專利名稱：：從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種黃酮類化合物的提取分離領(lǐng)域，具體涉及一種從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法。
背景技術(shù)：
：白藜蘆醇(Resveratrol)，又叫三羥基芪，分子式C14H1203，相對(duì)分子質(zhì)量為228.24。白藜戸醇是無味，灰白色或白色粉末，難溶于冷水，能溶于熱水、乙醚、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等，熔點(diǎn)為256257°C。白藜蘆醇是從寥科植物虎杖的根莖和根或者葡萄屬葡萄科植物葡萄的果皮中提取出來的一種黃酮類化合物。1940年首次發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇，20世紀(jì)70年代首次發(fā)現(xiàn)葡萄中含有這種物質(zhì)，后來人們發(fā)現(xiàn)虎杖、花生、桑椹等植物中也含有這種成分。白藜蘆醇是一種重要的植物抗毒素，它能夠阻止低密度脂蛋白的氧化，因而具有潛在的防心血管疾病、防癌、抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用，它被美國專著《抗衰老圣典》一書列為"100種最熱門有效抗衰老物質(zhì)"之一，成為全世界研究的熱點(diǎn)。目前，白藜蘆醇的制備方法有化學(xué)合成法，植物細(xì)胞培養(yǎng)法和天然產(chǎn)物提取法?，F(xiàn)合成白藜蘆醇需要通過5步以上的合成工藝才能達(dá)到98%的含量，并且合成工藝條件苛刻，試劑昂貴，收率低，很難實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)；植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，是指在不改變植物天然屬性的基本特性的前提下，把本來應(yīng)在天然環(huán)境中生長的植物，置于完全人工受控的反應(yīng)環(huán)境中，并利用優(yōu)化的細(xì)胞繁殖條件促使植物細(xì)胞高速繁殖，然后從細(xì)胞中提取對(duì)人類有用的天然的藥用成分，這一技術(shù)僅限于小實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)，并且培養(yǎng)過程中人為控制嚴(yán)格，操作復(fù)雜，對(duì)于工業(yè)化大生產(chǎn)還需深入的研究和探討。從天然產(chǎn)物中提取和分離白藜蘆醇，既充分利用了我國豐富的自然資源，又具有經(jīng)濟(jì)可行的生產(chǎn)優(yōu)勢(shì)。中國專利CN1116264C"白藜戸醇和白藜戸醇甙分離方法及其應(yīng)用"和中國專利CN1724495A"從中草藥植物虎杖中制備白藜蘆醇的方法"主要采用將虎杖根莖用有機(jī)溶劑提取，經(jīng)乙酸乙酯萃取、濃縮、柱層析和重結(jié)晶，得到純度高達(dá)97%以上的白藜蘆醇和白藜蘆醇甙。但是，該方法是用乙酸乙酯萃取，乳化現(xiàn)象明顯，產(chǎn)品損失嚴(yán)重，從而導(dǎo)致收率降低，且該方法是從虎杖中將白藜蘆醇和白藜蘆醇甙提取分離出來，沒有將白藜蘆醇甙轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇，這一步驟沒有實(shí)施，也會(huì)影響白藜蘆醇的收率。中國專利CN1269831C"虎杖甙和白藜蘆醇的新制備方法"提出一種虎杖苷和白藜蘆醇的新制備方法，它是用聚酰胺層析法分離純化虎杖苷和白藜蘆醇。該專利中用聚酰胺樹脂分離，聚酰胺樹脂目數(shù)比較細(xì)，容易堵柱，并且專利中沒有將虎杖甙轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇，工藝不經(jīng)濟(jì)。中國專利CN1513822A"虎杖提取高純白藜蘆醇工藝"，本發(fā)明簡化了工藝和操作程序，縮短了生產(chǎn)周期，降低了生產(chǎn)成本，提高了產(chǎn)品收率和純度。此工藝?yán)梦⑸镛D(zhuǎn)化，用40%乙醇與4-甲基-2-戊醇混合劑作為萃取溶劑，利用較好的設(shè)備微波提取，縮短生產(chǎn)周期，但是將微波提取用于規(guī)?；a(chǎn)現(xiàn)在仍舊有一定的難度，工藝不可行，僅局限于實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)。中國專利CN1384088A"—種從虎杖植物中提取白藜戸醇的制備方法"和中國專利CN1926592A"—種從中藥虎杖中分離純化白藜戸醇苷和白藜戸醇的方法"分別采用專用的高壓層析柱和高速逆流色譜法分離白藜蘆醇，設(shè)備成本高，僅能達(dá)到公斤級(jí)生產(chǎn)，產(chǎn)率低，生產(chǎn)成本高，局限于實(shí)驗(yàn)室的分離，不適用大生產(chǎn)。中國專利CN1090603C"—種從中藥虎杖中提取白藜蘆醇的工藝"，本發(fā)明涉及一種藥用原料白藜蘆醇的提取工藝。所述的提取工藝為在粉末狀虎杖原料中加入復(fù)合酶在恒溫下進(jìn)行酶解反應(yīng)48-72小時(shí)獲得酶解原料；再用溶解萃取、濃縮獲得含白藜蘆醇的半成品，再經(jīng)精制即得。此專利工藝簡單，但需要反復(fù)結(jié)晶才能得到白藜蘆醇的精品，反復(fù)重結(jié)晶會(huì)造成產(chǎn)品收率低，損耗大，生產(chǎn)成本高的缺點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容為了解決
背景技術(shù)：
中存在的從虎杖中提取分離白藜蘆醇方法成本高，沒有將白藜蘆醇甙轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇，白藜蘆醇收率低，且工藝繁瑣、周期長，不適用于工業(yè)化大生產(chǎn)的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種成本低、白藜蘆醇收率高、工藝簡單、周期短，適用于工業(yè)化大生產(chǎn)的從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，包括以下步驟1)粉碎將虎杖原料粉碎；2)酶解將步驟1)粉碎后的原料中加入原料重量12倍量的水和原料重量1%。10%。的水解酶，拌勻，在354(TC條件下酶解1248h，將酶解后的原料干燥；該水解酶可以是纖維素酶、植物提取復(fù)合酶、淀粉酶、果膠酶或P-葡聚糖苷酶的一種、兩種或兩種以上的混合酶；3)提取將步驟2)酶解后的干燥原料，用提取溶劑回流或冷浸提取，將提取液濃縮至比重為1.101.30，該比重是在607(TC，常壓下測(cè)定的，然后加入體積為濃縮液體積13倍量的水，沉降；4)離心將步驟3)制得的加水濃縮液離心，過濾，得到沉淀；5)柱分離5.1)沉淀溶解拌樣取沉淀重量1倍量的體積濃度為6080%的甲醇或乙醇加入步驟4)的沉淀中溶解，得到溶解液和沉淀，棄沉淀，將溶解液與柱填料拌樣，烘干，得到拌樣樣品；所加柱填料與步驟4)得到的沉淀的質(zhì)量比為1:2;柱填料可以是聚丙烯酸樹脂CG71、聚丙烯酸樹脂RPC40、聚苯乙烯樹脂CG161、聚苯乙烯樹脂CG300、葡聚糖凝膠S印hadexG-25或葡聚糖凝膠S印hadexLH-20中的一種；5.2)上柱取步驟5.1)制得的拌樣樣品與柱層析填料上柱，再用洗脫體系進(jìn)行洗脫，通過薄層層析法檢查各流份，收集含有白藜蘆醇的流份，濃縮至原體積的1/101/3，放置產(chǎn)生結(jié)曰曰曰5拌樣樣品與柱層析填料的質(zhì)量比為i:3i:15;柱層析填料可以是聚丙烯酸樹脂CG71、聚丙烯酸樹脂RPC40、聚苯乙烯樹脂CG161、聚苯乙烯樹脂CG300、葡聚糖凝膠S印hadexG-25或葡聚糖凝膠S印hadexLH-20;6)重結(jié)晶將步驟5.2)產(chǎn)生的結(jié)晶用離心機(jī)或板框過濾器過濾，得到粗結(jié)晶，將此粗結(jié)晶用粗結(jié)晶重量的14倍量的體積濃度為80%_95%的甲醇或乙醇重結(jié)晶，得到含量不低于98%的白藜蘆醇。上述步驟2)中加入的最佳水解酶為13-葡聚糖苷酶和果膠酶的混合酶，用量為原料重量的4%。，P-葡聚糖苷酶與果膠酶的質(zhì)量比為19:1，酶解溫度為37t:，酶解時(shí)間為36h時(shí)最佳;上述提取溶劑可以是甲醇、乙醇、乙酸乙酯或丙酮；上述洗脫體系可以是甲醇/水、乙醇/水、丙酮/水或石油醚/乙酸乙酯體系；上述步驟3)中提取溶劑是丙酮，冷浸提取，將提取液濃縮至比重為1.21，該比重是在65t:，常壓下測(cè)定的，向濃縮液中加入體積為濃縮液體積2倍量的水；步驟5.1)中取沉淀重量1倍量的體積濃度為70X的甲醇，柱填料為聚苯乙烯樹脂CG161;步驟5.2)中上柱所用的拌樣樣品與柱層析填料的質(zhì)量比為1:8;柱層析填料為聚苯乙烯樹脂CG161;洗脫體系為石油醚/乙酸乙酯洗脫體系；步驟6)中使用離心機(jī)過濾，得到粗結(jié)晶，將粗結(jié)晶用粗結(jié)晶重量的2倍量的體積濃度為95%的甲醇重結(jié)晶為最佳。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的另一技術(shù)方案是從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，包括以下步驟1)粉碎將虎杖原料粉碎；2)提取將步驟1)粉碎后的原料，用提取溶劑回流或冷浸提取，將提取液濃縮至比重為1.101.30，該比重是在607(TC，常壓下測(cè)定的，加入體積為濃縮液體積12倍量的水；3)酶解在步驟2)的加水濃縮液中加入原料重量1%。10%。的水解酶，攪拌均勻，在354(TC條件下酶解636h，得到酶解液；該水解酶可以是纖維素酶、植物提取復(fù)合酶、淀粉酶、果膠酶或P_葡聚糖苷酶的一種、兩種或兩種以上的混合酶；4)離心將步驟3)制得的酶解液離心，過濾，得到沉淀；5)柱分離5.1)沉淀溶解拌樣取沉淀重量1倍量的體積濃度為6080%的甲醇或乙醇加入步驟4)制得的沉淀中溶解，得到溶解液和沉淀，棄沉淀，將溶解液與柱填料拌樣，烘干，得到拌樣樣品；所加柱填料與步驟4)得到的沉淀的質(zhì)量比為1:2;柱填料可以是聚丙烯酸樹脂CG71、聚丙烯酸樹脂RPC40、聚苯乙烯樹脂CG161、聚苯乙烯樹脂CG300、葡聚糖凝膠S印hadexG-25或葡聚糖凝膠S印hadexLH-20中的一種；5.2)上柱取步驟5.1)制得的拌樣樣品與柱層析填料上柱，再用洗脫體系進(jìn)行洗脫，通過薄層層析法檢查各流份，收集含有白藜蘆醇的流份，濃縮至原體積的1/101/3，放置產(chǎn)生結(jié)曰曰曰5所述拌樣樣品與柱層析填料的質(zhì)量比為1:31:15;柱層析填料可以是聚丙烯酸樹脂CG71、聚丙烯酸樹脂RPC40、聚苯乙烯樹脂CG161、聚苯乙烯樹脂CG300、葡聚糖凝膠S印hadexG-25或葡聚糖凝膠S印hadexLH-20中的一種；6)重結(jié)晶將步驟5.2)產(chǎn)生的結(jié)晶用離心機(jī)或板框過濾器過濾，得到粗結(jié)晶，將此粗結(jié)晶用粗結(jié)晶重量的14倍量的體積濃度為80%_95%的甲醇或乙醇重結(jié)晶，得到含量不低于98%的白藜蘆醇。上述步驟3)中加入的最佳水解酶為13_葡聚糖苷酶、植物提取復(fù)合酶和纖維素酶的混合酶，用量為原料重量的2%。，P-葡聚糖苷酶、植物提取復(fù)合酶與纖維素酶的質(zhì)量比為12:5:3，酶解溫度為4(TC，酶解時(shí)間為12h時(shí)最佳；上述提取溶劑可以是甲醇、乙醇、乙酸乙酯或丙酮；上述洗脫體系可以是甲醇/水、乙醇/水、丙酮/水或石油醚/乙酸乙酯體系；上述步驟2)中提取溶劑是乙酸乙酯，回流提取，將提取液濃縮至比重為1.IO，該比重是在6(TC，常壓下測(cè)定的，加入體積為濃縮液體積l倍量的水；步驟5.1)中取沉淀重量1倍量的體積濃度為80%的甲醇，柱填料為葡聚糖凝膠S印hadexLH-20;步驟5.2)中上柱所用的拌樣樣品與柱層析填料的質(zhì)量比為1:8;柱層析填料為葡聚糖凝膠S印hadexLH-20;洗脫體系為乙醇/水洗脫體系；步驟6)中使用離心機(jī)過濾，得到粗結(jié)晶，將粗結(jié)晶用粗結(jié)晶重量的1.5倍量的體積濃度為95%的甲醇重結(jié)晶為最佳。上述兩種技術(shù)方案中柱分離用到的柱填料是聚丙烯酸樹脂CG71、聚丙烯酸樹脂RPC40、聚苯乙烯樹脂CG161、聚苯乙烯樹脂CG300、葡聚糖凝膠S印hadexG-25或葡聚糖凝膠S印hadexLH-20中的一種，這些填料由于都是高分子填料，對(duì)目標(biāo)分離物的死吸附少或者不產(chǎn)生死吸附，使得產(chǎn)品的收率提高。同時(shí)，傳統(tǒng)的工藝方法是從虎杖中提取分離白藜蘆醇和白藜蘆醇甙，沒有將白藜蘆醇甙轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇，上述兩種方案通過在提取步驟前或提取步驟后加入水解酶，使白藜蘆醇甙進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇，再經(jīng)柱分離和重結(jié)晶技術(shù)中各個(gè)環(huán)節(jié)的控制，使得白藜蘆醇的收率提高。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)1、該方法采用有機(jī)溶劑提取，之后加水沉降，再用醇溶解樣品，避免萃取帶來的損失，提高產(chǎn)品收率，降低成本。2、該方法將白藜蘆醇甙轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇，提高了白藜蘆醇的收率。3、該方法成本低。4、該方法工藝簡捷、周期短，適用于工業(yè)化大生產(chǎn),圖1是實(shí)施例1得到的白藜蘆醇含量測(cè)定結(jié)果的HPLC高效液相圖譜。圖2是實(shí)施例2得到的白藜蘆醇含量測(cè)定結(jié)果的HPLC高效液相圖譜。圖3是實(shí)施例3得到的白藜蘆醇含量測(cè)定結(jié)果的HPLC高效液相圖譜。圖4是實(shí)施例4得到的白藜蘆醇含量測(cè)定結(jié)果的HPLC高效液相圖譜。具體實(shí)施方式實(shí)施例1取1000kg虎杖原料粉碎，加入1000kg水和10kg纖維素酶，拌勻，在35t:條件下酶解40h，將酶解后的原料以微波干燥方式進(jìn)行干燥；取干燥后的原料，用體積濃度為80%的甲醇回流提取，將提取液濃縮至比重為1.10(該比重是在63°C，常壓下測(cè)定的)，加入體積為濃縮液體積2倍量的水，沉降，放置12h;用離心機(jī)離心，過濾，得沉淀70kg;取70kg體積濃度為80%的甲醇加入沉淀中溶解，得到溶解液和沉淀，棄沉淀，將溶解液與35kg聚丙烯酸樹脂CG71拌樣，烘箱烘干備用；取質(zhì)量比為l:3的拌樣樣品與聚丙烯酸樹脂CG71上柱，分離，用不同體積比的甲醇/水洗脫體系進(jìn)行洗脫，先用甲醇/水體積比為3:7洗脫雜質(zhì)，再用甲醇/水體積比為5:5洗脫有效成分，收集有效成分段，濃縮產(chǎn)生結(jié)晶，將結(jié)晶離心，得到粗結(jié)晶，將粗結(jié)晶用粗結(jié)晶重量的1.5倍量的體積濃度為80%的甲醇重結(jié)晶，即可得到含量為98.767X的白藜蘆醇12kg，白藜蘆醇的收率為1.2%，表1是該實(shí)施例的檢測(cè)結(jié)果列表，圖1是該實(shí)施例得到的白藜蘆醇含量測(cè)定結(jié)果的HPLC高效液相圖譜。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例2取1000kg虎杖原料粉碎，加入1500kg的水和7kg的植物提取復(fù)合酶和lkg纖維素酶，拌勻，在3『C條件下酶解38h;將酶解后的原料以鼓風(fēng)干燥方式進(jìn)行干燥；取干燥后的原料，用體積濃度為80%的乙醇回流提取，將提取液濃縮至比重為1.15(該比重是在62t:，常壓下測(cè)定的)，加入體積為濃縮液體積1倍量的水，沉降，放置12h;用離心機(jī)離心，過濾，得沉淀68kg;取68kg體積濃度為70%的甲醇將沉淀溶解，得到溶解液和沉淀，棄沉淀，將溶解液與34kg聚丙烯酸樹脂RPC40拌樣，烘箱烘干備用；取質(zhì)量比為1:5的拌樣樣品與聚丙烯酸樹脂RPC40上柱，分離，用不同體積比的丙酮/水洗脫體系進(jìn)行洗脫，先用丙酮/水體積比為9:l洗脫雜質(zhì)，再用丙酮/水體積比為8:i洗脫有效成分，收集有效成分段，濃縮產(chǎn)生結(jié)晶，將結(jié)晶用離心機(jī)過濾，得到粗結(jié)晶，用粗結(jié)晶重量的2倍量的體積濃度為95%的甲醇重結(jié)晶，即可得到含量為98.591%的白藜蘆醇llkg，白藜蘆醇的收率為1.1%，表2是該實(shí)施例的檢測(cè)結(jié)果列表，圖2是該實(shí)施例得到的白藜蘆醇含量測(cè)定結(jié)果的HPLC高效液相圖譜。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例3取虎杖1000kg原料粉碎，加入1500kg水和3.8kgP-葡聚糖苷酶和0.2kg果膠酶，拌勻，在37t:條件下酶解36h，將酶解后的原料自然干燥；取干燥后的原料，用丙酮冷浸提取，將提取液濃縮至比重為1.21(該比重是在65t:，常壓下測(cè)定的)，加入濃縮液體積2倍量的水，放置12h;用離心機(jī)離心加水濃縮液，過濾，得沉淀72kg;取72kg體積濃度為70%的甲醇加入沉淀中溶解，得到溶解液和沉淀，棄沉淀，將溶解液與36kg聚苯乙烯樹脂CG161拌樣，烘箱烘干備用；取質(zhì)量比為1:8的拌樣樣品和聚苯乙烯樹脂CG161上柱，分離，用不同體積比的石油醚/乙酸乙酯洗脫體系進(jìn)行洗脫，先用石油醚/乙酸乙酯體積比為9:l洗脫雜質(zhì)，再用石油醚/乙酸乙酯體積比為5:i洗脫有效成分，收集有效成分段，濃縮產(chǎn)生結(jié)晶，用離心機(jī)過濾，得到粗結(jié)晶，用粗結(jié)晶重量2倍量的體積濃度為95%的甲醇重結(jié)晶，即可得到含量為99.258%的白藜蘆醇13kg，白藜蘆醇的收率為1.3%，表3是該實(shí)施例的檢測(cè)結(jié)果列表，圖3是該實(shí)施例得到的白藜蘆醇含量測(cè)定結(jié)果的HPLC高效液相圖譜。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例4取1000kg虎杖原料粉碎，用乙酸乙酯回流提取，將提取液濃縮至比重為1.10(該比重是在6(TC，常壓下測(cè)定的)，加入濃縮液體積1倍量的水，加入1.2kgP-葡聚糖苷酶、0.5kg植物提取復(fù)合酶和0.3kg纖維素酶，攪拌均勻，在40°C的條件下酶解12h，得到酶解液，將酶解液用離心機(jī)離心，過濾，得沉淀73kg。取73kg體積濃度為80%的甲醇加入沉淀中溶解，得到溶解液和沉淀，棄沉淀，將溶解液與36.5kg葡聚糖凝膠S印hadexLH-20拌樣，烘箱烘干備用；取質(zhì)量比為l:8的拌樣樣品與葡聚糖凝膠S印hadexLH-20上柱，分離，用不同體積比的乙醇/水洗脫體系進(jìn)行洗脫，先用乙醇/水體積比為1:4洗脫雜質(zhì)，再用乙醇/水體積比為2:l洗脫有效成分，收集有效成分段，濃縮產(chǎn)生結(jié)晶，將結(jié)晶用離心機(jī)過濾，得到粗結(jié)晶，用粗結(jié)晶重量的1.5倍量的體積濃度為95%的甲醇重結(jié)晶，即可得到含量為98.826%的白藜蘆醇12kg，白藜蘆醇的收率為1.2%，表4是該實(shí)施例的檢測(cè)結(jié)果列表，圖4是該實(shí)施例得到的白藜蘆醇含量測(cè)定結(jié)果的HPLC高效液相圖譜。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權(quán)利要求從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，包括以下步驟1)粉碎將虎杖原料粉碎；2)酶解將步驟1)粉碎后的原料中加入原料重量1～2倍量的水和原料重量1‰～10‰的水解酶，拌勻，在35～40℃條件下酶解12～48h，將酶解后的原料干燥；所述水解酶是纖維素酶、植物提取復(fù)合酶、淀粉酶、果膠酶或β-葡聚糖苷酶的一種、兩種或兩種以上的混合酶；3)提取將步驟2)酶解后的干燥原料，用提取溶劑回流或冷浸提取，將提取液濃縮至比重為1.10～1.30，該比重是在60～70℃，常壓下測(cè)定的，然后加入體積為濃縮液體積1～3倍量的水，放置沉降；4)離心將步驟3)制得的加水濃縮液離心，過濾，得到沉淀；5)柱分離5.1)沉淀溶解拌樣取沉淀重量1倍量的體積濃度為60～80％的甲醇或乙醇加入步驟4)的沉淀中溶解，得到溶解液和沉淀，棄沉淀，將溶解液與柱填料拌樣，烘干，得到拌樣樣品，所加柱填料與步驟4)得到的沉淀的質(zhì)量比為1∶2；所述柱填料為聚丙烯酸樹脂CG71、聚丙烯酸樹脂RPC40、聚苯乙烯樹脂CG161、聚苯乙烯樹脂CG300、葡聚糖凝膠SephadexG-25或葡聚糖凝膠SephadexLH-20中的一種；5.2)上柱取步驟5.1)制得的拌樣樣品與柱層析填料上柱，再用洗脫體系進(jìn)行洗脫，通過薄層層析法檢查各流份，收集含有白藜蘆醇的流份，濃縮至原體積的1/10～1/3，放置產(chǎn)生結(jié)晶；所述拌樣樣品與柱層析填料的質(zhì)量比為1∶3～1∶15，所述柱層析填料為聚丙烯酸樹脂CG71、聚丙烯酸樹脂RPC40、聚苯乙烯樹脂CG161、聚苯乙烯樹脂CG300、葡聚糖凝膠SephadexG-25或葡聚糖凝膠SephadexLH-20；6)重結(jié)晶將步驟5.2)產(chǎn)生的結(jié)晶用離心機(jī)或板框過濾器過濾，得到粗結(jié)晶，將此粗結(jié)晶用粗結(jié)晶重量的1～4倍量的體積濃度為80％-95％的甲醇或乙醇重結(jié)晶，得到含量不低于98％的白藜蘆醇。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，其特征在于所述步驟2)中加入的水解酶為！3-葡聚糖苷酶和果膠酶的混合酶，用量為原料重量的4%。，|3-葡聚糖苷酶與果膠酶的質(zhì)量比為19:1，酶解溫度為37t:，酶解時(shí)間為36h。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，其特征在于所述提取溶劑是甲醇、乙醇、乙酸乙酯或丙酮。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，其特征在于所述洗脫體系為甲醇/水、乙醇/水、丙酮/水或石油醚/乙酸乙酯體系。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，其特征在于所述步驟3)中提取溶劑是丙酮，冷浸提取，將提取液濃縮至比重為1.21，該比重是在65t:，常壓下測(cè)定的，向濃縮液中加入體積為濃縮液體積2倍量的水；所述步驟5.1)中取沉淀重量1倍量的體積濃度為70X的甲醇，柱填料為聚苯乙烯樹脂CG161;所述步驟`5.2)中上柱所用的拌樣樣品與柱層析填料的質(zhì)量比為1:8;柱層析填料為聚苯乙烯樹脂CG161;洗脫體系為石油醚/乙酸乙酯洗脫體系；所述步驟6)中使用離心機(jī)過濾，得到粗結(jié)晶，將粗結(jié)晶用粗結(jié)晶重量的2倍量的體積濃度為95%的甲醇重結(jié)晶。6.從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，包括以下步驟1)粉碎將虎杖原料粉碎；2)提取將步驟l)粉碎后的原料，用提取溶劑回流或冷浸提取，將提取液濃縮至比重為1.101.30，該比重是在607(TC，常壓下測(cè)定的，加入體積為濃縮液體積12倍量的水；3)酶解在步驟2)的加水濃縮液中加入原料重量1%。10%。的水解酶，攪拌均勻，在3540°C條件下酶解636h，得到酶解液；所述水解酶是纖維素酶、植物提取復(fù)合酶、淀粉酶、果膠酶或P-葡聚糖苷酶的一種、兩種或兩種以上的混合酶；4)離心將步驟3)制得的酶解液離心，過濾，得到沉淀；5)柱分離`5.1)沉淀溶解拌樣取沉淀重量1倍量的體積濃度為6080%的甲醇或乙醇加入步驟4)制得的沉淀中溶解，得到溶解液和沉淀，棄沉淀，將溶解液與柱填料拌樣，烘干，得到拌樣樣品，所加柱填料與步驟4)得到的沉淀的質(zhì)量比為1:2;所述柱填料為聚丙烯酸樹脂CG71、聚丙烯酸樹脂RPC40、聚苯乙烯樹脂CG161、聚苯乙烯樹脂CG300、葡聚糖凝膠S印hadexG-25或葡聚糖凝膠S印hadexLH-20;`5.2)上柱取步驟5.1)制得的拌樣樣品與柱層析填料上柱，再用洗脫體系進(jìn)行洗脫，通過薄層層析法檢查各流份，收集含有白藜蘆醇的流份，濃縮至原體積的1/101/3，放置產(chǎn)生結(jié)晶；所述拌樣樣品與柱層析填料的質(zhì)量比為1:31:15;所述柱層析填料為聚丙烯酸樹脂CG71、聚丙烯酸樹脂RPC40、聚苯乙烯樹脂CG161、聚苯乙烯樹脂CG300、葡聚糖凝膠S印hadexG-25或葡聚糖凝膠S印hadexLH-20;6)重結(jié)晶將步驟5.2)產(chǎn)生的結(jié)晶用離心機(jī)或板框過濾器過濾，得到粗結(jié)晶，將此粗結(jié)晶用粗結(jié)晶重量的14倍量的體積濃度為80%_95%的甲醇或乙醇重結(jié)晶，得到含量不低于98%的白藜蘆醇。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，其特征在于所述步驟3)中加入的水解酶為P-葡聚糖苷酶、植物提取復(fù)合酶、纖維素酶三種酶的混合酶，用量為原料重量的2%。，P-葡聚糖苷酶、植物提取復(fù)合酶與纖維素酶的質(zhì)量比為12:5:3，酶解溫度為4(TC，酶解時(shí)間為12h。8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，其特征在于所述提取溶劑是甲醇、乙醇、乙酸乙酯或丙酮。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，其特征在于所述洗脫體系為甲醇/水、乙醇/水、丙酮/水或石油醚/乙酸乙酯體系。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，其特征在于所述步驟2)中提取溶劑是乙酸乙酯，回流提取，將提取液濃縮至比重為1.10，該比重是在6(TC，常壓下測(cè)定的，向濃縮液中加入濃縮液體積1倍量的水；所述步驟5.1)中取沉淀重量1倍量的體積濃度為80X的甲醇，柱填料為葡聚糖凝膠S印hadexLH-20;所述步驟5.2)中上柱所用的拌樣樣品與柱層析填料的質(zhì)量比為l:8;柱層析填料為葡聚糖凝膠S印hadexLH-20;洗脫體系為乙醇/水洗脫體系；所述步驟6)中使用離心機(jī)過濾，得到粗結(jié)晶，將粗結(jié)晶用粗結(jié)晶重量的1.5倍量的體積濃度為95%的甲醇重結(jié)晶。全文摘要本發(fā)明涉及一種從虎杖中提取分離白藜蘆醇的方法，該方法包括粉碎、酶解、提取、離心、柱分離、重結(jié)晶或粉碎、提取、酶解、離心、柱分離、重結(jié)晶步驟。通過在酶解步驟中加入水解酶，再通過柱層析的分離，其中柱層析所用填料為聚丙烯酸樹脂CG71、聚丙烯酸樹脂RPC40、聚苯乙烯樹脂CG161、聚苯乙烯樹脂CG300、葡聚糖凝膠SephadexG-25或葡聚糖凝膠SephadexLH-20中的一種，解決了現(xiàn)有從虎杖中提取分離白藜蘆醇方法成本高，產(chǎn)品收率低，不能將白藜蘆醇甙進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇，工藝繁瑣、周期長，不適用于工業(yè)化大生產(chǎn)的技術(shù)問題。該方法成本低、收率高、工藝簡單、生產(chǎn)周期短，適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。文檔編號(hào)C07C37/82GK101698634SQ20091020739公開日2010年4月28日申請(qǐng)日期2009年10月20日優(yōu)先權(quán)日2009年6月30日發(fā)明者焦珂,王春德,王蕓珍,鄧尚勇,高強(qiáng)申請(qǐng)人:三原潤禾植化有限公司