專利名稱：一種大豆抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于大豆分子生物學(xué)及遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域。更具體涉及一種大豆抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)及與該主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的分子標(biāo)記，同時(shí)還涉及該分子標(biāo)記在大豆抗花葉病毒育種中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
大豆是一種重要農(nóng)作物，富含蛋白質(zhì)和脂肪以及對(duì)人體有利的活性成分如皂貳、異黃酮、磷脂等，是世界上植物性蛋白和油分的主要來源之一。目前我國大豆種植面積、總產(chǎn)及單產(chǎn)均居世界第四位，生產(chǎn)水平落后于世界大豆生產(chǎn)。2012年中國大豆種植面積718萬公頃，總產(chǎn)量1280萬噸，而進(jìn)口大豆達(dá)到創(chuàng)記錄的5750萬噸，占據(jù)我國五分之四的大豆市場。造成我國大豆生產(chǎn)滯后、供給嚴(yán)重不足、國內(nèi)大豆產(chǎn)業(yè)遭受進(jìn)口轉(zhuǎn)基因大豆嚴(yán)重沖擊的原因是多方面的，但主要原因之一是綜合抗病蟲害和抗逆能力差，單產(chǎn)低，種植效益低下，國際競爭力弱。大豆花葉病毒(Soybean mosaic virus SMV)病是世界上分布最廣泛,危害大豆最嚴(yán)重的病毒性病害之一，在我國各產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，己經(jīng)成為我國東北、黃淮和長江流域大豆主產(chǎn)區(qū)最主要的病害之一。SMV侵染大豆后，會(huì)導(dǎo)致大豆葉片中葉綠素含量及葉質(zhì)下降，葉面積減小，影響光合面積和光合能力，植株矮小，生長量下降，單株莢數(shù)減少，降低種子百粒重、萌發(fā)率、蛋白質(zhì)含量及含油量，并影響脂肪酸、蛋白質(zhì)、微量元素及游離氨基酸的組分等，嚴(yán)重影響大豆產(chǎn)量和品質(zhì)。大豆被花葉病毒侵染后的產(chǎn)量損失一般在15% - 35%，發(fā)病嚴(yán)重的年份，引起的產(chǎn)量損失可達(dá)70%以上，甚至絕產(chǎn)。大豆品種感染SMV后，根、莖、葉等形態(tài)器官受到嚴(yán)重影響，影響程度從大到小依次為單株粒重、單株葉面積、根瘤重、莖葉干重、根干重、種子褐斑粒率、株高、百粒重，且早期感染SMV其危害大于中后期感染。大豆花葉病毒病不但影響大豆的產(chǎn)量，還影響大豆的品質(zhì)，嚴(yán)重時(shí)病粒率達(dá)50%以上，嚴(yán)重降低大豆的商品質(zhì)量。

作物的許多重要農(nóng)藝性狀如產(chǎn)量、品質(zhì)和抗性等都是數(shù)量性狀，由多個(gè)基因控制，表現(xiàn)為連續(xù)變異，且易受環(huán)境影響，相對(duì)于由單基因控制的質(zhì)量性狀而言，選擇效果不好。通過構(gòu)建遺傳圖譜，定位數(shù)量性狀位點(diǎn)(quantitative trait loci, QTL),利用與QTL緊密連鎖的分子標(biāo)記在早代對(duì)育種材料進(jìn)行選擇，可克服環(huán)境影響，節(jié)約生產(chǎn)成本，提高選擇效率，加快育進(jìn)程。對(duì)大豆抗SMV的QTL定位研究也有一些報(bào)道，目前，在大豆第2、13和14號(hào)染色體上已定位抗大豆花葉病毒QTL，但效應(yīng)值較小,較難在大豆育種中應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的一個(gè)技術(shù)問題是提供鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒(SC-3株系)性狀的方法。本發(fā)明所提供的一種鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒性狀的方法，包括如下步驟:分別以待鑒定大豆的基因組DNA為模板，用由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的兩條單鏈DNA組成的PCR引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測所得到的PCR產(chǎn)物，按照下述方法確定所述待鑒定大豆的抗花葉病毒性狀:如果待鑒定大豆的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在聚丙烯酰胺凝膠電泳中顯示為與中豆32的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小相同的一個(gè)條帶，所述待鑒定大豆為抗花葉病毒大豆或?yàn)楹蜻x抗花葉病毒大豆，如果所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在聚丙烯酰胺凝膠電泳中顯示為與中豆29的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小相同的一個(gè)條帶，所述待鑒定大豆為非抗花葉病毒大豆或?yàn)楹蜻x非抗花葉病毒大豆；所述待鑒定大ii選自中ii 29 X中ii 32的雜種后代中的F7及其以后世代的豕系。其中，所述聚丙烯酰胺凝膠電泳中，所述聚丙烯酰胺凝膠的濃度(凝膠溶液中單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺的總質(zhì)量濃度)可為60g/L，所述聚丙烯酰胺凝膠的交聯(lián)度(凝膠溶液中甲叉雙丙烯酰胺占丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù))可為5%。上述方法中，所述PCR擴(kuò)增中先進(jìn)行10個(gè)第一個(gè)循環(huán)后再進(jìn)行25個(gè)第二個(gè)循環(huán)，所述第一個(gè)循環(huán)的引物退火條件為60°C 30s，所述第二個(gè)循環(huán)的引物退火條件為55°C30s。其中，所述第一個(gè)循環(huán)的溫度程序是:先94°C 30s，然后60°C 30s，最后72°CImin ;所述第二個(gè)循環(huán)的溫度程序是:先94°C 30s,然后55°C 30s,最后72°C lmin。上述方法中，所述待鑒定大豆具體選自中豆29 X中豆32的雜種后代中的F7至F11豕系。在本發(fā)明的個(gè)實(shí)施例中，所述待鑒定大ii具體選自中ii 29 X中ii 32的雜種后代中的F11的家系。

上述方法中，所述抗花葉病毒大豆是指花葉病毒病的病情指數(shù)< 30的大豆品種或品系；所述非抗花葉病毒大豆是指花葉病毒病的病情指數(shù)> 30的大豆品種或品系。上述方法中，在中豆29X中豆32這個(gè)雜交組合中，中豆29為母本，中豆32為父本。上述方法可用于大豆育種、大豆抗花葉病毒SC-3株系的早期預(yù)測和篩選抗花葉
病毒大豆。在大豆育種中，可選擇上述方法鑒定出的抗花葉病毒大豆或候選抗花葉病毒大豆進(jìn)行育種。本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是提供鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒性狀的引物對(duì)。本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒性狀的引物對(duì)，名稱為GmSSRl3-23，由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的兩條單鏈DNA組成。其中，SEQ ID N0.1由20個(gè)脫氧核苷酸組成，SEQ ID N0.2由20個(gè)脫氧核苷酸組成。含有上述引物對(duì)GmSSR13_23的鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒性狀的試劑或試劑盒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。上述引物對(duì)GmSSR13-23、含有上述引物對(duì)GmSSR13-23的試劑或試劑盒的下述a)、
b)或c)用途也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍:a)在大豆育種中的應(yīng)用；b)在大豆抗花葉病毒的早期預(yù)測中的應(yīng)用；c)在篩選抗花葉病毒大豆中的應(yīng)用。
本發(fā)明所要解決的再一個(gè)技術(shù)問題是提供一種大豆抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)。本發(fā)明所提供的大豆抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)是qRSC.13_1，該主效基因位點(diǎn)的貢獻(xiàn)率(32.4%)超過已往的報(bào)導(dǎo)，對(duì)大豆抗花葉病毒起著關(guān)鍵作用，可用作圖位克隆和分子標(biāo)記輔助選擇。上文中，花葉病毒具體為花葉病毒SC-3株系。本發(fā)明的引物對(duì)GmSSR13_23，是與主效基因位點(diǎn)qRSC.13-1緊密連鎖的標(biāo)記，與qRSC.13-1相距0.8cM,是基于PCR技術(shù)的共顯性SSR標(biāo)記，因而可靠且使用方便。實(shí)驗(yàn)證明，利用引物對(duì)GmSSR13_23對(duì)大豆育種群體進(jìn)行輔助選擇得到了花葉病毒病的病情指數(shù)低于30的抗花葉病毒家系，這表明引物對(duì)GmSSR13-23用于大豆抗花葉病毒育種的分子標(biāo)記輔助選擇是切實(shí)有效的。

本發(fā)明通過對(duì)大豆抗花葉病毒的QTL定位，首次精細(xì)定位了抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)qRSC.13-1并獲得了與其緊密連鎖的分子標(biāo)記GmSSR13_23，該大豆抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)qRSC.13-1，可解釋32.4%的表型變異，可用于圖位克隆和分子標(biāo)記輔助選擇。在常規(guī)育種方法中，大豆對(duì)SMV的抗性需人工接種鑒定才能確定，且易受環(huán)境，選擇效率低下。通過檢測抗SMV SC-3株系主效基因位點(diǎn)，可以在苗期進(jìn)行淘汰，不僅節(jié)約生產(chǎn)成本而且大大提高選擇效率，從而加快育種進(jìn)程。本發(fā)明中抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)位置明確，主效基因位點(diǎn)的檢測方法方便快速，不受環(huán)境影響。通過檢測與抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的分子標(biāo)記，即可預(yù)測大豆的抗花葉病毒性狀，進(jìn)而準(zhǔn)確快速篩選高抗花葉病毒的材料。本發(fā)明通過分子標(biāo)記GmSSR13-23輔助選擇得到的家系的花葉病毒病的病情指數(shù)均低于30，利用本發(fā)明的GmSSR13-23進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇可提高大豆抗花葉病毒育種的選擇效率，加快育種進(jìn)程。


圖1為利用GmSSR13-23對(duì)1_36的家系的F11代、母本和父本的基因組DNA進(jìn)行PCR得到的PCR產(chǎn)物的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳圖。圖中1-36為材料編號(hào)，Pl和P2分別代表母本中豆29和父本中豆32。圖2為大豆抗SMV SC-3株系病情指數(shù)LOD值分布曲線。圖中橫坐標(biāo)代表連鎖群，縱坐標(biāo)代表LOD值。箭頭所示為抗SMV SC_3株系主效基因位點(diǎn)(qRSC.13-1)曲線。圖3為大豆13號(hào)染色體對(duì)應(yīng)的F連鎖群。左側(cè)為抗SMV SC-3株系主效基因位點(diǎn)(qRSC.13-1)位置及置信區(qū)間示意圖，右側(cè)為標(biāo)記名稱及遺傳距離(CM)。
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。大豆中豆29和中豆32 (周新安等，大豆重組自交系群體三、四粒莢變異及其與產(chǎn)量的關(guān)系，中國油料作物學(xué)報(bào)，2005，27:22-25)公眾可從商業(yè)途徑獲得，也可從中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所獲得，以重復(fù)本發(fā)明實(shí)驗(yàn)?；ㄈ~病毒SC-3株系(戰(zhàn)勇等，黃淮地區(qū)大S 花葉病毒株系的鑒定與分布，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，39 =2009-2015)公眾可從田間采集大豆葉片分離，也可從中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所獲得，以重復(fù)本發(fā)明實(shí)驗(yàn)。在以下的實(shí)施方案中，除非特別說明，否則所有操作均按照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(第三版)(黃培堂等譯，北京:科學(xué)出版社，2002)所提供的方法進(jìn)行。實(shí)施例1、利用引物對(duì)GmSSR13-23鑒定中豆29X中豆32的F11家系的抗花葉病毒性狀一、鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒性狀的PCR試劑本實(shí)施例的鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒性狀的PCR試劑由PCR引物對(duì)GmSSR13_23、10XTaq緩沖液，dNTP混合物，MgCl2溶液、Taq DNA聚合酶和ddH20組成。其中，PCR引物對(duì)GmSSRl3-23由正向引物和反向引物這兩條單鏈DNA組成，其序列如下:正向引物:5，-CAGCCAATAGCAACAAAGGG-3，(SEQID N0.1),反向引物:5，-GCCTTGCTTGCTCATCAAAT-3，(SEQID N0.2)。二、待鑒定大豆中豆29 X中豆32的F11家系是按照如下方法獲得:中豆29和中豆32雜交，雜交后代連續(xù)自交，在F3即分株行種植，以后各世代均從每一個(gè)株行中隨機(jī)選擇一個(gè)單株，衍生出下一世代。自F7世代同一個(gè)家系內(nèi)隨機(jī)選擇5個(gè)單株，種子混合，不同家系分別種植，獲得由406個(gè)F11株系組成的重組自交系群體。其中，從F2至F11的雜交方式均為自交。三、田間實(shí)驗(yàn)和利用引物對(duì)GmSSR13_23鑒定待鑒定大豆的抗花葉病毒性狀(一)隨機(jī)區(qū)組實(shí)驗(yàn)測定花葉病毒抗性從步驟二的406個(gè)家系中隨機(jī)選36個(gè)家系的F11家系，即編號(hào)為1_36的大豆材料種植以測定每個(gè)家系對(duì)花葉病毒SC-3株系的抗性。試驗(yàn)采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，共設(shè)三個(gè)重復(fù)區(qū)。每個(gè)重復(fù)區(qū)設(shè)38個(gè)小區(qū)，36個(gè)家系中每個(gè)家系I個(gè)小區(qū)，母本中豆29 (Pl) I個(gè)小區(qū),父本中豆32 (P2)l個(gè)小區(qū)。所有試驗(yàn)材料種植于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所試驗(yàn)農(nóng)場。每個(gè)小區(qū)種植3行，行長3.5m，行距為
0.4m，株距為0.lm。在第一片真葉展開時(shí)人工磨擦接種鑒定(智海劍等，2002-2004年國家大豆區(qū)試品種對(duì)大豆花葉病毒抗性的評(píng)價(jià).大豆科學(xué)，2005，24:190-193)，方法如下:(I)供試花葉病毒SC-3株系在感病品種大豆南農(nóng)1138-2上繁殖保存。(2)群體及親本材料播種后在未出苗之前蓋好防蟲網(wǎng)。在第一對(duì)真葉展開時(shí)，取南農(nóng)1138-2上具有典型花葉病毒癥狀的新鮮病葉加0.1M、PH7.5的磷酸緩沖液(約Ig新鮮葉片加5ml緩沖液)和適量600目金剛砂，在攪拌機(jī)中打成勻漿，用毛刷蘸勻漿均勻摩擦接種于供試材料真葉上，接種后用清水沖洗葉片上多余的汁液。待第一片復(fù)葉展開時(shí)重復(fù)接種I次。(3)接種30天癥狀穩(wěn)定時(shí)調(diào)查發(fā)病情況，并計(jì)算發(fā)病率、病情指數(shù)。(4)磷酸緩沖液的配制。稱取 Na2HPO4.12H20 71.6g,KH2PO4.12H20 6.8g，加純凈水2400ml，攪拌使其充分溶解，調(diào)pH到7 .5，定容到2500ml。置于4°C冰箱中備用。(5)大豆接種SMV的鑒定方法。親本及各家系的調(diào)查包括癥狀類型、病級(jí)，并計(jì)算病情指數(shù)。病級(jí)是株系癥狀的嚴(yán)重度分級(jí)，參照智海劍等(2005)的方法調(diào)查單株病級(jí)，具體的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)是:花葉型:0級(jí):免疫、無癥狀或僅在接種葉上出現(xiàn)局部枯斑；1級(jí):輕花葉；2級(jí):黃斑花葉、葉片輕度皺縮；3級(jí):重花葉、葉片皺縮卷曲；4級(jí):葉片嚴(yán)重皺縮且植株矮化。壞死型:0級(jí):免疫、無癥狀或僅在接種葉上有局部枯斑；1級(jí):部分葉片上出現(xiàn)可見微小壞死斑；2級(jí):多數(shù)壞死斑直徑在5mm以下或有部分葉脈壞死，其長度小于IOmm ；3級(jí):壞死斑連片或主脈壞死長度大于20mm ；4級(jí):葉片因壞死脫落，或壞死面積超過葉片面積50%，或出現(xiàn)頂枯，植株停止生長。如在同一植株上同時(shí)出現(xiàn)花葉、壞死二種癥狀，病級(jí)取級(jí)別高者。病情指數(shù)(DI) =Σ(病級(jí)X發(fā)病株數(shù))/(最高病級(jí)X總株數(shù))X 100。(6)大豆對(duì)SMV抗感的劃分標(biāo)準(zhǔn):病情指數(shù)小于等于30為抗花葉病毒大豆；花葉病毒病的病情指數(shù)大于30為非抗花葉病毒大豆。結(jié)果如表2 所示，表明家系 2、3、5、9、10、11、13、18、20、21、23、25、26、29、30、31、33
這17個(gè)家系以及中豆32的花葉病毒病的病情指數(shù)均小于30，是抗花葉病毒大豆；家系1、
4、6、7、8、12、14、15、16、17、19、22、24、27、28、32、34、35、36 這 19 個(gè)家系以及中豆 29 的花葉病毒病的病情指數(shù)均大于30，是非抗花葉病毒大豆。(二)利用引物對(duì)GmSSR13_23測定大豆的抗花葉病毒性狀在步驟(一)編號(hào)為1-36的家系的F11代、母本中豆29 (Pl)和父本中豆32的3葉期分別采集大豆葉片提取其基因組DNA，利用引物對(duì)GmSSR13-23進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行60g/L變性聚丙烯酰胺凝膠(交聯(lián)度為5%)電泳，檢測電泳條帶大小。其中，編號(hào)為1-36的家系每個(gè)家系采集5個(gè)植株的葉片等質(zhì)量混合后提取基因組DNA，母本采集10個(gè)植株的葉片等質(zhì)量混合后提取基因組DNA，父本采集10個(gè)植株的葉片等質(zhì)量混合后提取基因組DNA。具體的實(shí)驗(yàn)方法如下:1、用 CTAB 法(Keim P.A rapid protocol for isolating soybean DNA.Soybeangenet newslett, 1988, 15:147-148)提取葉片基因組 DNA(I)取0.5g新鮮葉片放入1.5ml離心管中，用玻璃棒磨為勻漿，加入700 yl經(jīng)65°C預(yù)熱30min的CTAB溶液和20 yl P -巰基乙醇搖勻，放入65°C的水浴鍋中水浴30min。(2)取出離心管，加入700 U I氯仿-異戊醇(24:l/v:v)輕搖幾次，靜置30min后12000rpm,離心 lOmin。(3)吸取上清液，加入2倍體積的冰凍無水乙醇，置于_20°C冰箱30min。12000rpm離心10分鐘讓DNA沉淀，倒掉離心管中乙醇溶液。(4)用75%(V/V)乙醇清洗2_3次，倒乙醇溶液，打開離心管蓋置于通風(fēng)櫥內(nèi)吹干。(5)加入200 U I雙蒸水溶解DNA，用紫外分光光度計(jì)測定DNA的濃度，于_20°C冰箱中保存?zhèn)溆谩?、分別以步驟I提取的中豆29 X中豆32的的F11代家系1_36的基因組DNA為模板，利用引物對(duì)GmSSR13-23進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系如表1:表1.
權(quán)利要求
1.鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒性狀的方法，包括如下步驟:分別以待鑒定大豆的基因組DNA為模板，用由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的兩條單鏈DNA組成的PCR引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測所得到的PCR產(chǎn)物，按照下述方法確定所述待鑒定大豆的抗花葉病毒性狀: 如果待鑒定大豆的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在聚丙烯酰胺凝膠電泳中顯示為與中豆32的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小相同的條帶，所述待鑒定大豆為抗花葉病毒大豆或?yàn)楹蜻x抗花葉病毒大豆，如果所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在聚丙烯酰胺凝膠電泳中顯示為與中豆29的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小相同的條帶，所述待鑒定大豆為非抗花葉病毒大豆或?yàn)楹蜻x非抗花葉病毒大豆； 所述待鑒定大ii選自中ii 29 X中ii 32的雜種后代中的F7及其以后世代的豕系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述聚丙烯酰胺凝膠電泳中，所述聚丙烯酰胺凝膠的濃度為60g/L，所述聚丙烯酰胺凝膠的交聯(lián)度為5%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述PCR擴(kuò)增中先進(jìn)行10個(gè)第一個(gè)循環(huán)后再進(jìn)行25個(gè)第二個(gè)循環(huán)，所述第一個(gè)循環(huán)的引物退火條件為60°C 30s，所述第二個(gè)循環(huán)的引物退火條件為55°C 30s。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:所述第一個(gè)循環(huán)的溫度程序是:先94°C30s，然后60°C 30s，最后72°C Imin ;所述第二個(gè)循環(huán)的溫度程序是:先94°C 30s，然后55°C 30s，最后 72°C Imin。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于:所述待鑒定大豆選自中豆29X中豆32的雜種后代中的F7至F11家系。
6.權(quán)利要求1-5中任一所述的方法的用途，所述用途為1)、2)或3): 1)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法在 大豆育種中的應(yīng)用； 2)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法在大豆抗花葉病毒性狀的早期預(yù)測中的應(yīng)用； 3)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法在篩選抗花葉病毒大豆中的應(yīng)用。
7.鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒性狀的引物對(duì)，名稱為GmSSR13-23，由SEQID N0.1和SEQ ID N0.2所示的兩條單鏈DNA組成。
8.含有權(quán)利要求7所述的引物對(duì)的鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒性狀的試劑或試劑盒。
9.權(quán)利要求7所述的引物對(duì)、權(quán)利要求8所述的試劑或試劑盒的用途，所述用途為a)、b)或 c): a)權(quán)利要求7所述的引物對(duì)、權(quán)利要求8所述的試劑或試劑盒在大豆育種中的應(yīng)用； b)權(quán)利要求7所述的引物對(duì)、權(quán)利要求8所述的試劑或試劑盒在大豆抗花葉病毒性狀的早期預(yù)測中的應(yīng)用； c)權(quán)利要求7所述的引物對(duì)、權(quán)利要求8所述的試劑或試劑盒在篩選抗花葉病毒大豆中的應(yīng)用。
10.一種大豆抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)，其特征在于:所述主效基因位點(diǎn)為qRSC.13-1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種大豆抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)及應(yīng)用。該大豆抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)及其在分子標(biāo)記輔助選擇育種中的應(yīng)用。該抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)為qRSC.13-1,貢獻(xiàn)率為32.4%。與抗花葉病毒主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的分子標(biāo)記為GmSSR13-23。利用緊密連鎖的分子標(biāo)記檢測育種群體家系是否含有該主效基因位點(diǎn)，可預(yù)測其抗花葉病毒性，大大提高了大豆抗花葉病毒育種的選擇效率。
文檔編號(hào)C12N15/11GK103114145SQ20131005381
公開日2013年5月22日 申請日期2013年2月20日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月20日
發(fā)明者陳海峰, 沙愛華, 單志慧, 楊中路, 張曉娟, 張嬋娟, 陳李淼, 陳水蓮, 邱德珍, 周蓉, 吳學(xué)軍, 周新安 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所