高表達達托霉素的菌株及其篩選方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及高表達達托霉素的菌株及其篩選方法，屬于抗生素生產(chǎn)菌株及其篩選領(lǐng)域。菌株的分類命名為玫瑰孢鏈霉菌（Streptomyces?roseosporus)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號分別為CGMCC?NO.6899、NO.7014和NO.7015。本發(fā)明還提供了一種高表達達托霉素的菌株的篩選方法，采用紫外誘變結(jié)合抗生素抗性篩選增加菌株的突變機率，得到的高表達達托霉素的菌株生產(chǎn)達托霉素的產(chǎn)量均在59.86mg/L以上，可高達79.44mg/L。本發(fā)明可以快速、有效地提高達托霉素生產(chǎn)水平，具有十分重要的現(xiàn)實意義。
【專利說明】高表達達托霉素的菌株及其篩選方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及高表達達托霉素的菌株及其篩選方法，屬于抗生素生產(chǎn)菌株及其篩選領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]達托霉素是A21978的N-癸酞基衍生物，由玫瑰孢鏈霉菌代謝產(chǎn)生。達托霉素分子由13個氨基酸組成的環(huán)脂肽與十碳的脂肪酸鏈所組成。當(dāng)A-21978C發(fā)生脫酰作用脫去N末端連接基團時，可得到A-21978C核心，而A21978C核心的N末端再與癸酸發(fā)生酰化作用
后即可得到達托霉素(結(jié)構(gòu)式如下)。
[0003]
【權(quán)利要求】
1.一種高表達達托霉素的菌株，其分類命名為玫瑰孢鏈霉菌(Streptomycesroseosporus),保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏編號為CGMCCN0.6899。
2.—種高表達達托霉素的菌株，其分類命名為玫瑰孢鏈霉菌(Streptomycesroseosporus),保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏編號為CGMCCN0.7014。
3.—種高表達達托霉素的菌株，其分類命名為玫瑰孢鏈霉菌(Streptomycesroseosporus),保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏編號為CGMCCN0.7015。
4.一種高表達達托霉素的菌株的篩選方法，包括如下步驟: (1)篩選具有利福平和/或慶大霉素抗性的玫瑰孢鏈霉菌菌株； (2)從具有利福平和/或慶大霉素抗性的玫瑰孢鏈霉菌菌株中篩選高表達達托霉素的菌株。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高表達達托霉素的菌株的篩選方法，其特征在于:篩選具有利福平和/或慶大霉素抗性的玫瑰孢鏈霉菌菌株的出發(fā)菌株為玫瑰孢鏈霉菌ATCC 31586，或者是經(jīng)過誘變處理的玫瑰孢鏈霉菌菌株。
6.根據(jù)權(quán)利要求 4所述的高表達達托霉素的菌株的篩選方法，其特征在于:具體步驟包括: 1)將玫瑰孢鏈霉菌孢子懸液或者經(jīng)過誘變處理后的玫瑰孢鏈霉菌孢子懸液涂布于含有利福平和/或慶大霉素的固體平板，培養(yǎng)，篩選出抗利福平和/或慶大霉素的玫瑰孢鏈霉菌突變株； 2)分別挑選抗利福平和/或慶大霉素的玫瑰孢鏈霉菌突變株單菌落，進行搖瓶發(fā)酵并檢測達托霉素含量，篩選得到高表達達托霉素的菌株。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的高表達達托霉素的菌株的篩選方法，其特征在于:所述的玫瑰孢鏈霉菌孢子懸液中，孢子濃度為IO5-1O6個/mL ;所述的固體平板為高氏一號培養(yǎng)基；所述的培養(yǎng)為在30°C暗室培養(yǎng)5~7天。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的高表達達托霉素的菌株的篩選方法，其特征在于:固體平板中含有利福平和/或慶大霉素的量為:利福平的濃度為0.1~1.8μ g/mL，或者慶大霉素的濃度為0.r1.1 μ g/mL，或者慶大霉素的濃度為0.1~1.0 μ g/mL，同時利福平的濃度為0.14~L 4 μ g/mL。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的高表達達托霉素的菌株的篩選方法，其特征在于:所述的搖瓶發(fā)酵是將挑選的單菌落移至種子培養(yǎng)基，放大培養(yǎng)后轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基；所述的檢測達托霉素含量的方法為先用HPLC外標法檢測，再用牛津杯法進一步驗證。
10.采用權(quán)利要求4-9中任一項所述的方法篩選得到的菌株，所述的菌株生產(chǎn)達托霉素的產(chǎn)量在59.86mg/L以上。
【文檔編號】C12R1/465GK103937694SQ201310023483
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2013年1月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月22日
【發(fā)明者】劉剛, 劉體顏, 陳惠鵬, 邢玉華, 張部昌 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所