一種核桃仁多肽的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種核桃仁多肽的提取方法，包括以下步驟：（1）球磨粉碎：取脫油核桃粉，加入水，并加木瓜蛋白酶，采用球磨機(jī)對脫油核桃粉進(jìn)行濕法粉碎得到超細(xì)粉體懸濁液；（2）酶水解：將懸濁液與球罐分離，向溶液中補(bǔ)充水，調(diào)整pH至6.0-7.0，繼續(xù)加入木瓜蛋白酶，在55-65℃條件下，超聲波處理20-30min，之后60℃條件下攪拌酶水解10-30min后離心即得。本發(fā)明將球磨超微粉碎、超聲提取、木瓜蛋白酶酶解三者聯(lián)合，對脫油核桃粉進(jìn)行超微粉碎，顆粒細(xì)化，細(xì)胞破碎，蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)暴露溶解釋放，超聲處理進(jìn)一步促使核桃蛋白從破碎的細(xì)胞中釋放溶解，使多肽轉(zhuǎn)化率大幅度提高。
【專利說明】一種核桃仁多肽的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品或保健食品加工【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種核桃仁多肽的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]核桃具有很高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，是開發(fā)高級保健食品的良好原料。核桃仁含油脂65%，蛋白質(zhì)15.4%以上，脫油后核桃主要成分為核桃蛋白，核桃多肽生產(chǎn)主要以脫油核桃柏為原料，利用化學(xué)法或酶法降解而成。酶法與傳統(tǒng)酸法、堿法加工相比，具有不可比擬優(yōu)點(diǎn)，如不會有任何有害殘留物質(zhì)，具有高度專一性和高效性，酶制劑用量小，反應(yīng)條件溫和，營養(yǎng)成分損失少，易操作，能耗低等，但酶法提取時(shí)間長，易生微生物。
[0003]天然核桃蛋白具有緊密立體結(jié)構(gòu)，其酶切位點(diǎn)包藏于蛋白質(zhì)內(nèi)部，從而很難被蛋白酶水解，所以需對核桃蛋白進(jìn)行預(yù)處理，使蛋白變性，以有效提高核桃蛋白水解度。另外，常規(guī)酶法分解蛋白質(zhì)雖達(dá)到很高水解率，但費(fèi)時(shí)、且條件苛刻，要達(dá)到小分子肽階段，條件更不易控制，所以核桃蛋白酶解前可考慮一些預(yù)處理。目前預(yù)處理方法較多，常見的有微波、超聲波、熱處理、凍融和超高壓等。當(dāng)前國內(nèi)外有關(guān)利用預(yù)處理提高植物、動物蛋白水解度相關(guān)報(bào)道很多；但有關(guān)核桃蛋白報(bào)道相對較少。蛋白變性方法有很多，其中熱處理由于方法簡便，設(shè)備投資少，成為最普遍預(yù)處理方法。但熱處理能耗大，時(shí)間長，本發(fā)明將球磨超微粉碎、超聲提取、木瓜蛋白酶酶解三者聯(lián)合，對脫油核桃粉進(jìn)行超微粉碎，顆粒細(xì)化，細(xì)胞破碎，蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)暴露溶解釋放，超聲處理進(jìn)一步促使核桃蛋白變性從破碎的細(xì)胞中釋放溶解，可使多肽轉(zhuǎn)化率大幅度提高、酶解提取分離時(shí)間大大縮短。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種核桃仁多肽的提取方法，能在比較溫和的條件下高效快速獲得核桃多肽，使其在生產(chǎn)工藝達(dá)到經(jīng)濟(jì)高效、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出如下技術(shù)方案:
一種核桃仁多肽的提取方法，包括以下步驟:
(1)球磨粉碎:取脫油核桃粉，以脫油核桃粉重量計(jì)，加入物料重量3-5倍的水，并加木瓜蛋白酶20U/g，采用球磨機(jī)在轉(zhuǎn)速為250-400rpm條件下對脫油核桃粉進(jìn)行濕法粉碎l_3h得到超細(xì)粉體懸池液；
(2)酶水解:將懸濁液與球罐分離，以脫油核桃粉重量計(jì)，取2-3倍的水沖洗球罐，合并2次懸濁液。向溶液中補(bǔ)充水量至干物濃度為50-100g/l，調(diào)整pH至6.0-7.0，繼續(xù)加入20U/g —脫油核桃粉的木瓜蛋白酶，在55-65°C條件下，按10-1500W/升超聲波處理20-30min，之后在60°C條件下攪拌酶水解10_30min后離心得上清液即多肽溶液。
[0006]優(yōu)選的，所述步驟(I)中球磨機(jī)為行星式球磨機(jī)。
[0007]優(yōu)選的，所述步驟(2)中利用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的氫氧化鈉和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的鹽酸調(diào)整 pH 至 6.0-7.0。
[0008]材料為:脫油核桃粉、木瓜蛋白酶(2000U/g)。[0009]本發(fā)明采用木瓜蛋白酶(2000U/g)，北京鼎國生物試劑有限公司)
本發(fā)明的技術(shù)方案，將球磨超微粉碎、超聲提取、木瓜蛋白酶酶解三者聯(lián)合，對脫油核桃粉進(jìn)行超微粉碎，顆粒細(xì)化，細(xì)胞破碎，蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)暴露溶解釋放，超聲處理進(jìn)一步促使核桃蛋白從破碎的細(xì)胞中釋放溶解，使多肽轉(zhuǎn)化率大幅度提高。采用雙縮脲法檢測溶液中多肽的含量，計(jì)算脫油核桃粉多肽的轉(zhuǎn)化率最高可達(dá)87%。
[0010]本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
【具體實(shí)施方式】
[0011]下面通過實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說明，但不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0012]實(shí)施例1
球磨粉碎:取500克的脫油核桃粉至于瑪瑙罐中，加入物料重量1500ml的水，并加木瓜蛋白酶5g，采用行星式球磨機(jī)(XQM-20L，南京科析試驗(yàn)儀器研究所)在轉(zhuǎn)速為400rpm條件下對脫油核桃粉進(jìn)行濕法粉碎3h得到超細(xì)粉體懸濁液；
酶水解:將懸濁液與球罐分離，取1500ml的水沖洗球罐，合并2次懸濁液。向溶液中補(bǔ)充水量至干物濃度為100g/l，利用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的氫氧化鈉和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的鹽酸，調(diào)整pH至6.5，繼續(xù)加入5g的木瓜蛋白酶，在60°C條件下，按1000W/升超聲波處理30min，之后在進(jìn)一步攪拌酶水解30min。酶解液條件為60°C條件，酶解后離心得上清液即多肽溶液，采用雙縮脲法檢測溶液中多肽的含量，多肽的轉(zhuǎn)化率為87%。所述多肽溶液可以經(jīng)過濾、真空冷凍的步驟得核桃仁多肽純品。
[0013]轉(zhuǎn)化率的檢測方法:游離氨基酸采用甲醛滴定法；蛋白質(zhì)采用凱氏定氮法。多肽采用雙縮脲法檢測。
[0014]多肽轉(zhuǎn)化率計(jì)算公式:轉(zhuǎn)化率=(Τ2-Τ1)/(Ρ1_Ρ2)。
[0015] 式中:Τ2為酶解后多肽含量；T1為酶解前多肽含量；P1為酶解前總蛋白含量；P2為酶解前酸溶性蛋白含量。
[0016]盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解:在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下可以對這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由權(quán)利要求及其等同物限定。
【權(quán)利要求】
1.一種核桃仁多肽的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)球磨粉碎:取脫油核桃粉，加入物料重量3-5倍的水，并加木瓜蛋白酶20U/g，采用球磨機(jī)在轉(zhuǎn)速為250-400rpm條件下對脫油核桃粉進(jìn)行濕法粉碎l_3h得到超細(xì)粉體懸池液； (2)酶水解:將懸濁液與球罐分離，取2-3倍的水沖洗球罐，合并2次懸濁液， 向溶液中補(bǔ)充水量至干物濃度為50-100g/l，調(diào)整pH至6.0-7.0，繼續(xù)加入20U/g的木瓜蛋白酶，在55-65°C條件下，按10-1500W/升超聲波處理20-30min，之后在60°C條件下攪拌酶水解10-30min后離心得上清液即多肽溶液。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中球磨機(jī)為行星式球磨機(jī)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中利用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的氫氧化鈉和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的鹽酸調(diào)整pH至6.0-7.0。
【文檔編號】C12P21/06GK103468773SQ201310401761
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月6日
【發(fā)明者】莊義慶, 吳琴燕, 楊敬輝 申請人:江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所