專利名稱：一種解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)菌，具體涉及一種具有高效抑藻效果的溶藻細(xì)菌。
背景技術(shù)：
在水體富營養(yǎng)化問題日益嚴(yán)重的情況下，經(jīng)濟(jì)、便捷、具有環(huán)境友好性的生物方法(Gschmm等，1998 Karpenter等，1992)成為富營養(yǎng)化水體修復(fù)領(lǐng)域的研究熱點。溶藻細(xì)菌控藻研究由20世紀(jì)60年代逐步開展，日益受到重視。國內(nèi)外研究學(xué)者從海洋赤潮 (Imai等；2001)、富營養(yǎng)化湖泊(Rashidan等；2001)、水庫(S. W. Jung等；2008)、農(nóng)田排水渠(Jeffrey ；1981)、污水(James 等；1969)、湖泊底泥(Choi Hee-jin 等；2005)等環(huán)境中分離出具有抑藻效果的溶藻細(xì)菌。解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)是廣泛存在于自然界的一種非致病性細(xì)菌。目前，國內(nèi)對其研究僅局限于發(fā)酵條件的優(yōu)化、降解除草劑丁草胺(譚文捷等；2005)，抑制植物病原真菌和病毒(申莉莉等；2010)等在生物防治(王英國等；2007) 中的應(yīng)用領(lǐng)域，在控藻領(lǐng)域的研究尚為空白。研究表明，解淀粉芽孢桿菌可產(chǎn)生多種抑菌物質(zhì)(鄧建良等；2007)，通過產(chǎn)生抗生素、抗菌蛋白或多肽等活性物質(zhì)來抑制植物病原菌、真菌、病毒、線蟲(Yoshida等；2001)，從而起到生物防治的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有高效抑藻效果的解淀粉芽孢桿菌。本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下方案1 一種解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)，于 2010 年 12 月 28日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏號為CGMCC NO :4516。方案2 把方案1所述解淀粉芽孢桿菌CGMCC NO 4516應(yīng)用于水環(huán)境的藻類水華控制或除藻。方案3 作為方案2的一個特例，其特征在于，利用解淀粉芽孢桿菌CGMCC NO 4516 抑制水環(huán)境中藻類的生長。方案4 作為方案3的一個特例，其特征在于，所述藻類為藍(lán)藻。方案5 作為方案4的一個特例，其特征在于，所述藍(lán)藻為水華魚腥藻。本發(fā) 明的有益效果本發(fā)明提供的解淀粉芽孢桿菌CGMCC NO 4516可用于水環(huán)境的藻類水華控制或除藻，對水環(huán)境中藻類的生長有明顯的抑制作用，尤其對于水華魚腥藻的具有非常高的溶藻效果。生物材料保藏解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)，于2010年12月28日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏號為CGMCC NO :45160
具體實施例方式下面通過一個具體實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。(一 )解 淀粉芽孢桿菌CGMCC NO 4516的分離用水樣采集器在滇池富營養(yǎng)化湖泊水面下Im處取水樣，將采集的表層水樣通過濾紙過濾，以消除原生動物的影響并去除水中雜質(zhì)。取20mL過濾水樣無菌操作注入到 IOOmL預(yù)培養(yǎng)5 7天的水華魚腥藻(水華魚腥藻(Anabaena flos-aquae)藻種購自中國科學(xué)院水生生物研究所藻種庫(FACHB))中，對照組注入20mL過濾后的高壓滅菌水樣，將藻種接種于150mL錐形瓶中，用封口膜封口保存，放置在光合植物培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，光合培養(yǎng)周期為14h:10h、溫度25士 1°C、光照20001UX ；藻體接種和傳代過程嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)則， 如上培養(yǎng)1周。將對照正常，實驗組出現(xiàn)黃化現(xiàn)象的藻液用于下一步實驗。本試驗選擇水華魚腥藻作為主要的受試藍(lán)藻藻種。收集培養(yǎng)至對數(shù)期的水華魚腥藻，于常溫以3500 4000r/min離心12 15min。 用無菌BGll培養(yǎng)液將黃化藻液稀釋10、100和1000倍。分別取ImL不同梯度的稀釋液與 2mL濃縮水華魚腥藻液，在小試管中充分混勻后均勻涂布在BGll固體培養(yǎng)基上，并且設(shè)置空白對照。將這些藻板倒置放在光合植物培養(yǎng)室內(nèi)光照培養(yǎng)。待藻板上出現(xiàn)空斑后，用無菌接種環(huán)切取典型空斑(每板取2 3個)，重懸于5mL的無菌BGl 1液體培養(yǎng)基中，用鋪藻板的方法對這個空斑純化三次。以上操作均在超凈室中進(jìn)行。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基分離經(jīng)過幾天培養(yǎng)，藻板上空斑周圍出現(xiàn)散落的菌落，用無菌接種環(huán)挑取典型菌落，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上劃線分離，經(jīng)過3 5次劃線分離，得到細(xì)菌單菌落。分別以水華魚腥藻、銅綠微囊藻和聚球藻為實驗對象，在玻璃孔板小孔中加入3ml 對數(shù)生長期的藻液，用無菌接種環(huán)挑取單菌落的一部分放入培養(yǎng)至對數(shù)期的藻液中，光照培養(yǎng)。對7天內(nèi)出現(xiàn)黃化現(xiàn)象的單菌落再次劃線生長，反復(fù)純化多次。以上操作均在超凈室中進(jìn)行。溶藻細(xì)菌選擇經(jīng)過反復(fù)純化多次的溶藻菌加入到水華魚腥藻、銅綠微囊藻和聚球藻，進(jìn)行溶藻效果試驗，從多種細(xì)菌中選取溶藻效果最好的菌株DCl。 (二)解淀粉芽孢桿菌CGMCC NO 4516生化理化鑒定 通過抑藻效果初試實驗和細(xì)菌生長曲線測定結(jié)果，選取抑藻效果最優(yōu)、生長適應(yīng)期較短、短時間富集培養(yǎng)即可獲得高濃度菌體的DCl菌株。DCl的細(xì)胞形態(tài)和理化試驗結(jié)果見下表。
權(quán)利要求
1.解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)CGMCC NO :4516。
2.權(quán)利要求1所述解淀粉芽孢桿菌在水環(huán)境的藻類水華控制或除藻方面的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，利用解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC NO :4516抑制水環(huán)境中藻類的生長。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藻類為藍(lán)藻。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藍(lán)藻為水華魚腥藻。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用。該解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC NO4516對藻類的生長具有明顯的抑制作用，尤其是對于水華魚腥藻的生長具有高效的抑制作用，可應(yīng)用于富營養(yǎng)化湖泊、城市景觀水體等水環(huán)境的藻類水華控制或除藻。
文檔編號C12R1/07GK102154162SQ201010614948
公開日2011年8月17日 申請日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者吳為中, 吳偉龍, 安成才, 李超, 楊璐華 申請人:北京大學(xué)