專利名稱：一種從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法。
背景技術(shù)：
白藜蘆醇是蒽醌萜類化合物，別名虎杖甙元，是重要的植物抗毒素，主要從葡萄皮、虎杖等植物中提取得到。其抑制癌細(xì)胞、降低血脂、防治心血管疾病、抗氧化、延緩衰老等作用比較明顯，被喻為繼紫杉醇之后的又一新的綠色抗癌藥物。目前，白藜蘆醇主要由虎杖的干燥根莖提取?；⒄?Polygonum cuspida turn Sieb. et Zucc.)為野生多年灌木狀草本，野生資源經(jīng)長年挖掘，已日益減少，人工種植需三年方能采收，導(dǎo)致資源瓶頸嚴(yán)重。目前多采用乙酸乙酯溶劑提取虎杖中白藜蘆醇，提取溫度為70 攝氏度左右，采用提取罐三次套提，所需提取時(shí)間長，且容易堵塞。溶劑成本高，能耗大，污染多，效率低。制得的白藜蘆醇為脂溶性產(chǎn)品，在飲料、口服液等液體產(chǎn)品方面的應(yīng)用有局限。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法。該方法成本低，能耗小，產(chǎn)品純度高。本發(fā)明的一種從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，以虎杖為原料，經(jīng)愈傷處理后，粉碎發(fā)酵，然后采用甲縮醛提取，提取液經(jīng)濃縮、膜分離、大孔樹脂吸附和洗脫，得到的洗脫液進(jìn)行濃縮、重結(jié)晶、真空干燥，制得白藜蘆醇，再采用殼聚糖納米粒的制備方法， 得到水溶性白藜蘆醇。所述粉碎發(fā)酵中的粉碎是將愈傷處理后的虎杖粉碎至50-200目，采用的發(fā)酵劑為虎杖專用復(fù)合酶、紅糖、纖維素酶、半纖維素酶、葡萄糖苷酶、安琪酵母、葡萄酒酵母中的一種。所述發(fā)酵劑為葡萄酒酵母。所述愈傷處理是將新鮮虎杖植株，經(jīng)弱光條件下愈傷處理。所述采用甲縮醛提取的條件為提取時(shí)間為1-3小時(shí)，提取溫度為20_50 C。所述采用甲縮醛提取的設(shè)備為平轉(zhuǎn)式提取設(shè)備，
所述膜分離采用RO膜、納濾膜BW30-400-FR、GH4040F或HNF-4040中的一種。所述大孔樹脂吸附和洗脫采用的大孔樹脂為SP850、LSA10, LSA5B, LSA20, DlOl， XDAl和XDA6中的一種，采用5%Na0H、2%醋酸、純化水、乙醇中的一種或幾種為洗脫液。所述重結(jié)晶的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種混合液，重結(jié)晶溫度控制在-5-20 C，重結(jié)晶時(shí)間5-20小時(shí)。所述殼聚糖納米粒的制備方法如下(1)取羥丙基殼聚糖，用純水?dāng)嚢枞芙?，過濾，配制成1.0-5. Og / L的羥丙基殼聚糖水溶液，用醋酸調(diào)節(jié)pH 3 6，成為羥丙基殼聚糖醋酸溶液；(2)取多聚磷酸鈉溶于純水中，制成濃度為0.5-1. 2g / L的溶液，過濾，得到多聚磷酸鈉溶液；(3)取白藜蘆醇溶于50w%乙醇溶液，在持續(xù)攪拌下緩慢加入羥丙基殼聚糖醋酸溶液，加完后繼續(xù)攪拌10-30min，再于持續(xù)攪拌下緩慢滴加多聚磷酸鈉溶液，停止滴加后繼續(xù)攪拌5-lOmin，噴霧干燥，得到白藜蘆醇?xì)ぞ厶羌{米粒，即為水溶性白藜蘆醇。本發(fā)明主要采用經(jīng)愈傷處理的鮮虎杖原料，粉碎發(fā)酵，利用平轉(zhuǎn)逆流提取設(shè)備，采用甲縮醛溶劑提取，提取液經(jīng)濃縮，膜分離、大孔樹脂吸附與洗脫、真空干燥，可得99%以上的高純度白藜蘆醇，再采用殼聚糖納米粒技術(shù)，得到水溶性白藜蘆醇，主要的技術(shù)原理有
1、根據(jù)生物工程原理，新鮮虎杖原料經(jīng)愈傷處理，白藜蘆醇含量可實(shí)現(xiàn)5%以上的增殖。 2、提取溶劑甲縮醛的溶解性較強(qiáng)，可替代甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等，有效地提取白藜蘆醇，提高得率。3、利用殼聚糖納米粒技術(shù)對白藜蘆醇進(jìn)行包合，可增加白藜蘆醇生物利用度，提高其水溶解度。與傳統(tǒng)工藝比，本發(fā)明提高了虎杖原料利用率，生產(chǎn)工藝簡捷，溶劑成本低，能耗小，污染少。不但提取效率高，產(chǎn)品純度高，拓寬了產(chǎn)品的應(yīng)用范圍，水溶效果好，而且實(shí)現(xiàn)了節(jié)能降耗、清潔化生產(chǎn)。與傳統(tǒng)工藝比，本發(fā)明具有以下顯著優(yōu)點(diǎn)
1、利用甲縮醛的溶解性強(qiáng)、價(jià)格低、環(huán)境友好等特點(diǎn)，替代甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等用于虎杖中白藜蘆醇的提取，提取溫度降低到20-50 ？ C。不僅溶劑消耗低，而且生產(chǎn)能耗低，降低了生產(chǎn)成本，且能提高白藜蘆醇得率。2、以平轉(zhuǎn)逆流提取設(shè)備取代提取罐用于虎杖中白藜蘆醇的提取，提高了提取率和溶劑回收率，提取時(shí)間縮短為1-3小時(shí)，溶劑損耗可降低50%以上，可有效降低生產(chǎn)成本。3、采用膜分離、大孔吸附樹脂等方法，用于白藜蘆醇的分離純化，可得到高純度白藜蘆醇產(chǎn)品。4、采用殼聚糖納米粒技術(shù)制備水溶性白藜蘆醇，使脂溶性的白藜蘆醇產(chǎn)品在傳統(tǒng)口服固體制劑及外用產(chǎn)品的應(yīng)用基礎(chǔ)上，增加了在飲料、口服液等液體產(chǎn)品方面的應(yīng)用。


圖1為水溶性白藜蘆醇樣品的HPLC譜圖。
具體實(shí)施例方式以下為本發(fā)明的具體實(shí)施例子，進(jìn)一步描述本發(fā)明，但是本發(fā)明不僅限于此。實(shí)施例1
本發(fā)明的從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，其制備步驟如下 采用新鮮虎杖植株，以MS為基本培養(yǎng)基，誘導(dǎo)愈傷組織，誘導(dǎo)出的愈傷組織在弱紫外光光照(1340 1560 Ix)條件下培養(yǎng)，粉碎至100目，然后以啤酒酵母為誘導(dǎo)子對愈傷組織進(jìn)行酶解發(fā)酵，發(fā)酵后采用甲縮醛提取，提取時(shí)間為2小時(shí)，提取溫度為40 C。提取液經(jīng)濃縮、膜分離、大孔樹脂吸附和洗脫，得到的洗脫液進(jìn)行濃縮、重結(jié)晶、真空干燥，制得白藜蘆醇，再采用殼聚糖納米粒的制備方法，得到水溶性白藜蘆醇。如圖1所示，得到的水溶性白藜蘆醇樣品的純度為99. 30%，提取率為88%。
所述殼聚糖納米粒的制備方法如下(1)取羥丙基殼聚糖，用純水?dāng)嚢枞芙?，過濾，配制成1.0-5. Og / L的羥丙基殼聚糖水溶液，用醋酸調(diào)節(jié)pH 3 6，成為羥丙基殼聚糖醋酸溶液；(2)取多聚磷酸鈉溶于純水中，制成濃度為0.5-1. 2g / L的溶液，過濾，得到多聚磷酸鈉溶液；(3)取白藜蘆醇溶于50w%乙醇溶液，在持續(xù)攪拌下緩慢加入羥丙基殼聚糖醋酸溶液，加完后繼續(xù)攪拌10-30min，再于持續(xù)攪拌下緩慢滴加多聚磷酸鈉溶液，停止滴加后繼續(xù)攪拌5-lOmin，噴霧干燥，即得白藜蘆醇?xì)ぞ厶羌{米粒。表1本發(fā)明與傳統(tǒng)工藝主要技術(shù)指標(biāo)(每Ikg產(chǎn)品)
權(quán)利要求
1.一種從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，其特征在于以虎杖為原料，經(jīng)愈傷處理后，粉碎發(fā)酵，然后采用甲縮醛提取，提取液經(jīng)濃縮、膜分離、大孔樹脂吸附和洗脫， 得到的洗脫液進(jìn)行濃縮、重結(jié)晶、真空干燥，制得白藜蘆醇，再采用殼聚糖納米粒的制備方法，得到水溶性白藜蘆醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，其特征在于所述粉碎發(fā)酵中的粉碎是將愈傷處理后的虎杖粉碎至50-200目，采用的發(fā)酵劑為虎杖專用復(fù)合酶、紅糖、纖維素酶、半纖維素酶、葡萄糖苷酶、安琪酵母、葡萄酒酵母中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，其特征在于所述發(fā)酵劑為葡萄酒酵母。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，其特征在于所述愈傷處理是將新鮮虎杖植株，經(jīng)弱光條件下愈傷處理。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，其特征在于所述采用甲縮醛提取的條件為提取時(shí)間為1-3小時(shí)，提取溫度為20-50 C。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，其特征在于所述采用甲縮醛提取的設(shè)備為平轉(zhuǎn)式提取設(shè)備。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，其特征在于所述膜分離采用RO膜、納濾膜BW30-400-FR、GH4040F或HNF-4040中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，其特征在于所述大孔樹脂吸附和洗脫采用的大孔樹脂為SP850、LSA10，LSA5B, LSA20, D101, XDAl和XDA6 中的一種，采用5%Na0H、2%醋酸、純化水、乙醇中的一種或幾種為洗脫液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，其特征在于所述重結(jié)晶的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種混合液，重結(jié)晶溫度控制在-5_20 C， 重結(jié)晶時(shí)間5-20小時(shí)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，其特征在于 所述殼聚糖納米粒的制備方法如下(1)取羥丙基殼聚糖，用純水?dāng)嚢枞芙猓^濾，配制成 1.0-5. Og / L的羥丙基殼聚糖水溶液，用醋酸調(diào)節(jié)pH 3 6，成為羥丙基殼聚糖醋酸溶液； (2)取多聚磷酸鈉溶于純水中，制成濃度為0.5-1. 2g / L的溶液，過濾，得到多聚磷酸鈉溶液；(3)取白藜蘆醇溶于50w%乙醇溶液，在持續(xù)攪拌下緩慢加入羥丙基殼聚糖醋酸溶液，力口完后繼續(xù)攪拌10-30min，再于持續(xù)攪拌下緩慢滴加多聚磷酸鈉溶液，停止滴加后繼續(xù)攪拌 5-lOmin，噴霧干燥，得到白藜蘆醇?xì)ぞ厶羌{米粒，即為水溶性白藜蘆醇。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從虎杖中提取制備水溶性白藜蘆醇的方法，該方法以虎杖為原料，經(jīng)愈傷處理后，粉碎發(fā)酵，然后采用甲縮醛提取，提取液經(jīng)濃縮、膜分離、大孔樹脂吸附和洗脫，得到的洗脫液進(jìn)行濃縮、重結(jié)晶、真空干燥，制得白藜蘆醇，再采用殼聚糖納米粒的制備方法，得到水溶性白藜蘆醇。本發(fā)明產(chǎn)品純度高，白藜蘆醇純度高達(dá)98%以上；生產(chǎn)成本低，比傳統(tǒng)的方法要低20-30%；得率高，比傳統(tǒng)的要高8-10%；有效的增加白藜蘆醇的溶解度，提高白藜蘆醇的口服吸收生物利用度；可清潔化生產(chǎn)，純化過程無污染，溶劑可回收使用。
文檔編號A23L2/52GK102219652SQ20111011559
公開日2011年10月19日 申請日期2011年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月5日
發(fā)明者余峰, 楊爽, 牟大慶, 陳燕梅 申請人:三明華健生物工程有限公司