專利名稱：一種利用白酒糟和糖蛋白生產(chǎn)環(huán)保型生物飼料的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種利用白酒糟和糖蛋白生產(chǎn)環(huán)保型生物飼料的方法，屬于微生物飼料添加劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
白酒糟是釀酒業(yè)的副產(chǎn)品，是白酒成熟醪經(jīng)蒸餾而剩下的廢糟液。我國(guó)是白酒生產(chǎn)大國(guó)，每年產(chǎn)糟量在數(shù)千萬噸以上。白酒糟含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸和淀粉等營(yíng)養(yǎng)成分，還含有多種微量元素、維生素和菌體代謝產(chǎn)物等。但由于其淀粉糊精及粗纖維含量高，動(dòng)物難以直接消化利用，而使其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值大幅降低。玉米糖蛋白是口服葡萄糖廠的附屬產(chǎn)品，玉米制品，口感甜，動(dòng)物適口性好，在飼料中添加代替部分玉米不僅飼喂效果好，還可以降低飼料成本。玉米糖蛋白主要含有豐富的粗脂肪、葡萄糖、多種維生素等，能量是玉米的I. 7倍，是喂養(yǎng)畜禽的理想原料。玉米糖蛋白含有95%的玉米脂肪，20%的麩糖。除糖分外，其粗蛋白和氨基酸等營(yíng)養(yǎng)成分相對(duì)較缺乏。同時(shí)，由于其脂肪和糖含量較高，因此在貯存過程中極易發(fā)生氧化變質(zhì)。造成以上兩類副產(chǎn)品作為飼料資源利用率低下的原因還包括第一，白酒糟和玉米糖蛋白都是高水分飼料，含水量在5(Γ60%之間，因此不能參與飼料工業(yè)的產(chǎn)品加工，失去了用料大戶；第二，濕態(tài)的白酒糟和玉米糖蛋白是短命飼料，產(chǎn)出必須及時(shí)利用，久貯則霉壞變質(zhì)，從而失去了飼料資源的穩(wěn)定性；第三，濕態(tài)的白酒糟和玉米糖蛋白是裹足飼料，基本是就地消化，不能遠(yuǎn)銷，因此失去了更大的市場(chǎng)；第四，濕態(tài)的白酒糟和玉米糖蛋白是發(fā)熱飼料，易腐敗變質(zhì)，不宜久存；第五，濕態(tài)的白酒糟和玉米糖蛋白是冷貯飼料，周圍氣溫高能加速品質(zhì)劣變，同時(shí)造成環(huán)境污染；第六，濕態(tài)的白酒糟和玉米糖蛋白是添加飼料，因內(nèi)含酒精、亞硫酸和過多的粗纖維，大大限制了利用比例。鑒于以上原因，白酒糟和玉米糖蛋白飼用顯得蒼白無力，無論哪種方法都不能得到快速、充分利用的效果，資源流失也就突出地表現(xiàn)出來。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，為解決上述問題，提供一種利用白酒糟和糖蛋白生產(chǎn)環(huán)保型生物飼料的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種利用白酒糟和糖蛋白生產(chǎn)環(huán)保型生物飼料的方法，其特征在于(I)將各種發(fā)酵底物原料加入干料混合機(jī)內(nèi)進(jìn)行混合；混合完畢的發(fā)酵底物通過調(diào)質(zhì)器進(jìn)行蒸煮滅菌，再進(jìn)入濕料混合機(jī)中進(jìn)行降溫，然后接種由4種益生菌組成的混合菌種發(fā)酵液進(jìn)行充分混合；(2)接種并混合好的發(fā)酵底物通過自動(dòng)計(jì)量打包系統(tǒng)裝填到新型硅膠呼吸膜飼料發(fā)酵袋中進(jìn)行打包、封口，在發(fā)酵室內(nèi)恒溫條件下發(fā)酵72 120h，即得到所述環(huán)保型生物飼料的成品；所述的發(fā)酵底物的組成為稻糠8 10重量份、白酒糟40 50重量份、玉米糖蛋白10 30重量份、玉米噴漿纖維5 10重量份、玉米粉5 10重量份、麩皮5 10重量份以及糖蜜2 3重量份；混合完畢的發(fā)酵底物水分含量為45% ；所述的混合菌種發(fā)酵液包括康寧木霉(Trichoderma konigii)、酪酸梭狀芽胞桿菌(Clostridium butyricum)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和幾腸球菌(Enterococcus faecalis)菌液。 如上所述的方法，優(yōu)選地，步驟(I)中所述的發(fā)酵底物在調(diào)質(zhì)器中經(jīng)O. 3 O. 4MPa的飽和蒸汽、在140 150°C條件下進(jìn)行瞬時(shí)蒸煮滅菌I 2min。如上所述的方法，優(yōu)選地，步驟(I)中所述的發(fā)酵底物進(jìn)入濕料混合機(jī)后，不斷攪拌并通入冷空氣，使發(fā)酵底物溫度降至30 35°C。如上所述的方法，優(yōu)選地，步驟(2 )中所述的混合菌種發(fā)酵液中，康寧木霉、酪酸梭狀芽胞桿菌、釀酒酵母和糞腸球菌的接種量分別為發(fā)酵底物重量的2 5%、2 5%、5 10%和5 10% ;發(fā)酵底物接種后充分混合2 5min。如上所述的方法，優(yōu)選地，所述的發(fā)酵底物接種并混合后，通過自動(dòng)計(jì)量打包系統(tǒng)裝填到硅膠呼吸膜飼料發(fā)酵袋中進(jìn)行打包、封口，包裝過程中不需將袋內(nèi)空氣排空，包裝好的物料在發(fā)酵室內(nèi)30 35°C條件下發(fā)酵72 120h即為成品。如上所述的方法，優(yōu)選地，所述的新型硅膠呼吸膜飼料發(fā)酵袋的袋體兩端封口為圓形無角設(shè)計(jì)。如上所述的方法，優(yōu)選地，所述的濕料混合機(jī)、調(diào)質(zhì)器和自動(dòng)計(jì)量打包系統(tǒng)均為 316L不銹鋼材質(zhì)。如上所述的方法，優(yōu)選地，所述的混合菌種發(fā)酵液中的各種菌液分別是按以下方法制成的(I)所述康寧木霉菌液的制備方法為制備康寧木霉一級(jí)種子培養(yǎng)基葡糖糖20g，馬鈴薯浸取液lOOOmL，pH自然，在溫度115 121°C下滅菌20 30min ；其中，所述馬鈴薯浸取液的制備方法為取去皮的馬鈴薯200g，切成小塊，加水IOOOmL煮沸30min濾去馬鈴薯塊，將濾液補(bǔ)足至IOOOmL ；制備康寧木霉二級(jí)固體種子培養(yǎng)基麩皮80kg、豆柏粉16kg、硫酸銨2. 5kg、KH2PO4L 5kg，無菌純水100L, pH自然，在溫度115 121°C下滅菌20 30min ；康寧木霉一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝康寧木霉一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，接入康寧木霉菌種斜面制成濃度為I. O 2. OX IO8個(gè)/mL的孢子懸液25mL，25 28°C下以120 150r/min振蕩培養(yǎng)24 48h ；康寧木霉二級(jí)種子培養(yǎng)將上述經(jīng)康寧木霉一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到康寧木霉二級(jí)固體種子培養(yǎng)基中，在25 28°C、相對(duì)濕度85 90%條件下發(fā)酵24 48h，發(fā)酵過程中每隔2 3h通風(fēng)、翻料一次；(2)所述釀酒酵母菌液的制備方法為制備釀酒酵母一級(jí)種子培養(yǎng)基麥芽汁培養(yǎng)基130. lg，蒸餾水IOOOmL混合均勻，在溫度115 121°C下滅菌15 30min ；制備釀酒酵母二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基蔗糖蜜120kg、葡萄糖10kg、麥芽浸粉 10kg、酵母浸粉 10kg、MgSO4 · 7H20 I. 5kg、KH2PO4 2. 0kg，無菌純水 1000L, pH 自然，在溫度115 121°C下滅菌20 30min ；釀酒酵母一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝釀酒酵母一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將釀酒酵母菌種斜面按環(huán)/80 IOOmL的比例接種入釀酒酵母一級(jí)種子培養(yǎng)基中，28 30°C下以100 130r/min振蕩培養(yǎng)24 48h ；釀酒酵母二級(jí)種子培養(yǎng)將上述經(jīng)釀酒酵母一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到釀酒酵母二級(jí)種子罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng)24 48h ；釀酒酵母液體發(fā)酵培養(yǎng)將上述經(jīng)釀酒酵母二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到釀酒酵母發(fā)酵罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以 100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng)24 48h ；(3)所述酪酸梭狀芽胞桿菌菌液的制備方法為制備酪酸梭狀芽胞桿菌一級(jí)種子培養(yǎng)基胰蛋白胨20g、牛肉浸膏10g、酵母膏6g、葡萄糖4g、磷酸氫二鉀2g、磷酸二氫鉀lg、硫酸鎂O. 4g、氯化鈣O. 2g、硫酸亞鐵O. lg、半胱氨酸鹽酸鹽O. 5g,蒸懼水IOOOmL, pH 7. 2 7. 4,在溫度115 121°C下滅菌20 30min ；制備酪酸梭狀芽胞桿菌二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10kg、胰蛋白胨10kg、酵母浸膏 5kg、牛肉浸膏 3kg、K2HP04 2kg,MgSO4 ·7Η20 O. 5kg,MnSO4 ·Η20 0. 2kg,NaHCOlkg、CaCO3 1kg，蒸餾水 1000L, pH6. 8 7. 0，在溫度 115 121°C 下滅菌 20 30min ；酪酸梭狀芽胞桿菌一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝酪酸梭狀芽胞桿菌一級(jí)種子培養(yǎng)基900mL，將酪酸梭狀芽胞桿菌菌種斜面按環(huán)/50 IOOmL的比例接種入酪酸梭狀芽胞桿菌一級(jí)種子培養(yǎng)基中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h ；酪酸梭狀芽胞桿菌二級(jí)種子培養(yǎng)將上述經(jīng)酪酸梭狀芽胞桿菌一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到酪酸梭狀芽胞桿菌二級(jí)種子罐中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h ；酪酸梭狀芽胞桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)將上述經(jīng)酪酸梭狀芽胞桿菌二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到酪酸梭狀芽胞桿菌發(fā)酵罐中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h ；(4)所述糞腸球菌菌液的制備方法為制備糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)基大豆蛋白胨5g、胰蛋白胨5g、酵母浸粉10g、葡萄糖10g，無機(jī)鹽溶液40mL，蒸餾水IOOOmL,培養(yǎng)基煮沸后加入半胱氨酸鹽酸鹽0. 5g，pH 7. 0，在溫度115 121°C下滅菌20 30min ；其中，所述無機(jī)鹽溶液的制備方法為無水CaCl2 0. 2g、MgSO4 · 7H200. 48g，K2HPO4
I.0g, NaCl 2g，NaHCO3 IOg,混合CaCl2和MgSO4在300mL蒸餾水中直至溶解，加500mL蒸餾水，邊攪拌邊緩慢加入其他鹽類，繼續(xù)攪拌直至全部溶解，加200mL蒸餾水混勻，保存到4°C下備用；制備糞腸球菌二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基全脂奶粉10kg、牛肉浸粉10kg、酵母浸粉 10kg、葡萄糖 5kg、乙酸鈉 5kg、朽1 檬酸銨 2kg、Tween80 lkg、K2HPO4 2kg、MgSO4 · 7H20
0.2kg,MnSO4 ·Η20 0. 05kg，蒸餾水IOOOmL混合均勻，pH6. 8，在溫度115 121 °C下滅菌20 30min ；糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)基900mL，將糞腸球菌菌種斜面按環(huán)/50 IOOmL的比例接種入糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)基中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h ;接種前，將所述糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)基煮沸驅(qū)氧；糞腸球菌二級(jí)種子培養(yǎng)將上述經(jīng)糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到糞腸球菌二級(jí)種子罐中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h ；糞腸球菌液體發(fā)酵培養(yǎng)將上述經(jīng)糞腸球菌二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到糞腸球菌發(fā)酵罐中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h。如上所述方法制備得到環(huán)保型生物飼料。按照如上所述方法制備得到的環(huán)保型生物飼料，該產(chǎn)品中粗蛋白(DM)≥19. 52%、粗脂肪(DM)≥6. 75%、粗纖維(DM) < 7. 80%、釀酒酵母(CFU/g)≥9. 50 X 108、酪酸梭狀芽胞桿菌(CFU/g)≥4. 50父108、糞腸球菌(0卩~8)8. ≥OOXlO80本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明是選用稻糠、白酒糟、玉米糖蛋白、玉米噴漿纖維、玉米粉和糖蜜為原料，經(jīng)混合、滅菌后接種由康寧木霉(Trichoderma konigii)、酪酸梭狀芽胞桿菌(Clostridiumbutyricum)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和幾腸球菌(Enterococcusfaecalis)組成的混合菌液，通過硅膠呼吸膜固態(tài)發(fā)酵方法制得的微生物固態(tài)發(fā)酵飼料產(chǎn)品。本發(fā)明生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本較低，產(chǎn)品具有較高的活菌數(shù)和粗蛋白以及較高的粗脂肪，具有微生態(tài)制劑與蛋白飼料的雙重特性，產(chǎn)品能夠獲得較高的經(jīng)濟(jì)效益。同時(shí)采用硅膠呼吸膜飼料發(fā)酵袋進(jìn)行發(fā)酵，使得微生物好氧發(fā)酵和厭氧發(fā)酵能在同一個(gè)環(huán)境下進(jìn)行，接種的微生物組合巧妙，能有效抑制大腸桿菌和沙門氏菌，同時(shí)又能促進(jìn)有益菌的快速生長(zhǎng)。更具體地說，本發(fā)明提供的利用白酒糟和糖蛋白生產(chǎn)環(huán)保型生物飼料的方法具有以下優(yōu)點(diǎn)1、采用本發(fā)明方法，白酒糟和玉米糖蛋白經(jīng)過特定的纖維素分解菌、飼料酵母及糞腸球菌進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)后，不僅能使其纖維素降低，蛋白質(zhì)升高，而且由于產(chǎn)品具有較高的纖維素酶活和較高的活性酵母細(xì)胞數(shù)，因此在動(dòng)物飼養(yǎng)中，可提高飼料的轉(zhuǎn)化率，并具有抗病和促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。2、本發(fā)明方法采用硅膠呼吸膜飼料發(fā)酵袋進(jìn)行發(fā)酵，使得微生物好氧發(fā)酵和厭氧發(fā)酵能在同一個(gè)環(huán)境下進(jìn)行，接種的微生物組合巧妙，能有效抑制大腸桿菌和沙門氏菌，同時(shí)又能促進(jìn)有益菌的快速生長(zhǎng)。3、本發(fā)明方法采用硅膠呼吸膜固態(tài)發(fā)酵方法，能使活菌在自然條件下能長(zhǎng)期保持其高活性。原料接種后就密封包裝，發(fā)酵在包裝袋內(nèi)進(jìn)行。好氧菌在生長(zhǎng)繁殖過程中首先將包裝內(nèi)氧氣耗盡，發(fā)酵產(chǎn)生的氣體從呼吸膜排出，確保了包裝袋內(nèi)的無氧和無雜菌污染的環(huán)境。同時(shí)后期糞腸球菌在厭氧條件下發(fā)酵產(chǎn)生了大量的有機(jī)酸，進(jìn)一步保證了產(chǎn)品的長(zhǎng)期運(yùn)輸和貯存的穩(wěn)定性。4、采用本發(fā)明方法，白酒糟和玉米糖蛋白經(jīng)過微生物固態(tài)發(fā)酵后其中殘留的如酒精、亞硫酸和過多的粗纖維等抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)，都會(huì)得到有效的降解，從而有效的提聞廣品的詞用價(jià)值。5、采用本發(fā)明方法生產(chǎn)的環(huán)保型生物飼料中，粗蛋白(DM)≥19. 52%、粗脂肪(DM)≥6. 75%、粗纖維(DM) < 7. 80%、釀酒酵母(CFU/g)≥9. 50 X 108、酪酸梭狀芽胞桿菌(CFU/g)≥ 4. 50X 108、糞腸球菌(CFU/g)≥ 8. OOXlO80


圖I為本發(fā)明方法的流程示意圖。
具體實(shí)施例方式以下通過具體實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)及特點(diǎn)，但這些實(shí)施例并非用以限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明以下實(shí)施例中所用康寧木霉(Trichoderma konigii)、酪酸梭狀芽胞桿菌(Clostridium butyricum)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和幾腸球菌 (Enterococcus faecalis)菌種是分別購(gòu)買于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)和中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)的野生菌種。保藏號(hào)分別為=CGMCC 3.4290、CICC 20763、CGMCC 2. 1190、CICC21869。實(shí)施例I參見圖1，按照以下方法制備本實(shí)施例的環(huán)保型生物飼料I.準(zhǔn)確稱取稻糠80kg、白酒糟450kg、玉米糖蛋白300kg、玉米噴衆(zhòng)纖維50kg、玉米粉50kg、麩皮50kg、糖蜜20kg，混合均勻制成發(fā)酵底物，發(fā)酵底物水分含量為45%。2.將發(fā)酵底物通過調(diào)質(zhì)器經(jīng)0. 3MPa的飽和蒸汽，在140°C條件下進(jìn)行瞬時(shí)蒸煮滅菌 lmin。3.發(fā)酵底物滅菌結(jié)束后進(jìn)入濕料混合機(jī)，不斷攪拌并通入冷空氣，使發(fā)酵底物溫度降至32°C左右。4.將康寧木霉、酪酸梭狀芽胞桿菌、釀酒酵母和糞腸球菌分別按發(fā)酵底物重量的5%、5%、10%和10%進(jìn)行接種；然后充分混合4min。5.發(fā)酵底物接種混合好后，通過自動(dòng)計(jì)量打包系統(tǒng)裝填到硅膠呼吸膜飼料發(fā)酵袋中進(jìn)行打包、封口，包裝過程中不需將袋內(nèi)空氣排空，包裝好的物料在發(fā)酵室內(nèi)35°C條件下發(fā)酵96h即為成品。6. 將康寧木霉(Trichoderma konigii)、酪酸梭狀芽胞桿菌(Clostridiumbutyricum)> 釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和幾腸球菌(Enterococcusfaecalis)分別按以下方法進(jìn)行增菌培養(yǎng)和液態(tài)發(fā)酵(I)康寧木霉(Trichoderma konigii )A.制備一級(jí)種子培養(yǎng)基葡糖糖20g，馬鈴薯浸取液lOOOmL，pH自然，在溫度121°C 下滅菌 30min。馬鈴薯浸取液的制備方法取去皮的馬鈴薯200g，切成小塊，加水IOOOmL煮沸30min濾去馬鈴薯塊,將濾液補(bǔ)足至1000mL。B.制備二級(jí)固體種子培養(yǎng)基麩皮80kg、豆柏粉16kg、硫酸銨2. 5kg、KH2PO4
I.5kg,無菌純水100L, pH自然,在溫度121°C下滅菌30min。C.培養(yǎng)條件一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，接入菌種斜面制成的孢子懸液(I. 5 X IO8 個(gè) /mL) 25mL, 28°C、130r/min、振蕩培養(yǎng) 24h。二級(jí)種子培養(yǎng)100L自動(dòng)固態(tài)發(fā)酵罐裝二級(jí)固體種子培養(yǎng)基50kg，將上述經(jīng)一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的重量比接種到二級(jí)固體種子培養(yǎng)基中，28°C、相對(duì)濕度85 90%條件下發(fā)酵48h，發(fā)酵過程中每隔2h通風(fēng)、翻料一次。(2)釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)A.制備一級(jí)種子培養(yǎng)基麥芽汁培養(yǎng)基130. Ig,蒸餾水IOOOmL混合均勻，在溫度115。。下滅菌 15min。B.制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基蔗糖蜜120kg、葡萄糖10kg、麥芽浸粉10kg、酵母浸粉 10kg、MgSO4 · 7H20 I. 5kg、KH2PO4 2. 0kg，無菌純水 1000L, pH 自然，在溫度121°C 下滅菌 30min。
C.培養(yǎng)條件一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將菌種斜面按環(huán)/IOOmL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，30°C、130r/min、振蕩培養(yǎng)24h。二級(jí)種子培養(yǎng)20L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝二級(jí)種子培養(yǎng)基10L，將上述經(jīng)一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，30°C、通風(fēng)量體積比I: I、機(jī)械攪拌120r/min、培養(yǎng) 24h。液體發(fā)酵培養(yǎng)200L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝發(fā)酵培養(yǎng)基100L，將上述經(jīng)二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的重量比接種到發(fā)酵罐中，30°C、通風(fēng)量體積比1:1、機(jī)械攪拌120r/min、培養(yǎng) 24h。(3)酪酸梭狀芽胞桿菌(Clostridium butyricum)A.制備一級(jí)種子培養(yǎng)基胰蛋白胨20g、牛肉浸膏10g、酵母膏6g、葡萄糖4g、磷酸氫二鉀2g、磷酸二氫鉀lg、硫酸鎂0. 4g、氯化鈣0. 2g、硫酸亞鐵0. lg、半胱氨酸鹽酸鹽
0.5g，蒸餾水 lOOOmL, pH 7. 2，在溫度 121°C 下滅菌 30min。B.制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10kg、胰蛋白胨10kg、酵母浸膏5kg、牛肉浸膏 3kg、K2HP04 2kg,MgSO4 ·7Η20 0. 5kg,MnSO4 ·Η200. 2kg,NaHCO IkgXaCO3 lkg,蒸餾水1000L，pH7. 0，在溫度121°C下滅菌30min。C.培養(yǎng)條件一級(jí)種子培養(yǎng)IOOOmL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基900mL，將菌種斜面按環(huán)/50mL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，37°C靜置培養(yǎng)24h。二級(jí)種子培養(yǎng)10L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝二級(jí)種子培養(yǎng)基5L，將上述經(jīng)一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，37°C靜置培養(yǎng)24h。液體發(fā)酵培養(yǎng)100L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝發(fā)酵培養(yǎng)基50L，將上述經(jīng)一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的重量比接種到發(fā)酵罐中，37°C靜置培養(yǎng)24h。(4)幾腸球菌(Enterococcus faecalis)A.制備一級(jí)種子培養(yǎng)基大豆蛋白胨5g、胰蛋白胨5g、酵母浸粉10g、葡萄糖IOg,無機(jī)鹽溶液40mL，蒸餾水IOOOmL,半胱氨酸鹽酸鹽0. 5g (培養(yǎng)基煮沸后加入)，pH 7. 0，在溫度121°C下滅菌30min，在接種前先煮沸驅(qū)氧后再進(jìn)行接種。無機(jī)鹽溶液=CaCl2(無水)0. 2g、MgSO4 · 7H20 0. 48g，K2HPO4 I. 0g, NaC12g，NaHCO310g，混合CaCl2和MgSO4在300mL蒸餾水中直至溶解，加500mL蒸餾水，邊攪拌邊緩慢加入其他鹽類，繼續(xù)攪拌直至全部溶解，加200mL蒸餾水混勻，保存到4°C下備用。B.制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基全脂奶粉10kg、牛肉浸粉10kg、酵母浸粉10kg、葡萄糖 5kg、乙酸鈉 5kg、朽1 檬酸銨 2kg、Tween80 lkg、K2HP042kg、MgSO4 · 7H20 0. 2kg、MnSO4 · H2O 0. 05kg，蒸餾水 IOOOmL 混合均勻，ρΗ6· 8，在溫度 121°C下滅菌 30min。C.培養(yǎng)條件一級(jí)種子培養(yǎng)IOOOmL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基900mL，將菌種斜面按環(huán)/50mL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，37°C靜置培養(yǎng)24h ;在接種前先將一級(jí)種子培養(yǎng)基煮沸驅(qū)氧，接種后初期利用三角瓶中剩余空間中的少量氧氣進(jìn)行種子培養(yǎng)，氧氣消耗完畢之后形成厭氧培養(yǎng)。二級(jí)種子培養(yǎng)20L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝二級(jí)種子培養(yǎng)基10L，將上述經(jīng)一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，37°C靜置培養(yǎng)24h。
液體發(fā)酵培養(yǎng)200L自動(dòng)發(fā)酵罐裝發(fā)酵培養(yǎng)基100L，將上述經(jīng)一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的重量比接種到發(fā)酵罐中，37°C靜置培養(yǎng)24h。7.按照以上方法制備得到的環(huán)保型生物飼料，該產(chǎn)品中粗蛋白(DM)彡20. 03%、粗脂肪(DM)彡12. 65%、粗纖維(DM) < 6. 55%、釀酒酵母(CFU/g)彡2. 50 X 109、酪酸梭狀芽胞桿菌(CFU/g)彡 5. 00X 108、糞腸球菌(CFU/g)彡 I. 5X IO9。各項(xiàng)指標(biāo)參見表I。表I底物發(fā)酵前與發(fā)酵后營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)比對(duì)表(DM)
fi蛋白粗脂脅粗纖維釀酒酵母酪酸梭狀芽胞.糞腸球菌
項(xiàng)目
__(%) (%) (%) (CFU/g)桿菌(CFU/g) (CFU/g)
發(fā)酵前 13.95 10.69 13.18 ———
發(fā)酵后 20. 03 12.65 6.55 2.00χ109 5.OOxlO8 1.50χ109
變化率 43.37 18.33 50.30 一一—實(shí)施例2參見圖1，按照以下方法制備本實(shí)施例的環(huán)保型生物飼料I.準(zhǔn)確稱取稻糠100kg、白酒糟500kg、玉米糖蛋白100kg、玉米噴衆(zhòng)纖維70kg、玉米粉100kg、麩皮100kg、糖蜜30kg，混合均勻制成發(fā)酵底物，發(fā)酵底物水分含量為45%。2.將發(fā)酵底物通過調(diào)質(zhì)器經(jīng)O. 3MPa的飽和蒸汽，在140°C條件下進(jìn)行瞬時(shí)蒸煮滅菌 lmin。3.發(fā)酵底物滅菌結(jié)束后進(jìn)入濕料混合機(jī)，不斷攪拌并通入冷空氣，使發(fā)酵底物溫度降至32°C左右。4.將康寧木霉、酪酸梭狀芽胞桿菌、釀酒酵母和糞腸球菌分別按發(fā)酵底物重量的5%、5%、5%和5%進(jìn)行接種；然后充分混合4min。5.發(fā)酵底物接種混合好后，通過自動(dòng)計(jì)量打包系統(tǒng)裝填到硅膠呼吸膜飼料發(fā)酵袋中進(jìn)行打包、封口，包裝過程中不需將袋內(nèi)空氣排空，包裝好的物料在發(fā)酵室內(nèi)35°C條件下發(fā)酵96h即為成品。6. 將康寧木霉(Trichoderma konigii)、酪酸梭狀芽胞桿菌(Clostridiumbutyricum)> 釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和幾腸球菌(Enterococcusfaecalis)分別按如實(shí)施例I所述的方法進(jìn)行增菌培養(yǎng)和液態(tài)發(fā)酵。7.按照以上方法制備得到的環(huán)保型生物飼料，該產(chǎn)品中粗蛋白(DM)彡19.52%、粗脂肪(DM)彡6. 75%、粗纖維(DM) < 7. 80%、釀酒酵母(CFU/g)彡9. 50 X 108、酪酸梭狀芽胞桿菌(CFU/g)彡4. 50X 108、糞腸球菌(CFU/g) ^ 8. OOXlO80各項(xiàng)指標(biāo)參見表2。表2底物發(fā)酵前與發(fā)酵后營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)比對(duì)表(DM)
權(quán)利要求
1.一種利用白酒糟和糖蛋白生產(chǎn)環(huán)保型生物飼料的方法，其特征在于 (1)將各種發(fā)酵底物原料加入干料混合機(jī)內(nèi)進(jìn)行混合；混合完畢的發(fā)酵底物通過調(diào)質(zhì)器進(jìn)行蒸煮滅菌，再進(jìn)入濕料混合機(jī)中進(jìn)行降溫，然后接種混合菌種發(fā)酵液進(jìn)行充分混合； (2)接種并混合好的發(fā)酵底物通過自動(dòng)計(jì)量打包系統(tǒng)裝填到硅膠呼吸膜飼料發(fā)酵袋中進(jìn)行打包、封口，在發(fā)酵室內(nèi)恒溫條件下發(fā)酵72 120h，即得到所述環(huán)保型生物飼料的成品; 所述的發(fā)酵底物的組成為稻糠8 10重量份、白酒糟40 50重量份、玉米糖蛋白10 30重量份、玉米噴漿纖維5 10重量份、玉米粉5 10重量份、麩皮5 10重量份以及糖蜜2 3重量份；混合完畢的發(fā)酵底物水分含量為45% ； 所述的混合菌種發(fā)酵液包括康寧木霉、酪酸梭狀芽胞桿菌、釀酒酵母和糞腸球菌菌液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟(I)中所述的發(fā)酵底物在調(diào)質(zhì)器中經(jīng)O.3 O. 4MPa的飽和蒸汽、在140 15CTC條件下進(jìn)行瞬時(shí)蒸煮滅菌I 2min。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟(I)中所述的發(fā)酵底物進(jìn)入濕料混合機(jī)后，不斷攪拌并通入冷空氣，使發(fā)酵底物溫度降至30 35°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的混合菌種發(fā)酵液中，康寧木霉、酪酸梭狀芽胞桿菌、釀酒酵母和糞腸球菌的接種量分別為發(fā)酵底物重量的2 5%、2 5%、5 10%和5 10% ;發(fā)酵底物接種后充分混合2 5min。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述的發(fā)酵底物接種并混合后，通過自動(dòng)計(jì)量打包系統(tǒng)裝填到硅膠呼吸膜飼料發(fā)酵袋中進(jìn)行打包、封口，包裝過程中不需將袋內(nèi)空氣排空，包裝好的物料在發(fā)酵室內(nèi)30 35°C條件下發(fā)酵72 120h即為成品。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述的新型硅膠呼吸膜飼料發(fā)酵袋的袋體兩端封口為圓形無角設(shè)計(jì)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述的濕料混合機(jī)、調(diào)質(zhì)器和自動(dòng)計(jì)量打包系統(tǒng)均為316L不銹鋼材質(zhì)。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述的混合菌種發(fā)酵液中的各種菌液分別是按以下方法制成的 (I)所述康寧木霉囷液的制備方法為 制備康寧木霉一級(jí)種子培養(yǎng)基葡糖糖20g，馬鈴薯浸取液lOOOmL，pH自然，在溫度115 121°C 下滅菌 20 30min ； 其中，所述馬鈴薯浸取液的制備方法為取去皮的馬鈴薯200g，切成小塊，加水IOOOmL煮沸30min濾去馬鈴薯塊,將濾液補(bǔ)足至IOOOmL ； 制備康寧木霉二級(jí)固體種子培養(yǎng)基麩皮80kg、豆柏粉16kg、硫酸銨2. 5kg、KH2PO4L 5kg，無菌純水100L, pH自然，在溫度115 121°C下滅菌20 30min ； 康寧木霉一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝康寧木霉一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL,接入康寧木霉菌種斜面制成濃度為I. O 2. OX IO8個(gè)/mL的孢子懸液25mL，25 28°C下以120 150r/min振蕩培養(yǎng)24 48h ； 康寧木霉二級(jí)種子培養(yǎng)將上述經(jīng)康寧木霉一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到康寧木霉二級(jí)固體種子培養(yǎng)基中，在25 28°C、相對(duì)濕度85 90%條件下發(fā)酵·24 48h，發(fā)酵過程中每隔2 3h通風(fēng)、翻料一次； (2)所述釀酒酵母菌液的制備方法為 制備釀酒酵母一級(jí)種子培養(yǎng)基麥芽汁培養(yǎng)基130. lg，蒸餾水IOOOmL混合均勻，在溫度115 121 °C下滅菌15 30min ； 制備釀酒酵母二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基蔗糖蜜120kg、葡萄糖10kg、麥芽浸粉·10kg、酵母浸粉 10kg、MgSO4 · 7H20 I. 5kg、KH2PO4 2. 0kg，無菌純水 1000L, pH 自然，在溫度·115 121°C 下滅菌 20 30min ； 釀酒酵母一級(jí)種子培養(yǎng)=IOOOmL三角瓶中裝釀酒酵母一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將釀酒酵母菌種斜面按環(huán)/80 IOOmL的比例接種入釀酒酵母一級(jí)種子培養(yǎng)基中，28 30°C下以·100 130r/min振蕩培養(yǎng)24 48h ； 釀酒酵母二級(jí)種子培養(yǎng)將上述經(jīng)釀酒酵母一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到釀酒酵母二級(jí)種子罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比為1:0.5 I的條件下、以·100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng)24 48h ； 釀酒酵母液體發(fā)酵培養(yǎng)將上述經(jīng)釀酒酵母二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到釀酒酵母發(fā)酵罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 ·120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng)24 48h ； (3)所述酪酸梭狀芽胞桿菌菌液的制備方法為 制備酪酸梭狀芽胞桿菌一級(jí)種子培養(yǎng)基胰蛋白胨20g、牛肉浸膏10g、酵母膏6g、葡萄糖4g、磷酸氫二鉀2g、磷酸二氫鉀lg、硫酸鎂O. 4g、氯化鈣O. 2g、硫酸亞鐵O. lg、半胱氨酸鹽酸鹽O. 5g，蒸餾水lOOOmL，pH 7. 2 7. 4，在溫度115 121 °C下滅菌20 30min ； 制備酪酸梭狀芽胞桿菌二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10kg、胰蛋白胨10kg、酵母浸膏 5kg、牛肉浸膏 3kg、K2HP04 2kg,MgSO4 ·7Η20 0. 5kg、MnS04 .H2O 0. 2kg,NaHCO 1kg、CaCO3 1kg，蒸餾水 1000L，ρΗ6· 8 7. 0，在溫度 115 121°C 下滅菌 20 30min ; 酪酸梭狀芽胞桿菌一級(jí)種子培養(yǎng)=IOOOmL三角瓶中裝酪酸梭狀芽胞桿菌一級(jí)種子培養(yǎng)基900mL，將酪酸梭狀芽胞桿菌菌種斜面按環(huán)/50 IOOmL的比例接種入酪酸梭狀芽胞桿菌一級(jí)種子培養(yǎng)基中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h ； 酪酸梭狀芽胞桿菌二級(jí)種子培養(yǎng)將上述經(jīng)酪酸梭狀芽胞桿菌一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到酪酸梭狀芽胞桿菌二級(jí)種子罐中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h ； 酪酸梭狀芽胞桿菌液體發(fā)酵培養(yǎng)將上述經(jīng)酪酸梭狀芽胞桿菌二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到酪酸梭狀芽胞桿菌發(fā)酵罐中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h ； (4)所述糞腸球菌菌液的制備方法為 制備糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)基大豆蛋白胨5g、胰蛋白胨5g、酵母浸粉10g、葡萄糖·10g，無機(jī)鹽溶液40mL，蒸餾水IOOOmL,培養(yǎng)基煮沸后加入半胱氨酸鹽酸鹽0. 5g，pH 7. 0，在溫度115 121°C下滅菌20 30min ； 其中，所述無機(jī)鹽溶液的制備方法為無水CaCl2 O. 2g、MgSO4 · 7Η200· 48g，K2HPO4·1.0g, NaCl 2g，NaHCO3 IOg,混合CaCl2和MgSO4在300mL蒸餾水中直至溶解，加500mL蒸餾水，邊攪拌邊緩慢加入其他鹽類，繼續(xù)攪拌直至全部溶解，加200mL蒸餾水混勻，保存到4°C下備用；制備糞腸球菌二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基全脂奶粉10kg、牛肉浸粉10kg、酵母浸粉 10kg、葡萄糖 5kg、乙酸鈉 5kg、朽1 檬酸銨 2kg、Tween80 1kg、K2HPO4 2kg、MgSO4 · 7H20,0.2kg,MnSO4 ·Η20 0. 05kg，蒸餾水IOOOmL混合均勻，pH6. 8，在溫度115 121 °C下滅菌20 30min ； 糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)IOOOmL三角瓶中裝糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)基900mL,將糞腸球菌菌種斜面按環(huán)/50 IOOmL的比例接種入糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)基中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h ;接種前，將所述糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)基煮沸驅(qū)氧； 糞腸球菌二級(jí)種子培養(yǎng)將上述經(jīng)糞腸球菌一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到糞腸球菌二級(jí)種子罐中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h ； 糞腸球菌液體發(fā)酵培養(yǎng)將上述經(jīng)糞腸球菌二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到糞腸球菌發(fā)酵罐中，35 37°C靜置培養(yǎng)24 48h。
9.按照權(quán)利要求I 8中任一項(xiàng)所述方法制備得到環(huán)保型生物飼料。
全文摘要
一種利用白酒糟和糖蛋白生產(chǎn)環(huán)保型生物飼料的方法，其是將各種發(fā)酵底物原料加入干料混合機(jī)內(nèi)進(jìn)行混合；混合完畢的發(fā)酵底物通過調(diào)質(zhì)器進(jìn)行蒸煮滅菌，再進(jìn)入濕料混合機(jī)中進(jìn)行降溫，然后接種混合菌種發(fā)酵液進(jìn)行充分混合；接種并混合好的發(fā)酵底物通過自動(dòng)計(jì)量打包系統(tǒng)裝填到新型硅膠呼吸膜飼料發(fā)酵袋中進(jìn)行打包、封口，在發(fā)酵室內(nèi)恒溫條件下發(fā)酵72～120h，即得到所述環(huán)保型生物飼料的成品；所述發(fā)酵底物的組成為稻糠8～10重量份、白酒糟40～50重量份、玉米糖蛋白10～30重量份、玉米噴漿纖維5～10重量份、玉米粉5～10重量份、麩皮5～10重量份以及糖蜜2～3重量份；混合完畢的發(fā)酵底物水分含量為45%；所述的混合菌種發(fā)酵液包括康寧木霉、酪酸梭狀芽胞桿菌、釀酒酵母和糞腸球菌菌液。
文檔編號(hào)C12N1/18GK102960541SQ201210506480
公開日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2012年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月30日
發(fā)明者張有聰, 郝永清, 任國(guó)軍, 岳彥, 任宏偉 申請(qǐng)人:張有聰