專利名稱：：Tlr9的新型合成性激動劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及對于調(diào)控Toll樣受體(TLR)介導(dǎo)的免疫應(yīng)答有用的合成的化學(xué)組合物。具體而言，本發(fā)明涉及產(chǎn)生獨特的細胞因子和趨化因子譜(profile)的TTll樣受體·9(TLR9)激動劑。
背景技術(shù)：
：Toll樣受體(TLR)存在于免疫系統(tǒng)的許多細胞上，而且已經(jīng)顯示出牽涉先天性免疫應(yīng)答(Hornung,V.等(2002)J.Immunol.168:4531-4537)。在脊椎動物中，這個家族由稱作TLRl至TLRll的11種蛋白質(zhì)組成，已知它們識別來自細菌、真菌、寄生物、和病毒的病原體相關(guān)分子樣式(molecularpatterns)(Poltorak,a.等(1998)Science282:2085-2088;Underhill,D.M.等(1999)Nature401:811-815;Hayashi,F.等(2001)Nature410:1099-1103;Zhang,D.等(2004)Science303:1522-1526;Meier,A.等(2003)Cell.Microbiol.5:561-570;Campos,M.A.等(2001)J.Immunol.167:416-423;Hoebe,K.等(2003)Nature424:743-748;Lund,J.(2003)J.Exp.Med.198:513-520;Heil,F.等(2004)Science303:1526-1529;Diebold,S.S.等(2004)Science303:1529-1531;Hornung,V.等(2004)J.Immunol.173:5935-5943)。TLR是脊椎動物識別外來分子和對外來分子發(fā)動免疫應(yīng)答的關(guān)鍵手段，而且還提供了聯(lián)系先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的手段(Akira，S.等(2001)NatureImmunol.2:675-680;Medzhitov,R.(2001)NatureRev.Immunol.1:135-145)。有些TLR位于細胞表面上以檢測胞外病原體和對胞外病原體啟動應(yīng)答，而其它TLR位于細胞內(nèi)以檢測胞內(nèi)病原體和對胞內(nèi)病原體啟動應(yīng)答。已知TLR9識別細菌DNA中的和合成寡核苷酸中的未甲基化CpG基序(Hemmi，H.等(2000)Nature408:740-745)。含CpG的硫代磷酸酯寡核苷酸的其它修飾也能影響它們作為經(jīng)由TLR9之免疫應(yīng)答的調(diào)控物起作用的能力(參見例如Zhao等(1996)Biochem.Pharmacol.51:173-182;Zhao等(1996)BiochemPharmacol.52:1537-1544;Zhao等(1997)AntisenseNucleicAcidDrugDev.7:495-502;Zhao等(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9:3453-3458;Zhao等(2000)Bioorg.Med.Chem.Lett.10:1051-1054;Yu,D.等(2000)Bioorg.Med.Chem.Lett.10:2585-2588;Yu,D.等(2001)Bioorg.Med.Chem.Lett.11:2263-2267;及Kandimalla,E.等(2001)Bioorg.Med.Chem.9:807-813)。天然存在的TLR9激動劑已經(jīng)顯示出產(chǎn)生抗腫瘤活性(例如腫瘤生長和血管發(fā)生)，導(dǎo)致有效的抗癌應(yīng)答(例如抗白血病)(Smith,J.B.和Wickstrom,Ε·(1998)J.Natl.CancerInst.90:1146-1154)。另外，TLR9激動劑已經(jīng)顯示出與其它已知的抗腫瘤化合物(例如西妥昔單抗(cetuximab)、伊立替康(irinotecan))協(xié)同工作(Vincenzo,D.等(2006)Clin.CancerRes.12(2):577-583)。某些TLR9激動劑由含有核心CpR二核苷酸的3’-3’連接的DNA結(jié)構(gòu)構(gòu)成，其中R為經(jīng)修飾的鳥苷(美國專利號7，276，489)。另外，特定的化學(xué)修飾容許制備特定的寡核苷酸類似物，它們對免疫應(yīng)答產(chǎn)生的相異的調(diào)控。具體而言，結(jié)構(gòu)活性相關(guān)性研究容許鑒定合成基序(motif)和新的基于DNA的化合物，其產(chǎn)生對免疫應(yīng)答的特定的調(diào)控，而且這些調(diào)控與由未甲基化的CpG二核苷酸所產(chǎn)生的調(diào)控是相異的(Kandimalla,E.等(2005)Proc.Natl.Acad.Sci.USA102:6925-6930;Kandimalla,E.等(2003)Proc.Nat.Acad.Sci.USAlOO:14303-14308;Cong,Y.等(2003)BiochemBiophysRes.Commun.310:1133-1139;Kandimalla,E.等(2003)Biochem.Biophys.Res.Commun.306:948-953;Kandimalla,E.^(2003)NucleicAcidsRes.31:2393-2400;Yu,D.等(2003)Bioorg.Med.Chem.11:459-464;Bhagat,L.等(2003)Biochem.Biophys.Res.Commun.300:853-861;Yu,D.等(2002)NucleicAcidsRes.30:4460-4469;Yu,D.等(2002)J.Med.Chem.45:4540-4548;Yu,D.等(2002)Biochem.Biophys.Res.Commun.297:83-90;Kandimalla.E.等(2002)Bioconjug.Chem.13:966-974;Yu,D.等(2002)NucleicAcidsRes.30:1613-1619;Yu,D.等(200I)Bioorg.Med.Chem.9:2803-2808;Yu,D.等(2001)Bioorg.Med.Chem.Lett.11:2263-2267;Kandimalla,E.等(200I)Bioorg.Med.Chem.9:807-813;Yu,D.等(2000)Bioorg.Med.Chem.Lett.10:2585-2588;Putta,M.等(2006)NucleicAcidsRes.34:3231-3238)。發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，獨特地修飾核心CpR二核苷酸側(cè)翼序列、核苷酸之間的連接或連接寡核苷酸的接頭產(chǎn)生新的TLR9激動劑，其在體外和在體內(nèi)產(chǎn)生相異的細胞因子和趨化因子譜。這種對含CpR的寡核苷酸“定制調(diào)節(jié)”(custom-tune)細胞因子和趨化因子應(yīng)答的能力提供以疾病特異性的和甚至患者特異性的方式預(yù)防和/或治療各種疾病狀況的能力。如此，需要新的寡核苷酸類似物化合物來提供此類受到定制調(diào)節(jié)的應(yīng)答。發(fā)明概述本發(fā)明提供了新的基于寡核苷酸的化合物，它們各自作為激動劑與TLR9相互作用而分別提供相異的(distinct)免疫應(yīng)答譜(profile)。依照本發(fā)明的TLR9激動劑的特征在于特定的(specific)和獨特的(unique)化學(xué)修飾,其提供了它們相異的(distinctive)免疫應(yīng)答激活譜。依照本發(fā)明的TLR9激動劑在多種細胞類型中且在多種體外和體內(nèi)實驗?zāi)Ｐ椭姓T導(dǎo)免疫應(yīng)答，其中各種激動劑提供相異的免疫應(yīng)答譜。依照本發(fā)明的TLR9激動劑單獨、或與其它藥物聯(lián)合或共施用，或作為用作疫苗的抗原的佐劑，用在預(yù)防和/或治療各種疾病中。因此，它們作為用于研究免疫系統(tǒng)以及用于比較各種動物物種(諸如人和小鼠)的免疫系統(tǒng)的工具是有用的。如此，在第一個方面，本發(fā)明提供了TLR9的基于寡核苷酸的激動劑(“化合物”)。在第二個方面，本發(fā)明提供了包含依照本發(fā)明的基于寡核苷酸的TRL9激動劑和藥學(xué)可接受載體的藥物配制劑。在第三個方面，本發(fā)明提供了疫苗。依照這個方面的疫苗包含依照本發(fā)明的藥物配制劑且進一步包含抗原。在第四個方面，本發(fā)明提供了用于在個體中產(chǎn)生TLR9介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的方法，此類方法包括對個體施用依照本發(fā)明的化合物、藥物配制劑或疫苗。在第五個方面，本發(fā)明提供了用于治療性處理患有疾病或病癥的患者的方法，此類方法包括對患者施用依照本發(fā)明的化合物、藥物配制劑或疫苗。在第六個方面，本發(fā)明提供了用于預(yù)防疾病或病癥的方法，包括對患者施用依照本發(fā)明的化合物、藥物配制劑或疫苗。本發(fā)明可由下述段落描述1.一種免疫調(diào)控化合物，其選自化合物No.l至No.169。2.一種組合物，其包含依照段I的免疫調(diào)控化合物和生理學(xué)可接受的載體。3.在個體中產(chǎn)生免疫應(yīng)答的方法，包括對個體施用藥學(xué)有效量的依照段I的化合物。4.用于治療性處理患有受益于免疫應(yīng)答調(diào)控的疾病或病癥的個體的方法，包括對個體施用藥學(xué)有效量的依照段I的化合物。5.依照段4的方法，其中所述疾病或病癥是癌癥、自身免疫性病癥、氣道炎癥、炎性病癥、傳染病、皮膚病癥、變態(tài)反應(yīng)、哮喘或由病原體或變應(yīng)原引起的疾病。6.依照段4的方法，進一步包括施用一種或多種化療化合物、靶向治療劑、疫苗、抗原、抗體、細胞毒劑、變應(yīng)原、抗生素、反義寡核苷酸、TLR激動劑、激酶抑制劑、肽、蛋白質(zhì)、DNA疫苗、佐劑、共刺激分子或其組合。7.用于預(yù)防性處理患有受益于免疫應(yīng)答調(diào)控的疾病或病癥的個體的方法，包括對個體施用藥學(xué)有效量的依照段I的化合物。8.依照段7的方法，其中所述疾病或病癥是個體中的癌癥、自身免疫性病癥、氣道炎癥、炎性病癥、傳染病、皮膚病癥、變態(tài)反應(yīng)、哮喘或由病原體或變應(yīng)原引起的疾病。9.依照段7的方法，進一步包括施用一種或多種化療化合物、靶向治療劑、疫苗、抗原、抗體、細胞毒劑、變應(yīng)原、抗生素、反義寡核苷酸、TLR激動劑、激酶抑制劑、肽、蛋白質(zhì)、DNA疫苗、佐劑、共刺激分子或其組合。附圖簡述圖I是本發(fā)明免疫調(diào)控化合物的線性合成的合成方案。DMTr=4，4’-二甲氧基三苯甲基；CE=氰乙基。圖2是本發(fā)明免疫調(diào)控化合物的平行合成的合成方案。DMTr=4，4’-二甲氧基三苯甲基；CE=氰乙基。圖3A-3C描繪了依照下文實施例2培養(yǎng)、處理和分析的表達TLR9的HEK293細胞中的NF-KB活性。簡言之，將HEK293細胞用10μg/ml依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸刺激18小時，并使用SEAP(分泌型人胚胎堿性磷酸酶)測定法測定NF-KB水平。圖3D-3G描繪了依照下文實施例2培養(yǎng)、處理和分析的表達TLR9的HEK293細胞中的NF-KB活性。將HEK293細胞用0(83/培養(yǎng)基)、0.1,0.3、I.0,3.O、或10.Oμg/ml依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸刺激18小時，并使用SEAP(分泌型人胚胎堿性磷酸酶)測定法測定NF-κB水平。圖3A-3G更一般地證明了施用依照本發(fā)明的含有新的堿基、接頭、和/或獨特修飾的免疫調(diào)控寡核苷酸產(chǎn)生相異的TLR9激活譜。圖4A和4B描繪了依照下文實施例3分離、培養(yǎng)、處理和分析的人PBMC的細胞因子和趨化因子濃度。簡言之，自新鮮獲得的健康人志愿者血液分離PBMC，并用10μg/ml劑量的依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸培養(yǎng)24小時。收集上清液，并通過Luminex多重測定法分析細胞因子和趨化因子水平。圖4A和4B更一般地證明了施用依照本發(fā)明的含有新的堿基、接頭、和/或獨特修飾的免疫調(diào)控寡核苷酸產(chǎn)生相異的細胞因子和趨化因子譜。圖4C-4H描繪了依照下文實施例3分離、培養(yǎng)、處理和分析的人PBMC的細胞因子和趨化因子濃度。簡言之，自新鮮獲得的健康人志愿者血液分離PBMC，并用O(PBS)、0.I、O.3、I.0,3.O、或10.Oμg/ml劑量的依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸培養(yǎng)24小時。收集上清液，并通過Luminex多重測定法分析細胞因子和趨化因子水平。圖4C-4H更一般地證明了施用依照本發(fā)明的含有新的堿基、接頭、和/或獨特修飾的免疫調(diào)控寡核苷酸產(chǎn)生相異的細胞因子和趨化因子譜。圖4I-4N描繪了依照下文實施例3分離、培養(yǎng)、處理和分析的人PBMC的細胞因子和趨化因子濃度。簡言之，自新鮮獲得的健康人志愿者血液分離PBMC，并用O(PBS)、1.O、或10.Oμg/ml劑量的依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸培養(yǎng)24小時。收集上清液，并通過Luminex多重測定法分析細胞因子和趨化因子水平。圖4I-4N更一般地證明了施用依照本發(fā)明的含有新的堿基、接頭、和/或獨特修飾的免疫調(diào)控寡核苷酸產(chǎn)生相異的細胞因子和趨化因子譜。圖40-4FF描繪了依照下文實施例3分離、培養(yǎng)、處理和分析的人PBMC的細胞因子和趨化因子濃度。簡言之，自新鮮獲得的健康人志愿者血液分離PBMC，并用O(PBS)、0.I、O.3、I.0,3.O、或10.Oμg/ml劑量的依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸培養(yǎng)24小時。收集上清液，并通過Luminex多重測定法分析細胞因子和趨化因子水平。圖40-4FF更一般地證明了施用依照本發(fā)明的含有新的堿基、接頭、和/或獨特修飾的免疫調(diào)控寡核苷酸產(chǎn)生相異的細胞因子和趨化因子譜。圖5A和5B描繪了依照下文實施例3分離、培養(yǎng)、處理和分析的人類漿細胞樣樹突細胞(PDC)的細胞因子和趨化因子濃度。簡言之，自新鮮獲得的健康人志愿者血液PBMC分離pDC，并用10μg/ml劑量的依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸培養(yǎng)24小時。收集上清液，并通過Luminex多重測定法分析細胞因子和趨化因子水平。圖5A和5B更一般地證明了施用依照本發(fā)明的含有新的堿基、接頭、和/或獨特修飾的免疫調(diào)控寡核苷酸產(chǎn)生相異的細胞因子和趨化因子譜。圖6A-6F描繪了由依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸誘導(dǎo)的人B細胞增殖。依照下文實施例4分離、培養(yǎng)、處理和分析人B細胞。簡言之，將自新鮮獲得的健康人志愿者血液PBMC分離的人B細胞用不同劑量的依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸培養(yǎng)68小時，并用3H-胸苷脈沖6-8小時。使用液體閃爍計數(shù)器測定3H-胸苷攝取。圖6A-6F更一般地證明了施用依照本發(fā)明的含有新的堿基、接頭、和/或獨特修飾的免疫調(diào)控寡核苷酸產(chǎn)生相異的細胞增殖譜，這些譜因所施用的寡核苷酸的堿基組成、獨特修飾、和量而有不同。圖7A描繪了依照下文實施例5處理的C57BL/6小鼠中的血清細胞因子和趨化因子誘導(dǎo)。簡言之，給小鼠皮下注射lmg/kg劑量的依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸，2小時后收集血清，通過Luminex多重測定法分析細胞因子和趨化因子水平。圖7B描繪了依照下文實施例5處理的BALB/c小鼠中的血清細胞因子誘導(dǎo)。簡言之，給小鼠皮下注射lmg/kg劑量的依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸，2小時后收集血清，并通過ELISA分析IL-12水平。圖7C-7F描繪了依照下文實施例5處理的BALB/c小鼠中的血清細胞因子誘導(dǎo)。簡言之，給小鼠皮下注射O.25或lmg/kg劑量的依照本發(fā)明的免疫調(diào)控寡核苷酸，2小時后收集血清，并通過ELISA分析IL-12水平。圖7A-7F更一般地證明了體內(nèi)施用依照本發(fā)明的含有新的堿基、接頭、和/或獨特修飾的免疫調(diào)控寡核苷酸產(chǎn)生相異的TLR9激活譜，這會在多種疾病中找到應(yīng)用。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了新的基于寡核苷酸的化合物，它們各自作為激動劑與TLR9相互作用而分別提供相異的免疫應(yīng)答譜。依照本發(fā)明的TLR9激動劑的特征在于獨特的化學(xué)修飾，其提供了它們相異的免疫應(yīng)答激活譜。本文中所引用的所有出版物反映了本領(lǐng)域的技術(shù)水平，通過述及將它們完整收入本文。這些參考文獻的教導(dǎo)與本說明書之間的任何沖突應(yīng)當(dāng)以有利于后者的方式來解決。依照本發(fā)明的TLR9激動劑在多種細胞類型中且在多種體內(nèi)和體外實驗?zāi)Ｐ椭姓T導(dǎo)免疫應(yīng)答，其中各種激動劑提供相異的免疫應(yīng)答譜。因此，它們作為用于研究免疫系統(tǒng)以及用于比較各種動物物種(諸如人和小鼠)的免疫系統(tǒng)的工具是有用的。依照本發(fā)明的TLR9激動劑單獨、或與其它藥物聯(lián)合或共施用，或作為用作疫苗的抗原的佐劑，用在預(yù)防和/或治療各種疾病中。定乂術(shù)語“2’-取代的核苷”或“2’-取代的阿拉伯糖苷(arabinoside)”一般包括如下的核苷或阿拉伯糖核苷，其中戊糖或阿拉伯糖模塊2’位置的羥基被取代而生成2’-取代的或2’-O-取代的核糖核苷。在某些實施方案中，所述取代是用含有1-6個飽和的或不飽和的碳原子的低級烴基、用鹵素原子、或用具有6-10個碳原子的芳基進行的，其中所述烴基或芳基可以是未取代的或者可以是取代的，例如用鹵素、羥基、三氟甲基、氰基、硝基、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、羰烷氧基(carboalkoxy)、或氨基取代。2’_0_取代的核糖核苷或2’-O-取代的阿糖胞苷的例子包括但不限于2’-氨基、2’-氟、2’-烯丙基、2’-O-烴基和2’-炔丙基核糖核苷或阿拉伯糖苷、2’-O-甲基核糖核苷或2’-O-甲基阿拉伯糖苷和2’-O-甲氧基乙氧基核糖核苷或2’-O-甲氧基乙氧基阿拉伯糖苷。術(shù)語“3’”在用于方向時一般指多核苷酸或寡核苷酸中位于同一多核苷酸或寡核苷酸中另一區(qū)域或位置3’(朝向寡核苷酸的3’位置)的區(qū)域或位置。術(shù)語“5’”在用于方向時一般指多核苷酸或寡核苷酸中位于同一多核苷酸或寡核苷酸中另一區(qū)域或位置5’(朝向寡核苷酸的5’位置)的區(qū)域或位置。術(shù)語“約”一般意味著確切的數(shù)目不是至關(guān)重要的。如此，寡核苷酸中核苷殘基的數(shù)目不是至關(guān)重要的，而且涵蓋少一個或兩個核苷殘基或者多一個至數(shù)個核苷殘基的寡核苷酸作為上文所述每一個實施方案的等同方案。術(shù)語“氣道炎癥”一般包括但不限于由變應(yīng)原引起的呼吸道炎癥，包括哮喘。術(shù)語“變應(yīng)原”一般指抗原或在暴露于受試者后引發(fā)變態(tài)反應(yīng)的分子(通常是蛋白質(zhì))的抗原性部分。典型的是，受試者對變應(yīng)原是過敏的，如通過例如風(fēng)團(wheal)和潮紅(flare)測試或本領(lǐng)域已知的任何方法所指出的。即使只有一小部分受試者在暴露于該分子后展現(xiàn)出變應(yīng)性(例如IgE)免疫應(yīng)答，也說該分子是變應(yīng)原。術(shù)語“變態(tài)反應(yīng)”一般包括但不限于食物變態(tài)反應(yīng)、呼吸變態(tài)反應(yīng)和皮膚變態(tài)反應(yīng)。術(shù)語“抗原”一般指受到抗體或T細胞抗原受體識別和選擇性結(jié)合的物質(zhì)?？乖梢园ǖ幌抻陔摹⒌鞍踪|(zhì)、核苷、核苷酸及其組合?？乖梢允翘烊坏幕蚝铣傻模乙话阏T導(dǎo)對該抗原特異性的免疫應(yīng)答。術(shù)語“自身免疫性病癥”一般指其中“自身”抗原遭受免疫系統(tǒng)攻擊的病癥。該術(shù)語包括但不限于紅斑狼瘡(lupuserythematosus)、多發(fā)性硬化(multiplesclerosis)、I型糖尿病(typeIdiabetesmellitus)、腸易激綜合征(irritablebowelsyndrome)、克羅恩氏病(Chron，sdisease)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis)、感染性休克(septicshock)、普秀(alopeciauniversalis)、急性播散性腦脊髓炎(acutedisseminatedencephalomyelitis)、阿狄森氏病(Addison’sdisease)、強直性脊柱炎(ankylosingspondylitis)、抗憐月旨抗體綜合征(antiphospholipidantibodysyndrome)、自身免疫性溶血性貧血(autoimmunehemolyticanemia)、自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis)、大皰性類天皰瘡(Bullouspemphigoid)、查加斯病(chagasdisease)、慢性阻塞性肺病(chronicobstructivepulmonarydisease)、腹部疾病(coeliacdisease)、皮肌炎(dermatomyositis)、子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis)、古德帕斯丘氏綜合征(Goodpasture，ssyndrome)、格雷夫斯氏病(Graves’disease)、格巴二氏綜合征(Guillain_Barr6syndrome)、橋本氏病(Hashimoto，sdisease)、化膿性汗腺炎(hidradenitissuppurativa)、特發(fā)性血小板減少性紫癒(idiopathicthrombocytopenicpurpura)、間質(zhì)性膀胱炎(interstitialcystitis)、硬斑病(morphea)、重癥肌無力(myastheniagravis)、發(fā)作性睡病(narcolepsy)、神經(jīng)性肌強直(neuromyotonia)、天皰瘡(pemphigus)、惡性貧血(perniciousanaemia)、多肌炎(polymyositis)、原發(fā)性膽汁性肝硬化(primarybiliarycirrhosis)、精神分裂癥(schizophrenia)、斯耶格倫氏綜合征(SjOgreil5Ssyndrome)、顳動脈炎(temporalarteritis)(巨細胞動脈炎(giantcellarteritis))、血管炎(vasculitis)、白癜風(fēng)(vitiligo)、外陰痛(vulvodynia)和韋格納氏肉芽腫病(Wegener’sgranulomatosis)、自身免疫性哮喘(autoimmuneasthma)、感染性休克(septicshock)、銀屑病(psoriasis)和癥疾(malaria)。術(shù)語“癌癥”一般包括但不限于由異常的或不受控制的細胞增殖和/或分裂引起的任何惡性生長或腫瘤。癌癥可發(fā)生于人和/或動物中，而且可發(fā)生于任何和所有組織中。用本發(fā)明治療具有癌癥的患者可包括依照本發(fā)明的化合物、藥物配制劑或疫苗的施用，使得異常的或不受控制的細胞增殖和/或分裂受到影響。術(shù)語“載體”一般涵蓋任何賦形劑、稀釋劑、填充劑、鹽、緩沖劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、油、脂、含脂的囊泡、微球體、脂質(zhì)體封裝、或本領(lǐng)域公知用于藥物配制劑的其它物質(zhì)。應(yīng)當(dāng)理解，載體、賦形劑、或稀釋劑的特征會取決于用于特定應(yīng)用的施用路徑。含有這些物質(zhì)的藥學(xué)可接受配制劑的制備記載于例如《Remington’sPharmaceuticalSciences》第18版(A.Gennaro編，MackPublishingCo.，Easton,PA，1990)。術(shù)語“藥學(xué)可接受的”或“生理學(xué)可接受的”一般指不干擾依照本發(fā)明的化合物的效力和與生物學(xué)系統(tǒng)(諸如細胞、細胞培養(yǎng)物、組織、或生物體)相容的物質(zhì)。優(yōu)選的是，所述生物學(xué)系統(tǒng)是活的生物體，諸如脊椎動物。術(shù)語“共施用”一般指在足夠近的時間里施用至少兩種不同物質(zhì)以調(diào)控免疫應(yīng)答。優(yōu)選的是，共施用指同時施用至少兩種不同物質(zhì)。術(shù)語“藥學(xué)有效量”一般指足以實現(xiàn)期望生物學(xué)效應(yīng)(諸如有益結(jié)果)的量。如此，“藥學(xué)有效量”會取決于施用它的背景。藥學(xué)有效量可以在一次或多次預(yù)防性或治療性施用中施用。術(shù)語“與...組合”一般指在治療患者的過程中施用依照本發(fā)明的化合物和/或?qū)χ委熂膊』蚣不加杏玫那也幌景l(fā)明化合物的TLR9拮抗劑效應(yīng)的其它藥劑。此類施用可以以任意次序進行，包括同時施用，以及相隔幾秒鐘至長達數(shù)天的時間上有間隔的次序。此類組合處理還可包括超過一次的依照本發(fā)明的化合物和/或獨立的其它藥劑的施用。依照本發(fā)明的化合物和其它藥劑的施用可以是通過相同或不同的路徑的。術(shù)語“個體”和“受試者”一般指哺乳動物，諸如人。哺乳動物一般包括但不限于人、非人靈長類、大鼠、小鼠、貓、犬、馬、牛(cattle)、奶牛(cows)、豬、綿羊和家兔。術(shù)語“激酶抑制劑”一般指拮抗或抑制細胞中磷酸化依賴性細胞信號傳導(dǎo)和/或生長途徑的分子。激酶抑制劑可以是天然存在的或合成的，而且包括具有作為口服治療劑施用的潛力的小分子。激酶抑制劑具有迅速且特異性抑制靶激酶分子活化的能力。蛋白質(zhì)激酶是誘人的藥物靶，部分因為它們調(diào)節(jié)極其多種信號傳導(dǎo)和生長途徑且包括許多不同蛋白質(zhì)。因此，它們在牽涉激酶信號傳導(dǎo)的疾病(包括癌癥、心血管疾病、炎性病癥、糖尿病、黃斑變性和神經(jīng)學(xué)病癥)的治療中具有極大潛力。激酶抑制劑的例子包括sorafenib(Nexavar)、Sutent>dasatinib、Dasatinib、Zactima、Tykerb和STI571。術(shù)語“線性合成”一般指在寡核苷酸的一端開始并線性進展至另一端的合成。線性合成容許將相同或不同(就所摻入的長度、堿基組成和/或化學(xué)修飾而言)的單體單元摻入寡核苷酸。術(shù)語“哺乳動物”明確地意圖包括溫血的脊椎動物，包括但不限于人。術(shù)語“經(jīng)過修飾的核苷”一般是包括經(jīng)過修飾的雜環(huán)堿基、經(jīng)過修飾的糖模塊、或其任意組合的核苷。在一些實施方案中，經(jīng)過修飾的核苷是非天然嘧啶或嘌呤核苷，如本文所述。為了本發(fā)明，經(jīng)過修飾的核苷、嘧啶或嘌呤類似物或非天然存在的嘧啶或嘌呤可互換使用，指包括非天然存在的堿基和/或非天然存在的糖模塊的核苷。為了本發(fā)明，如果某堿基不是鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶，那么認為該堿基是非天然的。術(shù)語“調(diào)控”或“調(diào)控性”一般指變化，諸如響應(yīng)的升高或TLR9介導(dǎo)的響應(yīng)的定性差異。術(shù)語“接頭”一般指能借助共價或非共價鍵合經(jīng)由糖、堿基、或主鏈附著至寡核苷酸的任何模塊。接頭可用于附著兩個或更多個核苷，或者可附著至寡核苷酸的5’和/或3’末端核苷酸。在本發(fā)明的某些實施方案中，所述接頭可以是非核苷酸接頭。術(shù)語“非核苷酸接頭”一般指能借助共價或非共價鍵合附著至寡核苷酸的、核苷酸連接以外的化學(xué)模塊。優(yōu)選的是，所述非核苷酸接頭的長度是約2埃至約200埃，而且可以是順式或反式取向。術(shù)語“核苷酸連接”一般指經(jīng)由它們的糖(例如3’_3’、2’_3’、2’_5’、3’_5’)接合兩個核苷的化學(xué)連接，其由相鄰核苷間的磷原子和帶電荷的或中性的基團(例如磷酸二酯、硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯)組成。術(shù)語“基于寡核苷酸的化合物”指自多個相連接的核苷單元形成的多核苷酸。核苷單元可以是病毒、細菌、細胞碎屑、siRNA或微小RNA的一部分，或者可以由病毒、細菌、細胞碎屑、SiRNA或微小RNA的一部分構(gòu)成。所述寡核苷酸還可以自現(xiàn)有的核酸來源獲得，包括基因組或cDNA，但是優(yōu)選是通過合成方法生成的。在優(yōu)選的實施方案中，每個核苷單元包括雜環(huán)喊基和呋喃戍糖基、海操糖、阿拉伯糖、2’_脫氧-2’_取代的核苷、2’_脫氧-2’-取代的阿拉伯糖、2’-O-取代的阿拉伯糖或己糖基團。核苷殘基可以通過多種已知的核苷間連接之每一種而彼此偶聯(lián)。所述核苷間連接包括但不限于磷酸二酯(phosphodiester)、硫代磷酸酯(phosphorothioate)、二硫代磷酸酯(phosphorodithioate)、烴基膦酸酯(alkyIphosphonate)、烴基硫代磷酸酯(alkyIphosphonothioate)、磷酸三酯(phosphotriester)、亞氨基磷酸酯(phosphoramidite)、娃氧燒(siIoxane)、碳酸酯(carbonate)、羰燒氧基(carboalkoxy)、氨基乙酸酯(acetamidate)、氨基甲酸酯(carbamate)、嗎啉代(morpholino)、硼代(borano)、硫醚(thioether)、橋接氨基磷酸酯(bridgedphosphoramidate)、橋接亞甲基勝酸酯(bridgedmethylenephosphonate)、橋接硫代磷酸酯(bridgedphosphorothioate)、和砜(sulfone)核苷間連接。術(shù)語“基于寡核苷酸”還涵蓋具有一個或多個立體有擇(stereospecific)核苷間連接(例如RP)-或(SP)-硫代磷酸酯、烴基膦酸酯、或磷酸三酯連接)的多核苷。如本文中所使用的，術(shù)語“寡核苷酸”和“二核苷酸”明確意圖包括具有任何所述核苷間連接的多核苷和二核苷，無論所述連接是否包含磷酸根基團。在某些優(yōu)選的實施方案中，這些核苷間連接可以是磷酸二酯、硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯連接，或其組合。術(shù)語“肽”一般指長度和組成足以影響生物學(xué)應(yīng)答(例如抗體生成或細胞因子活性，無論該肽是否是半抗原)的多肽。術(shù)語“肽”可以包括經(jīng)過修飾的氨基酸(無論是天然存在的還是非天然存在的)，其中所述修飾包括但不限于磷酸化、糖基化、PEG化、脂化(Iipidization)和甲基化。術(shù)語“TLR9激動劑”一般指能夠增強、誘導(dǎo)或調(diào)控由TLR9介導(dǎo)的免疫刺激的基于寡核苷酸的化合物。術(shù)語“治療”或“處理”一般指旨在獲得有益的或期望的結(jié)果(其可以包括癥狀的緩和或者疾病進展的延遲或改善)的辦法。表I顯示了依照本發(fā)明的某些TLR9激動劑。在此表中，除非指明，基于寡核苷酸的TLR9激動劑均為硫代磷酸酯(PS)連接。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員會認識到，可使用磷酸二酯(PO)連接或混用PS連接和PO連接。除非指明，所有核苷酸均為脫氧核糖核苷酸。表I權(quán)利要求1.一種免疫調(diào)控化合物，其選自下組5，-Tcg2Tcg2Ttu1Y-M-Yu1TTg2CTg2CT-S，[5，-SEQIDNO:12-3’-M-3’-SEQIDNO:12-5’];5，-TCGiAACGJTCoG-Z-GoCTTGiCAAGiCT-5，[5，-SEQIDN0:7-3’-Z-3’-SEQIDNO:7-5'];5，-TCGiAACGJTCGrY-TCTTGiCTGTCTTGiCT-5，[5’-SEQIDNO:18-3’-Y-3’-SEQIDNO:172-5’];5，-TCG1AACG1TTCG1-Y-TCTTG1CTGnCT-S，[5’-SEQIDNO:20-3’-Y-3’-SEQIDNO:171-5’];5，-TCGiAACGJoTCoG-m-GoCToTGiCAAGiCT-5，[5，-SEQIDNO:34-3’-m-3’-SEQIDNO:-34-5'];5，-TCGiAACGiTTCc^-Y^GACTTGfTGAC-S’[5’-SEQIDNO:41-3’-Y2-3’-SEQIDNO:30-5'];5，-Tcg1Aacg1Ttcg1-Y3-Tgttg1CtgtCttg1Ct-S'[5，-SEQIDNO:45-3，-Y3-3，-SEQIDNO:178-5，];和5’-CAGTCGjTCAG-YfTCTTGiCTGTCT-5’[5，-SEQIDNO:43-Y2-SEQIDNO:17-5’]，其中G1=-脫氮-dG；G2=AraG;Q/Q/U=2，-O-甲基核糖核苷酸；o=磷酸二酯連接；m=順式，反式-1，3，5-環(huán)己三醇接頭；γ=1，3-丙二醇接頭；γ2=1，4-丁二醇接頭；γ3=1，5-戊二醇接頭；Ζ=1，3，5-戊三醇接頭。2.一種組合物，其包含依照權(quán)利要求I的免疫調(diào)控化合物和生理學(xué)可接受的載體。3.權(quán)利要求I的免疫調(diào)控化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于在個體中產(chǎn)生免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括對個體施用藥學(xué)有效量的依照權(quán)利要求I的化合物。4.權(quán)利要求I的免疫調(diào)控化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療性處理患有受益于免疫應(yīng)答調(diào)控的疾病或病癥的個體的方法，所述方法包括對個體施用藥學(xué)有效量的依照權(quán)利要求I的化合物。5.依照權(quán)利要求4的用途，其中所述疾病或病癥是癌癥、自身免疫性病癥、氣道炎癥、炎性病癥、傳染病、皮膚病癥、變態(tài)反應(yīng)、哮喘或由病原體或變應(yīng)原引起的疾病。6.依照權(quán)利要求4的用途，進一步包括施用一種或多種化療化合物、靶向治療劑、疫苗、抗原、抗體、細胞毒劑、變應(yīng)原、抗生素、反義寡核苷酸、TLR激動劑、激酶抑制劑、肽、蛋白質(zhì)、DNA疫苗、佐劑、共刺激分子或其組合。7.權(quán)利要求I的免疫調(diào)控化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于預(yù)防性處理患有受益于免疫應(yīng)答調(diào)控的疾病或病癥的個體的方法，所述方法包括對個體施用藥學(xué)有效量的依照權(quán)利要求I的化合物。8.依照權(quán)利要求7的用途，其中所述疾病或病癥是個體中的癌癥、自身免疫性病癥、氣道炎癥、炎性病癥、傳染病、皮膚病癥、變態(tài)反應(yīng)、哮喘或由病原體或變應(yīng)原引起的疾病。9.依照權(quán)利要求7的用途，進一步包括施用一種或多種化療化合物、靶向治療劑、疫苗、抗原、抗體、細胞毒劑、變應(yīng)原、抗生素、反義寡核苷酸、TLR激動劑、激酶抑制劑、肽、蛋白質(zhì)、DNA疫苗、佐劑、共刺激分子或其組合。全文摘要本發(fā)明涉及TLR9的新型合成性激動劑。本發(fā)明涉及對于調(diào)控Toll樣受體(TLR)介導(dǎo)的免疫應(yīng)答有用的合成的化學(xué)組合物。具體而言，本發(fā)明涉及產(chǎn)生相異的細胞因子和趨化因子譜的Toll樣受體9(TLR9)激動劑。文檔編號C12N15/117GK102864151SQ201210311690公開日2013年1月9日申請日期2008年7月31日優(yōu)先權(quán)日2007年8月1日發(fā)明者?？钒?R.坎迪馬拉,馬里卡朱納.雷迪普塔,王大慶,郁東,巴加特.拉克施米,蘇蒂爾.阿格拉沃爾申請人:艾德拉藥物股份有限公司