Nodal、GDF1基因SNP位點(diǎn)的用途
【專利摘要】本發(fā)明屬于基因檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及Nodal和GDF1基因SNP位點(diǎn)的用途及其試劑盒。本發(fā)明提供的Nodal和GDF1基因SNP位點(diǎn)的用途是Nodal和GDF1基因SNP位點(diǎn)在制備診斷先天性心臟病易感性的檢測(cè)試劑盒中的用途。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)位于Nodal基因SNP位點(diǎn)3’UTR區(qū)rs2279253和rs2279254以及GDF1基因rs4808870與先天性心臟病相關(guān)。因此在此基礎(chǔ)上提出一種通過(guò)SNP來(lái)檢測(cè)先天性心臟病易感風(fēng)險(xiǎn)性的方法和試劑盒，并且經(jīng)臨床實(shí)驗(yàn)研究驗(yàn)證，本檢測(cè)方法具有可行性，本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒具有良好靈敏性、穩(wěn)定性和特異性。本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒可對(duì)正常人群進(jìn)行先天性心臟病易感性的篩查，能有效起到風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警、早期診斷的作用。
【專利說(shuō)明】NodaUGDFI基因SNP位點(diǎn)的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于基因檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及Nodal基因和GDFl基因SNP位點(diǎn)的用途及相關(guān)試劑盒。
【背景技術(shù)】[0002]先天性心臟病(CHD)，簡(jiǎn)稱先心病，是指胚胎發(fā)育時(shí)期心臟及大血管的形成發(fā)生障礙而引起的局部解剖結(jié)構(gòu)異常，或出生后應(yīng)自動(dòng)關(guān)閉的通道未能閉合而對(duì)心功能產(chǎn)生了實(shí)際或潛在影響的一組先天畸形。先心病是最常見(jiàn)的先天缺陷性疾病，在我國(guó)，先心病在活產(chǎn)嬰兒中的發(fā)病率為6%。~9%。，而在自然流產(chǎn)嬰兒中則高達(dá)5%~10%，總體發(fā)病率為4%。~10%。，全國(guó)每年有15-20萬(wàn)先心病患兒出生。國(guó)外報(bào)道先心病總體發(fā)病率為8 %。，亞洲國(guó)家最高，約為9.3 %。。先心病包括多種心臟畸形，如房間隔缺損(atrialseptal defect, ASD)、室間隔缺損(ventricular septal defect, VSD)、動(dòng)脈導(dǎo)管未閉(patent ductus arteriosus,PDA)、法洛氏四聯(lián)癥(tetralogy of Fallot,TOF)、大動(dòng)脈轉(zhuǎn)位(transposition of the great arteries, TGA)等?；純撼Ｓ行乃ァ⒆咸?、肺炎、肺動(dòng)脈高壓、發(fā)育障礙等臨床表現(xiàn)，無(wú)論是在新生兒非感染性死亡，還是5歲以下兒童總體死亡原因中，先天性心臟病均居首位。
[0003]多數(shù)先心病(80% )是胚胎期由于環(huán)境因素和遺傳因素共同作用、相互影響，導(dǎo)致心血管系統(tǒng)發(fā)育異常所引起的，其發(fā)病原因及過(guò)程均非常復(fù)雜。環(huán)境因素主要包括有:宮內(nèi)感染、營(yíng)養(yǎng)不良造成的某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏、吸煙飲酒、某些慢性疾病、藥物等。遺傳因素少數(shù)是由于染色體的微缺失所導(dǎo)致的綜合癥型先心病，大多為各種相關(guān)心臟發(fā)育基因變異所導(dǎo)致的單純性先心病。
[0004]單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotide polymorphism, SNP)是一種新遺傳學(xué)標(biāo)志。據(jù)人類基因組計(jì)劃數(shù)據(jù)庫(kù)估計(jì)，90%的人類遺傳變異的結(jié)果都來(lái)自單核苷酸多態(tài)性。全基因組關(guān)聯(lián)研究已經(jīng)證實(shí)單核苷酸多態(tài)性增加了某些常見(jiàn)疾病的易感性，如癌癥，糖尿病和冠狀動(dòng)脈性疾病，但對(duì)先心病的研究尚處于初期階段。目前，單核苷酸多態(tài)性與先心病的關(guān)聯(lián)研究都集中在檢測(cè)候選基因多態(tài)性上，如葉酸代謝通路基因與先心病易感性的研究，在多項(xiàng)研究中都發(fā)現(xiàn)葉酸代謝過(guò)程中重要的亞甲基四氫葉酸還原酶基因中的一個(gè)SNP(C677T)可導(dǎo)致酶的活性下降，但是這個(gè)結(jié)論在一項(xiàng)Meta分析中并未得到確定。另外，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)已被證明是正常心臟發(fā)育的關(guān)鍵基因，而VEGF的三個(gè)SNP (C2578A, Gl 154A, C634G)被認(rèn)為與22qll缺失綜合征、TOF及VSD有關(guān)，但是和MTHFR —樣，Meta分析依然未能證實(shí)它們之間的關(guān)系，這可能和樣本量大小、基因頻率、統(tǒng)計(jì)效力及先心病表型的異質(zhì)性有關(guān)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是為先天性心臟病易感性的診斷提供一種解決方法和相應(yīng)的試劑盒。本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下:[0006]方案之一是:Nodal基因SNP位點(diǎn)和/或⑶Fl基因SNP位點(diǎn)在制備先天性心臟病易感性的診斷試劑盒中的應(yīng)用；
[0007]所述Nodal 基因 SNP 位點(diǎn)為 rs2279253 和 / 或 rs2279254 ；
[0008]所述⑶Fl基因SNP位點(diǎn)為rs4808870。
[0009]方案之一中，所述先天性心臟病為CTDs中的PA，再具體為PA中的IVS亞型；其中，CTDs的定乂為:圓維動(dòng)脈干崎形；PA的定乂為:肺動(dòng)脈閉鎖；IVS亞型的定乂為:室間隔完整的肺動(dòng)脈閉鎖。
[0010]方案之一中，當(dāng)Nodal基因SNP位點(diǎn)rs2279253的基因型為T(mén)T時(shí)，先天性心臟病(PA)易感性增加，先天性心臟病(IVS)易感性增加；當(dāng)Nodal基因SNP位點(diǎn)rs2279254的基因型為GG時(shí)，先天性心臟病(PA)易感性增加，先天性心臟病(IVS)易感性增加；iGDFl基因SNP位點(diǎn)rs4808870的基因型為AA時(shí)，先天性心臟病(PA)易感性增加，先天性心臟病(IVS)易感性增加。
[0011]方案之二是:GDF1基因SNP位點(diǎn)單倍型在制備診斷先天性心臟病易感性的檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用；
[0012]所述⑶Fl基因 SNP 位點(diǎn)單倍型為 rs7250622T-rs4808867G-rs4808870G-rs2075762T ；
[0013]所述⑶Fl基因 SNP 位點(diǎn)單倍型為 rs7250622C-rs4808867A-rs4808870G-rs2075762T。
[0014]方案之二中，所述先天性心臟病為CHD，具體為CHD中的CTD或CHD中的non_CTD ；其中，CHD的定義為先天性心臟病；CTD的定義為:圓錐動(dòng)脈干畸形；non-CTD的定義為:非圓錐動(dòng)脈干畸形。
[0015]方案之二中，當(dāng)所述單倍型為rs7250622T-rs4808867G-rs4808870G-rs2075762T時(shí)，先天性心臟病(CHD)易感性降低，先天性心臟病(CTD)易感性降低，先天性心臟病(non-CTD)易感性降低；當(dāng)所述單倍型為 rs7250622C-rs4808867A-rs4808870G_rs2075762T時(shí)，先天性心臟病(CHD)易感性增加，先天性心臟病(CTD)易感性增加，先天性心臟病(non-CTD)易感性增加。
[0016]本領(lǐng)域技術(shù)人員可通過(guò)任何檢測(cè)SNP位點(diǎn)的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)方案一和方案二中SNP的檢測(cè)。例如，Taqman法、質(zhì)譜法、DNA微陣列法、測(cè)序法、微測(cè)序、雜交、限制性片段分析、寡核苷酸連接檢測(cè)、等位基因特異性PCR-HRM或聯(lián)合應(yīng)用上述方法。
[0017]方案之三是:一種診斷先天性心臟病易感性的試劑盒，包括檢測(cè)上述SNP位點(diǎn)的物質(zhì)或檢測(cè)上述單倍型的物質(zhì)。
[0018]方案之三中，所述檢測(cè)上述SNP位點(diǎn)的物質(zhì)或檢測(cè)上述單倍型的物質(zhì)包括檢測(cè)上述SNP位點(diǎn)的引物對(duì)或檢測(cè)上述單倍型的引物對(duì)。
[0019]方案之三中，試劑盒還包括基因組DNA抽提試劑、PCR反應(yīng)體系試劑和DHPLC相關(guān)試劑，所述PCR反應(yīng)體系包括dNTP、MgCl2、Taq DNA聚合酶、PCR反應(yīng)緩沖液和所述引物對(duì)。
[0020]方案之三中，所述引物對(duì)具體如下:
[0021]檢測(cè)rs2279253 和 / 或 rs2279254 的引物對(duì):序列如 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.2所示；
[0022]所述檢測(cè)權(quán)利要求3或4所述單倍型的引物對(duì)為如下:[0023]檢測(cè)rs7250622 的引物對(duì):SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.4 所示；
[0024]檢測(cè)rs4808870 的引物對(duì):SEQ ID N0.5 和 SEQ ID N0.6 所示；
[0025]檢測(cè)rs2075762 的引物對(duì):SEQ ID N0.7 和 SEQ ID N0.8 所示；
[0026]檢測(cè)rs4808867 的引物對(duì):SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.10 所示。
[0027]方案之三中，所述DHPLC相關(guān)試劑為乙腈、三基乙基銨醋酸鹽；所述Taq DNA聚合酶為具有高保真性tag酶。在一些實(shí)施例中，所述Taq DNA聚合酶優(yōu)選為高保真tag聚合酶，其中最優(yōu)選為MBI高保真tag酶。
[0028]方案之四是:方案之三中任一所述試劑盒在制備先天性心臟病易感性的診斷試劑盒中的應(yīng)用。
[0029]方案之四中，當(dāng)Nodal基因SNP位點(diǎn)rs2279253的基因型為T(mén)T時(shí)，先天性心臟病(PA)易感性增加，先天性心臟病(IVS)易感性增加；當(dāng)Nodal基因SNP位點(diǎn)rs2279254的基因型為GG時(shí)，先天性心臟病(PA)易感性增加，先天性心臟病(IVS)易感性增加；iGDFl基因SNP位點(diǎn)rs4808870的基因型為AA時(shí)，先天性心臟病(PA)易感性增加，先天性心臟病(IVS)易感性增加。
[0030]方案之四中，當(dāng)所述單倍型為rs7250622T-rs4808867G-rs4808870G-rs2075762T時(shí)，先天性心臟病(CHD)易感性降低，先天性心臟病(CTD)易感性降低，先天性心臟病(non-CTD)易感性降低；當(dāng)所述單倍型為 rs7250622C-rs4808867A-rs4808870G_rs2075762T時(shí)，先天性心臟病(CHD)易感性增加，先天性心臟病(CTD)易感性增加，先天性心臟病(non-CTD)易感性增加。`
[0031 ] 根據(jù)本領(lǐng)域公知常識(shí)，CHD包括CTD和non-CTD ；CTD中包括PA ；PA中包括IVS和VSD。
[0032]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為:本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)位于Nodal基因SNP位點(diǎn)rs2279253和rs2279254以及⑶Fl基因SNP位點(diǎn)rs4808870極其相關(guān)單倍型與先天性心臟病相關(guān)。因此在此基礎(chǔ)上提出一種通過(guò)SNP來(lái)檢測(cè)系統(tǒng)心臟病易感風(fēng)險(xiǎn)性的方法和試劑盒，并且經(jīng)臨床實(shí)驗(yàn)研究驗(yàn)證，本檢測(cè)方法具有可行性，本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒具有良好靈敏性、穩(wěn)定性和特異性。本發(fā)明的試劑盒對(duì)正常人群進(jìn)行先天性心臟病易感性的篩查，能有效起到風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警、早期診斷的作用。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0033]圖1為⑶Fl基因四個(gè)SNP成對(duì)位點(diǎn)之間的D’值。
【具體實(shí)施方式】
[0034]以下結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。
[0035]材料與方法:
[0036]1.1研究對(duì)象[0037]1.1.1先天性心臟病患者
[0038]募集2008年I月至2009年12月期間在北京阜外心血管病醫(yī)院住院被臨床確診為單純性先天性心臟病的知情同意患者共310例，其中男性160例，女性150例。先心病由常規(guī)超聲心動(dòng)圖、彩色多普勒、磁共振成像或手術(shù)報(bào)告等檢查確診。先心病病例臨床亞型包括單發(fā) VSD、單發(fā) ASD、PDA、TOF、TGA、DORV, ECD、AVSD, TAPVC, HLHS, Ebstein，s anomaly、A—P window、PA (室間隔完整型(pulmonary atresia with an intact ventricularseptum,PA+IVS)、室間隔缺損型(pulmonary atresia with ventriucular septal defect,PA+VSD))、PTA、SV。進(jìn)而，按照心臟畸形是否與圓錐動(dòng)脈干發(fā)育異常有關(guān)，將病例組分為兩大類:圓錐動(dòng)脈干畸形組(CTDs)和非圓錐動(dòng)脈干畸形組(Non — CTDs):CTDs組包括TOF、TGA、DORV, PA、PTA、AP window ;Non—CTDs 包括 ASD、VSD、AVSD, PDA、ECD、Ebstein’ sanomaly、TAPVR、SV、HLHS。膜周性VSD因目前對(duì)其機(jī)制存在爭(zhēng)議而排除在單發(fā)VSD亞型之外，還有具有遺傳綜合癥或染色體異常(如22qll微缺失或21三體綜合征)的先心病患者也被排除在本研究之外。 [0039]1.1.2正常對(duì)照
[0040]從民族、性別兩個(gè)方面選擇和病例組相匹配的同醫(yī)院體檢正常健康對(duì)照320例，均無(wú)先天性心臟病家族史及其他綜合征病史，其中男性178例，女性142例。
[0041]本研究經(jīng)北京阜外心血管病醫(yī)院及蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有臨床和實(shí)驗(yàn)室資料的收集以及外周血樣的采集均獲得研究對(duì)象的知情同意。
[0042]1.2主要試劑
[0043]全血基因組DNA提取試劑盒北京天根生化科技有限公司；dNTP:10mmol/L，北京鼎國(guó)生物技術(shù)發(fā)展中心；Taq DNA polymerase:MBI Fermentas Lithuania ;限制性內(nèi)切酶:Eco72I, MBI Fermentas Lithuania ；DNA Markers =Markerl, DL2000 廣州東盛生物科技有限公司；乙腈(ACN):Sigma公司；三基乙基銨醋酸鹽(TEAA):Transgenomic公司；常熔點(diǎn)瓊脂糖:北京迪爾拜生物公司。
[0044]1.3主要儀器
[0045]低溫臺(tái)式離心機(jī):MIRK0.22R(HettiehZentrifuge)德國(guó)；高速冷凍離心機(jī):(北京長(zhǎng)流科學(xué)儀器公司);UV5710紫外分光光度計(jì):(上海天美科學(xué)儀器有限公司);SW—CJ-1F型單人雙面凈化工作臺(tái):(蘇州凈化設(shè)備有限公司制造)；681型磁力加熱攪拌器:(江蘇南通)；PCR 儀:(Bio—RadiCyelerl70—8705.Bio—RadLaboratories, Inc.，USA)(Gene Amp9600PCR, PERKIN ELMER公司);電泳儀:DYY — 6B型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(北京市六一儀器廠)；凝膠成像儀:(UVpBioimagingsystem, VUP, Inc.),英國(guó)；分析天平:METTLERT0ELD0AB—204E (Mettler—TO IedoInstrumentSC0.1 td.);水浴鍋:數(shù)顯恒溫水浴鍋 HH—2 (國(guó)華電器有限公司)；電子恒溫水箱:HH.W12— 600型(北京永光明醫(yī)療儀器廠)；低溫冰箱:SANY0 MEDICAL FREZER，日本；快速震蕩搖勻器:SK—1(江蘇常州)；電熱鼓風(fēng)干燥箱:DNP—9052 (上海);超純水儀:MiIlipore corporation (MiLi一Q, MiLipore 公司),美國(guó)；DHPLC — DNA 分析儀:Wave3500 (Transgenomic Inc.，Omaha, USA) ;DHPLC — DNA 分析軟件:WAVEMAKE Software Version4.1。
[0046]實(shí)施例1、Nodal基因與CHD
[0047]1.1基因組DNA的提取(參考試劑盒說(shuō)明書(shū))[0048]1.2引物設(shè)計(jì)與合成
[0049]選擇Nodal 基因 SNP 位點(diǎn) rsl904589 和 rsl0999334，rs2279253 與 rs2279254 進(jìn)行PCR-DHPLC檢測(cè)。通過(guò)美國(guó)國(guó)家醫(yī)學(xué)圖書(shū)館Pubmed引擎(http://www.ncb1.nlm.nih.gov/sites/snp)檢索到其側(cè)翼序列，我們采用Premier Primier5.0結(jié)合Premier3.0在線設(shè)計(jì)引物，并由DNAMAN6.0.40軟件檢測(cè)合格，再將不同引物的待擴(kuò)增片段上機(jī)用WAVEMAKESoftware Version4.1軟件進(jìn)行DHPLC模擬檢測(cè)，挑選出最適合上機(jī)檢測(cè)的引物序列，DHPLC檢測(cè)溫度可應(yīng)用系統(tǒng)的Navigator軟件包進(jìn)行預(yù)測(cè)。如果待測(cè)樣本與已知的野生型對(duì)照樣本的色譜洗脫峰有明顯差異，可確定為檢測(cè)最佳溫度。如果在此溫度下兩者的洗脫峰沒(méi)有明顯差異，則按照色譜圖的具體形狀判斷升高或降低檢測(cè)溫度，然后再根據(jù)峰型變化確定DHPLC實(shí)際檢測(cè)溫度。
[0050]Nodal 基因 SNP位點(diǎn) rsl904589 和 rsl0999334 的引物為 F:TAGAGCGGTTTCAGATGGACR:CTTGACCTTCCGACACAGTT。
[0051]rs2279253 和 rs2279254 位點(diǎn)的引物為 F:AGTGGTTCTCTGCTAATGAG(SEQ ID N0.1)R:AGACTGGACAGTGAATTGCT(SEQ ID N0.2)。已確定的引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行合成，HAP純化，引物濃度調(diào)整到10 μ M — 20°C保存。
[0052]1.3四個(gè)多態(tài)位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增；
[0053]1.3.1(l)rsl904589 和 rsl0999334 的 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系
[0054]
【權(quán)利要求】
1.Nodal基因SNP位點(diǎn)和/或⑶Fl基因SNP位點(diǎn)在制備先天性心臟病易感性的診斷試劑盒中的應(yīng)用； 所述 Nodal 基因 SNP 位點(diǎn)為 rs2279253 和 / 或 rs2279254 ； 所述⑶Fl基因SNP位點(diǎn)為rs4808870。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述先天性心臟病為CTDs中的PA，再具體為PA中的IVS亞型；其中，CTDs的定義為:圓錐動(dòng)脈干畸形；PA的定義為:肺動(dòng)脈閉鎖；IVS亞型的定乂為:室間隔完整的肺動(dòng)脈閉鎖。
3.GDFl基因SNP位點(diǎn)單倍型在制備診斷先天性心臟病易感性的檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用； 所述⑶Fl 基因 SNP 位點(diǎn)單倍型為 rs7250622T-rs4808867G-rs4808870G-rs2075762T ； 所述⑶Fl 基因 SNP 位點(diǎn)單倍型為 rs7250622C-rs4808867A-rs4808870G-rs2075762T。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于:所述先天性心臟病為CHD，具體為CHD中的CTD或CHD中的non-CTD ;其中，CHD的定義為先天性心臟病；CTD的定義為:圓錐動(dòng)脈干畸形；non-CTD的定義為:非圓錐動(dòng)脈干畸形。
5.一種診斷先天性心臟病易感性的試劑盒，包括檢測(cè)權(quán)利要求1或2所述SNP位點(diǎn)的物質(zhì)或檢測(cè)權(quán)利要求3或4所述單倍型的物質(zhì)。
6.如權(quán)利要求5所述檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述檢測(cè)權(quán)利要求1或2所述SNP位點(diǎn)的物質(zhì)或檢測(cè)權(quán)利要求3或4所述單倍型的物質(zhì)包括檢測(cè)權(quán)利要求1或2所述SNP位點(diǎn)的引物對(duì)或檢測(cè)權(quán)利要求3或4所述單倍型的引物對(duì)。
7.如權(quán)利要求5或6所述檢測(cè)試劑盒，其特征在于:還包括基因組DNA抽提試劑、PCR反應(yīng)體系試劑和DHPLC相關(guān)試劑，所述PCR反應(yīng)體系包括dNTP、MgCl2、Taq DNA聚合酶、PCR反應(yīng)緩沖液和所述引物對(duì)。
8.如權(quán)利要求5-7任一所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于: 所述檢測(cè)權(quán)利要求1或2所述SNP位點(diǎn)的引物對(duì)為檢測(cè)rs2279253和/或rs2279254的引物對(duì)，序列如SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示； 所述檢測(cè)權(quán)利要求3或4所述單倍型的引物對(duì)為如下: 檢測(cè) rs7250622 的引物對(duì):SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.4 所示； 檢測(cè) rs4808870 的引物對(duì):SEQ ID N0.5 和 SEQ ID N0.6 所示； 檢測(cè) rs2075762 的引物對(duì):SEQ ID N0.7 和 SEQ ID N0.8 所示； 檢測(cè) rs4808867 的引物對(duì):SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.10 所示。
9.如權(quán)利要求5-8所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述DHPLC相關(guān)試劑為乙腈、三基乙基銨醋酸鹽；所述Taq DNA聚合酶為具有高保真性tag酶。
10.權(quán)利要求5-9任一所述試劑盒在制備先天性心臟病易感性的診斷試劑盒中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103695529SQ201310398818
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月5日
【發(fā)明者】謝小冬, 蘇剛, 李培強(qiáng), 吳驊, 李炯, 孫曉瑋 申請(qǐng)人:謝小冬