專(zhuān)利名稱(chēng)：一種氧化還原酶或其重組酶的應(yīng)用及一種重組氧化還原酶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種氧化還原酶或其重組酶作為羰基還原酶催化劑在不對(duì)稱(chēng)還原前手性羰基化合物以制備光學(xué)活性手性醇中的應(yīng)用，以及一種重組氧化還原酶。
背景技術(shù)：
光學(xué)活性手性醇是醫(yī)藥和精細(xì)化學(xué)品合成的重要中間體。目前，光學(xué)活性手性醇的制備方法主要包括化學(xué)催化的羰基不對(duì)稱(chēng)還原法、生物催化的羰基不對(duì)稱(chēng)還原法和生物催化的消旋醇手性拆分法。其中，化學(xué)催化羰基的不對(duì)稱(chēng)還原，通常需要銠、釕等昂貴的金屬催化劑。這些催化劑回收困難、污染環(huán)境，且反應(yīng)能耗高。生物催化不對(duì)稱(chēng)還原法的優(yōu)點(diǎn)在于，該方法理論上能將酮100%地轉(zhuǎn)化為單一構(gòu)型的手性醇，底物利用率高，產(chǎn)物易于分離，缺點(diǎn)是需要添加昂貴的輔酶。生物催化的手性拆分不需添加輔酶，但該方法的缺點(diǎn)在于目標(biāo)構(gòu)型的產(chǎn)物最高收率不會(huì)超過(guò)50 %。前手性羰基化合物的不對(duì)稱(chēng)還原是獲取光學(xué)活性手性醇的有效途徑之一。迄今為止，已有許多關(guān)于生物催化酮不對(duì)稱(chēng)還原制備光學(xué)活性醇的報(bào)道。例如，Qi如等 (Construction and co-expression of a polycistronic ρlasmidencoding carbonyl reductase and glucose dehydrogenase for production of ethyl (S)_4_chloro_3_ hydroxybutanoate. Bioresource Technology, 2010,101 :6761-6767)用來(lái)自樹(shù)干畢赤酵母(Pichia stipitis)CBS 60 的羰基還原酶I3sCR催化4_氯乙酰乙酸乙酯(Ethyl 4-chloroacetoacetate, C0BE)不對(duì)稱(chēng)還原制備(S) ~4~ 氯 _3_ 羥基丁酸乙酯(Ethyl 4-chloro-3-hydroxybutanoate, (S)-CHBE)。其中(S)-CHBE 是用于治療血膽固醇過(guò)多的他汀類(lèi)藥物——羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)抑制劑的重要中間體。該文獻(xiàn)采用水 /辛酸乙酯兩相反應(yīng)體系和分批加入底物COBE和葡萄糖的策略，有機(jī)相中(S)-CHBE的濃度達(dá)1J6M，光學(xué)純度高于99%，得率為90%。但該催化方法的缺點(diǎn)在于，需要添加葡萄糖和葡萄糖脫氫酶催化輔酶NADPH的再生，在這種情況下，反應(yīng)過(guò)程中需要精確控制 pH 值，±曾力口了工藝復(fù)雜度。Inoue 等(Purification andCharacterization of a Novel Alcohol Dehydrogenase from Leifsonia sp. StrainS749 -.a Promising Biocatalyst for an Asymmetric Hydrogen TransferBioreduction. Applied and environmental microbiology. 2005,75 :3633-3641)用來(lái)自賴氏細(xì)菌(Leifsonia sp.) strain S749 的醇脫氫酶LsADH催化2，2，2-三氟苯乙酮生產(chǎn)(S)-2，2，2-三氟苯乙醇(一種潛在的手性液晶材料)，單水相反應(yīng)體系中可催化的底物濃度達(dá)到100g/L，其中醇脫氫酶LsADH具有催化異丙醇氧化，同時(shí)使NAD+還原生成NADH的能力，反應(yīng)過(guò)程不需要控制pH值。然而，目前已用于工業(yè)化生產(chǎn)的羰基還原酶類(lèi)催化劑并不多，其難點(diǎn)在于具有高催化活性和高選擇性等優(yōu)異催化性能的羰基還原酶難以獲得，而且催化反應(yīng)中所涉及的輔酶價(jià)格昂貴，無(wú)疑增加了工藝生產(chǎn)的成本。因此，針對(duì)前手性羰基化合物，亟需篩選高效特異的，尤其是能實(shí)現(xiàn)自身輔酶循環(huán)的羰基還原酶，以滿足工業(yè)需要。Genbank收錄了一種氧化還原_&CR(Genbank登錄號(hào)為NP 631416)，其氨基酸序列如SEQ ID No. 2所示，共包含263個(gè)氨基酸，其可來(lái)源于天藍(lán)色鏈霉菌(Str印tomyces coelicolor)A3(2)NRRL B-16638，其編碼基因(Genbank 登錄號(hào) NC 003888. 3, REGION 8176680. · 8177471)的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示，共包含792bp堿基。至今，尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道該氧化還原酶進(jìn)行任何實(shí)際應(yīng)用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有的高催化活性和高選擇性羰基還原酶尚不多見(jiàn)，且大多需要昂貴的輔酶，不能滿足工業(yè)應(yīng)用理想需要的缺陷，而提供一種氧化還原酶或其重組酶在羰基化合物不對(duì)稱(chēng)還原領(lǐng)域中的新應(yīng)用，以及一種可高效特異催化羰基化合物，尤其是4-氯乙酰乙酸乙酯的不對(duì)稱(chēng)還原，且可實(shí)現(xiàn)自身輔酶循環(huán)的重組氧化還原酶。本發(fā)明涉及一種氧化還原酶或其重組酶作為羰基還原酶催化劑在不對(duì)稱(chēng)還原前手性羰基化合物以制備光學(xué)活性手性醇中的應(yīng)用；所述的氧化還原酶或其重組酶的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No. 2所示。本發(fā)明中，所述的氧化還原酶的Genbank登錄號(hào)為NP_631416，下文簡(jiǎn)稱(chēng)氧化還原酶 &CR，其可來(lái)源于天藍(lán)色鏈霉菌(Sti^ptomyces coelicolor)A3 (2)NRRL B-16638。本發(fā)明中，所述的重組酶可由下述方法制得培養(yǎng)包含堿基序列如序列表中SEQ ID No. 1所示的氧化還原酶基因的重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體，即可。其中，所述的培養(yǎng)的步驟的方法和條件沒(méi)有特殊限制，可以根據(jù)宿主類(lèi)型和所選培養(yǎng)方法等因素的不同按本領(lǐng)域普通知識(shí)進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪x擇，只要使重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體能夠生長(zhǎng)并產(chǎn)生本發(fā)明的重組氧化還原酶即可。對(duì)于培養(yǎng)基，本發(fā)明優(yōu)選包括下述成分的培養(yǎng)基 酵母膏5 10g/L，蛋白胨10 20g/L和NaC110g/L。本發(fā)明一較佳實(shí)例為將包含堿基序列如序列表中SEQ ID No. 1所示的氧化還原酶基因的重組大腸桿菌接種于含卡那霉素的LB培養(yǎng)基(包括酵母膏5g/L，蛋白胨10g/L和 NaCl 10g/L)中培養(yǎng)，之后再接種于LB，培養(yǎng)基(包括酵母膏10g/L，蛋白胨20g/L和NaCl 10g/L)中培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)液0D_達(dá)到7. 5 8.5(優(yōu)選8)時(shí)，在終濃度為0. 1 ImM(優(yōu)選 0. 5mM)的異丙基-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下，即可高效表達(dá)本發(fā)明的重組氧化還原酶。其中，所述的培養(yǎng)的溫度較佳的為30 37°C，更佳的為37°C。所述的培養(yǎng)較佳的在振蕩條件下進(jìn)行。所述的再接種于LB’培養(yǎng)基的步驟較佳的按體積比5%的接種量接種。所述的誘導(dǎo)的時(shí)間較佳的為22 ^°C，更佳的為25°C。所述的誘導(dǎo)的時(shí)間較佳的為10 15h，更佳的為12h。按上述方法制得本發(fā)明的重組氧化還原酶后，可按本領(lǐng)域常規(guī)方法收集待用，一般可為下述方式中任一種(1)收集培養(yǎng)液中的細(xì)胞，洗滌，冷凍干燥，得凍干細(xì)胞。具體的操作優(yōu)選將培養(yǎng)液離心(轉(zhuǎn)速一般為8000 IOOOOrpm)去除上清液，收集細(xì)胞，生理鹽水洗滌(優(yōu)選兩次)，冷凍干燥，得凍干細(xì)胞。( 將收集的培養(yǎng)液中的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞破壁處理，離心，取上清液，即得粗酶液。具體的操作優(yōu)選將收集的培養(yǎng)液中的細(xì)胞重新懸浮于本領(lǐng)域常用的PH6. 0 7. 0的緩沖液(如磷酸鹽緩沖液，優(yōu)選pH6. 5、IOOmM的磷酸-磷酸鈉緩沖液)中，進(jìn)行細(xì)胞破壁。所述的細(xì)胞破壁的方式可采用常規(guī)方法，如超聲處理，優(yōu)選條件為功率400W，超聲如，間歇6s，重復(fù)99輪。細(xì)胞破壁后的離心的速度較佳的為8000 1OOOOrpm0 (3)按方式( 制備粗酶液，將粗酶液進(jìn)一步冷凍干燥得粗酶粉其中，所述的包含堿基序列如序列表中SEQ ID No. 1所示的氧化還原酶基因的重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體可按下述方法制得將包含堿基序列如序列表中SEQID No. 1所示的氧化還原酶基因的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至宿主微生物中，即可。所述的宿主微生物可為本領(lǐng)域常規(guī)的各種宿主微生物，只要能滿足重組表達(dá)載體可穩(wěn)定的自行復(fù)制，且所攜帶的本發(fā)明的氧化還原酶基因可被有效表達(dá)即可。本發(fā)明優(yōu)選大腸桿菌，更優(yōu)選大腸埃希氏菌(E.coli) BL21(DE3)。所述的包含堿基序列如序列表中SEQ ID No. 1所示的氧化還原酶基因的重組表達(dá)載體可按下述方法制得將堿基序列如序列表中SEQ ID No. 1所示的氧化還原酶基因連接于載體上，即可。所述的載體可為本領(lǐng)域常規(guī)的各種載體，如市售的質(zhì)粒、粘粒、噬菌體或病毒載體等，優(yōu)選質(zhì)粒pET18a。較佳的，可通過(guò)下述方法制得本發(fā)明的重組表達(dá)載體將堿基序列如序列表中SEQ ID No. 1所示的氧化還原酶基因和質(zhì)粒pET-28a用限制性內(nèi)切酶 NdeI和HindIII雙酶切，然后用T4DNA連接酶連接，即可得本發(fā)明的重組表達(dá)質(zhì)粒。所述的堿基序列如序列表中SEQ ID No. 1所示的氧化還原酶基因可通過(guò)引物，以天藍(lán)色鏈霉菌(Sti^ptomyces coelicolor)A3 (2)NRRL B-16638 的基因組為模板，經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)進(jìn)行基因擴(kuò)增制得；所述的引物為上游引物為 GGAGATTCATATGAGCACCACCGGAACCACC,下游引物為 GTGAAGCTTTCAGACGGCGGTGTAGGCGC。本發(fā)明的應(yīng)用較佳的按下述方法進(jìn)行在NAD+和/或NADH、以及異丙醇的存在下， 在所述的氧化還原酶或其重組酶的作用下，將作為底物的前手性羰基化合物進(jìn)行不對(duì)稱(chēng)還原反應(yīng)，制得光學(xué)活性手性醇。上述應(yīng)用中，所述的不對(duì)稱(chēng)還原反應(yīng)的各條件可按本領(lǐng)域此類(lèi)反應(yīng)的常規(guī)條件進(jìn)行選擇，具體選擇以及優(yōu)選條件如下介紹所述的前手性羰基化合物較佳的為芳基酮類(lèi)化合物或酮酯類(lèi)化合物，更佳的為 R1COR2, R3C0CH2C00CH2CH3 或 R4C0C00CH2CH3 ；其中，隊(duì)為-C6H5 或-C6H4X, R2 為-CH3、-CH2CF3 或-CH2X, R3 為-CH3、-CH2CH3、-CH2X 或-CF3, R4 為-CH3、-C (CH3) 2、-C6H4X 或-(CH2) 2C6H5，X 為 Cl或Br，X在苯基上取代的位置可為鄰位、間位或?qū)ξ?。所述的前手性羰基化合物的量根?jù)具體底物選擇，對(duì)于單一水相溶劑體系可為10 200g/L反應(yīng)溶液，對(duì)于有機(jī)溶劑相/水相的兩相轉(zhuǎn)化體系可為10 600g/L水。按常規(guī)方法，所述的氧化還原酶或其重組酶可采用下述形式加入反應(yīng)體系將粗酶液直接加入反應(yīng)體系，或者將懸浮或溶解有凍干細(xì)胞或粗酶粉的PH5 9、優(yōu)選6 7的緩沖水溶液加入反應(yīng)體系。所述的緩沖水溶液種類(lèi)可為本領(lǐng)域常用的各種緩沖液，優(yōu)選磷酸鹽緩沖液。所述的緩沖液的濃度可為50 100mM。本發(fā)明最優(yōu)選pH6. 5、IOOmM的磷酸-磷酸鈉緩沖液。所述的氧化還原酶或其重組酶的量為催化有效量以上，一般為80 400U/g 底物(酶活單位U的定義見(jiàn)實(shí)施例幻，優(yōu)選200 400U/g底物。所述的異丙醇的量一般為前手性羰基化合物摩爾量的1 45倍，優(yōu)選1. 6 1. 8 倍。所述的NAD+和/或NADH的量可為0. 3 1.0mmol/L。較佳的，在反應(yīng)體系中還加入MgCl2,以提高本發(fā)明的氧化還原酶或其重組酶的酶活力。所述的MgCl2的量較佳的為 2mmol/L。上述mmol/L在單一水相溶劑體系中為mmol/L反應(yīng)溶液，在有機(jī)溶劑相/水相的兩相轉(zhuǎn)化體系中為mmol/L水。
所述的不對(duì)稱(chēng)還原反應(yīng)的溫度一般為20 40°C，優(yōu)選25 30°C。所述的不對(duì)稱(chēng)還原反應(yīng)的時(shí)間以反應(yīng)完全為準(zhǔn)，一般為1 36小時(shí)。所述的不對(duì)稱(chēng)還原反應(yīng)的溶劑體系可為通常的緩沖水溶液體系。所述的緩沖水溶液同前述。為了更好地解決底物抑制和產(chǎn)物抑制問(wèn)題，本發(fā)明優(yōu)選有機(jī)溶劑相/水相的兩相轉(zhuǎn)化體系。所述的有機(jī)溶劑相與水相的體積比可為0.5 1.5 1，優(yōu)選1 1。其中， 所述的水相為前述緩沖水溶液。所述的有機(jī)溶劑優(yōu)選鄰苯二甲酸二丁酯、異辛烷、正庚烷、 辛酸乙酯、正己烷、正辛醇、甲苯或乙酸丁酯，更優(yōu)選甲苯。同樣為更好地解決底物抑制和產(chǎn)物抑制問(wèn)題，較佳地采用底物和異丙醇分批加入的操作。具體的，底物和異丙醇分批加入的批次可為3 6次，優(yōu)選4次。每批次底物的加入量可為底物總量的1/6 1/3，優(yōu)選1/4。異丙醇首次加入量可為總量的2/5 3/5，優(yōu)選 2/5。剩余批次的異丙醇加入量為總量的1/10 3/10，優(yōu)選1/5。每批次底物和異丙醇加入的時(shí)間為前批次底物反應(yīng)完全后為宜。 反應(yīng)結(jié)束后，按常規(guī)方法提取分離后，即可獲得光學(xué)活性手性醇c 以底物R1COIi2為例，反應(yīng)路線如下所示。
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權(quán)利要求
1.一種氧化還原酶或其重組酶作為羰基還原酶催化劑在不對(duì)稱(chēng)還原前手性羰基化合物以制備光學(xué)活性手性醇中的應(yīng)用；所述的氧化還原酶或其重組酶的氨基酸序列如序列表中 SEQ ID No. 2 所示。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的氧化還原酶來(lái)源于天藍(lán)色鏈霉菌(Sti^ptomyces coelicolor)A3 (2)NRRL B-16638 ；所述的重組酶由下述方法制得培養(yǎng)包含堿基序列如序列表中SEQ IDNo. 1所示的氧化還原酶基因的重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體，即可；所述的培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基較佳的為包括下述成分的培養(yǎng)基酵母膏5 10g/L，蛋白胨10 20g/L和NaCl 10g/L。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的重組酶由下述方法制得將包含堿基序列如序列表中SEQ ID No. 1所示的氧化還原酶基因的重組大腸桿菌接種于含卡那霉素的 LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)，之后再接種于LB’培養(yǎng)基中培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)液0D600達(dá)到7. 5 8. 5，優(yōu)選 8時(shí)，在終濃度為0. 1 ImM，優(yōu)選0. 5mM的異丙基-β -D-硫代吡喃半乳糖苷的誘導(dǎo)下，即可；所述的LB培養(yǎng)基包括酵母膏5g/L，蛋白胨10g/L和NaCl 10g/L ；所述的LB’培養(yǎng)基包括酵母膏10g/L，蛋白胨20g/L和NaCl 10g/L ；所述的培養(yǎng)的溫度較佳的為30 37°C;所述的培養(yǎng)較佳的在振蕩條件下進(jìn)行；所述的再接種于LB’培養(yǎng)基的步驟較佳的按體積比5%的接種量接種；所述的誘導(dǎo)的時(shí)間較佳的為22 ；所述的誘導(dǎo)的時(shí)間較佳的為10 15h。
4.如權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的重組酶按下述方式中任一種收集(1)收集培養(yǎng)液中的細(xì)胞，洗滌，冷凍干燥，得凍干細(xì)胞；( 將收集的培養(yǎng)液中的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞破壁處理，離心，取上清液，即得粗酶液；C3)按方式( 制備粗酶液，將粗酶液進(jìn)一步冷凍干燥得粗酶粉。
5.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的包含堿基序列如序列表中SEQID No. 1所示的氧化還原酶基因的重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體由下述方法制得通過(guò)引物，以天藍(lán)色鏈霉菌(Sti^ptomyces coelicolor)A3 (2)NRRL B-16638的基因組為模板，經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)進(jìn)行基因擴(kuò)增得堿基序列如序列表中SEQ ID No. 1所示的氧化還原酶基因，之后連接于載體上得包含堿基序列如序列表中SEQ ID No. 1所示的氧化還原酶基因的重組表達(dá)載體，之后轉(zhuǎn)化至宿主微生物中，即可；所述的引物為上游引物為 GGAGATTCATATGAGCACCACCGGAACCACC，下游引物為 GTGAAGCTTTCAGACGGCGGTGTAGGCGC ；所述的載體較佳的為質(zhì)粒pET18a ；所述的宿主微生物較佳的為大腸桿菌，更佳的為大腸埃希氏菌(E. coli)BL21 (DE3)。
6.如權(quán)利要求1 5任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用按下述方法進(jìn)行在 NAD+和/或NADH、以及異丙醇的存在下，在所述的氧化還原酶或其重組酶的作用下，將作為底物的前手性羰基化合物進(jìn)行不對(duì)稱(chēng)還原反應(yīng)，制得光學(xué)活性手性醇。
7.如權(quán)利要求1或6所述的應(yīng)用，其特征在于所述的前手性羰基化合物為芳基酮類(lèi)化合物或酮酯類(lèi)化合物，更佳的為R1COIi2、R3COCH2COOCH2CH3或R4COCOOCH2CH3 ；其中， R1 為-C6H5 或-C6H4X, R2 為-CH3、-CH2CF3 或-CH2X, R3 為-CH3、-CH2CH3、-CH2X 或-CF3, R4為-CH3、-C(CH3)2、-C6H4X或-(CH2)2C6H5，X為Cl或Br，X在苯基上取代的位置為鄰位或?qū)ξ弧?br> 8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述的前手性羰基化合物的量在單一水相溶劑體系中為10 200g/L反應(yīng)溶液，在有機(jī)溶劑相/水相的兩相轉(zhuǎn)化體系中為10 600g/ L水；和/或，所述的氧化還原酶或其重組酶采用下述形式加入反應(yīng)體系將粗酶液直接加入反應(yīng)體系，或者將懸浮或溶解有凍干細(xì)胞或粗酶粉的pH5 9、優(yōu)選6 7的緩沖水溶液加入反應(yīng)體系；所述的緩沖水溶液較佳的為磷酸鹽緩沖液；所述的緩沖液的濃度較佳的為 50 IOOmM ；所述的緩沖水溶液優(yōu)選pH6. 5、IOOmM的磷酸-磷酸鈉緩沖液；和/或，所述的氧化還原酶或其重組酶的量為80 400U/g底物，優(yōu)選200 400U/g 底物；和/或，所述的異丙醇的量為前手性羰基化合物摩爾量的1 45倍，優(yōu)選1. 6 1. 8倍；禾口 /或，所述的NAD+和/或NADH的量為0. 3 1. Ommol/L ；和/或，所述的不對(duì)稱(chēng)還原反應(yīng)中，在反應(yīng)體系中還加入MgCl2,所述的MgCl2的量較佳的為 2mmol/L ；所述的mmol/L在單一水相溶劑體系中為mmol/L反應(yīng)溶液，在有機(jī)溶劑相/水相的兩相轉(zhuǎn)化體系中為mmol/L水。和/或，所述的不對(duì)稱(chēng)還原反應(yīng)的溫度為20 40°C，優(yōu)選25 30°C ；和/或，所述的不對(duì)稱(chēng)還原反應(yīng)的時(shí)間以反應(yīng)完全為準(zhǔn)。
9.如權(quán)利要求6或8所述的應(yīng)用，其特征在于所述的不對(duì)稱(chēng)還原反應(yīng)的溶劑體系為緩沖水溶液體系或有機(jī)溶劑相/水相的兩相轉(zhuǎn)化體系；所述的有機(jī)溶劑相與水相的體積比較佳的為0.5 1.5 1，更佳的為1 1，所述的水相為緩沖水溶液；所述的緩沖水溶液較佳的為磷酸鹽緩沖液；所述的緩沖液的濃度較佳的為50 IOOmM ；所述的緩沖水溶液優(yōu)選pH6. 5、IOOmM的磷酸-磷酸鈉緩沖液；所述的有機(jī)溶劑為鄰苯二甲酸二丁酯、異辛烷、正庚烷、辛酸乙酯、正己烷、正辛醇、甲苯或乙酸丁酯， 更優(yōu)選甲苯；和/或，所述的底物和異丙醇以分批加入的方式加入反應(yīng)體系；底物和異丙醇分批加入的批次為3 6次，優(yōu)選4次；每批次底物的加入量為底物總量的1/6 1/3，優(yōu)選1/4 ’異丙醇首次加入量為總量的2/5 3/5，優(yōu)選2/5 ；剩余批次的異丙醇加入量為總量的1/10 3/10，優(yōu)選1/5 ；每批次底物和異丙醇加入的時(shí)間為前批次底物反應(yīng)完全后加入。
10.一種重組氧化還原酶，其特征在于其為權(quán)利要求1 5任一項(xiàng)中所述的重組酶。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示的氧化還原酶或其重組酶作為羰基還原酶催化劑在不對(duì)稱(chēng)還原前手性羰基化合物以制備光學(xué)活性手性醇中的應(yīng)用。本發(fā)明還公開(kāi)了由下述方法制得的重組氧化還原酶培養(yǎng)包含堿基序列如序列表中SEQ ID No.1所示的氧化還原酶基因的重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體，即可。本發(fā)明涉及的氧化還原酶制備簡(jiǎn)便，作為羰基還原酶催化劑可適用的前手性羰基化合物范圍廣，具有優(yōu)異的催化活性，可獲得高轉(zhuǎn)化率、高光學(xué)純度的光學(xué)活性手性醇，并且可實(shí)現(xiàn)自身輔酶NADH的再生，無(wú)需另外加入其它輔酶再生系統(tǒng)，整個(gè)反應(yīng)過(guò)程不需控制pH，反應(yīng)條件溫和，具有很好的工業(yè)應(yīng)用開(kāi)發(fā)前景。
文檔編號(hào)C12N15/63GK102154377SQ20101059937
公開(kāi)日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2010年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月17日
發(fā)明者倪燕, 沈乃東, 潘江, 王麗娟, 許建和, 邱勇雋, 邱立歡 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)