專利名稱：一株源于大豆根際能夠拮抗病原真菌的芽孢桿菌及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及拮抗多種病原真菌的大豆根際固氮菌及其用途，特別涉及一種可以拮抗作物赤霉病菌和菌核病菌，并具有在大豆根際進(jìn)行固氮功能的細(xì)菌。
背景技術(shù)：
氮肥是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中最重要的生產(chǎn)資料之一。生產(chǎn)化學(xué)氮肥消耗大量能源，占生產(chǎn)總成本的70% 80%。近年來能源日趨緊張，我國(guó)化肥生產(chǎn)用煤價(jià)格飚升導(dǎo)致化學(xué)氮肥價(jià)格上漲，農(nóng)民難以承受，反響強(qiáng)烈。此外，化學(xué)氮肥在提高作物產(chǎn)量、保障我國(guó)糧食安全方面發(fā)揮了巨大作用，但是不合理施氮已經(jīng)形成了嚴(yán)重的面源污染，造成一系列的嚴(yán)重危害，如太湖藍(lán)藻事件令人觸目驚心。城市地下水硝酸鹽污染已經(jīng)對(duì)飲用水安全造成了威脅。大氣中含有78%的氮素，但其存在形式是分子態(tài)氮?dú)?，?dòng)植物不能直接利用，自然界只有某些原核微生物具有直接利用大氣中氮?dú)獾哪芰Γ瑢⑵溥€原成氨，這就是生物固氮作用。選用高效固氮微生物菌種工廠化生產(chǎn)制成菌劑，或進(jìn)一步與其它富含植物營(yíng)養(yǎng)的物料復(fù)合加工成生物制品，應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，可以提供作物氮素營(yíng)養(yǎng)，改善作物根際生態(tài)環(huán)境，提高土壤生物肥力性狀，這就是通常所說的固氮微生物菌劑或固氮微生物肥料。生物氮肥具有多種優(yōu)勢(shì)①生物氮肥由可再生的生化制劑和活體微生物組成，可以再生，不存在資源枯竭問題，是可持續(xù)發(fā)展農(nóng)資產(chǎn)品。②生物氮肥是環(huán)境友好型肥料，其生產(chǎn)和使用過程均不產(chǎn)生三廢等污染性物質(zhì)，而且能改善土壤理化性質(zhì)，提高土壤肥力，是生態(tài)農(nóng)業(yè)農(nóng)資產(chǎn)品。③生物氮肥生產(chǎn)耗能少、成本低，其成本僅為等效化學(xué)氮肥的20% 40%，可以為國(guó)家節(jié)省大量的煤炭和石油等能源戰(zhàn)略物資。④使用生物氮肥可以顯著降低農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本，提高農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)，提升土壤肥力，使農(nóng)民受益，促進(jìn)社會(huì)和諧發(fā)展。作物赤霉病的病原菌為玉米赤霉菌(Gibberella zeae)無性世代為禾谷鐮刀菌 (Fusarium graminearum)，是糧食作物的重要致病菌。我國(guó)小麥赤霉病有95%是麥類赤霉病菌引起的，是長(zhǎng)江中下游冬麥區(qū)和東北春麥區(qū)的重要病害，發(fā)病時(shí)經(jīng)常造成20% 30% 的產(chǎn)量損失。此外，該菌還侵染玉米、水稻、大麥等作物，引起苗枯、莖腐、基腐、穗腐等。菌核病的病原菌是核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)，其形態(tài)特征表現(xiàn)為子囊盤小，呈小杯狀，淺肉色至褐色，單個(gè)或幾個(gè)從菌核上生出，直徑0. 5-lcm,柄褐色細(xì)長(zhǎng)，彎曲，長(zhǎng)3-5cm， 向下漸細(xì)，與菌核相連。菌絲體可以形成菌核，長(zhǎng)柄的褐色子囊盤產(chǎn)生在菌核上。菌核形狀多樣，長(zhǎng)3-15 μ m。子囊圓柱形，120-140 μ mX 11 μ m，孢子通常8個(gè)，單行排列，橢圓形， 8-14 μ mX 4-8 μ m，側(cè)絲細(xì)長(zhǎng)，線形，無色，頂部較粗。該菌是一種危害作物和蔬菜的世界性的重要的植物病原菌，廣泛地侵染、危害十字花科、豆科、茄科、蕓香科等植物，如造成油菜、 大豆、向日葵、黃瓜、辣椒等經(jīng)濟(jì)作物和蔬菜菌核病。目前對(duì)上述真菌病害的防治主要依靠化學(xué)農(nóng)藥，然而化學(xué)防治不僅成本高、污染環(huán)境，而且防效也不理想，同時(shí)食品的安全性也受到嚴(yán)重影響。菌種是微生物肥料生產(chǎn)應(yīng)用的基礎(chǔ)。目前，限制我國(guó)微生物肥料行業(yè)發(fā)展的瓶頸就是高效菌種的選育問題。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)迫切需求固氮效能高、拮抗病原真菌、抗逆性強(qiáng)、貨架期長(zhǎng)的微生物肥料生產(chǎn)用菌種。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株可以在作物根際進(jìn)行高效固氮，并且拮抗作物赤霉病菌 (Gibberellazeae)禾口菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)的細(xì)菌。本發(fā)明所提供的細(xì)菌，是芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶5711，該菌株已于2011年8 月17日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào))，保藏編號(hào)為CGMCC No. 5152。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種菌劑，該菌劑的活性成分為所述的芽孢桿菌 (Bacillus sp.)GD571ICGMCC No. 5152。該菌劑除包含作為活性成分的芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152 外，還可包括輔料，如草炭、動(dòng)物的糞便、各類作物的秸稈、松殼、稻草、花生皮等。該菌劑可用于抑制病原真菌、防治植物真菌病害、固氮、產(chǎn)生固氮酶等。所述芽孢桿菌(Bacillussp. )GD571 ICGMCC No. 5152 在制備下述 1)-4)中任一菌劑中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍1)用于抑制病原真菌的菌劑；2)用于防治植物真菌病害的菌劑；3)用于固氮的菌劑；4)產(chǎn)生固氮酶的菌劑。所述病原真菌可為通過土壤、施入土壤中的肥料、和/或種子傳播的真菌，具體可為引起赤霉病的真菌、或?yàn)橐鹁瞬〉恼婢?；所述植物真菌病害可為赤霉病或菌核病。所述引起赤霉病的真菌可為玉米赤霉?Gibberellazeae)或禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum)；所述弓I起菌核病的真菌可為核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)。所述的芽孢桿菌(Bacillus sp. )GD571 ICGMCC No. 5152或以該芽孢桿菌 (Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152為活性成分的菌劑在生產(chǎn)固氮酶中的應(yīng)用以及在制備生物有機(jī)肥中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種含有所述芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶5711 CGMCCNo. 5152或以所述芽孢桿菌(Bacillus sp. )GD5711CGMCC No. 5152為活性成分的菌劑的生物有機(jī)肥。本發(fā)明的又一目的是提供一種培養(yǎng)芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152的方法，該方法包括將芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152在用于培養(yǎng)芽孢桿菌的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的步驟。本發(fā)明的又一目的是提供一種制備所述菌劑的方法，該方法包括如下步驟將所述的芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152作為活性成分，得到所述菌劑。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明是從土壤樣品中經(jīng)過層層篩選，最終篩選出了芽孢桿菌 (Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152，該菌株具有固氮酶活性，能夠拮抗作物赤霉病病原菌玉米赤霉菌(Gibberella zeae)禾口菌核病病原菌核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum), 競(jìng)爭(zhēng)適應(yīng)能力強(qiáng)，接種效果好，在固氮微生物菌劑和生物有機(jī)肥生產(chǎn)中具有廣闊的應(yīng)用前景。
保藏說明菌種名稱芽孢桿菌拉丁名(Bacillus sp.)菌株編號(hào)GD5711保藏機(jī)構(gòu)中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏機(jī)構(gòu)簡(jiǎn)稱CGMCC地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)保藏日期2011年8月17日保藏中心登記入冊(cè)編號(hào)CGMCC No. 515

圖 1 為芽孢桿菌(Bacillus sp. )GD571 ICGMCC No. 5152 的固氮酶活性。圖2為芽孢桿菌(Bacillus sp.)拮抗赤霉病菌玉米赤霉菌(Gibberella zeae)。 左側(cè)菌落為芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152，右側(cè)菌落為玉米赤霉菌 (Gibberella zeae)。圖 3 為芽孢桿菌(Bacillus sp. )GD5711CGMCC No. 5152 拮抗菌核病菌 (Sclerotinia sclerotiorum)。左側(cè)菌落為芽孢桿菌(Bacillus sp. )GD571 ICGMCC No. (Sclerotinia sclerotiorum)。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。固氮菌富集培養(yǎng)液ACCC55 成份蔗糖 10g、K2HPO4 · 3H20 0. 5g、NaCl 0. 2g、CaCO3 lg、MgSO4 · 7H20 0. 2g、蒸餾水 IOOOmUpH 7. 0 7. 2。改良固氮培養(yǎng)基成份蔗糖10g、K2HPO4 · 3H20 0. 5g、NaCl 0. 2g、CaCO3 lg、 MgSO4 · 7H20 0. 2g、酵母膏 0. 5g、蒸餾水 1000ml、瓊脂 1. 5% 2· 0%, pH 7· 0 7· 2。無氮培養(yǎng)基蔗糖10g，NaCl 0. 12g，K2HPO4 · 3H20 0. 5g，CaCO3Ig, MgSO4 · 7H200. 2g， 蒸餾水 lOOOmL，pH7. 2。赤霉病菌-玉蜀黍赤霉菌(Gibberella zeae)(中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心，ACCC31053)。菌核病菌-核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)(中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心，ACCC30046)。實(shí)施例1、大豆根際固氮菌⑶5711的分離與鑒定一、大豆根際固氮菌⑶5711的分離取IOg 土樣(采自中國(guó)黑龍江)放入90ml無菌水中搖床振蕩20min制成混濁液， 吸取5ml放入30ml固氮菌富集培養(yǎng)液ACCC55中，lOOrpm，進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)，7 后換新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。重復(fù)培養(yǎng)3次后進(jìn)行固氮芽孢菌分離。吸取Iml上述固氮菌富集培養(yǎng)物放到9ml無菌水中制成KT1稀釋度，繼續(xù)稀釋制成10_2、10_3、10_4、10_5稀釋度的菌懸液，在100°c沸水中加熱lOmin，冷卻后每個(gè)稀釋度取0. Iml涂布在固氮菌分離培養(yǎng)基平板上，29°C靜置培養(yǎng)。2 3d待菌落形成后，在改良的ACCC55固氮菌培養(yǎng)基平板上用平板劃線法進(jìn)行菌種純化。將分離純化所得的其中一個(gè)菌株命名為大豆根際固氮菌GD5711。二、大豆根際固氮菌⑶5711的鑒定從以下幾個(gè)方面鑒定步驟一分離并純化得到的大豆根際固氮菌1、形態(tài)學(xué)鑒定將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，且菌落大小穩(wěn)定，上述步驟一分離并純化得到的固氮菌 ⑶5711進(jìn)行單菌落狀態(tài)描述，主要包括菌落的大小、顏色、透明度、濕潤(rùn)度、菌落表面狀態(tài) (是否平坦、突起、褶皺、凹陷等)、菌落邊緣狀態(tài)(是否整齊、不規(guī)則、放射狀等)。對(duì)于處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的所述固氮菌GD5711，經(jīng)涂片染色后采用光學(xué)顯微鏡觀察菌體的形態(tài)。結(jié)果表明，上述步驟一分離并純化得到的固氮菌GD5711菌落圓形凸起，水滴狀， 半透明，有光澤，表面濕潤(rùn)光滑，邊緣整齊；菌體桿狀，1. 0X3. 5 4. O μ m。2、生理生化特征分析參考《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》(東秀珠，蔡妙英.常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè).北京科學(xué)出版社，2011.)和《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》(沈萍，范秀容，李廣武.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)(第三版).北京高等教育出版社，1999.)測(cè)定上述固氮菌⑶5711的生理生化特征。所述固氮菌⑶5711的生理生化特征測(cè)定結(jié)果如下接觸酶反應(yīng)陽性氧化酶反應(yīng)陰性生長(zhǎng)溫度4°C不生長(zhǎng)，28°C生長(zhǎng)，37°C不生長(zhǎng)，60°C不生長(zhǎng)耐鹽性試驗(yàn):2% NaCl生長(zhǎng)，5% NaCl生長(zhǎng)，7% NaCl生長(zhǎng)，10% NaCl生長(zhǎng)苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)陰性利用檸檬酸鹽陽性水解淀粉陽性卵黃卵磷脂酶陽性甲基紅試驗(yàn)陰性V. P試驗(yàn)陽性PH 5. 7生長(zhǎng)陽性糖醇發(fā)酵產(chǎn)酸葡萄糖陽性，甘露醇陽性，乳糖陰性，蔗糖陽性3、16s rDNA序列同源性分析常規(guī)方法培養(yǎng)上述步驟一分離純化得到的固氮菌GD5711，提取菌株的總DNA作為基因擴(kuò)增模板，以細(xì)菌16s rDNA 通用引物，27f:5' -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ‘， 1492r 5' -TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3‘進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系采用上海生物工程有限公司PCR擴(kuò)增試劑盒。反應(yīng)程序?yàn)?5°C變性30s、55°C退火lmin、72°C延伸2min，共30 個(gè)循環(huán)。DNA測(cè)序由北京三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)公司完成，序列拼接及相似性分析使用DNAMar 軟件完成，序列比對(duì)通過美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心NCBI數(shù)據(jù)庫(http://WWW. ncbi. nlm. nih. gov)在線完成。固氮菌GD5711菌株16s rDNA的序列詳見序列表中序列1。
4、生長(zhǎng)特性分析進(jìn)行了菌株最適溫度和最適pH生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)。采用無氮培養(yǎng)基，分別在4°C、28°C、 37°C、60°C培養(yǎng)、觀察、記錄菌株的溫度適應(yīng)性，每個(gè)處理3次重復(fù)。調(diào)整酸度分別為pH3、 pH4、pH5、pH6、pH7、pH8、pH9、pHIO、pHll，每個(gè)處理3次重復(fù)，培養(yǎng)、觀察、記錄菌株生長(zhǎng)的最適pHo結(jié)果表明，所述大豆根際固氮菌⑶5711的最適生長(zhǎng)溫度為^°C，最適生長(zhǎng)pH為 pH7 8。鑒于上述形態(tài)、生理生化特征分析和16s rDNA序列同源性分析結(jié)果，將步驟一分離并純化得到的大豆根際固氮菌GD5711鑒定為變型細(xì)菌α亞群芽孢桿菌科芽孢桿菌屬 (Bacillus sp.)。該大豆根際固氮菌⑶5711已于2011年8月17日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3 號(hào))，保藏編號(hào)為CGMCC No. 5152。實(shí)施例2、芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152固氮酶活性測(cè)定對(duì)實(shí)施例1所得到的芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152進(jìn)行固氮酶活性測(cè)定，具體方法如下所述在15X 150mm螺口玻璃管中加入5ml改良固氮培養(yǎng)基制成斜面，接種固氮菌，28°C培養(yǎng)。以不接種空白斜面為陰性對(duì)照，設(shè)3個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)7 后，換橡膠塞，注入乙炔氣體使終濃度為10 %，用醫(yī)用膠布密封，繼續(xù)培養(yǎng)72h，取100 μ 1反應(yīng)氣體， 用氣相色譜儀測(cè)定乙烯生成量，根據(jù)以下公式計(jì)算芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶5711CGMCC No. 5152的固氮酶活性。固氮酶活性(nmol/mg *h) = C2H4nmol/[菌體蛋白量(mg) X反應(yīng)時(shí)間(h)]，其中 C2H4nmol = IOOOXC2H4 體積(μ 1) X 273XP/[22. 4X Q73+t) X 760]，其中 P為氣壓(mm汞柱)，t為反應(yīng)溫度CC )。其中，菌體蛋白含量測(cè)定方法如下所述用5ml生理鹽水將試管斜面上的菌苔洗入離心管中，收集菌體，向沉淀中加入:3ml 0. 5M的NaOH沸水煮沸5min，加入:3ml 0. 5M的 HCl混合，離心后取上清1. Oml，加入5ml考馬斯亮藍(lán)溶液，在漩渦混合器上混合，顯色3min， 測(cè)定595nm處的吸光值A(chǔ)595，根據(jù)牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算菌體蛋白含量。結(jié)果顯示，篩選到的芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152的固氮酶活性為2. 820nmol C2H4/h ^mg蛋白，如圖1所示。這一結(jié)果表明，本發(fā)明的芽孢桿菌(Bacillus sp. )GD571 ICGMCC No. 5152 具有固氮能力。實(shí)施例3、芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152拮抗病原真菌抑菌率測(cè)
定采用兩點(diǎn)對(duì)峙法對(duì)實(shí)施例1所得到的芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152進(jìn)行拮抗病原真菌抑菌率測(cè)定，具體操作如下所述在PDA平板上距離中心 2cm的兩點(diǎn)上分別接種作物赤霉病菌(Gibberella zeae)(或者菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)和芽孢桿菌(Bacillus sp. )GD571 ICGMCC No. 5152，每個(gè)篩選處理 3 個(gè)重復(fù)，以只接病原真菌不接固氮菌的平板為對(duì)照。恒溫培養(yǎng)，15d后用毫米刻度尺測(cè)量對(duì)峙平板上病原真菌沿被測(cè)芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152方向的菌落半徑 A、及對(duì)照平板上病原真菌的菌落半徑病原真菌生長(zhǎng)抑制率(％)=(對(duì)照半徑對(duì)峙培養(yǎng)病原真菌菌落半徑/對(duì)照半徑& X 100 %。結(jié)果顯示，赤霉病菌(Gibberella zeae)的r。是63. 3士2. Smnur1 是29· 0士0. 5mm ；M^M'MM (Sclerotinia sclerotiorum)白勺 r0 ^ 63. 0 + 2. lmm, !T1 ^ 23. 5 + 0. 5mm。 均值代人上述公式計(jì)算得所述芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152對(duì)赤霉病菌(Gibberella zeae)的抑菌率為54. 19 %，如圖2所示；對(duì)菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)的抑菌率為62. 69%，如圖3所示。這一結(jié)果表明所述芽孢桿菌(Bacillus sp. )GD571 ICGMCC No. 5152可以有效拮抗作物赤霉病菌(Gibberellazeae)和菌核病菌 (Sclerotinia sclerotiorum)。
權(quán)利要求
1.芽孢桿菌(Bacillussp.)⑶5711，它在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的藏編號(hào)為CGMCC No. 5152。
2.一種菌劑，它的活性成分為權(quán)利要求1所述的芽孢桿菌(Bacillus sp.) GD571ICGMCC No. 5152。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的菌劑，其特征在于所述菌劑為下述1)-4)中任一的菌劑1)用于抑制病原真菌的菌劑；2)用于防治植物真菌病害的菌劑；3)用于固氮的菌劑；4)產(chǎn)生固氮酶的菌劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芽孢桿菌(Bacillussp.)⑶571ICGMCC No. 5152在制備下述 1)-4)中任一菌劑中的應(yīng)用1)用于抑制病原真菌的菌劑；2)用于防治植物真菌病害的菌劑；3)用于固氮的菌劑；4)產(chǎn)生固氮酶的菌劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的菌劑或權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述病原真菌為引起赤霉病的真菌、或?yàn)橐鹁瞬〉恼婢?；所述植物真菌病害為赤霉病或菌核病?br> 6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的菌劑或應(yīng)用，其特征在于所述引起赤霉病的真菌為玉米赤霉菌(Gibberella zeae)或禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum)；所述引起菌核病的真菌為核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)。
7.權(quán)利要求1所述的芽孢桿菌(Bacillussp.)⑶571ICGMCC No. 5152、或權(quán)利要求2、 3、5或6所述菌劑在生產(chǎn)固氮酶中應(yīng)用；或權(quán)利要求1所述的芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152、或權(quán)利要求2、3、5 或6所述菌劑在制備生物有機(jī)肥中應(yīng)用。
8.含有權(quán)利要求1所述芽孢桿菌(Bacillussp.)⑶571ICGMCC No. 5152、或權(quán)利要求 2、3、5或6所述菌劑的生物有機(jī)肥。
9.培養(yǎng)權(quán)利要求1所述芽孢桿菌(Bacillussp.)⑶571ICGMCC No. 5152的方法，包括將芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152在用于培養(yǎng)芽孢桿菌的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的步驟。
10.權(quán)利要求2、3、5或6所述菌劑的制備方法，包括如下步驟將權(quán)利要求1所述的芽孢桿菌(Bacillus sp.)⑶571ICGMCC No. 5152作為活性成分，得到所述菌劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了拮抗多種病原真菌的大豆根際固氮菌及其用途。該大豆根際固氮菌是芽孢桿菌(Bacillus sp.)GD5711，其在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的藏編號(hào)為CGMCC No.5152。本發(fā)明所提供的芽孢桿菌(Bacillus sp.)GD5711CGMCC No.5152具有固氮活性，可以有效拮抗作物赤霉病菌(Gibberellazeae)和菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)，在固氮微生物菌劑和生物有機(jī)肥生產(chǎn)中具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C12N1/20GK102296040SQ20111024754
公開日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2011年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月26日
發(fā)明者孫建光, 宋燕軍, 王會(huì)智 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所, 哈爾濱君龍實(shí)業(yè)有限公司