專(zhuān)利名稱：一株能將奎寧酮轉(zhuǎn)化為(r)-3-奎寧醇的諾卡氏菌及轉(zhuǎn)化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域，本發(fā)明涉及一種發(fā)酵合成手性奎寧醇的菌株及其生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
權(quán)利要求
1.諾卡氏菌Nocardiasp. WY1202,保藏單位為中國(guó)普通微生物菌種保藏中心,保藏編號(hào)為 CGMCC No. 5095。
2.由權(quán)利要求I所述菌株能轉(zhuǎn)化奎寧酮為(R)_3-奎寧醇。
3.權(quán)利要求I所述菌株的發(fā)酵培養(yǎng)方法，其包括步驟 1)種子培養(yǎng) 將諾卡氏菌Nocardia sp. WY1202接入滅菌后的種子液體培養(yǎng)基中，于30 37°C，200 250r/min培養(yǎng)24 48h，得到種子液， 液體培養(yǎng)基的配制如下葡萄糖10 20g/L,蛋白胨5g/L,酵母提取物5g/L,氯化鈉lg/L, pH 為 7. O ; 2)發(fā)酵培養(yǎng) 將步驟(I)得到的種子液體按接種量I 10%接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)條件30 37°C，搖床轉(zhuǎn)速200 250r/min，發(fā)酵時(shí)間48 60h，即得到諾卡氏菌的發(fā)酵液， 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為葡萄糖15 20g/L,酵母提取物3g/L,蛋白胨7g/L,磷酸二氫鉀lg/L，磷酸氫二鉀lg/L，硫酸鎂O. 5g/L，氯化鈉lg/L，pH為7. O。
4.一種制備權(quán)利要求2所述的(R)-3-奎寧醇的方法，其包括如下步驟 1)收集菌體發(fā)酵培養(yǎng)權(quán)利要求I所述的菌株，得到發(fā)酵液，離心收集菌體，得到濕菌體； 2)轉(zhuǎn)化反應(yīng)用磷酸氫二鉀-磷酸二氫鉀緩沖液洗滌濕菌體后重新懸浮于同一緩沖液中，再加入底物奎寧酮鹽酸鹽，添加葡萄糖，在20-50°C搖床上反應(yīng)，反應(yīng)24-48h后，停止反應(yīng)； 3)分離純化(R)-3-奎寧醇產(chǎn)品 反應(yīng)液離心分離，上清液用無(wú)機(jī)堿調(diào)節(jié)pH值到9-14，然后減壓旋蒸，得到的殘留物用二氯甲烷等有機(jī)溶劑固液萃取，濾液旋干得部分(R)_3-奎寧醇產(chǎn)品。濾餅溶于二氯甲烷等有機(jī)溶劑中攪拌半小時(shí)后過(guò)濾，濾液旋干得到粗產(chǎn)品，再用丙酮等有機(jī)溶劑重結(jié)晶得另一部分(R)-3-奎寧醇產(chǎn)品。
5.本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變或變形，只要不脫離本發(fā)明的技術(shù)思想，均屬于本發(fā)明權(quán)利要求所定義的范圍。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一株諾卡氏菌WY1202及用該菌發(fā)酵奎寧酮生產(chǎn)(R)-3-奎寧醇的方法。本發(fā)明菌種以奎寧酮鹽酸鹽為唯一碳源，是從天津市西青區(qū)農(nóng)家果園土壤中篩選而得。菌株Nocardia sp.WY1202現(xiàn)保藏在中國(guó)普通生物菌種保藏管理中心，保藏號(hào)為CGMCCNo.5095。生產(chǎn)方法為采用諾卡氏菌WY1202為菌種，經(jīng)過(guò)一級(jí)種子培養(yǎng)和二級(jí)發(fā)酵擴(kuò)大培養(yǎng)，取發(fā)酵培養(yǎng)液，離心收集菌體并洗滌菌體，將菌體重懸于緩沖液中，再加入底物奎寧酮鹽酸鹽，添加葡萄糖，反應(yīng)24-48h后，離心分離，上清液調(diào)pH值至堿性，減壓旋干，得到的殘留物用有機(jī)溶劑固液萃取，濾液旋干得到(R)-(-)-3-奎寧醇，且產(chǎn)物的產(chǎn)率為95％、純度為96％、e.e.值＞95％，反應(yīng)過(guò)程中操作簡(jiǎn)單，能耗低，符合綠色化學(xué)要求，可應(yīng)用于較大規(guī)模的(R)-(-)-3-奎寧醇生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12N1/20GK102952761SQ20111024464
公開(kāi)日2013年3月6日 申請(qǐng)日期2011年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月25日
發(fā)明者李鍵煚, 王玉, 吳洽慶, 朱敦明 申請(qǐng)人:天津工業(yè)生物技術(shù)研究所