專利名稱：一種長期保持捕食線蟲真菌活性的保存方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種長期保持捕食線蟲真菌活性的保存方法。適用于植物線蟲生防 菌，動物寄生線蟲生防菌及微生物學等研究.
背景技術：
自然界中存在一部分可以捕食、寄生或定殖于線蟲上的真菌，這類真菌為食線蟲 真菌。其中通過營養(yǎng)菌絲特化的捕食器官如粘性菌絲，粘性分枝，粘性網(wǎng)，粘性球，收縮環(huán)及 非收縮環(huán)來捕捉線蟲，這一類食線蟲真菌為捕食線蟲真菌。捕食線蟲真菌是對植物寄生線 蟲的防治具有潛在能力的一類生防菌。但研究人員在研究的過程中，對分離出的菌株進行 進一步研究時，涉及到菌種的保存問題。因此，一個好的保存方法對其研究具有重要的意 義。常用的保存法為試管斜面培養(yǎng)基。其方法是將待保存菌種接入PDA或玉米粉瓊脂 試管培養(yǎng)基內斜面，在25°C下培養(yǎng)2-3天，然后置于4°C條件下保存。這種保存方法存在的 不足是保存時間短，僅為半年，且很容易受螨類污染，占用空間大，易破碎，不易攜帶，轉管 頻率高，成本相對高，易降低真菌的捕食能力，影響研究進展。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)保存方法的不足，提供一種長期保持捕食線蟲真菌活 性的保存方法，利用飽和含水量的自然土壤在離心管內尤其是在微量離心管內長期保存捕 食線蟲真菌，捕食線蟲在接近自然條件下，保持其活性，延長保存時間，從而用于進一步研為達到上述目的，本發(fā)明采取的技術方案是第一步培養(yǎng)基的制備在離心管中裝入三分之一管體積的飽和含水量的自然土壤，用鋁箔包裹離心管， 在121°C條件下對離心管和內部的土壤高壓滅菌1小時即刻。第二步待存菌種的培養(yǎng)與保存在無菌條件下，將需要保存的菌種轉入離心管中的土壤表面，蓋緊蓋子，在25°C下 培養(yǎng)2天，然后將培養(yǎng)好的菌種連同離心管在4°C條件下保存即可。為了使保存菌種便于保存和攜帶，所述的離心管為1. 5ml的微量離心管(英文名 稱印pendorf管，簡稱EP管)。本發(fā)明的優(yōu)點是1、通過利用飽和含水量的土壤對菌種保存，其條件接近菌種在培養(yǎng)基的水分條 件，其中的土壤更接近捕食線蟲真菌的自然生存環(huán)境，所以保存時間長。2、避免了現(xiàn)有保存方法因多次轉管而降低真菌的捕食能力，在保存期間管中帶菌 土壤可多次使用，克服了常規(guī)保存方法易被螨類取食污染，保存時間短等不足，為研究該菌 種提供了便利。
3、利用EP管保存易攜帶，輕便，體積小，不易破碎，不易污染，保存基質來源廣，易 獲得，成本低，保存期長。為了驗證本發(fā)明保存方法菌種的活力，在同等條件下利用本發(fā)明保存方法和現(xiàn)有 保存方法進行比較試驗，結果發(fā)現(xiàn)利用本發(fā)明保存方法可以使捕食線蟲真菌活性保存保持 至少1年，而利用現(xiàn)有保存方法可以使捕食線蟲真菌活性保存僅保持半年，這說明本發(fā)明 方法保存遠優(yōu)于現(xiàn)有保存方法。具體實施方法下面結合具體實施例詳細說明本發(fā)明保存方法的步驟。第一步制備飽和含水量的土壤沿著漏斗內表面鋪一層定性濾紙，讓濾紙吸足水，將土壤放入漏斗內部(不要超 過濾紙邊緣)，逐漸加水，直到濾紙折角處有一滴水且未滴下為止。第二步利用飽和含水量土壤制備培養(yǎng)基將制備好的土壤用藥匙轉入1. 5ml印pendorf管(簡稱EP管)中，土壤的量占EP 管體積的三分之一，將EP敞口用鋁箔包裹，小心放入高壓滅菌鍋中，，在121 °C溫度、20磅壓 力條件下滅菌1小時。第三步待存菌種的培養(yǎng)和保存在無菌條件下，將需要保存的菌種轉入EP管中土壤表面，蓋緊蓋子，在25°C下培 養(yǎng)2天，然后將其放入冰箱在4°C條件下保存即可。
權利要求
1.一種長期保持捕食線蟲真菌活性的保存方法，其特征在于，步驟如下 第一步培養(yǎng)基的制備在離心管中裝入三分之一管體積的飽和含水量的自然土壤，用鋁箔包裹EP管，在 121°C條件下對離心管和內部的土壤高壓滅菌1小時； 第二步待存菌種的培養(yǎng)與保存在無菌條件下，將需要保存的菌種轉入離心管中的土壤表面，蓋緊蓋子，在25°C下培養(yǎng) 2天，然后將培養(yǎng)好的菌種連同離心管在4°C條件下保存即可。
2.如權利要求1所述的長期保持捕食線蟲真菌活性的保存方法，其特征在于，步驟如下第一步制備飽和含水量的土壤沿著漏斗內表面鋪一層定性濾紙，讓濾紙吸足水，將土壤放入漏斗內部且不要超過濾 紙邊緣，逐漸加水，直到濾紙折角處有一滴水且未滴下為止； 第二步利用飽和含水量土壤制備培養(yǎng)基將制備好的土壤用藥匙轉入1.5ml微量離心管中，土壤的量占離心管體積的三分之 一，將離心管敞口用鋁箔包裹，小心放入高壓滅菌鍋中，在121°C溫度、20磅壓力條件下滅 菌1小時；第三步待存菌種的培養(yǎng)和保存在無菌條件下，將需要保存的菌種轉入EP管中土壤表面，蓋緊蓋子，在25°C下培養(yǎng)2 天，然后將其放入冰箱在4°C條件下保存即可。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種長期保持捕食線蟲真菌活性的保存方法，它主要是利用離心管對飽和含水量的自然土壤進行高壓滅菌，然后將待存菌種轉入離心管中的土壤表面進行培養(yǎng)并保存。本發(fā)明通過利用飽和含水量的土壤對菌種保存，其條件接近菌種在培養(yǎng)基的水分條件，其中的土壤更接近捕食線蟲真菌的自然生存環(huán)境，所以保存時間長。避免了現(xiàn)有保存方法因多次轉管而降低真菌的捕食能力，在保存期間管中帶菌土壤可多次使用，克服了常規(guī)保存方法易被螨類取食污染，保存時間短等不足，為研究該菌種提供了便利。
文檔編號C12N1/04GK102146343SQ201010617000
公開日2011年8月10日 申請日期2010年12月31日 優(yōu)先權日2010年12月31日
發(fā)明者吳海燕, 周勛波, 畢建杰 申請人:吳海燕