專利名稱：細(xì)胞、核酸、酶和它們用于生產(chǎn)槐糖脂的用途以及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及核酸、酶和細(xì)胞以及它們用于生產(chǎn)槐糖脂的用途，也涉及用于生產(chǎn)槐糖脂的方法。
背景技術(shù)：
目前，表面活性劑基本上基于石化原料的基礎(chǔ)來生產(chǎn)。由于可預(yù)見的石化原料的短缺以及日益増加的對(duì)基于可再生原料的和/或生物可降解的產(chǎn)品的需求，基于可再生原料的表面活性劑的使用是ー種合適的替代方案。槐糖脂具有用作表面活性劑所需要的表面活性性質(zhì)。這些脂類目前使用多種酵母菌、特別是愚"##淨(jìng)朦bombicola)的野生型分離物來生產(chǎn)。迄今為止，僅通過過程控制(pH值、氧供應(yīng)、培養(yǎng)基組成、飼喂策略、氮供應(yīng)、溫度、底物的選擇等)的優(yōu)化進(jìn)行產(chǎn)物形成的性能參數(shù)的改善，所述性能參數(shù)諸如碳產(chǎn)率、空間時(shí)間產(chǎn)率、產(chǎn)物濃度、產(chǎn)物同質(zhì)性(こ?；潭?，脂肪酸種類，內(nèi)酯形式對(duì)開鏈形式)。唯一的例外是如下的)#資摩1母朦的遺傳修飾，其中β -氧化已經(jīng)被排除，使得作為底物而補(bǔ)料的甘油三酷、脂肪酸、脂肪醇等不能夠再被用作碳源，換而言之，被降解(VanBogaert等人FEMS Yeast Res. 2009年6月;9 (4):610-7)。以此方式，通過選擇底物，應(yīng)該能夠有針對(duì)性地控制槐糖脂的脂肪酸比例，從而影響產(chǎn)物性質(zhì)。由于通過優(yōu)化過程控制僅能有限地改善槐糖脂的生物技術(shù)生產(chǎn)的性能參數(shù)，所以還必須進(jìn)行遺傳修飾。所述遺傳修飾一方面包括增強(qiáng)參與槐糖脂合成的酶細(xì)胞色素P450單加氧酶、糖基轉(zhuǎn)移酶I、糖基轉(zhuǎn)移酶II、こ酰基轉(zhuǎn)移酶、槐糖脂輸出體(Exporter)，目的是改善產(chǎn)物形成的性能參數(shù)，諸如碳產(chǎn)率、空間時(shí)間產(chǎn)率、產(chǎn)物濃度、產(chǎn)物同質(zhì)性(こ?；潭?、脂肪酸物質(zhì))等。所述遺傳修飾另一方面包括減弱ー些參與槐糖脂合成的酶糖基轉(zhuǎn)移酶II、こ?；D(zhuǎn)移酶，目的是修飾生產(chǎn)的槐糖脂的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)糖基轉(zhuǎn)移酶II :生產(chǎn)單糖基槐糖脂；こ?；D(zhuǎn)移酶生產(chǎn)未こ酰化的槐糖脂。如果要在清潔用途、化妝品用途和其它用途中大規(guī)模地使用槐糖脂作為表面活性齊U，它們必須與目前使用的表面活性劑相競(jìng)爭(zhēng)。目前使用的表面活性劑是可以以非常低的成本生產(chǎn)的大宗化學(xué)品。因此，必須以盡可能最低的成本來生產(chǎn)槐糖脂。這不能僅僅通過過程優(yōu)化來優(yōu)化性能參數(shù)來實(shí)現(xiàn)。因此，存在日益増加的對(duì)具有高產(chǎn)品產(chǎn)率的槐糖脂有效生產(chǎn)的需求。 因此，本發(fā)明以這樣的目的為基礎(chǔ)，即提供工具和/或方法，借助于所述工具和/或方法，可以以簡(jiǎn)單且大量地合成特定槐糖脂。

發(fā)明內(nèi)容
令人驚奇地，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在下文中所述的細(xì)胞、核酸、多肽和方法能夠達(dá)成上述目的。
因此，本發(fā)明的主題是，具有經(jīng)改變的酶裝置的遺傳修飾的細(xì)胞，所述細(xì)胞用于合成槐糖脂。本發(fā)明的另ー個(gè)主題是，如在權(quán)利要求11和12中所述的新的核酸和載體。本發(fā)明還有ー個(gè)主題是，可用于槐糖脂生物合成中的新的酶。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，不僅改善了槐糖脂形成的性能參數(shù)，諸如碳產(chǎn)率和空間時(shí)間產(chǎn)率，而且也可以改善例如こ酰化程度和脂肪酸種類方面的產(chǎn)物同質(zhì)性。本發(fā)明的一個(gè)主題是能夠形成槐糖脂的細(xì)胞，對(duì)所述細(xì)胞已如此進(jìn)行了遺傳工程改變，使得所述細(xì)胞相對(duì)較于它的野生型而言具有一種經(jīng)改變的如分別在下文中列舉的選自下列所述組的至少ー種酶的活性
至少ー種酶 E1，該酶具有多肽序列 Seq ID Nr. 7,Seq ID Nr. 53,Seq ID Nr. 55,SeqID Nr. 57,Seq ID Nr. 59,Seq ID Nr. 61 或 Seq ID Nr. 63，尤其是 Seq ID Nr. 7，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于各個(gè)參照序列Seq ID Nr. 7、Seq ID Nr. 53、Seq ID Nr.55,Seq ID Nr. 57,Seq ID Nr. 59,Seq ID Nr. 61 或 Seq ID Nr. 63、尤其是 Seq ID Nr.7，最多25%、優(yōu)選最多20%、特別優(yōu)選最多15%、尤其最多10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有各參照序列Seq ID Nr.7,Seq ID Nr. 53,Seq ID Nr. 55,Seq ID Nr. 57,Seq ID Nr. 59,Seq ID Nr. 61 或 SeqID Nr. 63的酶的至少50%、優(yōu)選65%、特別優(yōu)選80%、尤其多于90%的酶的活性，其中將酶E1的酶的活性理解為將Z-9-十八碳烯酸轉(zhuǎn)化成17-羥基-Z-9-十八碳烯酸的能力，
至少ー種酶E2，該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 8或Seq ID Nr. 11，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于Seq ID Nr. 8或Seq ID Nr. 11，最多60%、優(yōu)選最多25%、特別優(yōu)選最多15%、尤其最多10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有各參照序列Seq ID Nr. 8或Seq ID Nr. 11的酶的至少50%、優(yōu)選65%、特別優(yōu)選80%、尤其多于90%的酶的活性，其中將酶E2的酶的活性理解為將UDP-葡萄糖和17-羥基-Z-9-十八碳烯酸轉(zhuǎn)化成17- ( β -D-吡喃葡萄糖基氧基)-Ζ-9-十八碳烯酸的能力，
至少ー種酶E3，該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 11，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于Seq ID Nr. 11，最多60%、優(yōu)選最多25%、特別優(yōu)選最多15%、尤其最多10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有參照序列Seq ID Nr. 11的酶的至少50%、優(yōu)選地65%、特別優(yōu)選地80%、尤其多于90%的酶的活性，其中將酶E3的酶的活性理解為將17-(β -D-吡喃葡萄糖基氧基)-Ζ-9-十八碳烯酸和UDP-葡萄糖轉(zhuǎn)化成17-L-[(2’ -0-β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸的能力，
至少ー種_Ε4,該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 9,或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于Seq ID Nr. 9，最多50%、優(yōu)選最多25%、特別優(yōu)選最多15%、尤其最多10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有Seq ID Nr.9的酶的至少50%、優(yōu)選65%、特別優(yōu)選80%、尤其多于90%的酶活性，其中將酶E4的酶的活性理解為將17-L- [ (2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳 烯酸-I’，4’ ’ -內(nèi)酯和こ?；?輔酶A轉(zhuǎn)化成17-L-[ (2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’ ’ -內(nèi)酯單こ酸酷，或?qū)?7-L-[ (2’ -0-β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸-I’，4’ ’ -內(nèi)酯單こ酸酯和こ?；?輔酶A轉(zhuǎn)化成17-L-[(2’-0-i3-D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸-內(nèi)酯ニこ酸酷，或?qū)?7-L-[(2’-0-i3-D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’’-內(nèi)酷和こ?；?輔酶A轉(zhuǎn)化成17_L_[ (2’ ~0~ β -D-卩比喃匍萄糖基-β -D-卩比喃匍萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳稀酸-1’，4’ ’ -內(nèi)酯ニこ酸酯的能力，其中第一個(gè)選項(xiàng)是優(yōu)選的，
至少ー種酶E5，該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 10，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于Seq ID Nr. 10，最多45%、優(yōu)選最多25%、特別優(yōu)選最多15%、尤其最多10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有Seq IDNr. 10的酶的至少50%、優(yōu)選65%、特別優(yōu)選80%、尤其多于90%的酶活性，其中酶E5的酶活性理解為將槐糖脂從細(xì)胞轉(zhuǎn)移到周圍的培養(yǎng)基中的能力。在本發(fā)明的上下文中，表述“槐糖脂”理解為通式(Ia)和(Ib)的化合物 H ORt
HO^vVr0X
ノ^、^R4
,HHf 式(Ia)
H OギOI
ICOOH
ぬ]
HH
權(quán)利要求
1.形成槐糖脂的細(xì)胞，其已如此進(jìn)行了遺傳工程改變，使得所述細(xì)胞相較于它的野生型而言具有一種經(jīng)改變的如分別在以下列舉的選自下列所述組的至少ー種酶的活性 至少ー種酶 E1，該酶具有多肽序列 Seq ID Nr. 7,Seq ID Nr. 53,Seq ID Nr. 55,SeqID Nr. 57、Seq ID Nr. 59、Seq ID Nr. 61 或 Seq ID Nr. 63，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于 Seq ID Nr. 7,Seq ID Nr. 53,Seq ID Nr. 55,Seq ID Nr. 57,Seq ID Nr. 59、Seq ID Nr. 61或Seq ID Nr. 63，最多25%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有各參照序列Seq ID Nr. 7、Seq ID Nr. 53、Seq ID Nr. 55、Seq ID Nr. 57,Seq ID Nr. 59,Seq ID Nr. 61 或 Seq ID Nr. 63 的酶的至少 50% 的酶的活性，其中將酶E1的酶的活性理解為將Z-9-十八碳烯酸轉(zhuǎn)化成17-羥基-Z-9-十八碳烯酸的能力， 至少ー種酶E2，該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 8或Seq ID Nr. 11，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于Seq ID Nr. 8或Seq ID Nr. 11，最多60%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有各參照序列Seq ID Nr. 8或Seq ID Nr.11的酶的至少50%的酶的活性，其中將酶E2的酶的活性理解為將UDP-葡萄糖和17-羥基-Z-9-十八碳烯酸轉(zhuǎn)化成17-(β -D-批喃匍萄糖基氧基)-Ζ_9_十八碳烯酸的能力， 至少ー種酶E3，該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 11，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于Seq ID Nr. 11，最多60%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有參照序列Seq ID Nr. 11的酶的至少50%的酶的活性，其中將酶E3的酶的活性理解為將17-(β -D-吡喃葡萄糖基氧基)-Ζ-9-十八碳烯酸和UDP-葡萄糖轉(zhuǎn)化成17-L- [ (2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸的能力， 至少ー種酶E4，該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 9，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于Seq ID Nr. 9，最多50%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有Seq ID Nr. 9的酶的至少50%的酶的活性，其中將酶E4的酶的活性理解為將17_L_[ (2’ ~0~ β -D-卩比喃匍萄糖基-β -D-卩比喃匍萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳稀酸-1’，4’ ’ -內(nèi)酯和こ?；?輔酶A轉(zhuǎn)化成17-L- [ (2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’ ’ -內(nèi)酯單こ酸酷，或?qū)?7-L-[(2’ -0-β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸-I’，4’ ’ -內(nèi)酯單こ酸酯和こ酰基-輔酶A轉(zhuǎn)化成17-L-[(2’-0-i3-D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸-內(nèi)酯ニこ酸酷，或?qū)?7-L-[(2’-0-i3-D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’’-內(nèi)酷和こ?；?輔酶A轉(zhuǎn)化成17_L_[ (2’ -O- β -D-卩比喃匍萄糖基-β -D-卩比喃匍萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳稀酸-1’，4’’_內(nèi)酯ニこ酸酯的能力， 至少ー種酶E5，該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 10，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于Seq ID Nr. 10，最多45%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有Seq ID Nr. 10的酶的至少50%的酶的活性，其中將酶E5的酶活性理解為將槐糖脂從細(xì)胞轉(zhuǎn)移到周圍的培養(yǎng)基中的能力。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的細(xì)胞，其特征在于，在其氧化中所述細(xì)胞被至少部分地阻斷。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2的細(xì)胞，其特征在于，所述改變的活性是增加的活性。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞具有増加的下述酶的組合的活性E1E2^ E1Ep E1E4^ E1E5^ E2E3> E2E4> E2E5、E3E4> E3E5、E4E5> E1E2E3^ E1E2E4^ E1E2E5^ E1E3E4^ E1E3E5^E1E4E5>E2E3E4>E2E4E5>E3E4E5>E1E2E3E4>E2E3E4E5>E1E3E4E5>E1E2E4E5>E1E2E3E5>E1E2E3E4 ^PE1E2E3E4E5O
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞具有減少的酶E3的活性和任選増加的下述酶的組合的活性 E1E2^ E1E4^ E1E5^ E2E4> E2E5、E4E5> E1E2E4' E1E2E5^ E1E4E5 和 E1E2E4E50
6.根據(jù)權(quán)利要求I或2的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞具有減少的酶E4的活性和任選増加的下述酶的組合的活性 E1Ep E1Ep E1Ep E2E3 > E2E5、E3E5、E1E2E3' E1E2E5' E1E3E5 和 E1E2E3E50
7.根據(jù)權(quán)利要求I或2的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞具有減少的酶E3和E4的活性和任選增加的下述酶的組合的活性 E1E2^ E1E5^ E2E5^ E1E2E50
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7的至少ー項(xiàng)的細(xì)胞，其特征在于，將所述細(xì)胞用根據(jù)權(quán)利要求10或11的至少ー種核酸轉(zhuǎn)化。
9.用于生產(chǎn)槐糖脂的方法，所述方法包括下述エ藝步驟 I)使根據(jù)權(quán)利要求1-8的至少ー項(xiàng)的細(xì)胞與包含碳源的培養(yǎng)基接觸， II)在使所述細(xì)胞能夠從所述碳源形成槐糖脂的條件下，培養(yǎng)所述細(xì)胞，且 III)任選分離形成的槐糖脂。
10.用根據(jù)權(quán)利要求9的方法得到的槐糖脂制備化妝品制劑、皮膚病學(xué)制劑或藥物制齊U、作物保護(hù)制劑和護(hù)理劑及清潔劑和表面活性劑濃縮物的用途。
11.分離的DNA，所述DNA選自下述序列A)根據(jù) Seq ID Nr. 2、Seq ID Nr. 3、Seq ID Nr. 4、Seq ID Nr. 5、Seq ID Nr. 6、Seq ID Nr. 52,Seq ID Nr. 54,Seq ID Nr. 56,Seq ID Nr. 58,Seq ID Nr. 60或Seq IDNr. 62的序列，其中根據(jù) Seq ID Nr. 2,Seq ID Nr. 52,Seq ID Nr. 54,Seq ID Nr. 56,Seq ID Nr.58、Seq ID Nr. 60或Seq ID Nr. 62的序列編碼能夠?qū)_9_十八碳烯酸轉(zhuǎn)化成17-羥基-Z-9-十八碳烯酸的蛋白質(zhì)， 其中所述序列Seq ID Nr. 3編碼能夠?qū)DP-葡萄糖和17-羥基-Z_9_十八碳烯酸轉(zhuǎn)化成17-( β -D-吡喃葡萄糖基氧基)-Ζ-9-十八碳烯酸的蛋白質(zhì)， 其中所述序列Seq ID Nr. 4編碼能夠?qū)?7_L_[ (2’ ~0~ β -D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’’-內(nèi)酷和こ?；?輔酶A轉(zhuǎn)化成17-L- [ (2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’’_內(nèi)酯單こ酸酷，或?qū)?7-L-[(2’-0-i3-D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’’_內(nèi)酯單こ酸酯和こ酰基-輔酶A轉(zhuǎn)化成17-L- [ (2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’ ’ -內(nèi)酯ニこ酸酷，或?qū)?7-L-[(2’ -0-β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’’-內(nèi)酷和こ酰基-輔酶A轉(zhuǎn)化成17-L-[(2’-0-i3-D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’’-內(nèi)酯ニこ酸酯的蛋白質(zhì)， 其中所述序列Seq ID Nr. 5編碼能夠?qū)⒒碧侵瑥募?xì)胞轉(zhuǎn)移到周圍的培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)，其中所述序列Seq ID Nr. 6編碼能夠?qū)DP-葡萄糖和17-羥基-Z_9_十八碳烯酸轉(zhuǎn)化成17- ( β -D-吡喃葡萄糖基氧基)-Ζ-9-十八碳烯酸，或?qū)?7- ( β -D-吡喃葡萄糖基氧基)-Ζ-9-十八碳烯酸和UDP-葡萄糖轉(zhuǎn)化成17-L-[ (2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸的蛋白質(zhì)， B)一種不含內(nèi)含子的序列,其源自根據(jù)Α)的序列，且其與根據(jù)Seq ID Nr. 2,Seq IDNr. 3、Seq ID Nr. 4、Seq ID Nr. 5、Seq ID Nr. 6、Seq ID Nr. 52、Seq ID Nr. 54、SeqID Nr. 56,Seq ID Nr. 58,Seq ID Nr. 60或Seq ID Nr. 62的序列編碼相同的蛋白質(zhì)或肽， C)ー種序列，其編碼蛋白質(zhì)或肽，所述蛋白質(zhì)或肽包含根據(jù)Seq ID Nr. 7、Seq ID Nr..8、Seq ID Nr. 9、Seq ID Nr. 10、Seq ID Nr. 11、Seq ID Nr. 53、Seq ID Nr. 55、Seq IDNr. 57、Seq ID Nr. 59、Seq ID Nr. 61或Seq ID Nr. 63的氨基酸序列，其中所述包含根據(jù) Seq ID Nr. 7、Seq ID Nr. 53、Seq ID Nr. 55、Seq ID Nr. 57、Seq ID Nr. 59、SeqID Nr. 61或Seq ID Nr. 63的氨基酸序列的蛋白質(zhì)或肽能夠?qū)_9_十八碳烯酸轉(zhuǎn)化成.17-羥基-Z-9-十八碳烯酸， D)ー種序列，其與根據(jù)組A)至C)中的任ー組的序列至少80%相同， E)ー種序列，其與根據(jù)組A)至D)中的任ー組的序列的反鏈雜交，或在考慮遺傳密碼的簡(jiǎn)并性的情況下與所述反鏈雜交， F)根據(jù)組A)至E)中的任ー組的序列的衍生物，其通過置換、添加、反轉(zhuǎn)和/或刪除ー個(gè)或多個(gè)堿基而得到，和 G)與根據(jù)組A)至F)中的任ー組的序列互補(bǔ)的序列。
12.載體，其包含如在權(quán)利要求11中定義的、根據(jù)組A)至G)中的任ー組的DNA序列。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的載體用于轉(zhuǎn)化細(xì)胞的用途。
14.分離的多肽，其選自 酶 E1，該酶具有多肽序列 Seq ID Nr. 7、Seq ID Nr. 53、Seq ID Nr. 55、Seq ID Nr..57、Seq ID Nr. 59、Seq ID Nr. 61 或 Seq ID Nr. 63、特別是 Seq ID Nr. 7，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于各個(gè)參照序列Seq ID Nr. 7,Seq ID Nr. 53,Seq ID Nr. 55,SeqID Nr. 57,Seq ID Nr. 59,Seq ID Nr. 61 或 Seq ID Nr. 63、特別是 Seq ID Nr. 7，最多.25%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有各個(gè)參照序列的酶的至少50%的酶的活性，其中將酶E1的酶的活性理解為將Z-9-十八碳烯酸轉(zhuǎn)化成17-羥基-Z-9-十八碳烯酸的能力， 酶E2，該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 8或Seq ID Nr. 11，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于Seq ID Nr. 8或Seq ID Nr. 11，最多60%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有各個(gè)參照序列Seq ID Nr. 8或Seq ID Nr. 11的酶的至少50%的酶的活性，其中將酶E2的酶的活性理解為將UDP-葡萄糖和17-羥基-Z-9-十八碳烯酸轉(zhuǎn)化成17- ( β -D-批喃葡萄糖基氧基)-Ζ-9-十八碳烯酸的能力， 酶E3，該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 11，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于SeqID Nr. 11，最多60%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有參照序列Seq ID Nr. 11的酶的至少50%的酶的活性，其中將酶E3的酶的活性理解為將17-(β -D-吡喃葡萄糖基氧基)-Ζ-9-十八碳烯酸和UDP-葡萄糖轉(zhuǎn)化成17-L- [ (2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸的能力，酶E4，該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 9，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于SeqID Nr. 9，最多50%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有Seq ID Nr. 9的酶的至少50%的酶的活性，其中將酶E4的酶的活性理解為將17-L- [ (2’ ~0~ β -D-卩比喃匍萄糖基-β -D-卩比喃匍萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳稀酸-1’，4’ ’ -內(nèi)酯和こ酰基-輔酶A轉(zhuǎn)化成17-L- [ (2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’ ’ -內(nèi)酯單こ酸酷，或?qū)?7-L-[(2’ -0-β -D-吡喃葡萄糖基-β -D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸-I’，4’ ’ -內(nèi)酯單こ酸酯和こ酰基-輔酶A轉(zhuǎn)化成17-L-[(2’-0-i3-D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸-內(nèi)酯ニこ酸酷，或?qū)?7-L-[(2’-0-i3-D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳烯酸I’，4’’-內(nèi)酷和こ酰基-輔酶A轉(zhuǎn)化成17_L_[ (2’ -O- β -D-卩比喃匍萄糖基-β -D-卩比喃匍萄糖基)氧基]-Ζ-9-十八碳稀酸-1’，4’ ’ -內(nèi)酯ニこ酸酯的能力，和 酶E5，該酶具有多肽序列Seq ID Nr. 10，或具有這樣的多肽序列其中相對(duì)于Seq ID Nr. 10，最多45%的氨基酸殘基通過刪除、插入、置換或這些的組合被改變，且該酶還具有帶有Seq ID Nr. 10的酶的至少50%的酶的活性，其中將酶E5的酶的活性理解為將槐糖脂 從細(xì)胞轉(zhuǎn)移到周圍的培養(yǎng)基中的能力。
全文摘要
本發(fā)明涉及細(xì)胞、核酸和酶，涉及它們用于生產(chǎn)槐糖脂的用途，也涉及用于生產(chǎn)槐糖脂的方法。
文檔編號(hào)C12R1/72GK102695796SQ201080061656
公開日2012年9月26日 申請(qǐng)日期2010年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月18日
發(fā)明者A.蒂森胡森, M.韋塞爾, S.沙費(fèi)爾 申請(qǐng)人:贏創(chuàng)德固賽有限公司