專利名稱：葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物配制方法及制劑的制作方法
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物配制方法及制劑技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種室內(nèi)質(zhì)控物，尤其涉及一種測(cè)定葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性的室內(nèi)質(zhì)控物。背景技術(shù)：
葡萄糖_6_ 憐酸脫氧酶(glucose-6-phosphatase dehydrogenase, G-6-PD)缺乏癥為紅細(xì)胞內(nèi)該酶顯著缺乏所致的一種遺傳性疾病，俗稱蠶豆病。其主要臨床表現(xiàn)是溶血性貧血。
本病發(fā)生溶血的機(jī)制尚未完全明了，目前認(rèn)為葡萄糖-6-磷酸脫氫酶是紅細(xì)胞葡萄糖磷酸戊糖旁路代謝中所必需的脫氫酶，它使6-磷酸葡萄糖釋出H+，從而使氧化型輔酶II(NADP+)還原成還原型輔酶II (NADPH)，NADPH是紅細(xì)胞內(nèi)抗氧化的重要物質(zhì)，它能使紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的氧化型谷胱甘肽(GSSG)還原成還原型谷胱甘肽(GSH)和維持過(guò)氧化氫酶 (Catalase7Cat)的活性。Cat是過(guò)氧化氫(H202)還原成水的還原酶。GSH的主要作用是 ①保護(hù)紅細(xì)胞內(nèi)含巰基(-SH)的血紅蛋白、酶蛋白和膜蛋白的完整性，避免H202對(duì)含-SH 物質(zhì)的氧化。②與谷胱甘肽過(guò)氧化氫(GSHPX)共同使H202還原成水。葡萄糖_6_磷酸脫氫酶缺乏時(shí)，NADPH生成不足，Cat和GSH減少。因此，當(dāng)機(jī)體受到氧化物侵害時(shí)，氧化作用產(chǎn)生的H202不能被及時(shí)還原成水，過(guò)多的H202作用于含-SH的血紅蛋白、膜蛋白和酶蛋白致血紅蛋白和膜蛋白均發(fā)生氧化損傷。血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白和變形珠蛋白小體 (Heinzbody),紅細(xì)胞膜的過(guò)氧損傷則致膜脂質(zhì)和膜蛋白巰基的氧化,上述作用最終造成細(xì)胞的氧化損傷和溶血。
測(cè)定紅細(xì)胞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性是診斷本病的主要手段。
2006年衛(wèi)生部頒布j的《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》第二十五條規(guī)定“醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)對(duì)開展的臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，繪制質(zhì)量控制圖”。目前， 多數(shù)定量檢測(cè)(如谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定等)已有商品化質(zhì)控物，但葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定沒有商品化質(zhì)控物，如不自行配制就難以開展室內(nèi)質(zhì)控。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物的配制方法及制劑
本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的
所述葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物的配制方法，包括如下步驟
(I)配制咪唑緩沖液秤取咪唑、二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTANa2 -2H20)、酶保護(hù)劑、疊氮鈉適量，溶于900ml蒸餾水中，用lmol/L醋酸調(diào)節(jié)pH至7. 4，加蒸餾水稀釋至1L。
(2)配制葡萄糖-6-磷酸脫氫酶高、中、低濃度質(zhì)控物取上述咪唑緩沖液三份，分別加入適量葡萄糖-6-磷酸脫氫酶至終濃度約為6000U/L、3000U/L、1000U/L。
(3)分裝與保存將葡萄糖-6-磷酸脫氫酶質(zhì)控物分裝至一次性塑料離心管，置-20°C冰箱保存。
高濃度葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物制劑的成份為
咪唑(g)3. 4 至 34;
EDTANa2 · 2H20 (g) O. 93 至 9. 3 ;
酶保護(hù)劑(g) 5至20;
疊氮鈉(g)I 至 10;
G-6-PD (U) 5000-7000 ；
lmol/L 醋酸調(diào) pH 至 7. 4 ;
H20(ml) 1000 ；
中濃度葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物制劑的成份為
咪唑(g)3. 4 至 34;
EDTANa2 · 2H20 (g) O. 93 至 9. 3 ;
酶保護(hù)劑(g) 5至20 ;
疊氮鈉(g)I 至 10 ;
G-6-PD(U)2000-4000 ；
lmol/L 醋酸調(diào) pH 至 7. 4 ;
H20(ml) 1000 ；
低濃度葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物制劑的成份為
咪唑(g)3. 4 至 34 ;
EDTANa2 · 2H20 (g) O. 93 至 9. 3 ;
酶保護(hù)劑(g) 5至20;
疊氮鈉(g)I 至 10 ;
G-6-PD(U)500-1500 ；
lmol/L 醋酸調(diào) pH 至 7. 4 ;
H20(ml) 1000。
本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明可作為葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控物，既可監(jiān)測(cè)相應(yīng)試劑在流通、保存、使用過(guò)程中是否出現(xiàn)變質(zhì)，還可監(jiān)測(cè)儀器設(shè)備的運(yùn)行狀況，這既是法規(guī)的要求，更是實(shí)際工作的迫切需要，本發(fā)明制備的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶高、中、低濃度質(zhì)控物均一性好，管間差異小于2%，本發(fā)明制備的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶高、中、低濃度質(zhì)控物中均含有防腐劑和酶保護(hù)劑，在低溫保存條件下，有效期大于一年。
具體實(shí)施方式
下面根據(jù)具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述
實(shí)施例I :
所述葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物的配制方法，包括如下步驟
(I)配制咪唑緩沖液秤取咪唑、二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTANa2 -2H20)、酶保護(hù)劑、疊氮鈉適量，溶于900ml蒸餾水中，用lmol/L醋酸調(diào)節(jié)pH至7. 4，加蒸餾水稀釋至1L。
(2)配制葡萄糖-6-磷酸脫氫酶高濃度質(zhì)控物取上述咪唑緩沖液三份，分別加入適量葡萄糖-6-磷酸脫氫酶至終濃度約為6000U/L。4
(3)分裝與保存將葡萄糖-6-磷酸脫氫酶質(zhì)控物分裝至一次性塑料離心管，置-20°C冰箱保存。
高濃度葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物制劑的成份為
咪唑(g)3.4 ;
EDTANa2 · 2H20(g) O. 93 ；
酶保護(hù)劑(g) 5 ；
疊氮鈉(g) I ;
G-6-PD(U)5000 ；
lmol/L醋酸調(diào)pH至7. 4 ;
H20(ml) 1000 ；
使用本發(fā)明的高值質(zhì)控物開展葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定室內(nèi)質(zhì)控一年，累積均值為6017U/L，累積標(biāo)準(zhǔn)差為175. 7U/L，累積CV值為2. 92%。
實(shí)施例2
所述葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物的配制方法，包括如下步驟
(I)配制咪唑緩沖液秤取咪唑、二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTANa2 ·2Η20)、酶保護(hù)劑、疊氮鈉適量，溶于900ml蒸餾水中，用lmol/L醋酸調(diào)節(jié)pH至7. 4，加蒸餾水稀釋至1L。
(2)配制葡萄糖-6-磷酸脫氫酶中濃度質(zhì)控物取上述咪唑緩沖液三份，分別加入適量葡萄糖-6-磷酸脫氫酶至終濃度約為3000U/L。
(3)分裝與保存將葡萄糖-6-磷酸脫氫酶質(zhì)控物分裝至一次性塑料離心管，置-20°C冰箱保存。
中濃度葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物制劑的成份為
咪唑(g) 18 ；
EDTANa2 · 2H20(g) 4. 5 ；
酶保護(hù)劑(g) 12 ;
疊氮鈉(g) 5 ；
G-6-PD(U)3000 ；
lmol/L醋酸調(diào)pH至7. 4 ;
H20(ml) 1000 ；
使用本發(fā)明的中值質(zhì)控物開展葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定室內(nèi)質(zhì)控一年，累積均值為2976U/L,累積標(biāo)準(zhǔn)差為103. 3U/L，累積CV值為3. 47%.
實(shí)施例3
所述葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物的配制方法，包括如下步驟
(I)配制咪唑緩沖液秤取咪唑、二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTANa2 ·2Η20)、酶保護(hù)劑、疊氮鈉適量，溶于900ml蒸餾水中，用lmol/L醋酸調(diào)節(jié)pH至7. 4，加蒸餾水稀釋至1L。
(2)配制葡萄糖-6-磷酸脫氫酶低濃度質(zhì)控物取上述咪唑緩沖液三份，分別加入適量葡萄糖-6-磷酸脫氫酶至終濃度約為1000U/L。
(3)分裝與保存將葡萄糖-6-磷酸脫氫酶質(zhì)控物分裝至一次性塑料離心管，置-20°C冰箱保存。
低濃度葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物制劑的成份為
咪唑(g)34;
EDTANa2 · 2H20 (g) 9. 3 ；
酶保護(hù)劑(g) 20 ；
疊氮鈉(g)10 ；
G-6-PD(U) 1500 ；
lmol/L 醋酸調(diào) pH 至 7. 4 ;
H20(ml) 1000。
使用本發(fā)明的低值質(zhì)控物開展葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定室內(nèi)質(zhì)控一年，累積均值為1038U/L,累積標(biāo)準(zhǔn)差為50. 3U/L，累積CV值為4. 85%。
根據(jù)上述說(shuō)明書的揭示和教導(dǎo)，本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員還可以對(duì)上述實(shí)施方式進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兏托薷摹Ｒ虼?，本發(fā)明并不局限于上面揭示和描述的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的一些修改和變更也應(yīng)當(dāng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。此外，盡管本說(shuō)明書中使用了一些特定的術(shù)語(yǔ)，但這些術(shù)語(yǔ)只是為了方便說(shuō)明，并不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何限制。
權(quán)利要求
1.一種葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物的配制方法，其特征在于包括如下步驟 (1)配制咪唑緩沖液秤取咪唑、二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTANa2· 2H20)、酶保護(hù)劑、疊氮鈉適量，溶于900ml蒸餾水中，用lmol/L醋酸調(diào)節(jié)pH至7. 4，加蒸餾水稀釋至IL ； (2)配制葡萄糖-6-磷酸脫氫酶高、中、低濃度質(zhì)控物取上述咪唑緩沖液三份，分別加入適量葡萄糖-6-磷酸脫氫酶至終濃度約為6000U/L、3000U/L、1000U/L ； (3)分裝與保存將葡萄糖-6-磷酸脫氫酶質(zhì)控物分裝至一次性塑料離心管，置_20°C冰箱保存。
2.葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物制劑，其特征在于高濃度葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物制劑的成份為 咪唑(g) 3. 4至34;EDTANa2 · 2H20(g)O. 93 至 9. 3 ; 酶保護(hù)劑(g) 5至20 ; 疊氮鈉(g) I至10 ;G-6-PD(U)5000-7000 ；lmol/L醋酸調(diào)pH至7. 4 ;H20(ml) 1000 ； 中濃度葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物制劑的成份為 咪唑(g) 3. 4至34;EDTANa2 · 2H20(g)O. 93 至 9. 3 ; 酶保護(hù)劑(g) 5至20 ; 疊氮鈉(g) I至10 ;G-6-PD(U)2000-4000 ；lmol/L醋酸調(diào)pH至7. 4 ;H20(ml) 1000 ； 低濃度葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物制劑的成份為 咪唑(g) 3. 4至34;EDTANa2 · 2H20(g)O. 93 至 9. 3 ; 酶保護(hù)劑(g) 5至20 ; 疊氮鈉(g) I至10 ;G-6-PD(U)500-1500 ；lmol/L醋酸調(diào)pH至7. 4 ;H20(ml)1000。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定質(zhì)控物的配制方法，包括如下步驟(1)配制咪唑緩沖液(2)配制葡萄糖-6-磷酸脫氫酶高、中、低濃度質(zhì)控物；(3)分裝與保存，本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明可作為葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控物，既可監(jiān)測(cè)相應(yīng)試劑在流通、保存、使用過(guò)程中是否出現(xiàn)變質(zhì)，還可監(jiān)測(cè)儀器設(shè)備的運(yùn)行狀況，這既是法規(guī)的要求，更是實(shí)際工作的迫切需要，本發(fā)明制備的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶高、中、低濃度質(zhì)控物均一性好，管間差異小于2％，本發(fā)明制備的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶高、中、低濃度質(zhì)控物中均含有防腐劑和酶保護(hù)劑，在低溫保存條件下，有效期大于一年。
文檔編號(hào)C12Q1/32GK102925536SQ20121043462
公開日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2012年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月2日 公開號(hào)201210434626.發(fā)明者劉和錄, 袁詠梅, 吳雄君, 竇宇紅, 華建江, 汪奇云 申請(qǐng)人:劉和錄