專(zhuān)利名稱(chēng)：豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法，尤其涉及利用 RT-PCR-DHPLC技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)方法及所使用的試劑。
背景技術(shù)：
豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的以妊娠母豬繁殖障礙、仔豬和育肥豬出現(xiàn)呼吸道癥狀為特征的傳染病。該病從1987年首次在美國(guó)被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，已迅速傳播至全世界各個(gè)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家和地區(qū)，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失，已被國(guó)際獸疫局 (OIE)列為需要通報(bào)的B類(lèi)傳染病。我國(guó)于1996年首次報(bào)道分離到PRRSV，目前該病毒已在我國(guó)很多省市豬群發(fā)生地方性流行，成為我國(guó)豬病的主要病原之一。近兩年發(fā)生于我國(guó)南方的豬“高熱病”也與此病原的變異株有關(guān)，當(dāng)時(shí)由于診斷不及時(shí)，使許多中小豬場(chǎng)倒閉， 給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，因此建立快速、有效、實(shí)用的檢測(cè)方法是防制PRRS 流行的重要環(huán)節(jié)。目前，常用的PRRS診斷方法有病毒中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)和免疫組織化學(xué)法(IHC)等，但存在操作復(fù)雜費(fèi)時(shí)、靈敏度或特異性不強(qiáng)等缺點(diǎn)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，RT-PCR也被廣泛的用到病毒性疾病的快速診斷中， 此方法簡(jiǎn)單、方便、快速、敏感，但存在假陽(yáng)性和PCR污染等弊端。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR (Real time RT-PCR)技術(shù)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、速度快等優(yōu)點(diǎn)但由于成本高、探針保存時(shí)間有限使得該方法應(yīng)用范圍有限。變性高效液相色譜通過(guò)對(duì)細(xì)微差別的 DNA序列可以從毒株水平快速識(shí)別病原。本研究旨在根據(jù)江西省近期PRRSV流行毒株的序列特點(diǎn)，將PCR-DHPLC技術(shù)用于PRRSV的檢測(cè)，通過(guò)特異性、敏感性、重復(fù)性試驗(yàn)，并與常規(guī) RT-PCR、熒光定量PCR進(jìn)行比較，建立一種特異性強(qiáng)、敏感性高的PCR-DHPLC檢測(cè)新技術(shù)，用于PRRS的快速、高通量診斷與監(jiān)測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測(cè)試劑盒及其RT-PCR-DHPLC 檢測(cè)方法。首先，本發(fā)明所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測(cè)試劑盒，該試劑盒組成如下 ① 5X 反轉(zhuǎn)錄緩沖液，4 μ L、② IOmM dNTP,4 gL、③ 20U/ μ L Rnasin, 1 U L、
④ 200 U/ μ L M-MLV, 1 μ L、⑤ 10 X PCR 緩沖液，2 μ L、⑥ 5U/ U L Taq DNA 聚合酶，
0. 2μ L、⑦ 10 μ M PRRSV 上游引物，1 μ L、⑧ 10 |i M PRRSV 下游引物，2 μ L、⑨ ddH20，
16. 8μ L ；
其中，PRRSV特異性引物序列如下 上游引物:5，- CTGTGCCCTGGCTG CGTT -3，，下游引物:5，- GAGTCTGCCCTTGGT GT -3，。本發(fā)明還提供了利用上述試劑盒檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒的檢測(cè)方法，包括如下步驟
1.在20μL的反轉(zhuǎn)錄體系中加入待測(cè)病毒總RNA 11 μ H,①號(hào)劑反轉(zhuǎn)錄4 μ 1
，②號(hào)劑2 μ],③號(hào)劑1 μ ,⑧號(hào)劑1 μ]1,70τ水浴10 min后迅速冰浴5 min，快
速加入④號(hào)劑1 口31,421水浴1 h，再放于70°C水浴5 min滅活反轉(zhuǎn)錄酶，立即置冰上冷卻。將反轉(zhuǎn)錄后的cDNA置于-20 °C保存?zhèn)溆谩?.取上步獲得的cDNA 2 yL，加入⑤號(hào)劑2yL、②號(hào)劑2yL、⑥號(hào)劑0.2yL、⑦ 號(hào)劑和⑧號(hào)劑各ι μ L，⑨號(hào)劑16. 8 μ L，總體積25 μ L，5000 r/min離心10s，然后按下列參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增
預(yù)變性:94°C,3 min ；
進(jìn)入循環(huán)94°C變性60s，60°C退火60s，72°C延伸60s，;35次循環(huán)； 終止延伸72°C，7 min ； 4°C保存反應(yīng)產(chǎn)物。3.將RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DHPLC分析
色譜柱=PS-DVB & C18 DNASep 色譜柱，4. 6 mmX50 mm，粒度 3 ψ- m ； 柱溫:50°C ；
流動(dòng)相(體積比)0. 0 min, 51. 0%緩沖溶液A，49. 0%緩沖溶液B ； 0. 5 min, 45. 7%緩沖溶液A，54. 3%緩沖溶液B ；
2.7 min, 41. 3%緩沖溶液A，58. 7%緩沖溶液B ； 4. 9 min, 38. 7%緩沖溶液A，61. 3%緩沖溶液B ； 7. 1 min, 37. 1%緩沖溶液A，62. 9%緩沖溶液B ； 9. 3 min, 35. 9%緩沖溶液A，64. 1%緩沖溶液B ；
其中，緩沖溶液A是濃度0. ImM的TEAA水溶液；緩沖溶液B是濃度為0. IM TEAA水溶液與乙腈按體積比3:1的混合溶液； 流速0. 9 mL/min ；
檢測(cè)器熒光檢測(cè)器，光源150W Xenon燈；激發(fā)譜帶寬15 nm ；發(fā)射譜帶寬15. 3 nm ；檢測(cè)靈敏度在波長(zhǎng)350 nm積分2 s ；
上樣量=RT-PCR產(chǎn)物5 UL。
t檢測(cè)結(jié)束后，根據(jù)DHPLC檢測(cè)圖譜中特征色譜峰的峰形、保留時(shí)間以及與陽(yáng)性對(duì)照譜圖的對(duì)照，來(lái)確定樣品中是否含有PRRSV。本發(fā)明采用RT-PCR-DHPLC技術(shù)，針對(duì)PRRSV建立靈敏便捷的檢測(cè)方法，并建立應(yīng)用于該方法的快速檢測(cè)試劑盒。使用本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法，可以高靈敏度地檢測(cè)PRRSV，并且檢測(cè)耗時(shí)短，操作簡(jiǎn)捷，可以節(jié)省大量的勞力和財(cái)力，適合快速檢測(cè)的要求。


圖 1 是 PRRSV RT-PCR-DHPLC 檢測(cè)譜圖。
圖2 PCR-DHPLC檢測(cè)PRRSV的特異性圖。圖3 PCR-DHPLC檢測(cè)PRRSV的重復(fù)性圖。
具體實(shí)施例方式下面為本發(fā)明的具體實(shí)施例，其對(duì)本方法的建立及其應(yīng)用作進(jìn)一步的說(shuō)明，但并不以任何形式限制本發(fā)明的內(nèi)容。如圖1所示，橫坐標(biāo)均為保留時(shí)間(單位分鐘min)，縱坐標(biāo)表示吸收峰信號(hào)強(qiáng)度 (單位毫伏mV)。病毒RNA提取試劑盒(MagNA Pure LC總核酸分離試劑盒)；反轉(zhuǎn)錄試劑、Ex Taq, 10XPCR buffer, dNIPs等PCR相關(guān)試劑購(gòu)自大連寶生物公司，三乙胺乙酰鹽(TEAA，色譜純)購(gòu)自iTransgenomic公司，乙腈(色譜純)購(gòu)自Fisher公司。本部分試驗(yàn)所用的主要儀器和設(shè)備包括基因擴(kuò)增儀(ABI9700，美國(guó)ABI公司)， 實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增儀(Lightcycler 480，瑞士 Roche公司)，核酸抽提純化系統(tǒng)(MagNA LC2. 0，瑞士 Roche公司)，變性高效液相色譜(簡(jiǎn)稱(chēng)DHPLC，美國(guó)Transgenomic公司)。實(shí)施例1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法的建立 (1)引物的設(shè)計(jì)、合成與試劑盒的組裝
該試劑盒包含以下組分①5X反轉(zhuǎn)錄緩沖液、②IOmM dNTP、③20U/ Li L Rnasin, ④ 200 L μ L M-MLV、⑤ IOXPCR 緩沖液、⑥ OT/ μ L Taq DNA 聚合酶、⑦ 10 μ M
PRRSV上游引物、⑧10 μ M PRRSV下游引物、⑨ddH20 ；
其中，PRRSV特異性引物序列如下 上游引物:5，- CTGTGCCCTGGCTG CGTT -3，， 下游引物:5，- GAGTCTGCCCTTGGT GT -3，。(2) RT-PCR-DHPLC 檢測(cè)方法
本檢測(cè)方法使用本實(shí)施例建立的檢測(cè)試劑盒，包括如下檢測(cè)步驟 A.病毒RNA的提取及質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)模板的制備 A. 1病毒RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
病毒總RNA用瑞士 Roche公司的核酸抽提純化系統(tǒng)MagNA LC2. 0配合其總核酸提取試劑盒并按其說(shuō)明書(shū)進(jìn)行提取，提取的RNA用60 μ L無(wú)RNase水溶解沉淀，-20 °C保存?zhèn)溆?。?0 _UL·的反轉(zhuǎn)錄體系中加入待測(cè)病毒總RNA 11 μΙ,①號(hào)劑反轉(zhuǎn)錄4 μ H,②號(hào)劑2 μ 31,③號(hào)劑1 μ 31,⑧號(hào)劑1 μ L ’ 70°C水浴10 min后迅速冰浴5
min,快速加入④號(hào)劑1 μ L· , 42°C水浴1 h，再放于70°C水浴5 min滅活反轉(zhuǎn)錄酶，立即
置冰上冷卻。將反轉(zhuǎn)錄后的cDNA置于-20 °C保存?zhèn)溆?。A. 2目的基因的克隆
以合成的cDNA為模板，用合成的克隆用上、下游引物擴(kuò)增目的片段，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳鑒定后，用膠回收試劑盒回收目的片段，然后將目的片段與PGEM-T Easy載體連接，將其轉(zhuǎn)化DH5 α感受態(tài)細(xì)胞，挑取疑似陽(yáng)性菌落進(jìn)行培養(yǎng)，提取重組質(zhì)粒，對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行PCR、酶切鑒定，將鑒定正確的陽(yáng)性重組質(zhì)粒菌液送寶生物公司測(cè)序驗(yàn)證。B.引物篩選與反應(yīng)體系優(yōu)化
檢索文獻(xiàn)，確定靶基因，從GenBank下載所有靶基因的序列，用Lasergene進(jìn)行序列比對(duì)，并截取最一致的序列設(shè)計(jì)PCR-DHPLC檢測(cè)用引物，驗(yàn)證其保守型。調(diào)整Taq酶、Mg2+、引物對(duì)、引物用量、和循環(huán)條件，直至得出最佳反應(yīng)體系和反應(yīng)條件。C. PCR擴(kuò)增條件
反應(yīng)體系取cDNA 2 yL，加入⑤號(hào)劑2yL、②號(hào)劑2yL、⑥號(hào)劑0. 2 μ L、⑦號(hào)劑和 ⑧號(hào)劑各1 μ L，⑨號(hào)劑16. 8 μ L，總體積25 μ L，5000 r/min離心10s，然后按下列參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增 反應(yīng)條件
預(yù)變性:94°C,3 min ；
進(jìn)入循環(huán)941變性608，601退火60s，72°C延伸60s，;35次循環(huán)； 終止延伸72°C，7 min ； 4°C保存反應(yīng)產(chǎn)物。D. DHPLC 分析
色譜柱=PS-DVB & C18 DNASep 色譜柱，4. 6 mmX50 mm，粒度 3 Ll m ； 柱溫:50°C ；
流動(dòng)相(體積比)0. 0 min, 51. 0%緩沖溶液A，49. 0%緩沖溶液B ；
0. 5 min, 45. 7%緩沖溶液A，54. 3%緩沖溶液B ；
2. 7 min, 41. 3%緩沖溶液A，58. 7%緩沖溶液B ；
4. 9 min, 38. 7%緩沖溶液A，61. 3%緩沖溶液B ；
7. 1 min, 37. 1%緩沖溶液A，62. 9%緩沖溶液B ；
9. 3 min, 35. 9%緩沖溶液A，64. 1%緩沖溶液B ；
其中，緩沖溶液A是濃度0. ImM的TEAA水溶液；緩沖溶液B是濃度為0. IM TEAA水溶液與乙腈按體積比3:1的混合溶液； 流速0. 9 mL/min ；
檢測(cè)器熒光檢測(cè)器，光源150W Xenon燈；激發(fā)譜帶寬15 nm ；發(fā)射譜帶寬15. 3 nm ；檢測(cè)靈敏度在波長(zhǎng)350 nm積分2 s ；
上樣量rt-pcr產(chǎn)物5 μ 。實(shí)施例2、PCR-DHPLC檢測(cè)方法特異性試驗(yàn)
取豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬細(xì)小病毒(PPV)、豬圓環(huán)病毒II型(PCV-2)、豬流感病毒(SIV)、豬瘟病毒(CSFV)和豬偽狂犬病毒(PRV)六種病毒培養(yǎng)液，提取RNA/DNA 進(jìn)行PCR-DHPLC檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果僅PRRSV出現(xiàn)擴(kuò)增吸收峰，結(jié)果為陽(yáng)性；PPV、PCV-2、SIV, CSFV和PRV未出現(xiàn)相應(yīng)的擴(kuò)增吸收峰，結(jié)果均為陰性。如圖2所示1.豬繁殖與呼吸綜合征病毒2-6.豬細(xì)小病毒、豬圓環(huán)病毒II型、豬流感病毒、豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒Fig. 2 Specialty detection of PCR-DHPLC for PRRSV 1. PRRSV 2-6. PPV, PCV-2,SIV, CSFV, PRV。
特異性試驗(yàn)結(jié)果表明，采用實(shí)施例1所建立的檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法，適合于 PCR-DHPLC檢測(cè)的引物可以特異性擴(kuò)增檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)，具有很好的豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)鑒定特異性。實(shí)施例3、RT-PCR-DHPLC重現(xiàn)性試驗(yàn)
取7個(gè)不同時(shí)段培養(yǎng)的PRRSV細(xì)胞液，提取RNA后，采用實(shí)施例1所建立的檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，記錄每次測(cè)定的出峰時(shí)間及峰值，驗(yàn)證PRRSV RT-PCR-DHPLC 法的重復(fù)性。檢測(cè)結(jié)果如附圖3所示。1-7.豬繁殖與呼吸綜合征病毒8. PBSFig. 3 Repeatability detection of PCR-DHPLC for PRRSV 1-7. PRRSV 8. PBS
由圖3可見(jiàn)，豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)均出現(xiàn)擴(kuò)增吸收峰，且出峰時(shí)間和峰型重現(xiàn)性較好，陰性對(duì)照的檢測(cè)結(jié)果為陰性。結(jié)果表明采用實(shí)施例1所建立的檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，具有很好的重現(xiàn)性。實(shí)施例4、RT-PCR-DHPLC靈敏度試驗(yàn)
將已制備的PRRSV陽(yáng)性質(zhì)粒做10倍梯度稀釋?zhuān)捎脤?shí)施例1所建立的檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，以此計(jì)算出RT-PCR-DHPLC所能檢出的最低模板拷貝數(shù)，確定本方法的靈敏度。具體稀釋濃度依次為1 X107，l XlO6,1 XlO5,1 XlO4,1 XlO3,1 XlO2,1 XlO1 和1拷貝/ μ L的質(zhì)粒DNA液的標(biāo)準(zhǔn)品，并分別以此為模板進(jìn)行RT-PCR-DHPLC檢測(cè)。結(jié)
果顯示RT-PCR-DHPLC的靈敏度達(dá)到10個(gè)拷貝/ Li L，結(jié)果見(jiàn)表1
表1.豬繁殖與呼吸綜合征病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株平板計(jì)數(shù)與RT-PCR-DHPLC檢測(cè)結(jié)果的比較
稀擇梯度5RT-PCR-DHPLC檢測(cè)結(jié)果第"弟度Ci χItf拷Μ/ )十第2梯度(1 χ 10:拷貞/μι)十第3梯度Cl X 10;拷頁(yè)/μι)十第4梯度C1 X ΙΟ^Μ/μ )十第5梯度C1 χ 10:拷 Λ/μι)_ 十_笫6梯度(1 X 10:拷貝/Ul)_ 十_笫7梯度(1 X ICT拷貝/μι)十第8梯度U拷Λ/μ )—
a 7個(gè)梯度之間的稀釋倍數(shù)為10倍。
實(shí)施例5、應(yīng)用于實(shí)際樣品的檢測(cè)，并與常規(guī)RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法對(duì)比
對(duì)16份臨床可疑病料進(jìn)行處理，提取RNA，應(yīng)用本試驗(yàn)所建立PCR-DHPLC方法與 RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光RT-PCR同時(shí)檢測(cè)，同時(shí)設(shè)置陽(yáng)性病料2份(樣品編號(hào)為P1、P2)和陰性病料2份(樣品編號(hào)為m、N2)作為對(duì)照。4種方法的驗(yàn)證比較結(jié)果如表1所示，用RT-PCR檢出12份陽(yáng)性病料，用PCR-DHPLC和熒光PCR方法檢測(cè)出15份病料PRRSV陽(yáng)性，采用培養(yǎng)鑒定方法鑒定這16份病料，15份病料為PRRSV陽(yáng)性，與PCR-DHPLC法、實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測(cè)的結(jié)果一致。與實(shí)時(shí)熒光PCR法相比，PCR-DHPLC法具有同樣的檢測(cè)靈敏度，能檢測(cè)出常規(guī) RT-PCR不能檢測(cè)的病料，該方法具有較好的適用性。表 2 PRRSV PCR-DHPLC 方法與常規(guī) RT-PCR、real-timePCR 方法比較
Tablel Comparison of the detected results of real-time PCR and normal RT-PCR
權(quán)利要求
1. 一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測(cè)試劑盒，其特征在于包括含以下組分①5XμΧ、② IOmMM-MLV,1 U L 、 μ M PRRSV 上游其中，PRRSV特異性引物序列如下 上游引物:5，- CTGTGCCCTGGCTG CGTT -3，， 下游引物:5，- GAGTCTGCCCTTGGT GT -3，。
2. —種權(quán)利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測(cè)方法，其特征在于方法步驟為1)在20μL的反轉(zhuǎn)錄體系中加入待測(cè)病毒總RNA 11 μ ，①號(hào)劑反轉(zhuǎn)錄4 μL，②號(hào)劑2 μ ,③號(hào)劑1 μ ,⑧號(hào)劑1 μ ，70°C水浴10 min后迅速冰浴5 min，快速加入④號(hào)劑1 μ -,，42°C水浴1 h，再放于70°C水浴5 min滅活反轉(zhuǎn)錄酶，立即置冰上冷卻，將反轉(zhuǎn)錄后的cDNA置于-20 ！保存?zhèn)溆茫?)取上步獲得的cDNA2 yL，加入⑤號(hào)劑2yL、②號(hào)劑2yL、⑥號(hào)劑0.2 μ L、⑦號(hào)劑和⑧號(hào)劑各1 μ L，⑨號(hào)劑16. 8 μ L，總體積25 μ L，5000 r/min離心10s，然后按下列參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增預(yù)變性:94°C,3 min ；進(jìn)入循環(huán)941變性608，601退火60s，72°C延伸60s，;35次循環(huán)； 終止延伸72°C，7 min ；4°C保存反應(yīng)產(chǎn)物；3)將RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DHPLC分析色譜柱=PS-DVB & C18 DNASep 色譜柱，4. 6 mmX50 mm，粒度 3 |1 m ； 柱溫:50°C ；流動(dòng)相體積比0.0 min, 51.0%緩沖溶液A，49.0%緩沖溶液B ；·0. 5 min, 45. 7%緩沖溶液A，54. 3%緩沖溶液B ；·2. 7 min, 41. 3%緩沖溶液A，58. 7%緩沖溶液B ； ·4. 9 min, 38. 7%緩沖溶液A，61. 3%緩沖溶液B ；·7. 1 min, 37. 1%緩沖溶液A，62. 9%緩沖溶液B ；·9. 3 min, 35. 9%緩沖溶液A，64. 1%緩沖溶液B ；其中，緩沖溶液A是濃度0. ImM的TEAA水溶液；緩沖溶液B是濃度為0. IM TEAA水溶液與乙腈按體積比3:1的混合溶液； 流速0. 9 mL/min ；檢測(cè)器熒光檢測(cè)器，光源150W Xenon燈；激發(fā)譜帶寬15 nm ；發(fā)射譜帶寬15. 3 nm ；檢測(cè)靈敏度在波長(zhǎng)350 nm積分2 s ；反轉(zhuǎn)錄緩沖液，4dNTP，4 μ L、③ 20U/ μ L Rnasin, 1 μ L、④ 200 U/ μ L ⑤ 10XPCR 緩沖液，2 μ L、⑥ 5U/ μ L Taq DNA 聚合酶，0. 2 μ L、⑦ 10 引物，1 μ L、⑧ 10 |i M PRRSV 下游引物，2yL、⑨ ddH20，16. 8yL ；上樣量=RT-PCR產(chǎn)物5 Li L。
全文摘要
用于豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。①5×反轉(zhuǎn)錄緩沖液、②10mMdNTP、③20U/μLRnasin、④200U/μLM-MLV、⑤10×PCR緩沖液、⑥5U/μLTaqDNA聚合酶、⑦10MPRRSV上游引物、⑧10MPRRSV下游引物、⑨ddH2O。使用本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法，可以高靈敏度地檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒，并且檢測(cè)耗時(shí)短，操作簡(jiǎn)捷，可以節(jié)省大量的勞力和財(cái)力，適合快速檢測(cè)的要求。
文檔編號(hào)C12R1/93GK102373300SQ201110271479
公開(kāi)日2012年3月14日 申請(qǐng)日期2011年9月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月14日
發(fā)明者孫思揚(yáng), 李瓊, 楊春華, 鐘毅 申請(qǐng)人:江西出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫綜合技術(shù)中心