專利名稱：一種當(dāng)歸根際高效解磷菌及其制備得到的菌劑和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種當(dāng)歸根際高效解磷菌Bacillus sp. DGP01，及其發(fā)酵制備得到的菌劑和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
磷是植物生長發(fā)育所必需的礦質(zhì)元素之一，是植物體內(nèi)核酸及多種酶、輔酶、ATP 等重要組成成分，作物吸收磷量與其生物量和產(chǎn)量呈顯著正相關(guān)性，植物缺磷時，會出現(xiàn)分蘗減少或延遲，抽穗推遲，成熟遲，穗粒數(shù)減少，籽粒不飽滿，玉米果穗禿頂，油菜脫莢、甘薯、馬鈴薯塊變小等現(xiàn)象，因此磷對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)極其重要。但我國有74%的耕地土壤缺磷，土壤中95%以上的磷為無效形式，植物很難直接吸收利用，尤其是紅壤旱地磷素最為缺乏； 另一方面土壤磷素的積累問題相當(dāng)嚴(yán)重，通過施肥進入土壤的磷會與Ca2+、i^2+、i^3+、Al3+等離子結(jié)合形成難溶性磷酸鹽，施入的磷肥有75% 90%積累在土壤中，作物的磷肥當(dāng)季利用率一般只有5% 10%，大部分磷肥成為無效態(tài)(難溶態(tài))在土壤中積累。由于長期施用磷肥，大多數(shù)農(nóng)田土壤潛在的磷庫含量很大，而提供作物生長發(fā)育的磷流卻很小。土壤中無機磷的含量約占土壤全磷量的1/3-1/2，而土壤中無機磷的形態(tài)主要有原生礦物和次生礦物兩種，其中原生礦物主要是磷灰石，磷灰石的主要成分為鈣氟磷灰石Ca5F (PO4) 3和氫氧磷灰石Caltl (PO4) 6 (OH)2,次生礦物主要指化合態(tài)，即沉淀態(tài)的磷酸鹽。在北方的石灰性土壤中， 磷酸鈣占無機磷量的60% -80%,在南方的磚紅壤中，磷酸鐵和磷酸鋁占無機磷量的80%， 這些結(jié)合態(tài)磷的活性低，向土壤供磷能力弱，土壤中除無機磷外，磷素中約1/3-1/2是有機磷，主要以植酸鈣鎂的形態(tài)存在，約占30% -50% ；此外，大量使用化肥明顯造成土壤板結(jié)、 土壤保水力下降、草地退化、荒漠化嚴(yán)重等不良后果。因此，提高磷的利用率一直是農(nóng)學(xué)、土壤學(xué)、生態(tài)環(huán)境和微生物學(xué)研究者關(guān)注的熱點。當(dāng)歸(Angelica sinensis (Oliv. ) Diels)為傘形科多年生草本藥用植物，藥用部位是其干燥根，收載于各部《中華人民共和國藥典》。當(dāng)歸具有補血活血，調(diào)經(jīng)止痛，潤腸通便之功效，是中醫(yī)婦科臨床上的常用中藥，素有“十方九歸”之說。當(dāng)歸主要分布于甘肅、云南、四川、湖北、貴州等省區(qū)，但主產(chǎn)于我國甘肅岷縣、武都、成縣等地，年產(chǎn)量占全國95%以上，當(dāng)歸是一種喜肥藥用植物，在營養(yǎng)生長期間，高肥是促進根系發(fā)育、獲得高產(chǎn)的重要因素，當(dāng)歸生長發(fā)育過程中對氮、磷、鉀三元素需求量大，當(dāng)歸產(chǎn)區(qū)土壤中和農(nóng)家肥料中一般磷、鉀不足，必須依靠施肥補充土壤養(yǎng)分的不足，而目前主要使用磷酸二氫鉀、磷酸二銨和氮磷鉀復(fù)合肥等化學(xué)肥料作追肥。長期以來，人們主要從無機磷的吸附與解吸、沉淀和溶解等化學(xué)轉(zhuǎn)化過程來研究土壤磷的活化。微生物對土壤磷的轉(zhuǎn)化和有效性影響很大，土壤微生物既是土壤無機質(zhì)轉(zhuǎn)化的執(zhí)行者，又是植物營養(yǎng)元素的活性庫，土壤微生物的生物量及其周轉(zhuǎn)對植物養(yǎng)分有效性起著重要作用。迄今為止發(fā)現(xiàn)的溶磷菌主要集中在農(nóng)作物土壤中，解磷微生物肥料也多應(yīng)用于農(nóng)作物的生產(chǎn)實踐中，而關(guān)于當(dāng)歸等中藥材栽培的微生物生態(tài)系統(tǒng)尚未見相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，對當(dāng)歸的根際微生物進行深入研究，提供一種具有降解土壤難溶無機磷，為植物提供可以直接吸收的優(yōu)質(zhì)磷素的當(dāng)歸根際高效解磷菌Bacillus sp.DGPOl，本發(fā)明另一個目的是提供當(dāng)歸根際高效解磷菌 Bacillus sp. DGPOl發(fā)酵制備得到的解磷菌劑，及Bacillus sp. DGPOl在制備降解土壤難溶無機磷的解磷菌劑中的應(yīng)用。技術(shù)方案為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為一種當(dāng)歸根際高效解磷菌，該解磷菌為芽孢桿菌Bacillus sp. DGP01，它在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為CGMCC No. 4755，保藏日期2011年4 月7日，保藏名稱為芽孢桿菌Bacillus sp.，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院 3號；菌株特征為菌體短桿狀，具有一個內(nèi)生芽孢，革蘭氏反應(yīng)為陽性，好氧。本發(fā)明提供的當(dāng)歸根際高效解磷菌的分離方法為從甘肅岷縣采集當(dāng)歸新鮮植株，抖掉附著在根上的疏松土壤，取粘附在當(dāng)歸根表面厚度約2 3mm的土壤，即為當(dāng)歸根際土壤樣品，稱取研磨后的根際土樣粉末10g，加入90ml含有少許玻璃珠的無菌水中，置于恒溫搖床以120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩30 40分鐘，稀釋，取10_3和10_4稀釋度的土壤懸液涂布于解磷細菌篩選固體平板培養(yǎng)基上(培養(yǎng)基組成為葡萄糖10g，(NH4)2SO4O. 5g，KCl 0. 3g， MgSO4 · 7Η200· 3g, NaCl 0. 3g, FeSO4 · 7H20 0. 03g, MnSO4 · 4H20 0. 03g, Ca3 (PO4) 25. 0g，瓊脂 20g，蒸餾水1000mL，pH 7. 0-7.幻，在32°C培養(yǎng)5天，有溶磷圈的菌落視為有解磷活性，相應(yīng)的菌株為解磷細菌，記錄菌落直徑和溶磷圈的大小，挑取溶磷圈較大的單菌落進行分離純化，轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)得到當(dāng)歸根際高效解磷菌芽孢桿菌Bacillus sp.DGPOl，于4°C 保藏。本發(fā)明提供的當(dāng)歸根際高效解磷菌的菌劑，它是通過以下方法制備得到的取當(dāng)歸根際解磷菌Bacillus sp.DGPOl菌株接種于種子培養(yǎng)基搖瓶中，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期； 然后將上述培養(yǎng)好的菌種按10%的接種量接種入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的500升種子罐(即菌種和發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比例為1 10)，投料量為350 400升，培養(yǎng)至對數(shù)生長期；然后將上述發(fā)酵液按10%的接種量接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的5噸生產(chǎn)罐培養(yǎng)(即發(fā)酵液和發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比例為1 10)，投料量為4. 0 4. 5噸，發(fā)酵所得培養(yǎng)液用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附后用包裝袋分裝成固體菌劑劑型，發(fā)酵培養(yǎng)液中菌體數(shù)量可達到10億個/mL以上。作為優(yōu)選方案，以上所述的當(dāng)歸根際高效解磷菌的菌劑，所述的種子培養(yǎng)基、種子罐與生產(chǎn)罐所用的發(fā)酵培養(yǎng)基均由下列重量的原料制成葡萄糖10g，(NH4)2SO4O. 5g，KCl 0. 3g, MgSO4 · 7H20 0. 3g, NaCl 0. 3g, FeSO4 · 7H20 0. 03g, MnSO4 · 4H20 0. 03g, KH2PO4L Og, 蒸餾水lOOOmL，種子培養(yǎng)基、種子罐與生產(chǎn)罐所用的發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為7. 0 7. 5。作為優(yōu)選方案，以上所述的當(dāng)歸根際高效解磷菌的菌劑，在種子罐和生產(chǎn)罐的發(fā)酵培養(yǎng)過程中無菌空氣的通氣量為1 0.6 1.0(即單位時間內(nèi)通入的無菌空氣和發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比)，攪拌速度為180 200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度30 32°C，培養(yǎng)時間為48 60小時。本發(fā)明提供的當(dāng)歸根際高效解磷菌的菌劑的制備方法，包括以下步驟(1)取分離得到的當(dāng)歸根際解磷菌Bacillus sp. DGP01菌株接種于種子培養(yǎng)基搖
4瓶中，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；(2)然后取步驟(1)培養(yǎng)好的菌種按10%的接種量接種入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的500 升種子罐中培養(yǎng)，投料量為350 400升，培養(yǎng)至對數(shù)生長期；(3)然后取步驟( 培養(yǎng)好的發(fā)酵液按10%的接種量接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的5噸生產(chǎn)罐中培養(yǎng)，投料量為4. 0 4. 5噸，發(fā)酵所得培養(yǎng)液用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附后用包裝袋分裝成固體菌劑劑型。作為優(yōu)選方案，以上所述的當(dāng)歸根際高效解磷菌菌劑的制備方法，其中步驟(1) 所述的種子培養(yǎng)基，步驟O)與步驟C3)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基均由下列重量的原料制成葡萄糖 10g, (NH4)2SO4O. 5g, KCl 0. 3g, MgSO4 · 7H20 0. 3g, NaCl 0. 3g, FeSO4 · 7H20 0. 03g, MnSO4 ·4Η200. 03g, KH2PO4L Og,蒸餾水lOOOmL，種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為7. 0 7. 5。作為優(yōu)選方案，以上所述的當(dāng)歸根際高效解磷菌菌劑的制備方法，步驟(1)搖瓶培養(yǎng)的溫度為觀 30°C，攪拌速度為180 200轉(zhuǎn)/分；步驟( 種子罐和步驟C3)生產(chǎn)罐的發(fā)酵培養(yǎng)過程中無菌空氣的通氣量為1 0.6 1.0(即單位時間內(nèi)通入的無菌空氣和發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比)，攪拌速度為180 200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度30 32°C，培養(yǎng)時間為 48 60小時。本發(fā)明提供的當(dāng)歸根際高效解磷菌在制備降解土壤難溶無機磷的解磷菌劑中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的解磷菌劑可與磷礦粉或有機肥混合使用，也可以單獨使用，應(yīng)用于當(dāng)歸等中藥材的栽培施肥，可提高中藥材的產(chǎn)量和品質(zhì)。有益效果本發(fā)明提供的當(dāng)歸根際高效解磷菌及其制備得到的菌劑和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點1、本發(fā)明經(jīng)過大量實驗篩選，從當(dāng)歸根際中篩選出具有降解難溶性無機磷(如 Ca2+、Fe2\ Fe3\ Al3+等離子結(jié)合形成難溶性磷酸鹽)的解磷菌Bacillus sp. DGP01，并以解磷菌Bacillus sp. DGPOl為菌種發(fā)酵培養(yǎng)制備得到解磷菌劑，該解磷菌及其菌劑能夠?qū)㈦y溶性無機磷轉(zhuǎn)化為可供植物直接吸收利用的優(yōu)質(zhì)磷素化合物，可提高土壤中難溶性磷的生物有效性和磷肥利用效率，節(jié)肥增產(chǎn)，而且可改善土壤結(jié)構(gòu)，提高土壤有機質(zhì)含量，改良鹽堿地以及對培育和充分發(fā)揮土壤生態(tài)肥力、保持農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境的平衡等均具有極其重要意義和應(yīng)用價值。2、本發(fā)明提供的解磷菌及其菌劑，不僅能增加土壤中的有效磷而且能促進植物對其他營養(yǎng)元素的吸收，解磷菌可以吸附植物根系周圍的鋅、銅、鈣等微量元素，改善植物營養(yǎng)；而且還可分泌生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，促進根系生長；并且解磷菌接種后，在植物根際大量生長繁殖，在一段時間內(nèi)成為植物根際的優(yōu)勢菌，從而可抑制或減少病原微生物的繁殖機會，提高植物的抗病能力。3、本發(fā)明提供的解磷菌劑可將土壤中難溶性無機磷降解為植物可以利用的可溶性無機磷，向土壤中直接釋放優(yōu)質(zhì)磷肥料，故不存在生產(chǎn)過程中向環(huán)境排放污染物，解磷微生物是一種真正意義上的環(huán)保型肥料；且本發(fā)明提供的解磷菌劑的制備方法，生產(chǎn)工藝簡單，生產(chǎn)效率高，能實現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)，具有良好的經(jīng)濟效應(yīng)和社會效應(yīng)。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例進一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權(quán)利要求所限定的范圍。實施例1一種當(dāng)歸根際高效解磷菌菌劑，它是通過以下方法制備得到的取當(dāng)歸根際解磷菌Bacillus sp. DGPOl (保藏號為CGMCC No. 4755)菌株接種于種子培養(yǎng)基搖瓶中，30°C，200轉(zhuǎn)/分種振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；然后將上述培養(yǎng)好的菌種按 10%的接種量接種入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的500升種子罐，投料量為400升，培養(yǎng)至對數(shù)生長期；然后將上述發(fā)酵液按10 %的接種量接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的5噸生產(chǎn)罐培養(yǎng)，投料量為4 噸，發(fā)酵所得培養(yǎng)液直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型的解磷菌菌劑。以上所述的種子培養(yǎng)基、種子罐與生產(chǎn)罐所用的發(fā)酵培養(yǎng)基均由下列重量的原料制成葡萄糖 10g, (NH4)2SO4O. 5g，KCl 0. 3g，MgSO4 · 7H20 0. 3g，NaCl 0. 3g，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0. 03g, MnSO4 · 4H20 0. 03g, KH2PO4L Og,蒸餾水 IOOOmL, pH 7. 0 7. 5。以上在種子罐和生產(chǎn)罐的發(fā)酵培養(yǎng)過程中無菌空氣的通氣量為1 1.0，攪拌速度為200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度32°C，培養(yǎng)時間為60小時。實施例2一種當(dāng)歸根際高效解磷菌菌劑，它是通過以下方法制備得到的取當(dāng)歸根際解磷菌Bacillus sp. DGPOl (保藏號為CGMCC No. 4755)菌株接種于種子培養(yǎng)基搖瓶中，30°C，200轉(zhuǎn)/分種振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；然后將上述培養(yǎng)好的菌種按 10%的接種量接種入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的500升種子罐，投料量為450升，培養(yǎng)至對數(shù)生長期；然后將上述發(fā)酵液按10%的接種量接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的5噸生產(chǎn)罐培養(yǎng)，投料量為 4. 5噸，發(fā)酵所得培養(yǎng)液用泥炭吸附后用包裝袋分裝成固體劑型的解磷菌菌劑。以上所述的種子培養(yǎng)基、種子罐與生產(chǎn)罐所用的發(fā)酵培養(yǎng)基均由下列重量的原料制成葡萄糖 10g, (NH4)2SO4O. 5g，KCl 0. 3g，MgSO4 · 7H20 0. 3g，NaCl 0. 3g，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0. 03g, MnSO4 · 4H20 0. 03g, KH2PO4L Og,蒸餾水 IOOOmL, pH 7. 0 7. 5。以上在種子罐和生產(chǎn)罐的發(fā)酵培養(yǎng)過程中無菌空氣的通氣量為1 0.6，攪拌速度為180轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度30°C，培養(yǎng)時間為48小時。實施例3解磷菌解磷能力測試1、液體培養(yǎng)法測定菌株的解磷能力在IOOmL三角瓶中裝入30mL已滅菌的種子培養(yǎng)基(葡萄糖10g，(NH4)2SO4O. 5g， KC10. 3g，MgSO4 ·7Η20 0.3g，NaCl 0· 3g，F(xiàn)eSO4 · 7Η20 0. 03g, MnSO4 ·4Η20 0. 03g, KH2PO4L Og, 蒸餾水1000mL，pH 7. 0 7. 5)，接入已經(jīng)活化好的斜面Bacillus sp. DGP01菌種(保藏號為CGMCC No. 4755)，搖瓶培養(yǎng)至對數(shù)生長期(約IO8CFU · mL—1)。按5%接種量分別接入解磷培養(yǎng)液O50mL三角瓶裝40mL培養(yǎng)基)，同時設(shè)不接菌種的對照組，每個處理重復(fù)5次，接種后在32°C，200轉(zhuǎn)/分鐘恒溫搖床上培養(yǎng)7 10天后，取IOml培養(yǎng)液，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心lOmin，然后采用鉬銻抗比色法測定上清液可溶性磷含量。2、砂培試驗測定菌株的解磷能力將解磷菌Bacillus sp. DGP01 (保藏號為CGMCC No. 4755)接種到無菌的加有難溶性無機磷培養(yǎng)基的土壤或細砂中，通過室內(nèi)模擬培養(yǎng)后，測定土壤(或細砂)中可溶性磷含量的變化來確定菌株解磷能力。具體步驟為取適量河砂，曬干后過2mm篩，水洗3次，以除去附著的土壤，再用稀鹽酸浸泡24h后，用蒸餾水洗至中性，烘干備用。稱取細砂50g 放入50mL三角瓶中，分別加入磷酸三鈣、磷酸鋁、磷酸鐵和磷礦粉0. 5g，1. 05X IO5Pa滅菌 30min，共滅菌3次。將2mL Bacillus sp. DGPOl菌的菌液接入滅菌的細砂中，加入8mL解磷培養(yǎng)基[葡萄糖 10g, (NH4)2SO4O. 5g, KCl 0. 3g, MgSO4 · 7H20 0. 3g, NaCl 0. 3g, FeSO4 · 7H20 0. 03g，MnSO4 · 4H20 0. 03g，磷源 5. 0g，蒸餾水 IOOOmL, pH 7. 0-7. 5]，同時設(shè)不加菌種的對照組，在32°C培養(yǎng)4周后，直接用水浸提砂土，并采用鉬銻抗比色法測定浸提液中可溶性磷的含量。3、結(jié)果與分析3. 1采用液體培養(yǎng)法測定Bacillus sp. DGPOl菌株的解磷能力Bacillus sp. DGPOl菌株對不同難溶性磷酸鹽均具有較強的解磷作用(如表1)， 尤其是對磷礦粉和磷酸三鈣的解磷效果較強，相對于對照組，分別提高了 20多倍，對難溶性磷酸鋁和磷酸鐵的解磷作用和對照組相比分別提高7倍多和19倍多。表IBacillus sp. DGPOl菌株對不同難溶性磷酸鹽的解磷作用(xQs, n=5)
磷源可溶性磷(mg/L) 接種Bacillus ψ. DGPOl菌株組對照組(CK)
磷礦粉589. 7±22.224. 6±1. 9磷酸三鈣519. 1±29. 322.9±2. 1磷酸鋁362. 3± 18. 649. 7±3.6磷酸鐵327. 5±17.917. 2±1. 1
3.2Bacillussp. DGPOl菌株的砂培試驗結(jié)果
將 Bacillussp. DGPOl菌株通過砂培試驗，具體實驗結(jié)果如表2所示
表 2Bacillussp. DGPOl菌株的砂培試驗結(jié)果(n=5)磷源可溶性磷(mg/kg砂)接種 Bacillus DGPOl 菌株組對照組(CK)
磷礦粉12.62±0. 210. 95±0.05磷酸三鈣10. 07±0. 190. 86±0. 03磷酸鋁7.22±0. 121.02 土0. 06磷酸鐵5. 87±0. 110. 71±0. 02由表2的砂培實驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的Bacillus sp. DGPOl菌株對難溶性磷礦粉、磷酸三鈣、磷酸鋁和磷酸鐵均具有較好的解磷作用，可以高效的將難溶性磷鹽轉(zhuǎn)化為植物易吸收利用的可溶性磷。實施例4Bacillus sp. DGPOl菌株解磷的穩(wěn)定性試驗本發(fā)明采用連續(xù)傳代的方法考察Bacillus sp. DGPOl菌株對難溶性磷鹽，如磷礦粉、磷酸三鈣、磷酸鋁和磷酸鐵的解磷功能的穩(wěn)定性，具體實驗結(jié)果如表3所示，結(jié)果表明在連續(xù)傳代30次后Bacillus sp. DGPOl菌株對磷礦粉、磷酸三鈣、磷酸鋁及磷酸鐵的解磷
7作用仍然較強，各代的可溶性磷含量波動范圍均在10%以內(nèi)，實驗結(jié)果表明本發(fā)明提供的 Bacillus sp. DGPOl解磷菌具有很好的解磷穩(wěn)定性能。表!BBacillus sp. DGPOl菌株解磷的穩(wěn)定性試驗結(jié)果( =5)
權(quán)利要求
1.一種當(dāng)歸根際高效解磷菌，其特征在于，該解磷菌為芽孢桿菌Bacillus sp.DGPOl, 它在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為CGMCC No. 4755，保藏日期2011年4月7日。
2.一種當(dāng)歸根際高效解磷菌的菌劑，其特征在于，它是通過以下方法制備得到的取當(dāng)歸根際解磷菌Bacillus sp. DGPOl菌株接種于種子培養(yǎng)基搖瓶中，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；然后將上述培養(yǎng)好的菌種按10%的接種量接種入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的500升種子罐，投料量為350 400升，培養(yǎng)至對數(shù)生長期；然后將上述發(fā)酵液按10%的接種量接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的5噸生產(chǎn)罐培養(yǎng)，投料量為4. 0 4. 5噸，發(fā)酵所得培養(yǎng)液用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附后用包裝袋分裝成的固體菌劑型。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的當(dāng)歸根際高效解磷菌的菌劑，其特征在于，所述的種子培養(yǎng)基、種子罐與生產(chǎn)罐所用的發(fā)酵培養(yǎng)基均由下列重量的原料制成葡萄糖10g， (NH4)2SO4O. 5g, KCl 0. 3g, MgSO4 · 7H20 0. 3g, NaCl 0. 3g, FeSO4 · 7H20 0. 03g, MnSO4 · 4H20 0. 03g，KH2PO4L 0g，蒸餾水lOOOmL，且種子培養(yǎng)基、種子罐與生產(chǎn)罐所用的發(fā)酵培養(yǎng)基的pH 值為7.0 7. 5。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的當(dāng)歸根際高效解磷菌的菌劑，其特征在于，在種子罐和生產(chǎn)罐的發(fā)酵培養(yǎng)過程中無菌空氣的通氣量為1 0. 6 1.0，攪拌速度為180 200轉(zhuǎn)/分， 培養(yǎng)溫度30 32°C，培養(yǎng)時間為48 60小時。
5.權(quán)利要求2所述的當(dāng)歸根際高效解磷菌的菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)取當(dāng)歸根際解磷菌Bacillussp.DGPOl菌株接種于種子培養(yǎng)基搖瓶中，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；(2)然后取步驟(1)培養(yǎng)好的菌種按10%的接種量接種入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的500升種子罐中培養(yǎng)，投料量為350 400升，培養(yǎng)至對數(shù)生長期；(3)然后取步驟( 培養(yǎng)好的發(fā)酵液按10%的接種量接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的5噸生產(chǎn)罐中培養(yǎng)，投料量為4. 0 4. 5噸，發(fā)酵所得培養(yǎng)液用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附后用包裝袋分裝成的固體菌劑型。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的當(dāng)歸根際高效解磷菌的菌劑的制備方法，其特征在于，步驟 (1)所述的種子培養(yǎng)基，步驟O)與步驟C3)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基均由下列重量的原料制成 葡萄糖 log, (NH4)2SO4O. 5g, KCl 0. 3g, MgSO4 · 7H20 0. 3g, NaCl 0. 3g, FeSO4 · 7H20 0. 03g, MnSO4 · 4H20 0. 03g, KH2PO4L Og,蒸餾水IOOOmL,且種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值為 7. 0 7. 5。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的當(dāng)歸根際高效解磷菌的菌劑的制備方法，其特征在于，在種子罐和生產(chǎn)罐的發(fā)酵培養(yǎng)過程中無菌空氣的通氣量為1 0.6 1.0，攪拌速度為180 200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度30 32°C，培養(yǎng)時間為48 60小時。
8.權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸根際高效解磷菌在制備降解土壤難溶無機磷的解磷菌劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種當(dāng)歸根際高效解磷菌及其制備得到的菌劑和應(yīng)用，該解磷菌為芽孢桿菌Bacillus sp.DGP01，它在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為CGMCCNo.4755，保藏日期2011年4月7日。解磷菌菌劑是通過以下方法制備得到的取解磷菌Bacillus sp.DGP01菌株接種于種子培養(yǎng)基搖瓶中，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期；然后將培養(yǎng)好的菌種接種入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的種子罐，培養(yǎng)至對數(shù)生長期；然后將上述發(fā)酵液接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的生產(chǎn)罐中培養(yǎng)得到。該解磷菌能夠?qū)㈦y溶性無機磷轉(zhuǎn)化為可供植物直接吸收利用的優(yōu)質(zhì)磷素化合物，可提高土壤中難溶性磷的生物有效性和磷肥利用效率，節(jié)肥增產(chǎn)，且在培育和發(fā)揮土壤生態(tài)肥力、保持農(nóng)業(yè)生態(tài)平衡方面具有重要意義和應(yīng)用價值。
文檔編號C12N1/20GK102250784SQ201110103328
公開日2011年11月23日 申請日期2011年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月25日
發(fā)明者段金廒, 江曙, 錢大瑋, 陶金華 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)