多態(tài)性。單一的氨基酸多態(tài)性，水痘病毒可具有比本領(lǐng)域已知的血清型是不同的血清型優(yōu)選地。本發(fā)明的一個(gè)孤立的水痘帶狀皰疹病毒的血清型是不包含的抗原表位的單克隆抗體3B3結(jié)合單克隆抗體可以從ATCC具有血清型VZV-MSP水痘帶狀皰疹病毒的一個(gè)例子。本發(fā)明的分離的水痘-帶狀皰疹病毒傳播的能力，從一個(gè)細(xì)胞另一個(gè)的速度是大于以前的特點(diǎn)的水痘-帶狀皰疹病毒，這種表型，這是在此也稱為在體外生長速率和細(xì)胞至細(xì)胞傳播。

【具體實(shí)施方式】
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)方面向體外生長率，具有較高的水痘帶狀皰疹病毒的制造方法的。優(yōu)選的是，水痘帶狀皰疹病毒在體外生長率大于在體外生長的匯率的第二水痘帶狀皰疹病毒。在本發(fā)明的一些方面中，檢測到水痘帶狀皰疹病毒包括檢測到水痘-帶狀皰疹多肽特異性結(jié)合的抗體。本發(fā)明的水痘帶狀皰疹病毒的多肽包含多態(tài)性。本文中描述了這樣的多肽。優(yōu)選地，由一個(gè)多態(tài)0RF68編碼水痘帶狀皰疹病毒的多肽，編碼的多肽包括天冬酰胺氨基酸150。水痘帶狀皰疹病毒的制備，其中包括可能還包括試劑，例如一個(gè)緩沖區(qū)，提供適當(dāng)?shù)臈l件下形成的多肽抗體復(fù)合物。多肽:抗體復(fù)合物，然后檢測?？贵w的檢測在本領(lǐng)域中是已知的，并且可以包括，例如，免疫熒光和過氧化物酶。到水痘-帶狀皰疹的多肽特異性結(jié)合的抗體，該抗體的存在下，用于檢測的方法已被用于在各種不同的格式，可用于檢測抗體水痘帶狀皰疹病毒，其中包括補(bǔ)體結(jié)合，間接熒光抗體，膜抗原的熒光抗體，中和間接血凝，免疫粘附血凝，放射免疫測定法，乳膠凝集法，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。檢測水痘帶狀皰疹病毒的其他方法包括擴(kuò)增的多核苷酸，優(yōu)選通過PCR。的多核苷酸可以是，例如，來自被攝體的分離，優(yōu)選具有由水痘帶狀皰疹病毒引起的疾病的懷疑的主體。優(yōu)選地，所述的多核苷酸，例如來自受試者的生物樣品，優(yōu)選血液，囊泡液，骨髓，或腦組織。本發(fā)明在一些方面中，該方法包括接觸的多核苷酸，優(yōu)選的分離的多核苷酸，用引物對，適合于形成可檢測的擴(kuò)增產(chǎn)物的條件下溫育，并檢測擴(kuò)增產(chǎn)物。本發(fā)明還提供了一種用于檢測水痘帶狀皰疹病毒的試劑盒。該套件包括一個(gè)水痘-帶狀皰疹多肽如本文所述的(當(dāng)檢測到水痘帶狀皰疹病毒的抗體)，或如本文所述的(當(dāng)擴(kuò)增的多核苷酸)在一個(gè)合適的包裝材料的量足以中的至少一個(gè)檢測的引物對。任選地，能夠?qū)嵤┍景l(fā)明所需要的緩沖液和溶液等其他試劑也包括在內(nèi)。打包的多肽或引物是指用于容納的試劑盒中的一個(gè)或多個(gè)物理結(jié)構(gòu)。該包裝材料是通過公知的方法，最好能提供一種無菌，無污染物的環(huán)境。該包裝材料具有一個(gè)標(biāo)簽，這表明可用于檢測水痘帶狀皰疹病毒的多肽或引物對。另外，包裝材料中包含指令指示內(nèi)的試劑盒的材料是如何被檢測到水痘帶狀皰疹病毒。如本文所用，術(shù)語“包”是指固體基質(zhì)或材料，如玻璃，塑料，紙，金屬箔等，能夠持有的多肽或引物對在規(guī)定的界限。因此，例如，一個(gè)程序包可以是用于包含的引物對的毫克量的玻璃小瓶中，或它可以是一個(gè)微量滴定板的井微克量的多肽已貼?！笆褂谜f明”通常包括一個(gè)有形的表達(dá)切合的試劑濃度的至少一種測定方法參數(shù)，如試劑和樣品的相對量，以混合的試劑/樣品的外加劑，溫度，緩沖液條件下，維修的時(shí)間段，本發(fā)明還涉及疫苗。在一個(gè)方面中，本發(fā)明的疫苗組合物。優(yōu)選地，接收的疫苗組合物的主題將顯示一個(gè)保護(hù)性的免疫應(yīng)答，增強(qiáng)對感染的抵抗力和/或臨床疾病的嚴(yán)重程度降低。一種疫苗組合物可包括改進(jìn)的水痘-帶狀皰疹病毒，更優(yōu)選為改性的減毒水痘-帶狀皰疹病毒。如上所述在“病毒，水痘帶狀皰疹病毒可以修改?！?br> 【權(quán)利要求】
1.一種帶狀皰疹病毒的制備方法，其包含的核苷酸115，808至117，679的SEQ ID NO:76的核苷酸序列，其條件是腺嘌呤核苷酸116255。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸是由水痘-帶狀皰疹病毒分離。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的多核苷酸，其特征在于，基本組成的堿基序列的核苷酸115，808至117，679的SEQ ID NO:76的分離的多核苷酸，其條件是腺嘌呤核苷酸116255。
【文檔編號】C12R1/93GK104513813SQ201310453985
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月29日
【發(fā)明者】王阿慧 申請人:上海滿益科技有限公司