專利名稱：一種蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑、其制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑、其制備方法及其在制備治療和預(yù)防糖尿病、肥胖癥及癌癥的藥物組合物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶(PTPs)是一類信號傳導(dǎo)酶，它們通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)酪氨酸的磷酸化水平來控制細(xì)胞的成長、分化、代謝；細(xì)胞遷移、基因轉(zhuǎn)錄、離子通道開閉、免疫反應(yīng)、細(xì)胞凋亡以及成骨發(fā)育也受到PTPs的調(diào)控。PTPs紊亂可導(dǎo)致多種疾病，如癌癥、糖尿病、肥胖癥和骨質(zhì)疏松癥。在人類基因組中，迄今為止發(fā)現(xiàn)有130余種基因編碼PTP，這些高特異性PTP不僅與癌抑制和發(fā)生的信號通路相關(guān)，而且它們的功能異常可直接導(dǎo)致人類不同疾病的發(fā)生。與疾病發(fā)生相關(guān)的的PTP作用機(jī)制及其抑制劑的篩選，一直是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。PTPases包括一大家庭跨膜(受體型)和胞內(nèi)(非受體型)酶，參與調(diào)控一系列重要生命過程。有幾種PTPases可能在胰島素通路中受體或受體后環(huán)節(jié)影響胰島素影響作用。目前研究主要集中在SHP-2和PTP1B。PTPlB是第一個被成功分離的蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶。該酶為一個37KD的胞內(nèi)酶，通過含有35個氨基酸殘基的C末端被定位于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，在第215位的Cys是PTPBl的催化活性中心。研究表明，PTPlB通過胰島素受體(Insulin Receptor, IR)和胰島素受體底物(Insulin Receptor Substrate, IRS),來阻斷胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,最終影響血液中匍萄糖向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)，表現(xiàn)出血糖升聞的現(xiàn)象另外。另外考慮到PTPlB基因敲除的小鼠對肥胖癥具有免疫性，所以可以肯定PTPlB在肥胖癥的發(fā)病過程中起著重要的作用。故而PTPlB是開發(fā)新抗糖尿病和肥胖藥物的作用靶點(diǎn)。蛋白酪氨酸憐酸酶SHP2[Src homology 2(SH2)domain containingphosphotyrosinephosphatase 2, SHP2]是一種由PTPNll基因編碼，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)廣泛表達(dá)的非受體型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)。SHP2通過參與多種細(xì)胞內(nèi)訊息傳遞如MAPkinase、Jak-Stat及PI3kinase等途徑，在細(xì)胞的增殖及分化等過程起重要作用。PTPNll被確定為原癌基因，也是許多其他原癌基因信號通路的重要組成部分，因此，SHP2作為治療Noonan綜合癥、幼年型粒單核細(xì)胞白血病等，以及其他可能相關(guān)腫瘤疾病的潛在藥物靶點(diǎn)。迄今，現(xiàn)有技術(shù)中尚沒有關(guān)于從玫煙色棒束孢發(fā)酵產(chǎn)物中提取蛋白酪氨酸磷酸酶抑制劑的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種新的蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑、其制備方法及其在制備治療和預(yù)防糖尿病、肥胖癥及癌癥的藥物組合物中的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下。一種蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑，是如下(a)或(b)、
(a)、具有如下結(jié)構(gòu)式的化合物；
權(quán)利要求
1.一種蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑，是如下(a)或(b) (a)、具有如下結(jié)構(gòu)式的化合物；
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑，其特征在于其藥用衍生物為藥用鹽，此藥用鹽為保持所述(a)的生物有效性且由非毒性的有機(jī)酸、無機(jī)酸、有機(jī)堿或無機(jī)堿形成的藥學(xué)常用酸加成鹽或堿加成鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑，其特征在于制備所述酸加成鹽所用的無機(jī)酸為鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸或硝酸，制備所述酸加成鹽 所用的有機(jī)酸為對甲苯磺酸、水楊酸、甲磺酸、草酸、蘋果酸、虎珀酸、乳酸、富馬酸；制備所述堿加成鹽所用的堿性制劑為銨、鉀、鈉或季銨氫氧化物。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑，其特征在于其藥用衍生物的形式為酯、醚衍生物，或者為通過雙鍵的氧化引入醛、酸或醇功能基；或者為在環(huán)內(nèi)引入磺酸基；或者為通過Witting反應(yīng)引入含有4-10個碳的鏈。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑，其特征在于通過Witting反應(yīng)引入的鏈中攜帶OR^NR2R3或鹵素，其中R1H為H或含有1-5個碳的烷基，鹵素為F、Cl.Br 或 I。
6.權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑的制備方法，其特征在于蟲生真菌玫煙色棒束孢固體或液體發(fā)酵液用乙酸乙酯、乙醇、甲醇或氯仿甲醇混合溶劑提取，所得提取物用硅膠柱層析分離，所得玫煙菌素即為權(quán)利要求I中的蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑(a)。
7.權(quán)利要求6所述蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑的制備方法其特征步驟在于 A、發(fā)酵培養(yǎng)將所述玫煙色棒束孢菌株以接種針接種至改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基中，260C，150rpm搖床培養(yǎng)7天，得種子液；將種子液接種至大米培養(yǎng)基，26°C光照培養(yǎng)30天，得發(fā)酵物；其中，所述改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的配方為200重量份的去皮土豆、20重量份的的葡萄糖、3重量份的KH2PO4U. 5重量份的MgS04、0. I重量份的檸檬酸、O. 01重量份的維生素B1，溶于1000重量份的無菌水，pH 6. 5，121°C滅菌20min，即得；所述大米培養(yǎng)基的配方為80重量份的大米、100重量份的無菌水，浸泡12h，pH自然，121°C滅菌30min，即得； B:提取分離發(fā)酵物用等體積的乙酸乙酯室溫下浸泡提取48h，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45°C減壓蒸餾至干，得浸膏樣品，將此浸膏樣品與I. 2倍重、100目 200目的硅膠充分?jǐn)嚢杌旌希稍?，研磨均勻成粉末狀，使浸膏樣品充分吸附于硅膠顆粒上，然后進(jìn)行常壓硅膠柱層析，硅膠柱規(guī)格為300目 400目，用石油醚/乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫，梯度洗脫的 流程為 100:0, 95:5,90:10,80:20，60:40，50:50，v/v，收集洗脫液，45 °C 減壓蒸餾，濃縮 后用有機(jī)溶劑洗滌；在上述石油醚/乙酸乙酯的80 20洗脫段得到的組分進(jìn)一步進(jìn)行上述常壓硅膠柱層析，并再次用石油醚/乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫，梯度洗脫的流程為100:0, 50:1,20:1, 15:1, 10:1,5:1, v/v，收集洗脫液，45°C減壓蒸餾，在5:1洗脫段得到玫煙菌素，即為權(quán)利要求I中的蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑(a)。
8.權(quán)利要求6所述蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑的制備方法其特征步驟在于 A、發(fā)酵培養(yǎng)將所述玫煙色棒束孢菌株以接種針接種至改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基中，260C，150rpm搖床培養(yǎng)7天，得種子液；將種子液接種至大米培養(yǎng)基，26°C光照培養(yǎng)30天，得發(fā)酵物；其中，所述改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的配方為200重量份的去皮土豆、20重量份的的葡萄糖、3重量份的KH2PO4U. 5重量份的MgS04、0. I重量份的檸檬酸、O. 01重量份的維生素B1，溶于1000重量份的無菌水，pH 6. 5，121°C滅菌20min，即得；所述大米培養(yǎng)基的配方為80重量份的大米、100重量份的無菌水，浸泡12h，pH自然，121°C滅菌30min，即得； B :提取分離發(fā)酵物用等體積的乙酸乙酯室溫下浸泡提取48h，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45°C減壓蒸餾至干，得浸膏樣品，將此浸膏樣品與I. 2倍重、100目 200目的硅膠充分?jǐn)嚢杌旌?，干燥，研磨均勻成粉末狀，使浸膏樣品充分吸附于硅膠顆粒上，然后進(jìn)行常壓硅膠柱層析，硅膠柱規(guī)格為300目 400目，用石油醚/乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫，梯度洗脫的流程為10O: O, 95:5, 90:10, 80:20, 60:40, 50:50, v/v,收集洗脫液，45V減壓蒸餾，濃縮后用有機(jī)溶劑洗滌；合并各洗脫段的洗脫液，并再次進(jìn)行上述常壓硅膠柱層析，層析后再次用石油醚/乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫，梯度洗脫的流程為100:0, 50:1,20:1, 15:1, 10:1,5:1, v/v,收集洗脫液，45°C減壓蒸餾；再次合并各洗脫段的洗脫液并重復(fù)100:0, 50:1,20:1, 15:1, 10:1,5:1,v/v的石油醚/乙酸乙酯梯度洗脫流程，在5:1洗脫段得到玫煙菌素，即為權(quán)利要求I中的蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑(a)。
9.權(quán)利要求6所述蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑的制備方法其特征步驟在于 A、發(fā)酵培養(yǎng)將所述玫煙色棒束孢菌株以接種針接種至改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基中，260C，150rpm搖床培養(yǎng)7天，得種子液；將種子液接種至大米培養(yǎng)基，26°C光照培養(yǎng)30天，得發(fā)酵物；其中，所述改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的配方為200重量份的去皮土豆、20重量份的的葡萄糖、3重量份的KH2PO4U. 5重量份的MgS04、0. I重量份的檸檬酸、O. 01重量份的維生素B1，溶于1000重量份的無菌水，pH 6. 5，121°C滅菌20min，即得；所述大米培養(yǎng)基的配方為80重量份的大米、100重量份的無菌水，浸泡12h，pH自然，121°C滅菌30min，即得； B :提取分離發(fā)酵物用等體積的乙酸乙酯室溫下浸泡提取48h，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45°C減壓蒸餾至干，得浸膏樣品，將此浸膏樣品與I. 2倍重、100目 200目的硅膠充分?jǐn)嚢杌旌?，干燥，研磨均勻成粉末狀，使浸膏樣品充分吸附于硅膠顆粒上，然后進(jìn)行常壓硅膠柱層析，硅膠柱規(guī)格為300目 400目，用石油醚/乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫，梯度洗脫的流程為10O: O, 95:5, 90:10, 80:20, 60:40, 50:50, v/v,收集洗脫液，45V減壓蒸餾，濃縮后用有機(jī)溶劑洗滌；在上述石油醚/乙酸乙酯的80 20洗脫段得到的組分進(jìn)一步進(jìn)行上述常壓硅膠柱層析，并用氯仿/甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，梯度洗脫的流程為100:0，95:5，90:10，v/v，在90 :10洗脫段得到玫煙菌素，即為權(quán)利要求I中的蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑(a)。
10.權(quán)利要求I所述蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑的用途，其特征在于用于制備治療和預(yù)防糖尿病、肥胖癥及癌癥的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸磷酸酶抑制劑其制備方法是利用玫煙色棒束孢固體或液體發(fā)酵液用乙酸乙酯、乙醇、甲醇或氯仿甲醇混合溶劑提取，所得提取物用硅膠柱層析分離，即得。其可用于制備治療和預(yù)防糖尿病、肥胖癥及癌癥的藥物組合物。
文檔編號C12P17/12GK102675199SQ20121015855
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月22日
發(fā)明者張軍, 羅都強(qiáng) 申請人:河北大學(xué)