專利名稱：β地中海貧血突變檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種β地中海貧血突變檢測試劑盒，特別是涉及利用一種不對稱擴 增的方法檢測β -地中海貧血核苷酸多態(tài)性的試劑盒，該試劑盒包含一套特異性核苷酸多 態(tài)性探針和擴增樣品中靶基因的PCR引物，用于檢測由于點突變引起的β -地中海貧血。
背景技術：
地中海貧血分為α -地中海貧血和β -地中海貧血(簡稱β _地貧)。β _地貧 是一種由β珠蛋白基因異常導致肽鏈表達失衡而產(chǎn)生的單基因遺傳血液病，多由珠蛋 白基因點突變所致，是我國南方各省最常見、危害最大的遺傳病之一，也是世界上最常見的 遺傳性之一，據(jù)統(tǒng)計全世界約有1億多人攜帶地中海貧血基因。我國廣東、廣西、四川、 香港、臺灣北部、云南、貴州、海南、福建、湖南、湖北是地中海貧血的高發(fā)省區(qū)，在新疆 也有發(fā)現(xiàn)。我國部分省份的β-地中海貧血發(fā)生率見表1。表1我國部分省份的β -地中海貧血發(fā)生率
權(quán)利要求
1.一種β地中海貧血突變檢測試劑盒，由PCR試劑、以尼龍膜為載體的低密度芯片、雜 交試劑組成，其特征在于PCR試劑中三對PCR引物序列分別為IF-β :5’ -AGTAGCAATTTGTACTGATGGTATGG-3’ 1R- β 5 ’ -CCCAGTTTCTATTGGTCTCCTTAAACC-3’ 2F- β 5，-GATAGGCACTGACTCTCTCTGC-3’ 2R- β 5，-GAACTTAACCATAGAAAAGAAGG-3， 3F- β 5 ’ -GTATCATGCCTCTTTGCACCATTC-3’ 3R-0 :5， -CACACAGACCAGCACGTTGCCCAGGAGC-3，。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒，其特征還在于點在低密度芯片上的特異性探針的序列TATA32--N:5，-TGGGCATAAAAGTCAGTG-3’TATA32--M:5，-TGGGAATAAAAGTCAGGTG-3，TATA30--N:5，-GGCATAAAAGTCAGGGCTA-3，TATA30--M:5，-GGCACAAAAGTCAGGGCTA-3，TATA29--N:5，-GCATAAAAGTCAGGGCATG-3，TATA29--M:5，-GCATGAAAGTCAGGGCATG-3，TATA28--N:5，-GCATAAAAGTCAGGGCAGATG--3TATA28--M:5，-GCATAGAAGTCAGGGCAGATG--3Cap+I-N :5，-CTATCTATTGCTTACATTTG-3， Cap+I-M :5，-CTATCTATTGCTTCCATTTG-3， Cap40-43-N :5’ -GCAACCTCAAACAGACA-3’ Cap40-43-M :5’ -GCAACCTCAGACACCAT-3， Innitiation-N :5’ -CTAAACAGACACCATGGTG-3 Innitiation-M :5’ -CTAAACAGACACCAGGGTG-3 CD8-N :5’ -CTGAGGAGAAGTCTGC-3’ CD8-M :5’ -CTGAGGAGGTCTGCCG-3’CD8/9-N5’ -CTGAGGAGAAGTCTGC-3’CD8/9-M5’ -TGAGGAGAAGGTCTGC-3’CD14,/15-N5 ’ -TTACTGCCCTGTGGG-3’CD14,/15-M5 ’ -TTACTGCCCTGGTGG-3’CD17--N 5，-CTCCTGTGGGGCAAGGTGA-3‘CD17--M 5，-CTCCTGTGGGGCTAGGTGA-3‘CD19--N 5，-GGTGAACGTGGATGAAGTTAG--3CD19--M 5，-GGTGGACGTGGATGAAGTTAG--3CD26--N 5，-GTAAGTTGGTGGTGAGGC-3’CD26--M 5，-GTAAGTTGGTGGTAAGGC-3’CD27,/28-N5' -TGGTGAGGCCCTGG-3’CD27,/28-M:5’ -TGGTGAGGCCCCTG-3’CD30--N 5，-CTTAGGCTGCTGGTGGTCTAC--3CD30--M :5，-CTTAGGCTGCTGGTGGTCTAC-3CD31--N :5，-CTTAGGCTGCTGGTGGTC-3’CD31--M :5，-CCTTAGGTGCTGGTGGTC-3’CD37--N :5，-CCTTGGACCCAGAGGTTAC-3’CD37--M :5，-CCTTAGACCCAGAGGTTAC-3’CD41--N :5，-TGGACCCAGAGGTTCTTTG-3’CD41--M :5，-TGGACCCAGAGGTTTCTTTG-3’CD41,/42-N:5， -GGTTCTTTGAGTCCTTTG-3CD41,/42-M:5’ -GGTTGAGTCCTTTGGGGA-3CD43--N :5，-CTTTGAGTCCTTTGGGGACT-3’CD43--M :5，-CTTTTAGTCCTTTGGGGACT-3，71/72-Ν5’ -GGTGCCTTTAGTGATGG-3’71/72-Μ5’ -TCGGTGCCTTTTAGTGATG-3’CD95--N :5，-ACTGTGACAAGCTGCAC-3’CD95--M :5，-ACTGTGACAAAGCTGCAC-3，IVSI-I-N :5’ -GGCAGGTTGGTATCAAGT-3’ IVSI-I-M :5’ -GGCAGTTTGGTATCAAGT-3’ IVSII-I-N :5’ -GTTGGTATCAAGGTTACTA-3’ IVSII-I-M :5’ -GTTGCTATCAAGGTTACAA-3’ IVSII-5-N :5’ -GTAACTTCAGGGTGAGTCT-3’ IVSII-5-M :5’ -GTAACTTCAGGGTGACTCT-3’ IVSII-nt654-N :5’ -TAAGGCAATAGCAATATAC-3’ IVSII-nt654-M :5’ -TAAGGTAATAGCAATATAC-3’ 顯色控制點5，-GCCGTAACCGTCACAATCCGT-3，。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒，其特征還在于PCR試劑中上游引物lF-β、2F-i3、3F-i3 的終濃度為ΙμΜ，下游引物IR-β、2R-i3、3R-i3的終濃度為10 μ Μ。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒，其特征還在于點在低密度芯片上的特異性探針的濃度為 5 μ M0
5.根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒，其特征還在于雜交試劑中雜交液I的組成為2XSSC， 0. 5% SDS，雜交液II的組成為0. 5XSSC,0. 5% SDS，辣根過氧化物酶的用量為0. IU。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒，其特征還在于雜交試劑中顯色底物包括TMB或0PD。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種β地中海貧血突變檢測試劑盒，特別是涉及利用一種不對稱擴增的方法檢測β-地中海貧血核苷酸多態(tài)性的試劑盒，該試劑盒包含一套特異性核苷酸多態(tài)性探針和擴增樣品中靶基因的PCR引物，可以檢測27種β-地中海貧血突變，并且檢測過程更加快速，檢測結(jié)果也更為準確。
文檔編號C12Q1/68GK102115781SQ20091021439
公開日2011年7月6日 申請日期2009年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月30日
發(fā)明者張帆, 李明, 林炳生, 程鋼, 陳華云 申請人:中山大學達安基因股份有限公司