專(zhuān)利名稱(chēng)：包含(α1→4)和(α1→6)糖苷鍵的葡萄糖-低聚糖、其用途、及其制備方法
包含(α 1 — 4)和(α 1 — 6)糖苷鍵的葡萄糖-低聚糖、其
用途、及其制備方法本發(fā)明涉及多糖和寡糖以及它們的營(yíng)養(yǎng)效果的領(lǐng)域。尤其是，本發(fā)明涉及α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶在制備包括益生元低聚糖在內(nèi)的膳食纖維的方法中的應(yīng)用，以及由此獲得的新型低聚糖。術(shù)語(yǔ)“膳食纖維”在1953年被Hipsley首次用來(lái)描述食物的植物細(xì)胞壁組分。今天，有很多纖維的定義在使用中，但是至今仍沒(méi)有普遍接受的定義。通常，纖維來(lái)自含有不易消化成分的碳水化合物來(lái)源。纖維典型地被分為兩類(lèi)；不溶性纖維，例如麥麩、抗性淀粉、 半纖維素、木質(zhì)素等，以及可溶性纖維，可溶性纖維又能夠進(jìn)一步被分為兩個(gè)亞類(lèi)短鏈長(zhǎng)度的可溶性纖維，包括聚葡萄糖、菊糖和低聚糖，以及長(zhǎng)鏈長(zhǎng)度的可溶性纖維，包括果膠、樹(shù)膠(古柯豆膠、槐豆膠、角叉菜膠、黃原膠)和β-葡聚糖(例如來(lái)自燕麥或大麥)。益生元是膳食纖維，因?yàn)樗鼈儾槐蝗祟?lèi)體內(nèi)的酶消化卻能被大腸菌群發(fā)酵。因此它們能使生物量和排便次數(shù)增加，因此對(duì)便秘和大腸粘膜的健康具有積極效果。益生元碳水化合物是天然存在的，且能夠在許多食物中被發(fā)現(xiàn)，包括蘆筍、菊苣、番茄和小麥，并且是母乳的天然成分。術(shù)語(yǔ)“益生元”在1995年被Gibson和Roberfroid首次定義。然而，被證實(shí)的最初定義難以考證，且從那時(shí)起作者已進(jìn)一步發(fā)展了該概念，提出新的定義“益生元是一種選擇性發(fā)酵成分，其使得能夠?qū)闹鞯母＠徒】涤欣哪c道微生物群落的組成和/或活性發(fā)生特定變化。”(Nutr Res Rev 2004;17:259-275)。為了符合益生元的分類(lèi)，因此需要一種成分(i)耐消化(胃液酸度，哺乳動(dòng)物的酶的水解作用和胃腸道吸收)；(ii)被腸道微生物發(fā)酵；且(iii)選擇性地刺激與健康和福利有關(guān)的腸道細(xì)菌的生長(zhǎng)和/或活性。最后一條標(biāo)準(zhǔn)是膳食纖維和益生元的主要區(qū)別特征。益生元通常由于其改變結(jié)腸微生物菌群， 通過(guò)增加糖化(碳水化合物發(fā)酵)微生物的數(shù)量同時(shí)減少致腐敗(蛋白質(zhì)發(fā)酵)微生物而促進(jìn)更健康的組成和/或活性的能力而被識(shí)別。滿足益生元標(biāo)準(zhǔn)的確定的不易消化碳水化合物包括低聚果糖(F0Q、低聚半乳糖 (GOS)、乳果糖、菊糖和聚葡萄糖。聚葡萄糖是一種由所有類(lèi)型糖苷鍵隨機(jī)交聯(lián)的葡萄糖單元組成的多糖。利體素聚葡萄糖(Litesse polydextrose)由于其獨(dú)特的糖苷鍵排列而不易消化。在分子中， (al-6)鍵占優(yōu)勢(shì)，而約13%該聚合物具有(α 1 — 4)鍵合，其能夠被人體小腸中的酶水解。它在整個(gè)結(jié)腸中發(fā)酵，且在末端結(jié)腸中調(diào)節(jié)的益生元作用是特別有效的。人類(lèi)干預(yù)研究已經(jīng)證實(shí)，利體素聚葡萄糖以劑量依賴(lài)的方式增加雙歧桿菌和乳酸桿菌。淀粉是在含有葉綠素的綠色植物中作為儲(chǔ)存能量的方式普遍存在的多糖。淀粉構(gòu)成了數(shù)十億食品配料市場(chǎng)不可缺少的一部分，并且其特征在于它復(fù)雜和穩(wěn)定的性質(zhì)。淀粉是具有廣泛工業(yè)應(yīng)用的必需品的理想實(shí)例，這些工業(yè)應(yīng)用包括造紙和紙板制造、發(fā)酵、生物燃料、生物降解塑料和清潔劑、生物農(nóng)藥、表面活性劑、聚氨酯、樹(shù)脂、粘合劑和溶劑。然而， 正是食品工業(yè)為淀粉及其衍生物提供了最大的市場(chǎng)。淀粉或者在小腸中被完全降解為葡萄糖并在血液中被攝取，或者未被消化的部分最終在大腸中作為結(jié)腸微生物菌群的一般底物。淀粉及其衍生物本身并不刺激特定的有益結(jié)腸微生物。因此，淀粉本身不是益生元化合物。該問(wèn)題的部分解決方案是將淀粉降解為雙糖麥芽糖，然后利用轉(zhuǎn)葡萄糖苷酶將麥芽糖轉(zhuǎn)化為聚合度是2至4的(α 1 — 6)-鍵合的異麥芽低聚糖(IMO)。然而，這些IMO產(chǎn)物太短且大部分在小腸中被降解，因此不能到達(dá)結(jié)腸。到達(dá)結(jié)腸的那部分IMO產(chǎn)物在結(jié)腸近端部分被腸道菌群迅速降解，而沒(méi)到達(dá)遠(yuǎn)端部分的那部分IMO產(chǎn)物更有害，蛋白降解細(xì)菌存在。為了通過(guò)刺激有益細(xì)菌類(lèi)群，特別是雙歧桿菌，來(lái)戰(zhàn)勝這些有害細(xì)菌，就需要更長(zhǎng)的異麥芽低聚糖。以前，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了各種方法用于麥芽低聚糖(M0Q和淀粉(直鏈淀粉、支鏈淀粉) 的化學(xué)修飾。最近，也有各種葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(環(huán)糊精葡聚糖基轉(zhuǎn)移酶、麥芽糖轉(zhuǎn)葡糖基酶、淀粉分支酶)已被用于淀粉(直鏈淀粉、支鏈淀粉)的修飾。本發(fā)明提供了用于淀粉、淀粉衍生物和/或不同鏈長(zhǎng)度的MOS的(酶)修飾的進(jìn)一步的手段和方法，以便改變它們的功能特性并提高它們的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。出人意料地發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使用葡聚糖蔗糖酶(glucansucrases)的GTFB型α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶(其為糖苷水解酶家族GH70的成員)能夠滿足這些目的[http://WWW. cazy. org]。然而，葡聚糖蔗糖酶催化蔗糖向α-葡聚糖多糖和低聚糖的轉(zhuǎn)化，以前有報(bào)道GTFB 根本不與蔗糖發(fā)生反應(yīng)(Kralj 2004)。本文中公開(kāi)了 GTFB對(duì)包含(α 1 — 4)鍵合的葡萄糖殘基的葡萄糖-低聚糖，例如麥芽-低聚糖(M0Q顯示出高活性。GTFB催化歧化反應(yīng)， 縮短一個(gè)底物分子且延伸第二個(gè)底物分子。兩種產(chǎn)物在下一個(gè)反應(yīng)中又都能再作為底物。 GTFB活性因此能產(chǎn)生一系列線性葡萄糖-低聚糖直至至少DP35。產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)分析已顯示 GTFB斷開(kāi)(α 1 — 4)糖苷鍵并生成新的(α 1 — 4)和(α 1 — 6)鍵。它是具有這種反應(yīng)和產(chǎn)物特異性的酶的第一個(gè)實(shí)例。因此，這種酶被命名為(1 —4)-a-D-葡聚糖(1 —4) (1 —6)-a-D-葡聚糖α-D-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶，或者，可替代地，被命名為a -葡聚糖轉(zhuǎn)移酶。 葡聚糖蔗糖酶也利用M0S，但是在蔗糖作為供體底物存在時(shí)它僅作為受體底物。這引起許多低聚糖的合成，例如，在存在葡聚糖蔗糖酶的情況下，麥芽糖通過(guò)一系列葡萄糖單元經(jīng)由 (a 1-6)鍵連接而延長(zhǎng)。然而，在葡聚糖蔗糖酶存在的情況下，MOS底物中的(a 1 — 4) 連接沒(méi)有發(fā)生斷裂且MOS僅被用作受體底物。這是與不能作用于蔗糖而代之以利用MOS作為供體和受體底物的GFTB酶的主要區(qū)別，斷開(kāi)(a 1 — 4)連接并通過(guò)歧化反應(yīng)引入新的 (a 1 — 6)和(a 1 — 4)連接。GTFB能夠從淀粉或淀粉衍生物合成的產(chǎn)物含有相對(duì)長(zhǎng)的異麥芽低聚糖(IMO)側(cè)鏈，特別是聚合度為4或更高的IMO側(cè)鏈。部分IMO-麥芽糖糊精 (IMO-MALT)在小腸中被降解，少于未變性的淀粉/衍生物被消耗時(shí)應(yīng)被降解的量。這是因?yàn)榻咏麵MO部分的那部分麥芽糖糊精未被腸道淀粉酶降解，因?yàn)榈矸勖感枰欢ㄩL(zhǎng)度的線性(a 1 — 4)鍵合葡萄糖殘基來(lái)起作用。因此，IMO-MALT被視為部分抗性淀粉衍生物，在小腸中比未變性的麥芽糖糊精產(chǎn)生更少的葡萄糖產(chǎn)物。這被認(rèn)為是有益的且有利于健康的生活方式(降低發(fā)生肥胖癥、II型糖尿病、以及與過(guò)度消費(fèi)快速降解的淀粉/衍生物有關(guān)的心臟病和冠心病的風(fēng)險(xiǎn))。運(yùn)輸未變性的至結(jié)腸的那部分IMO-MALT將被剩余菌群進(jìn)一步降解。含有(a 1 — 6)鍵合的IMO-MALT的IMO部分能夠作為有益的雙歧桿菌的特異性底物起作用，使IMO-MALT成為益生元成分。因此，IMO-MALT至少具有下列益處1.部分抗性麥芽糖糊精/淀粉，產(chǎn)生較少量的葡萄糖且從而有助于肥胖癥和II型糖尿病的預(yù)防。
2.刺激有益的腸道雙歧桿菌的益生元效果并從而促進(jìn)腸道健康。在第一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)具有一個(gè)或多個(gè)(α 1 — 6)糖苷鍵和一個(gè)或多個(gè)(α 1 — 4)糖苷鍵的葡萄糖-低聚糖混合物的方法，包括使在非還原末端含有至少兩個(gè)(α 1 — 4)-鍵合的D-葡萄糖單元的多糖和/或低聚糖底物與能夠斷開(kāi)(α 1 — 4) 糖苷鍵并生成新的(α —4)和(α —6)糖苷鍵的α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶接觸。可替代地，或另外，所述α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶能夠通過(guò)新的(α 1 — 6)糖苷鍵將麥芽糖基_、麥芽三糖基-或麥芽四糖基-單元轉(zhuǎn)移至底物。葡萄糖-低聚糖產(chǎn)物是線性的或者含有主要為(α —4)和(α —6)糖苷鍵的線性延伸/部分使它們?cè)谛∧c中具有耐酶作用是有利的，特別是對(duì)于作為膳食纖維應(yīng)用是有利的。因此，所述α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶優(yōu)選不引入(α —6)分支點(diǎn)，也不引入(α —2) 和(α 1 — 3)鍵。在一個(gè)具體方面，所述α -葡聚糖轉(zhuǎn)移酶(GTFB)是葡聚糖蔗糖酶GH70家族的新成員[http://www.cazy. org]，或如上所述的具有特定酶活性和底物偏好的其功能同系物。例如，該酶選自表2所示的那些，或者選自由來(lái)自羅伊氏乳桿菌(LactcAacillus reuteri)121的GTFB、來(lái)自羅伊氏乳桿菌TMW 1. 106的GTF106B、來(lái)自羅伊氏乳桿菌MLl 的GTML4和來(lái)自羅伊氏乳桿菌DSM 20016A的GTFDSM、來(lái)自發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)ATCC 14931的GTF構(gòu)成的組，在蛋白質(zhì)和核酸水平上，它們都是本領(lǐng)域公知的。登錄號(hào)具體參見(jiàn)下圖2和表2。當(dāng)然，也能夠使用這些已知序列的天然或人工同系物(突變體)，包括在熱穩(wěn)定性、底物特異性、酶活性等方面顯示理想特性的基因工程突變體。在一種實(shí)施方式中，所使用的GTFB同系物與來(lái)自表2列出的GTFB(-類(lèi)似)酶的GTFB，或者，優(yōu)選地，與羅伊氏乳桿菌121(AAU08014)、來(lái)自羅伊氏乳桿菌TMW1. 106的 GTF106B (ABP88725)、來(lái)自羅伊氏乳桿菌MLl的GTML4 (AAU08003)、來(lái)自羅伊氏乳桿菌DSM 20016A 的 GTFDSM(ABQ83597)或來(lái)自發(fā)酵乳桿菌 ATCC 14931 的 GTF(ZP_03945763)在氨基酸水平上表現(xiàn)出至少55 %、優(yōu)選至少60 %、75 %、至少80 %、85 %或至少90 %序列同一性。 例如，使用與來(lái)自羅伊氏乳桿菌121的GTFB在氨基酸水平上表現(xiàn)出至少55%、優(yōu)選至少 60%,75%,至少80 %、85 %或至少90 %序列同一性的GTFB同系物。優(yōu)選地，該酶與GTFB的催化核心在氨基酸水平上表現(xiàn)出至少45%、更優(yōu)選至少50%序列同一性，或至少60%序列同一性，所述催化核心由在羅伊氏乳桿菌121的 GTFB的蛋白質(zhì)序列中發(fā)現(xiàn)的連續(xù)氨基酸序列Wra°YRP. . . . IVMNQ1484表示基因文庫(kù)登陸號(hào) AAU08014(蛋白質(zhì)編碼)。所述GTFB同系物優(yōu)選包含一個(gè)或多個(gè)下列保守的氨基酸殘基，其中，與羅伊氏乳桿菌 121 的 GTFB 中的位置對(duì)應(yīng)的編號(hào)是:Argl013 ；Aspl015 ；Alal017 ；Asnl019 ；Glul053, Glyl054, Tyrl055, Hisll24, Aspll25, Glnll26, Argll27, Lysll28, Aspl479 ；Ilel480, Metl482，Asnl483，Glnl484。優(yōu)選地，至少存在催化殘基 Aspl015、Glul053 和 Aspll25。更優(yōu)選地，所有這些殘基都存在。在GTF酶的催化區(qū)中，已經(jīng)鑒定出四個(gè)保守區(qū)域。以前的蛋白質(zhì)工程研究已經(jīng)證實(shí)就形成的糖苷鍵類(lèi)型而言，定位在保守序列區(qū)域III和IV(序列比對(duì)見(jiàn)

圖1)中的氨基酸殘基控制 GTF 酶的產(chǎn)物特異性(Hellmuth et al. Biochemistry (2008) ；Kralj et al. (2005)Biochemistry 44,9206-9216 ；Kralj et al. (2006)FEBS J.273，3735-3742)。同樣，區(qū)域I和區(qū)域II含有有利于酶活性和反應(yīng)特異性的氨基酸殘基[Krai j et al. (2005)； Swistowska et al. (2007)FEBS Lett. 581，4036-4042.]。在一個(gè)具體方面，所述酶包含下列共有序列中的至少一種，其中的編號(hào)對(duì)應(yīng)于GTFB中的氨基酸位置(見(jiàn)圖1)a)(保守區(qū)域 ii) :f1009dgfrvdaadnidadvldq1027b)(保守區(qū)域 iii) :h1q48l(s/v)ynegyhsgaa1060c)(保守區(qū)域 iv) w1118sfvtnhdqrkn(l/v) ι1131D)(保守區(qū)域 I) =Gi473LKVQED (I/L) VMNQ1484在一種實(shí)施方式中，所述酶是來(lái)自葡聚糖蔗糖酶組的GTFA成員，例如，來(lái)自羅伊氏乳桿菌121的GTFA (基因文庫(kù)登陸號(hào)AX306822或AY697435 (GTF序列+側(cè)翼序列 a. ο. GTFB+轉(zhuǎn)座酶)，其已經(jīng)通過(guò)基因工程改造獲得了實(shí)施本發(fā)明的方法所需的獨(dú)特的 “GTFB-類(lèi)似”底物特異性和活性。因此，本發(fā)明也涉及屬于含至少一個(gè)表1中突變的gtfA 型葡聚糖蔗糖酶的基因修飾酶，所述酶能夠斷開(kāi)(α 1 — 4)糖苷鍵并生成新的(α 1 — 4)和 (α 1 — 6)糖苷鍵，并且對(duì)含(α 1 — 4)-連接的D-葡萄糖單元的多糖和/或低聚糖底物， 特別是麥芽低聚糖，具有底物偏好。技術(shù)人員將理解，可將與表1中提到的那些等同的突變能夠引入到來(lái)自其他有機(jī)體的GTFA酶同系物中。例如，來(lái)自羅伊氏乳桿菌180的GTF180、 來(lái)自羅伊氏乳桿菌MLl的GTFMLl、來(lái)自腸膜狀明串珠菌B512-F的DSRS、來(lái)自變異鏈球菌 GS-5的GTFD (參見(jiàn)van Hi jum等，2006)。優(yōu)選地，選自表1的多重突變被引入。在一種具體實(shí)施方式
中，表1所示的所有位置被改變。表1 用于在GTFA-類(lèi)似(葡聚糖蔗糖酶)酶中引入GTFB-類(lèi)似(α -葡聚糖轉(zhuǎn)移酶)活性的突變
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)具有一個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α 1 — 6)糖苷鍵和一個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α 1 — 4)糖苷鍵的葡萄糖-低聚糖混合物的方法，包括使在其非還原末端包含至少兩個(gè)α -1 — 4-鍵合的D-葡萄糖單元的多糖和/或低聚糖底物與能夠斷開(kāi)(α 1 — 4)糖苷鍵且生成新的 (α 1 — 4)和(α 1 — 6)糖苷鍵的α -葡聚糖轉(zhuǎn)移酶接觸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶沒(méi)有引入(α1 — 6)分支點(diǎn)也沒(méi)有引入(α 1 — 2)或(α 1 — 3)鍵。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶是GTFB類(lèi)型的酶、或具有特定酶活性的其功能同系物。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶選自由來(lái)自羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri) 121的GTFB、來(lái)自羅伊氏乳桿菌TMW 1. 106的 GTF106B、來(lái)自羅伊氏乳桿菌MLl的GTML4、來(lái)自羅伊氏乳桿菌DSM 20016A的GTFDSM和來(lái)自發(fā)酵乳桿菌ATCC 14931的GTF構(gòu)成的組，或顯示至少55%序列同一性的其同系物。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述底物的聚合度至少為4，優(yōu)選至少為6。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述底物選自由淀粉、蠟質(zhì)淀粉、高直鏈淀粉、它們的衍生物、麥芽低聚糖、直鏈淀粉、支鏈淀粉、麥芽糖糊精、(α —4)葡聚糖、reuteran、或它們組合構(gòu)成的組。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述淀粉、蠟質(zhì)淀粉、高直鏈淀粉或淀粉衍生物來(lái)源于馬鈴薯、玉米、木薯、豌豆、綠豆、大米或小麥。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其中，所述淀粉衍生物通過(guò)用麥芽糖轉(zhuǎn)葡糖基酶 /4- α -葡聚糖轉(zhuǎn)移酶或糖原-分支酶處理淀粉、蠟質(zhì)淀粉或高直鏈淀粉而產(chǎn)生。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括從混合物中分離至少一種具有一個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α 1 — 6)糖苷鍵和一個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α 1 — 4)糖苷鍵的葡萄糖_低聚糖的步驟，優(yōu)選使用沉淀-分級(jí)和/或色譜技術(shù)。
10.一種包含具有一個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α 1 — 6)糖苷鍵和一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選兩個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α 1 — 4)糖苷鍵的不同線性葡萄糖-低聚糖的混合物，其可通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求1至 8中任一項(xiàng)所述的方法獲得。
11.一種分離的具有一個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α 1 — 6)糖苷鍵和一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選兩個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α —4)糖苷鍵的線性葡萄糖-低聚糖，其可根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法獲得。
12.—種通式為A-B的線性葡萄糖-低聚糖或葡萄糖-低聚糖部分，或一種包含通式為 A-B的不同線性葡萄糖-低聚糖或葡萄糖-低聚糖部分的混合物，其中，A與B之間的鍵合是(α 1 — 6)糖苷鍵并且其中B包含至少兩個(gè)，優(yōu)選至少三個(gè)，連續(xù)(α 1 — 4)鍵合的葡萄糖殘基。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的葡萄糖-低聚糖或葡萄糖-低聚糖混合物，其中，(α1 — 6) 糖苷鍵和(α 1 — 4)糖苷鍵的比值范圍為20 80至90 10，優(yōu)選至少30 70至70 30。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的葡萄糖-低聚糖或葡萄糖-低聚糖混合物，其中，A 包含兩個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α 1 — 6)糖苷鍵，優(yōu)選地，其中A包含聚合度至少為4個(gè)葡萄糖殘基的異麥芽低聚糖。
15.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的葡萄糖-低聚糖或葡萄糖-低聚糖混合物，其中，A包含一個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α 1 — 4)糖苷鍵，優(yōu)選地，其中A包含聚合度至少為4個(gè)葡萄糖殘基的麥芽低聚糖。
16.根據(jù)權(quán)利要求12至15中任一項(xiàng)所述的葡萄糖-低聚糖或葡萄糖-低聚糖混合物， 其中，(平均)聚合度至少為7，優(yōu)選至少為10，更優(yōu)選至少為15。
17.包含根據(jù)權(quán)利要求10至16中任一項(xiàng)所述的葡萄糖-低聚糖或葡萄糖-低聚糖混合物的營(yíng)養(yǎng)組合物或化妝品組合物，優(yōu)選地，其中所述營(yíng)養(yǎng)組合物選自由乳制品、嬰幼兒配方食品、烘焙食品、糖果產(chǎn)品、壓縮干糧、糖塊、面食產(chǎn)品、面條產(chǎn)品、液體飲料、運(yùn)動(dòng)飲料、飲料和冰淇淋構(gòu)成的組。
18.根據(jù)權(quán)利要求10至16中任一項(xiàng)所述的葡萄糖-低聚糖或葡萄糖-低聚糖混合物作為營(yíng)養(yǎng)或化妝品添加劑，尤其是作為益生元纖維，的用途。
19.一種屬于包含至少一種表1中突變的GTFA型葡聚糖蔗糖酶的基因工程修飾的酶， 所述突變酶能夠斷開(kāi)(α 1 — 4)糖苷鍵并生成新的(α 1 — 4)和(α 1 — 6)糖苷鍵，并且對(duì)包含(α 1 — 4)-鍵合的D-葡萄糖單元的多糖和/或低聚糖底物，尤其是麥芽低聚糖，具有底物偏好。
20.能夠斷開(kāi)(α1 — 4)糖苷鍵并生成新的(α 1 — 4)和(α 1 — 6)糖苷鍵，和/或轉(zhuǎn)變麥芽糖、麥芽三糖或麥芽四糖-單元生成新的(α 1 — 6)糖苷鍵的酶在生產(chǎn)淀粉衍生物， 優(yōu)選(部分)難消化的淀粉衍生物的方法中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及多糖和低聚糖以及它們的營(yíng)養(yǎng)效果的領(lǐng)域。尤其是，本發(fā)明涉及α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶在制備包括益生元低聚糖在內(nèi)的膳食纖維的方法中的應(yīng)用，以及由此獲得的新型低聚糖。提供了一種生產(chǎn)具有一個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α1→6)糖苷鍵和一個(gè)或多個(gè)連續(xù)(α1→4)糖苷鍵的葡萄糖-低聚糖混合物的方法，該方法包括使包含至少兩個(gè)(α1→4)鍵合的D-葡萄糖單元的多糖和/或低聚糖底物與能夠斷開(kāi)(α1→4)糖苷鍵并生成新的(α1→4)和(α1→6)糖苷鍵的α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶相接觸。還提供了可由此獲得的(分離的)葡萄糖-低聚糖，以及它們?cè)跔I(yíng)養(yǎng)組合物和化妝品組合物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12P19/04GK102459624SQ201080030033
公開(kāi)日2012年5月16日 申請(qǐng)日期2010年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月8日
發(fā)明者盧貝特·迪庫(kù)伊澤恩, 斯拉夫科·克拉利, 約翰尼斯·保盧斯·卡梅爾林, 賈斯蒂納·馬爾戈扎塔·多布魯喬斯卡, 賴(lài)因德·約翰內(nèi)斯·利姆胡伊斯, 德 馬爾勒 馬克·約斯·埃莉斯·科內(nèi)利斯·范 申請(qǐng)人:格羅寧根大學(xué)