專利名稱：小鼠短串聯(lián)重復(fù)序列的復(fù)合擴增體系及檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及鑒定小鼠多個短串聯(lián)重復(fù)序列的復(fù)合擴增體系及其試劑盒，可以快速準(zhǔn)確進行小鼠細胞STR分型進而鑒定小鼠細胞系類型。
背景技術(shù)：
2009年，Nature上的一篇社論指出在數(shù)以千計的使用細胞系的生物實驗室中， 許多實驗室并不知道介于1/5-1/3之間的常用細胞系可能已不是原先認(rèn)為的那樣了。過去的25年里，大量的研究，加上美國、英國、德國和日本細胞庫的經(jīng)驗發(fā)現(xiàn)18-36%的培養(yǎng)物含有錯誤鑒定的物種或其它細胞類型。就連管理嚴(yán)格的美國國家癌癥研究所的細胞庫都出現(xiàn)了細胞系遭污染的現(xiàn)象?，F(xiàn)在實驗室研究人員唯一的辦法是給細胞驗明正身，使用DNA 指紋圖譜(STR分型技術(shù))驗證所使用的細胞是否與數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)一致以鑒定身份。Nature 雜志社希望這一身份鑒定工作能持續(xù)下去，將主要的無限制增殖的細胞系(癌細胞)鑒定完畢。Nature雜志將會要求投稿人為文章中的所有細胞系提供身份驗證。2010 $ 5 月 ATCC SDO (Standards Development Organization)Nature review cancer雜志上發(fā)表了題為〈〈Cell line misidentification :the beginning of the end》前瞻性報道。報道指出細胞系作為正?；蚰[瘤組織的模式細胞被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物開發(fā)，然而很大一部分的細胞系被錯誤標(biāo)記或被其它個體、組織、種系來源的細胞所替代，由于科學(xué)界無法解決此類問題以致大量因使用錯誤鑒定的細胞系而導(dǎo)致誤導(dǎo)或存在潛在錯誤的學(xué)術(shù)論文發(fā)表。通過近年來的努力而開發(fā)出的STR分型方法已成為對人源細胞進行鑒定的標(biāo)準(zhǔn)方法，STR分型的應(yīng)用成為根除細胞錯誤鑒定這一問題的重要一步。STR位點是由不同數(shù)目重復(fù)單元組成的重復(fù)DNA序列。STR分型的原理為在一單管中同時擴增多個多態(tài)性DNA片段。每一個STR位點均能被擴增且擴增產(chǎn)物標(biāo)記上不同顏色的熒光，使得擴增產(chǎn)物很容易通過片段大小和顏色來區(qū)分。STR分型最先應(yīng)用于親緣鑒定、法醫(yī)鑒定、以及鑒定在20年之前的大災(zāi)難中遇難的受害者。隨后，STR分型用于細胞鑒定中。用STR分型來做細胞鑒定具有其它方法所不具備的優(yōu)勢1.高度豐富信息同時分析多個STR位點，可以建立每個細胞的標(biāo)準(zhǔn)分型圖譜，便于不同來源細胞進行比對。2.靈敏度高，能夠檢測Ing或更低的DNA量，能夠檢測早期細胞污染。3.分型快速、且結(jié)果穩(wěn)定可靠，易于操作及自動化。許多方法已被用來檢測細胞系交叉污染，包括同工酶分析、核型分析、人類白細胞抗原(HLA)分型，免疫分型和DNA指紋識別。這些方法都可以鑒別出某一種細胞系，但是分辨能力各不一樣。然而，這些方法在不同實驗室所得到的數(shù)據(jù)卻不盡相同，以致沒有任何一種方法可以用來建立一個標(biāo)準(zhǔn)參考數(shù)據(jù)庫。由于STR分型具有快速、鑒定的細胞系結(jié)果明確等無以倫比的優(yōu)點，故STR分型的應(yīng)用價值最大。目前STR分型技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于人源細胞系的鑒定，并已建立起標(biāo)準(zhǔn)的 STRMarker組合，用于鑒定1000多種細胞。但對于小鼠細胞系的鑒定，由于沒有成型的多重STR擴增體系和相關(guān)的產(chǎn)品，STR分型并未得到廣泛應(yīng)用。在過去一個世紀(jì)的研究中，小鼠已經(jīng)成為建立人類遺傳性疾病的動物模型的最佳實驗材料，小鼠細胞系已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個領(lǐng)域。如在疾病研究和疫苗生產(chǎn)方面常用的小鼠細胞系有A9、3T3、NS-1、J774A. 1、CTLL_2、SC_1等多種，是除了人類細胞外被應(yīng)用數(shù)量最多的動物細胞，數(shù)量有幾百種。建立小鼠細胞系的STR分型方法，對于每一位使用小鼠細胞系的研究者來說無疑是一個福音，也必將極大地促進人類健康事業(yè)的發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述領(lǐng)域中的不足和需求，本發(fā)明提供一種鑒定小鼠細胞系的復(fù)合擴增體系，其擴增的位點是一些可以用來鑒定小鼠細胞系的STR位點，在鑒定小鼠細胞系時，其分型快速、結(jié)果準(zhǔn)確、操作簡單、便于大規(guī)模推廣，這種方法隨著試劑盒開發(fā)成功可以批量生產(chǎn)，使用條件可以模式化，全部過程都有自動化設(shè)備，不再依賴于人的操作經(jīng)驗，可以實現(xiàn)自動化，所需時間短，整個檢測時間需要6小時左右。小鼠短串聯(lián)重復(fù)序列的復(fù)合擴增體系，所述擴增體系中同時擴增STR位點 D2Mit395. l、D4Mitl70. l、D5Mit201. 1、D7Mit40、DllMit4、D15Mitl6 和 D17Mit51. 1。所述擴增體系中還包括性別決定位點Jaridl。所述擴增體系中的被擴增位點，分別由三種不同顏色的熒光素標(biāo)記，三組組合分別為第一組D15Mitl6、DllMit4、D2Mit395. 1 ；第二組D4Mitl70. 1、D7Mit40、 D5Mit201. 1 ；第三組D17Mit51. 1、Jaridl。所述三組中可以分別標(biāo)記為FAM或熒光素、HEX或JOE、TMR或VIC。所述第一組的標(biāo)記為FAM或熒光素；所述第二組標(biāo)記為HEX或JOE ；所述第三組標(biāo)記為TMR或VIC。所述STR位點由一對引物擴增，其中一條引物的5’末端帶有標(biāo)記。所述引物分別為D2Mit395. 1 引物:引物 1 GCCAAAGCTAGGTTTTCTGGTA，
引物 2 TCCAAAGGTACCAAGGCATAAT ；D4Mitl70. 1 引物引物 1 TTCCATCGAGTGACTTGATC，引物 2 CAGAGTGGCTGTCATCTGG ；D5Mit201. 1 引物:引物 1 TAACCTCTCTTAGGCTCGGAT，引物 2 :ACAGTGGAGTTGGACTGTGTT ；D7Mit40 引物引物 1 :GTCAACAGTCAGGAAAGCTG，引物 2 CAGATGCTTGTATTTGCAAAG ；DllMit4 引物引物 1 CAGTGGGTCATCAGTACAGC，引物 2 :AAGCCAGCCCAGTCTTCATA ；
D15Mitl6 引物:引物 1 :AGACTCAGAGGGCAAAAT，引物 2 TCGGCTTTTGTCTGTCTG ；D17Mit51. 1 引物引物 1 TCTGCCCTGTAACAGGAG，引物 2 CTTCTGGAATCAGAGGAT ；Jaridl 引物: 引物 1 :GCTGACTACTTCAACATGC，引物 2 CCGCTGCCAAATTCTTTGG ；一種試劑盒，包括一擴增體系，其特征在于包括STR位點D2MU395. 1、 D4Mitl70. 1、D5Mit201. 1、D7Mit40、DllMit4、D15Mitl6、D17Mit51. 1 的特異性引物對的混合物。用于擴增D2Mit395. 1的引物對是由位于SEQ ID NOl中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID NOl中400 450位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增D4Mitl70. 1的引物對是由位于SEQ ID N02中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N02中170 220位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增D5Mit201. 1的引物對是由位于SEQ ID N03中90 140位18 27個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N03中370 420位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增D7Mit40的引物對是由位于SEQ ID N04中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N04中270 320位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增DllMit4的引物對是由位于SEQ ID N05中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N05中320 370位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增D15Mitl6的引物對是由位于SEQ ID N06中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N06中200 250位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增D17Mit51. 1的引物對是由位于SEQ ID N07中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N07中220 270位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增Jaridl的引物對是由位于SEQ ID N08中70 120位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N08中290 340位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合。優(yōu)選引物對分別為上述8對引物。所述擴增體系的總體積為20μ1，其中IOX緩沖液2μ1，2.5πιΜ each dNTP 1. 6μ 1，引物對混合物4. 0μ 1，2. 5U Taq酶0. 4 μ 1，去離子水10 μ 1，加入模板DNA為2 μ 1。
所述引物對混合物中的引物對濃度分別為0. 3 μ M的D15MU16引物對、0. 2 μ M的 DllMit4 引物對、1. ΟμΜ 的 D2Mit395. 1 引物對、1. ΟμΜ 的 D4Mitl70. 1 引物對、0. 7μΜ 的 D7Mit40 引物對、0. 5μΜ 的 D5Mit201. 1 引物對、0. 7 μ M 的 D17Mit51. 1 引物對和 0. 3 μ M 的 Jaridl引物對。所述擴增體系的擴增條件為94 0C變性，5-10min ；59-61 °C退火，30_60sec ； 70-72°C延伸，30-60sec ；60°C最后延伸，30_60min。經(jīng)過多年的不斷努力，我們目前已篩選出一些可以用來鑒定小鼠細胞系的STR位點，如 DlMitl59. 1、D2Mit395. 1、D4Mitl70. 1、D5Mit201. 1、D7Mit40、DllMit4、D15Mitl6、 D17MU51. 1等。本發(fā)明選取其中7個具有高度靈敏性及特異性的STR位點(D2MU395. 1、 D4Mitl70. l、D5Mit201. l、D7Mit40、DllMit4、D15Mitl6、D17Mit51. 1)對小鼠細胞系進行分型檢測。同時，我們加入1個性別決定位點(Jaridl)，建立8個位點的多重復(fù)合擴增體系。 本發(fā)明的整個方法過程1、引物組合的設(shè)計首先，我們選擇了具有高度靈敏性及擴增特異性的STR位點，選擇的位點包括 D2Mit395. l、D4Mitl70. l、D5Mit201. l、D7Mit40、DllMit4、D15Mitl6、D17Mit51. 1，以及性別決定位點Jaridl。我們從小鼠的基因組數(shù)據(jù)中篩選了這些STR位點，具有高度多態(tài)性，和很強的種屬特異性，跟人、豚鼠、大鼠、倉鼠等物種均沒有高度同源序列。根據(jù)候選的位點所在基因的GeneBank序列號從NCBI核酸數(shù)據(jù)庫下載基因序列，各位點所在基因的部分序列見序列表。用于擴增D2Mit395. 1的引物對是由位于序列1中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與序列1中400 450位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物
的組合。用于擴增D4Mitl70. 1的引物對是由位于序列2中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與序列2中170 220位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物
的組合。用于擴增D5Mit2011的引物對是由位于序列3中90 140位18 27個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與序列3中370 420位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合。用于擴增D7MU40位點的引物對是由位于序列4中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與序列4中270 320位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合。用于擴增D11MU4的引物對是由位于序列5中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與序列5中320 370位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合。用于擴增D15MU16的引物對是由位于序列6中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與序列6中200 250位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合。用于擴增D17Mit51. 1的引物對是由位于序列7中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與序列7中220 270位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合。用于擴增Jaridl的引物對是由位于序列8中70 120位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與序列8中290 340位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組
口 O以上引物由Primer3、Primer Premier 5和NCBIBlast等軟件設(shè)計而成。設(shè)計引物時應(yīng)盡量確保各引物的Tm值在(60士2) °C的范圍內(nèi)，擴增效率類似并確保各對引物的擴增產(chǎn)物大小相差I(lǐng)OObp以上。設(shè)計完成后，用AutoDimer等軟件分析引物二聚體和不同引物之間的相互作用，如果有相互作用可產(chǎn)生非特異產(chǎn)物或者二聚體的需要重新設(shè)計，直至得到符合要求的引物序列。選用任一小鼠DNA模板，分別用8對引物進行單重擴增，將擴增產(chǎn)物置于1. 5 2. 0 %的瓊脂糖凝膠上電泳，根據(jù)電泳結(jié)果來調(diào)整PCR體系及擴增條件以得到8對引物共同的擴增條件。最終要達成的效果是在相同體系及擴增條件下，所有的引物對均能出現(xiàn)明亮且較單一的目的條帶。如果有引物滿足不了上述條件，則重新設(shè)計引物。然后，將滿足要求的8對引物，分為三組進行熒光標(biāo)記。每組采用一種熒光素，分別可以是FAM或熒光素、HEX或JOE、TMR或VIC。獲得熒光標(biāo)記引物后，用與之相配對的非熒光引物組合后分別進行單重擴增，將擴增產(chǎn)物置于3130x1遺傳分析儀上進行毛細管電泳，根據(jù)毛細管電泳檢測的結(jié)果來評估每對引物的擴增效率。其后，將同一熒光素標(biāo)記的2對或3對引物混合置于同一管中擴增，將擴增產(chǎn)物置于3130x1遺傳分析儀上進行毛細管電泳，根據(jù)毛細管電泳檢測的結(jié)果來確定每對引物的擴增效率以及此2對或3對引物的混合擴增是否引起非特異擴增。最后，根據(jù)單重擴增及組合擴增的毛細管電泳結(jié)果來初步確定各引物對的加入量，將8對引物混合置于同一管中擴增，再根據(jù)復(fù)合擴增的電泳結(jié)果來調(diào)整各自的濃度，使各引物對的擴增效率(反應(yīng)在電泳結(jié)果的峰高上)基本一致為準(zhǔn)。最終確定的8對引物序列分別見序列表。2.擴增體系及條件的建立2. ITaq酶的選擇Taq酶是擴增體系的重要組分，多種Taq酶都滿足本發(fā)明的需要，如Takara公司的 rTaq 酶和 HS Taq 酶、KAPA Biosystems 公司的 Taq 酶、Roche 公司的 AmpliTaq Gold 酶等均能得到較好的擴增效率和特異性，采用熱啟動Taq酶比非熱啟動酶的擴增特異性要好。2. 2Mg2+濃度的選擇我們摸索了在不同Mg2+濃度梯度下復(fù)合擴增，其中在1. 0-2. OmM的濃度范圍內(nèi)均能得到較好的擴增。2. 3反應(yīng)體積的選擇我們分別采用了 50 μ 1、20 μ 1和10 μ 1體系進行了復(fù)合擴增，結(jié)果顯示20 μ 1與 50 μ 1的體系效果基本相當(dāng)。2. 4反應(yīng)程序的優(yōu)化退火及延伸溫度我們摸索了退火溫度從55°C到62°C之間各溫度下的擴增情況， 結(jié)果顯示在59-61°C范圍內(nèi)均能得到較好結(jié)果。擴增循環(huán)數(shù)在觀-32個有較好的效果。我們摸索了在以下變性、退火及延伸溫度下各時間范圍內(nèi)(見表1)的擴增可以得到較好的結(jié)果
權(quán)利要求
1.小鼠短串聯(lián)重復(fù)序列的復(fù)合擴增體系，所述擴增體系中同時擴增小鼠STR位點 D2Mit395. l、D4Mitl70. l、D5Mit201. 1、D7Mit40、DllMit4、D15Mitl6 和 D17Mit51. 1。
2.根括權(quán)利要求1所述的復(fù)合擴增體系，所述擴增體系中還擴增小鼠性別決定位點 Jaridl0
3.根括權(quán)利要求2所述的復(fù)合擴增體系，所述擴增體系中的被擴增位點分別由三種不同顏色的熒光素標(biāo)記，三組組合分別為第一組D15Mitl6、DllMit4、D2Mit395. 1 ；第二組 D4Mitl70. l、D7Mit40、D5Mit201. 1 ；第三組D17Mit51. UJaridl0
4.根括權(quán)利要求3所述的復(fù)合擴增體系，所述三組中可以分別標(biāo)記為FAM或熒光素、 HEX或J0E、TMR或VIC。所述第一組的標(biāo)記為FAM或熒光素；所述第二組標(biāo)記為HEX或JOE ； 所述第三組標(biāo)記為TMR或VIC。
5.根括權(quán)利要求1所述的復(fù)合擴增體系，所述引物分別為 D2Mit395. 1 引物:引物 1 :GCCAAAGCTAGGTTTTCTGGTA， 引物 2 TCCAAAGGTACCAAGGCATAAT ； D4Mitl70. 1 引物 引物 1 :TTCCATCGAGTGACTTGATC， 引物 2 CAGAGTGGCTGTCATCTGG ； D5Mit201. 1 引物 引物 1 :TAACCTCTCTTAGGCTCGGAT， 引物 2 :ACAGTGGAGTTGGACTGTGTT ； D7Mit40 引物引物 1 :GTCAACAGTCAGGAAAGCTG， 引物 2 CAGATGCTTGTATTTGCAAAG ； DllMit4 引物引物 1 :CAGTGGGTCATCAGTACAGC， 引物 2 :AAGCCAGCCCAGTCTTCATA ； D15Mitl6 引物 引物 1 :AGACTCAGAGGGCAAAAT， 引物 2 :TCGGCTTTTGTCTGTCTG ； D17Mit51. 1 引物 引物 1 :TCTGCCCTGTAACAGGAG， 引物 2 :CTTCTGGAATCAGAGGAT ； Jaridl 引物引物 1 :GCTGACTACTTCAACATGC， 引物 2 :CCGCTGCCAAATTCTTTGG。
6.一種試劑盒，包括一擴增體系，其特征在于擴增體系中包括STR位點D2MU395. 1、 D4Mitl70. l、D5Mit201. l、D7Mit40、DllMit4、D15Mitl6 和 D17Mit51. 1 的特異性引物對的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，所述引物的混合物中還包括性別決定位點Jaridl的引物對。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，所述特異性引物對分別為用于擴增D2Mit395. 1的引物對是由位于SEQ ID NOl中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID NOl中400 450位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增D4Mitl70. 1的引物對是由位于SEQ ID N02中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N02中170 220位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增D5Mit201. 1的引物對是由位于SEQ ID N03中90 140位18 27個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N03中370 420位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增D7Mit40的引物對是由位于SEQ ID N04中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N04中270 320位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增DllMit4的引物對是由位于SEQ ID N05中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N05中320 370位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增D15Mitl6的引物對是由位于SEQ ID N06中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N06中200 250位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增D17Mit51. 1的引物對是由位于SEQ ID N07中90 140位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N07中220 270位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合，用于擴增Jaridl的引物對是由位于SEQ ID N08中70 120位18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物，和與SEQ ID N08中290 340位的互補序列的18 25個連續(xù)堿基構(gòu)成的引物的組合。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，所述特異性引物對分別為 D2Mit395. 1 引物:引物 1 :GCCAAAGCTAGGTTTTCTGGTA， 引物 2 TCCAAAGGTACCAAGGCATAAT ； D4Mitl70. 1 引物 引物 1 :TTCCATCGAGTGACTTGATC， 引物 2 CAGAGTGGCTGTCATCTGG ； D5Mit201. 1 引物 引物 1 :TAACCTCTCTTAGGCTCGGAT， 引物 2 :ACAGTGGAGTTGGACTGTGTT ； D7Mit40 引物引物 1 :GTCAACAGTCAGGAAAGCTG， 引物 2 CAGATGCTTGTATTTGCAAAG ；DllMit4 引物引物 1 :CAGTGGGTCATCAGTACAGC， 引物 2 :AAGCCAGCCCAGTCTTCATA ； D15Mitl6 引物 引物 1 :AGACTCAGAGGGCAAAAT， 引物 2 :TCGGCTTTTGTCTGTCTG ； D17Mit51. 1 引物 引物 1 :TCTGCCCTGTAACAGGAG， 引物 2 :CTTCTGGAATCAGAGGAT ； Jaridl 引物引物 1 :GCTGACTACTTCAACATGC， 引物 2 :CCGCTGCCAAATTCTTTGG。
全文摘要
本發(fā)明涉及小鼠短串聯(lián)重復(fù)序列的復(fù)合擴增體系及檢測試劑盒，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及在一個PCR體系中同時擴增多個小鼠的短串聯(lián)重復(fù)序列(D2Mit395.1、D4Mit170.1、D5Mit201.1、D7Mit40、D11Mit4、D15Mit16、D17Mit51.1)及1個性別決定位點(Jarid1)，對小鼠DNA進行復(fù)合擴增、毛細管電泳檢測。該體系可以用于小鼠細胞的基因分型，由于各個位點采用熒光標(biāo)記的引物，得到的產(chǎn)物帶有熒光標(biāo)記，可以在遺傳分析儀等儀器上進行檢測，得到的片段長度更精確，可重復(fù)性更高。本體系操作簡單、便于大規(guī)模推廣，全部過程都有自動化設(shè)備，整個檢測時間只需6小時左右。
文檔編號C12Q1/68GK102559878SQ20111043362
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月21日
發(fā)明者呂悅心, 周仲春, 陳初光 申請人:北京閱微基因技術(shù)有限公司