專利名稱：一種低脂骨鈣提取方法及骨鈣素的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及骨鈣提取工藝，屬于食品加工領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著社會(huì)的老齡化，在西方國(guó)家，骨質(zhì)疏松癥的患病率居代謝性骨病的第一位。骨質(zhì)疏松病癥帶給患者及家庭的痛苦是不言而喻的。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)目前約有超過(guò)I億的骨質(zhì)疏松癥患者，預(yù)計(jì)到2050年將增加到2億I千萬(wàn)人。造成越來(lái)越多的人們鈣缺乏的因素生活和工作節(jié)奏加快，工作壓力大以及生活無(wú)規(guī)律，不注意飲食結(jié)構(gòu)的合理搭配，每日鈣攝 入少于600毫克者可認(rèn)為是鈣攝入不足，易造成體內(nèi)鈣的缺乏；一些中年人工作緊張，缺乏自我保健意識(shí)，不重視室外活動(dòng)，使得體內(nèi)合成的維生素D減少，影響鈣的吸收和利用；營(yíng)養(yǎng)攝入不均衡或缺乏人體所必需的營(yíng)養(yǎng)元素。目前市場(chǎng)的鈣劑多為工業(yè)合成的鈣。工業(yè)合成的鈣劑營(yíng)養(yǎng)成分單一，很難滿足骨骼生長(zhǎng)代謝過(guò)程中多方面的營(yíng)養(yǎng)需求，補(bǔ)鈣效果不理想。動(dòng)物骨富含鈣、磷、鐵、鎂等多種礦物元素，而且與人骨相似，人體骨骼細(xì)胞對(duì)相同組織細(xì)胞有較強(qiáng)的親和力，因而利用率更聞。中國(guó)專利CN1087793A和美國(guó)專利US6342252B1公開了一種利用酶解方法從牛骨中提取鈣素的工藝。酶解骨鈣具有鈣磷比例適宜、營(yíng)養(yǎng)豐富、鈣質(zhì)吸收利用率高等特點(diǎn)。從市場(chǎng)銷售情況看，酶解骨鈣深受廣大消費(fèi)者的喜愛，服用后改善骨質(zhì)疏松的效果明顯，取得了顯著的經(jīng)濟(jì)效益。但是，上述工藝制得的骨鈣中，脫脂方法主要是以蒸煮方式實(shí)施，難以去除骨質(zhì)中高含量的脂肪，導(dǎo)致最終的產(chǎn)品脂肪含量較高。對(duì)于具有心血管疾病的消費(fèi)者，過(guò)高的脂肪攝入量顯然會(huì)升高發(fā)病的危險(xiǎn)因素。同時(shí)，由于腥膻味道重，口感差。因此，從動(dòng)物骨骼中提取鈣素的過(guò)程中，去除過(guò)多的脂肪，減少心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，又能夠去除產(chǎn)物中異味，增強(qiáng)口感的工藝，成為技術(shù)人員急需解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的酶解骨鈣的提取工藝，所述的工藝能夠較現(xiàn)有技術(shù)更好的去除骨質(zhì)中的脂肪。本發(fā)明的另一目的是提供一種更健康的補(bǔ)鈣產(chǎn)品生產(chǎn)工藝，所述的工藝制得的補(bǔ)鈣產(chǎn)品具有較低的脂肪含量，同時(shí)又具有極佳的口感。本發(fā)明的另一目的是提供一種具有市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的補(bǔ)鈣產(chǎn)品，所述的產(chǎn)品不因脫脂和去異味工藝的設(shè)計(jì)而增加生產(chǎn)成本，為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明采用三次脫脂方式去除骨油，第一次是60 80°C，45 75min ;第二次是80 90°C，30min ;第三次是脂肪酶酶解。三次脫脂除具有除去骨質(zhì)中的脂肪效果外，同時(shí)還具有殺菌的功效。為增強(qiáng)脫脂效果，本發(fā)明優(yōu)選的將骨粉碎至5 40_顆粒，顆粒過(guò)小則增加生產(chǎn)成本，顆粒過(guò)大去脂效果較差。發(fā)明人經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)及經(jīng)驗(yàn)，最終確定5 40_顆粒范圍達(dá)到去骨脂和成本的最佳性價(jià)比。在乙醇浸提脫脂后，本發(fā)明還采用熱水浸泡漂洗方式去除骨粉中存在的脂肪；漂洗后再次以4000 8000r/min,離心30min,這樣可以去除骨料中大部分的脂肪。為進(jìn)一步去除殘存的脂肪，本發(fā)明的工藝選擇在離心后再次加入堿性脂肪酶進(jìn)行酶解骨料中殘存的脂肪。堿性脂肪酶A、B按I. 5 3 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料重量比O. I O. 4%，20 30°C，水解40 60min。在酶解后，二次離心，進(jìn)一步將殘存的微量脂肪去除。本發(fā)明的酶解方法，經(jīng)過(guò)篩選后，最終發(fā)現(xiàn)用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解較其他蛋白酶具有更好的效果。當(dāng)然，選用其他蛋白酶進(jìn)行酶解也能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明的目的。本發(fā)明的提取工藝中最佳的酶解方案是PH值I 3，加入胃蛋白酶，水解溫度35 40°C，攪拌I 2h，PH值6 7，加入木瓜蛋白酶，40 60°C，攪拌I 2h?！?br> 水解骨粉所用的兩種蛋白酶各占骨料重量比為O. 04 O. 08%為佳。本發(fā)明采用發(fā)酵的方法對(duì)酶解后的產(chǎn)物進(jìn)行處理。本發(fā)明所述的發(fā)酵采用乳脂明串珠菌和檸檬酸，而二者之間的配比對(duì)最終產(chǎn)物的口味、生產(chǎn)效率都具有重要的影響。發(fā)明人最終確定乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 20 30的條件下，發(fā)酵的最終產(chǎn)物效果較好。在上述條件下，確定發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h時(shí)，可以達(dá)到生產(chǎn)效率的最優(yōu)化。堿性脂肪酶A由福建師范大學(xué)生物工程學(xué)院研制的擴(kuò)展青霉PF868產(chǎn)生的堿性脂肪酶，由深圳綠微康生物工程有限公司提供；堿性脂肪酶B采用生物技術(shù)由真菌發(fā)酵精制而產(chǎn)生的堿性脂肪酶，由海寧金潮實(shí)業(yè)有限公司提供。本發(fā)明的組合物與任何一種或一種以上藥劑學(xué)上輔料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素、羥丙甲基纖維素、聚乙二醇、硬脂酸鎂、微粉硅膠、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸等混合制成的各種劑型，例如，可制成片齊 、緩釋片、滴丸、顆粒齊 、膠囊齊 、微粒劑。優(yōu)選劑型為片劑或顆粒劑。采用本發(fā)明的脫脂工藝制得的骨粉中，脂肪基本被完全去除，使得酶解獲得的鈣劑中脂肪含量低于O. I %。產(chǎn)品對(duì)有心血管疾病的消費(fèi)者來(lái)說(shuō)更加安全和健康，但是又未因此而增加經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
具體實(shí)施例方式配制培養(yǎng)基:MRS培養(yǎng)基蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母膏0.5%，葡萄糖2%，磷酸氫二鉀0.2%，醋酸鈉0.5%，硫酸鎂0.02%，硫酸錳O. 005%，吐溫-80 O. 1%,檸檬酸三銨O. 2%, PH5. 5 6. 0，115°C，滅菌 30min。實(shí)施例I取動(dòng)物骨骼粉碎至40mm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫90°C，浸泡30分鐘，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值10，加入堿性脂肪酶A、B按I. 5 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 4%，30°C，水解60min，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I 5，100°〇，101^11，冷卻至401，加鹽酸調(diào)？!1值3，加入胃蛋白酶，占骨料比為0.08(%，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08 %，600C，攪拌2h，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 06%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 30，發(fā)酵溫度為39 °C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例2取動(dòng)物骨骼粉碎至5mm顆粒，加入乙醇，60°C，浸提45min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫80°C，浸泡30分鐘，將骨料4000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 3，調(diào)PH值8，加入堿性脂肪酶A、B按3 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 1%，201，水解401^11，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I 3，90°〇，101^11，冷卻至351，加鹽酸調(diào)？!1值1，加入胃蛋白酶，占骨料比為0.04(%，攪拌lh，加堿調(diào)節(jié)PH值至6，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 04%，4(TC，攪拌lh，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 02%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 20，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿 中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例3取動(dòng)物骨骼粉碎至20mm顆粒，加入乙醇，70°C，浸提60min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫85°C，浸泡30分鐘，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，調(diào)PH值9，加入堿性脂肪酶A、B按2 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 3%，251，水解501^11，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，95°〇，1011^11，冷卻至381，加鹽酸調(diào)？!1值2，加入胃蛋白酶，占骨料比為0.06%，攪拌I. 5h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6. 5，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 06%，50。。，攪拌I. 5h，力口熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 04%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 25，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例4取動(dòng)物骨骼粉碎至IOmm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫89°C，浸泡30分鐘，將骨料6000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 3. 5，調(diào)PH值8. 5，加入堿性脂肪酶A、B按2 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 2%，301，水解601^11，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4.5，99°〇，101^11，冷卻至391，加鹽酸調(diào)？!1值1，加入胃蛋白酶，占骨料比為0.08%,攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6. 7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 06 %，45 °C，攪拌lh，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 05%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 30，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例5取動(dòng)物骨骼粉碎至25mm顆粒，加入乙醇，75°C，浸提65min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫88°C，浸泡30分鐘，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，調(diào)PH值9. 5，加入堿性脂肪酶A、B按2. 8 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 3%，301，水解501^11，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I : 3. 5，98°C，10min，冷卻至38°C，加鹽酸調(diào)pH值3，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 08%,攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08%，60°C，攪拌Ih，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 04%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 25，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。 實(shí)施例6取動(dòng)物骨骼粉碎至35mm顆粒，加入乙醇，78°C，浸提70min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫87V，浸泡30分鐘，將骨料7000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值8，加入堿性脂肪酶A、B按I. 8 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 25%，20°C，水解50min，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I 3.2，97°〇，1011^11，冷卻至371，加鹽酸調(diào)？!1值1，加入胃蛋白酶，占骨料比為0.07%，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08%，55°C，攪拌2h，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 03%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 22，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例7取動(dòng)物骨骼粉碎至IOmm顆粒，加入乙醇，60°C，浸提75min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫86°C，浸泡30分鐘，將骨料5000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，調(diào)PH值10，加入堿性脂肪酶A、B按3 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 35%，24°C，水解45min，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I 3.1，96°〇，101^11，冷卻至361，加鹽酸調(diào)？!1值1.5，加入胃蛋白酶，占骨料比為0.07%，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 06%，45°C，攪拌2h，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 04%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 30，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例8取動(dòng)物骨骼粉碎至15mm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫84°C，浸泡30分鐘，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值8. 5，加入堿性脂肪酶A、B按2. 6 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 14%，30°C，水解60min，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I 3，9，94°〇，101^11，冷卻至391，加鹽酸調(diào)？!1值1.2，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 05%,攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08%,40°C，攪拌2h，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 03%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 30，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例9取動(dòng)物骨骼粉碎至30mm顆粒，加入乙醇，75°C，浸提55min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫83°C，浸泡30分鐘，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值8，加入堿性脂肪酶A、B按3 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 35%，28°C，水解60min，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I 4.1，93°〇，1011^11，冷卻至371，加鹽酸調(diào)？!1值3，加入胃蛋白酶，占骨料比為0.05%，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08%，5(TC，攪拌2h，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 06%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 28，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例10取動(dòng)物骨骼粉碎至20mm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提60min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫82V，浸泡30分鐘，將骨料6000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值10，加入堿性脂肪酶A、B按3 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 3%，301，水解601^11，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I 4.2，92°〇，101^11，冷卻至361，加鹽酸調(diào)？!1值2，加入胃蛋白酶，占骨料比為0.05(%，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 07%，55°C，攪拌lh，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 02%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 26，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿 中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例11將骨骼粉碎至40mm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫81°C，浸泡30分鐘，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值10，加入堿性脂肪酶A、B按3 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 1%，301，水解601^11，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I 4.5，91°〇，101^11，冷卻至351，調(diào)？!1值2，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 08%，水解2h，調(diào)PH值7，再加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 06%，550C，攪拌2h，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 03%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 20，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例12將骨骼粉碎至5mm顆粒，加入乙醇，60°C，浸提45min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫88°C，浸泡30分鐘，將骨料4000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 3，調(diào)PH值8，加入復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. I %，20°C，水解60min，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，90°C，lOmin，冷卻至38°C，力口鹽酸調(diào)PH值3，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 04%，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH至值7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08%，60°C，攪拌2h，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 06%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I 30，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例13將骨骼粉碎至30mm顆粒，加入乙醇，75°C，浸提60min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫87°C，浸泡30分鐘，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，調(diào)PH值9，加入復(fù)合脂肪酶，占骨料比0.4%，30°C，水解60min，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，92°C，lOmin，冷卻至37°C，力口鹽酸調(diào)pH值I，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 08%，水解211，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 05%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 30，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。實(shí)施例14將骨骼粉碎至IOmm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫85°C，浸泡30分鐘，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值10，加入堿性脂肪酶A、B混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. 4%，30°C，水解60min，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，93°C，IOmin,冷卻至35°C，加鹽酸調(diào)pH值2，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 06%，水解2h，調(diào)PH值7，再次加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08 %，600C，攪拌2h，加熱滅酶；加入總重量的5 %的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 05%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 26，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即 得。實(shí)施例15將骨骼粉碎至25mm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提65min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫87°C，浸泡30分鐘，將骨料6000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，調(diào)PH值8. 5，加入復(fù)合脂肪酶，占骨料比0.3%，30°C，水解60min，離心，去上清液；骨料加水，骨料與水重量體積比I : 3. 5，95°C，lOmin，冷卻至35°C，加鹽酸調(diào)pH值2，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 06%，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08%，5(TC，攪拌2h，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 05 %，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 30，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅活，干燥即得。
權(quán)利要求
1.一種低脂骨鈣提取方法，包括如下步驟 (1)將骨粉碎，浸提去骨油，去上清液； (2)將浸提后的骨料浸泡漂洗、離心，去上清液； (3)將離心后的骨料加水，調(diào)PH值，加堿性脂肪酶水解，離心，去上清液； (4)將步驟(3)中離心后的骨料加入蛋白酶酶解； (5)步驟(4)中的水解液再加入乳脂明串珠菌和檸檬酸發(fā)酵，加堿中和，滅活，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的骨鈣提取方法，其特征在于，所述的步驟(I)骨料顆粒5 40mm 加入乙醇，60 80°C，45 75min。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的骨鈣提取方法，其特征在于，所述的步驟(2)中將骨料顆粒熱水漂洗，然后4000 8000r/min,離心30min。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的骨鈣提取方法，其特征在于，所述的步驟(3)中骨料與水重量體積比I : 3 5，調(diào)PH值8 10，加入堿性脂肪酶A、B混合的復(fù)合脂肪酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的骨鈣提取方法，其特征在于，所述的復(fù)合脂肪酶中堿性脂肪酶A、B重量比為I. 5 3 I。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的骨鈣提取方法，其特征在于，所述的復(fù)合脂肪酶占骨料比O.I O. 4%。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的骨鈣提取方法，其特征在于，步驟(4)中所述的酶解是加鹽酸調(diào)pH值I 3，加入胃蛋白酶，水解溫度35 40°C，攪拌I 2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6 7，加入木瓜蛋白酶，40 60°C，攪拌I 2h。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的骨鈣提取方法，其特征在于，酶解骨粉所用的兩種蛋白酶各占骨料比為O. 04 O. 08%。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的骨鈣提取方法，其特征在于，步驟(5)中所述的發(fā)酵是加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 02 O. 06%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 20 30。
10.一種由動(dòng)物骨骼提取制備的骨鈣素，其特征在于，采用以下方法制備將骨骼粉碎至5 40mm顆粒，加入乙醇，60 80°C，浸提45 75min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫80-90°C，浸泡30分鐘，將骨料4000 8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 3 5，調(diào)PH值8 10，加入堿性脂肪酶A、B按I. 5 .3 I混合的復(fù)合脂肪酶，占骨料比O. I 0.4%，20 30°C，水解40 60min，離心，去上清液；離心后骨料加水，骨料與水重量體積比I : 3 5，90 100°C，lOmin，冷卻至35 40°C，加鹽酸調(diào)pH值I 3，加入胃蛋白酶，占骨料重量比為O. 04 O. 08%，攪拌I 2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6 7，加入木瓜蛋白酶，占骨料重量比為O. 04 O. 08%，40 60°C，攪拌I 2h，加熱滅酶；加入總重量的5%的葡萄糖，加入乳脂明串珠菌和檸檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比為O. 02 O. 06%，乳脂明串珠菌和檸檬酸重量比I : 20 30，發(fā)酵溫度為39°C，發(fā)酵時(shí)間為12h，加堿中和，120°C滅菌，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種低脂骨鈣提取方法及由該方法制得的骨鈣素。包括如下步驟三次脫脂、兩次離心、蛋白酶水解和發(fā)酵。采用本發(fā)明的脫脂工藝制得的骨粉中，脂肪基本被完全去除，使得酶解獲得的鈣劑中脂肪含量低于0.1％，游離鈣含量增加，同時(shí)口感極佳，無(wú)腥膻味道。產(chǎn)品對(duì)有心血管疾病的消費(fèi)者來(lái)說(shuō)更加安全和健康，但是又未因此而增加經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
文檔編號(hào)A23L1/312GK102871124SQ20121038243
公開日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月10日
發(fā)明者郁正剛, 趙健, 吳益群, 黃永亮, 崔卜東 申請(qǐng)人:天獅集團(tuán)有限公司